学术投稿

脱氧尿嘧啶核苷酸掺人量对尿苷酶抗污染效果的影响

杜绍财;吴娟;张敏;刘峰;韩建德

关键词:聚合酶链反应, 尿苷酶, 丙型肝炎病毒
摘要:目的了解脱氧尿嘧啶核苷酸(dUTP)掺入量与尿苷酶(UDG)抗污染的关系.方法通过聚合酶链反应将50%dUTP和全dUTP掺入HCV cDNA,并观察UDG的抗污染效果.结果0.05U、0.1 U、0.2 U的UDG 37℃消化60min,PAGE检测可抗10-1~10-8 50%dU-DNA模板污染.0.1 U UDG 37℃10 min能抗10-6,20min~30 min可抗10-5,PAGE虽阴性,但DNA-EIA杂交A值0.617,仍为阳性;40min可抗10-3,未经杂交证实.37℃消化20min电泳检测可抗10-1~10-8全dU-DNA污染,DNA-ELA杂交A值在0.005~0.049均为阴性.结论本文研究结果证实,用50%dU-DNA为模板,37℃10~20min时,抗污染效果较差,需增加抗污染时间.应用全dU-DNA为模板时,可获得良好的抗污染效果.
临床检验杂志相关文献
  • 流式细胞仪计数网织血小板及初步临床应用

    目的建立流式细胞仪常规检测网织血小板(reticulated platelet,Rp)的方法.方法用CD61-PE单抗标记全血中血小板,再用荧光染料噻唑橙(thiazol orange,TO)染色RP内RNA.TO浓度选择1/4稀释的Retic-COUNT,孵育时间为30min.以健康人染色-血小板为对照.结果检测了30例健康人RP%,结果为1.61%±1.14%(x±2s).17例血液病患者RP%结果基本能与临床病理符合,符合率94.1%.结论流式细胞仪适合临床常规检测网织血小板.

    作者:陈军浩;张葵 刊期: 2001年第06期

  • 精液自动化分析中视频参数的设置

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    作者:徐为高 刊期: 2001年第06期

  • 人抗小鼠抗体对CA199检测的影响

    人抗小鼠抗体(HAMA)对免疫实验特别是夹心法和竞争法有影响,能引起假阳性和假阴性结果,美国药物和食品管理局(FDA)建议,在体外诊断产品中都要考虑到样品中存在的人抗鼠抗体可能对实验有干扰.

    作者:黄学文;赵琪 刊期: 2001年第06期

  • 不同标本对荧光实时定量PCR法测定HBV-DNA结果的影响

    目的利用沉淀煮沸裂解法提取HBV核酸,探讨不同的临床标本和贮存条件对荧光定量PCR法测定乙型肝炎病毒核酸(HBV-NDA)结果的影响,为临床标本的收集和贮存提供依据.方法按不同要求收集特定的临床标本,用本实验室使用的HBV-DNA提取方法提取DNA模板,再用荧光实时定量PCR法检测HBV-DNA的含量.结果经EDTA、中等含量肝素、枸橼酸钠抗凝血浆标本与相应血清标本测定HBV-DNA的含量无显著性差别均(P>0.05),但高浓度肝素(1000U/ml)抗凝管结果显著降低(F值为25.96;P<0.05);溶血、高血脂标本、标本反复冻融、血浆(清)标本在室温下短期贮存(48h内)对HBV-DNA含量均无明显影响(P>0.05).结论用本实验室使用的HBV-DNA提取方法,可使抗凝剂及其它PCR反应抑制物质对HBV-DNA测定结果影响降到低,从而使临床无污染标本一般均可接受.

    作者:陶志华;谢耀盛;周武;陈晓东 刊期: 2001年第06期

  • 检验科的管理体制必须改革

    五十年来,我国医院检验科建设已有长足的进步.目前,医学检验系大专生与本科生已成为检验科的基本力量,近年来,又有硕士与博士学位者参加进来,从业者素质起到翻天覆地的变化.实验方法从手工操作过渡到半自动与全自动化,但是管理工作跟不上,因此检验质量不尽人意.由于疏于管理,有些检验项目用全自动仪器测得结果不如用手工法.有人建议要学习国外大型医院实验室管理模式.是否没有人知道国外的管理模式?回答是否定的.每年都有相当数量检验人员出国,回来后写的访问报告内容大多是仪器设备与质量管理,极少谈国内外实验室管理模式的差异,国外如何落实质量管理的,这些事似乎属于我国检验界讨论的禁区(实为误区),所以访问回来只能说一些能说的事,这对我国检验科建设毫无益处.兹将本人观察到的一些情况作初步评论,并对在因特网上看到的国外资料联系国内实际,提出本人的看法.

    作者:杨运昌 刊期: 2001年第06期

  • 盐水反应性抗Mur引起配血不合1例

    患者应某,女,92y,育有4个子女,1998年曾输AB型血800ml.2001年3月因结肠肿瘤需手术治疗,术前血红蛋白仅64g/L,与献血员戈某盐水配血时主侧凝,次侧不凝.

    作者:洪小珍;许先国;陈宗凡 刊期: 2001年第06期

  • 抗人甘露聚糖结合凝集素单抗的制备、鉴定及应用

    目的制备抗人甘露聚糖结合凝集素单克隆抗体及建立应用方法.方法用亲和层析法自人血清中提取甘露聚糖结合凝集素(MBL),免疫Balb/c小鼠,通过细胞融合的方法,得到3株稳定分泌抗人MBL单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株.建立检测MBL的EIJSA.结果本组mAb识别相对分子质量(Mr)为31 000的MBL分子,与MBL作用后可明显抑制MBL-甘露聚糖复合物的抗补体效应.用ELISA检测186例健康人血清中MBL水平为2.69±1.58 mg/L.结论成功地获得了抗MBL的mAb并用于建立ELISA.

    作者:王艾丽;张颖;李保仝;武建国 刊期: 2001年第06期

  • 连续监测法测定血清丙氨酸氨基肽酶

    目的建立血清丙氨酸氨基肽酶(AAP)连续监测法.方法以丙氨酰对硝基苯胺(Ala-pNA)为底物,研究AAP作用于此底物的动力学特征,选择适反应条件,建立血清AAP测定速率法及参考值,同时观测肝胆疾病患者血清AAP作用于此底物的动力学特征,选择适反应条件,建立血清AAP测定速率法及参考值,同时观测肝胆疾病患者血清AAP水平.结果酶反应适pH8.0,Tris-HCl缓冲液的佳浓度150mmol/L,Ala-pNa浓度以3 mmol/L为宜,米氏常数(Km)0.74 mmol/L,在8 min观测时间内吸光度变化与时间成比例,线性范围可达1800 U/L,平均批内、批间CV分别为1.04%和2.02%.20mmol/L甘油三酯、2g/L血红蛋白、340μmol/L胆红素对酶活力测定无干扰,正常成年人群参考范围(x±2s)41~77 U/L.肝胆疾病组血清AAP明显高于健康对照组.结论血清AAP活力是鉴别诊断肝胆疾病的一项特异、灵敏的指标;连续监测法适用于各种类型的自动化分析仪,便于临床推广.

    作者:吴林岚;涂向东;陈敏;朱忠勇 刊期: 2001年第06期

  • 微柱凝胶法与凝聚胺法抗体检出比较分析

    微柱(管)凝胶试验(Microtubes Gel Test)与凝聚胺试验是九十年代先后进入国内实验室并用于交叉配血的新方法[1,2].目前,微柱/管凝胶技术在一些先进国家已成为常规的红细胞血型血清学检测技术[3].而凝聚胺用于不完全抗体的测定与鉴定以及交叉配血等血清学试验也已在国内迅速推广使用.该方法简便、时间短、结果明显[4].

    作者:王梁平;彭道波;赵晖;张彦 刊期: 2001年第06期

  • 子宫肌瘤病人手术前后血清急性时相蛋白测定

    手术创伤或感染时,血清中C-反应蛋白(CRP)、转铁蛋白(Tf),前白蛋白(PA)等非特异性免疫反应蛋白的浓度会发生变化.为了解子宫肌瘤病人手术前后血清CRP、Tf、PA的变化及临床意义,我们对40例子宫肌瘤患者手术前后进行动态检测血清CRP、PA和Tf的浓度,以了解其对病人恢复情况,判断预后的价值.现将结果报道如下.

    作者:王金湖 刊期: 2001年第06期

  • IgM型抗-P1 1例报告

    蹇某,女,32岁,献血员,2000年8月4日在做ABO定型时发现正定型为B型,反定型无法确定,查询无输血史,经血型血清学检查,发现蹇某血清中含IgM抗-P1,现报告如下.

    作者:何永勋 刊期: 2001年第06期

  • 感染伤口中分离1株溶血巴斯德菌

    P.haemolytica(溶血巴斯德菌)是牛、羊等动物的正常菌群的一部分.也可引起这些动物的各种感染,是一种罕见的机会致病菌.我们于2000年8月在一例左胫腓骨粉碎性骨折及左小腿远端皮肤挫裂伤并伤口感染患者创面脓液中出该菌.

    作者:王华峰;许时菲;焦国红;刘伟 刊期: 2001年第06期

  • 胰腺炎患者腹腔液中分离1株抗坏血酸克鲁瓦菌

    2001年4月,我院从一位急性重型胰腺炎患者腹腔穿刺液中,分离培养出1株Kluyvera ascorbata(抗坏血酸克鲁瓦菌)报道如下.

    作者:管世江 刊期: 2001年第06期

  • 恶性淋巴瘤病人外周血细胞原位PCR方法

    目的探讨、建立外周血间期细胞原位PCR方法.方法用Dig-dUTP标记引物,用外周血淋巴细胞进行直接法原位PCR方法检测15例恶性淋巴瘤患者.结果阳性12例,阴性3例,正常对照无一例阳性.结论细胞悬液直接法原位PCR操作简单、结果可靠、敏感性高.

    作者:谢湘芝;经承学 刊期: 2001年第06期

  • 固相功能化免疫分子层的制备与形貌表征

    抗原与抗体的特异结合,主要是基于抗原和抗体分子结构及立体构型的互补,以及由多种因素造成二者分子间引力参与下发生的可逆性免疫反应.现行的固相免疫测定中,都是依据上述原理而设计,其与传统的“液相”血清学试验本质区别是有一个预先将抗原或抗体固相到载体表面的步骤,抗原-抗体结合反应由液态环境转移到了固相载体表面进行.

    作者:虞伟;顾宁;武建国 刊期: 2001年第06期

  • 冠心病患者同型半胱氨酸水平测定及其临床应用

    目的测定60例冠状动脉造影患者血清总同型半胱氨酸水平,探讨其对冠心病的临床意义.方法将60例冠脉造影患者分为冠心病组(狭窄程度≥50%)31例,与非冠心病组(狭窄程度<50%)29例,其中冠心病组统计病变累及支数,并按冠脉狭窄程度分级得出冠脉狭窄程度记分(CSS).用酶免分析法分别测定两组的血清总同型半胱氨酸(tHcy)浓度并进行比较.将tHcy水平与性别、年龄、收缩压、冠心病病变累及支数及冠脉狭窄程度记分等采用多元回归进行分析.结果冠心病组患者血清tHcy浓度(17.8±7.1μmol/L)显著高于非冠心病组(10.0±5.8μmol/L).多元回归分析表明:非冠心病组tHcy增高与收缩压的相关性强;冠心病组tHcy增高与病变累及支数及冠脉狭窄程度记分成正相关.结论高同型半胱氨酸血症是冠状动脉粥样硬化性心脏病的危险因子,且其升高水平冠脉病变累及支数及狭窄程度呈正相关.

    作者:冒海蕾;王惠民;李小华;苏伟;荀鹏程;刘才旺 刊期: 2001年第06期

  • MH肉汤增菌在复方新诺明药物敏感试验中的重要性

    美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)规定用K-B法进行复方新诺明(SMZco)药敏试验之前,首先用MH肉汤增菌6h,以去除分离培养基中胸腺嘧啶核苷对SMZco的影响.我们对临床分离的148株致病菌,在进行SMZco药敏试验时,采用直接法(用MH和LB两种培养基检测)和增菌后用MH培养基检测,对试验结果进行比较,报告如下.

    作者:张小卫;邵海枫;李珍大;王卫萍 刊期: 2001年第06期

  • 从胆汁性腹膜炎脓液中分离出泉居沙雷菌

    Serratia fonticola(泉居沙雷菌),属沙雷菌属,广泛分布于自然界的水及植物中.临床上多引起创伤感染,少数可引起呼吸道感染.此患者由胆囊、腹腔浓液中同时分离出泉居沙雷菌,尚属罕见,报道如下.

    作者:宋世平;解晓珍;黄春基 刊期: 2001年第06期

  • 三种筛查氨基糖甙类高度耐药肠球菌的方法评价

    肠球菌为条件致病菌,自1979年首例报道对高浓度庆大霉素耐药以来,耐庆大霉素肠球菌引起的医院感染发生率迅速增加,近年来已成为医院感染中重要的病原菌[1].由于这类肠球菌所引起的感染治疗难度大,因此筛查氨基糖甙类高水平耐药肠球菌(HLAR)对于指导临床用药非常重要.我们将临床分离的74株肠球菌用纸片扩散法、Vitek GPS-101药敏卡筛查,并以脑心浸液琼脂稀释筛选平板法(ADSP)为标准,评价其准确性.

    作者:颜英俊;刘华;喻华;周忠华 刊期: 2001年第06期

  • 淀粉酶测定用碘标准液新的配制方法

    碘-淀粉比色法中,碘标准液先配成50mmol/L贮存液,再在使用时配成5 mmol/L碘应用液.在使用过程中我们发现,由于碘易升华及氧化,配制的贮备液用塑料盖密封保存放置一段时间后整个试剂瓶有大量碘吸附和渗漏,且放置在碘贮备液周围的试剂亦受部分碘的污染.若改用密封性好的橡胶盖,则时间一长,橡胶膨化,碘浓度明显降低.购买的试剂盒也经常发现碘的渗漏及试剂盒外包装受碘的污染.我们将碘标准液配制方法略加改进,很好地解决了这个问题.

    作者:方芳;曹建明;袁谦 刊期: 2001年第06期

临床检验杂志

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