学术投稿

人血管内皮生长因子DNA克隆和在大肠杆菌中的表达

张明辉;安广宇;董宁征;白霞;余自强;阮长耿

关键词:血管内皮生长因子, 克隆, 表达
摘要:克隆人血管内皮生长因子165(Vascular endothelail growth factor165,VEGF165)并在大肠杆菌中诱导表达.用RT-PCR法从人白血病细胞株TF1扩增VEGF165 DNA片段,将该片段插入质粒pUCmT中并测序鉴定.将测序正确的pUCmT-VEGFl65与PET20b(+)均用EcoRI和SalⅠ双酶切,回收纯化目的基因片段与表达载体,构建VEGF165的原核表达载体PET20b(+)-VEGF165,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,IPTG诱导表达,表达产物用Ni-NTA Resin纯化,SDS-PAGE及Western Blot鉴定重组蛋白.结果表示:1.测序结果示扩增的VEGF165序列与文献报道相符;2.SDS-PAGE电泳示IPTG诱导后出现分子质量约23kd的重组蛋白条带;3.Western Blot分析表明重组蛋白可与兔抗人VEGF单克隆抗体特异性结合.成功克隆、表达及纯化VEGF165,为研究其功能奠定基础.
中国血液流变学杂志相关文献
  • 温度和标本存放时间对血粘度检测的影响

    目的探讨温度和血标本放置时间对全血粘度的影响.方法将30例血标本在不同环境温度下检测全血粘度,另将20例血标本存放不同时间后测定其全血粘度.结果全血粘度随温度升高而降低,随标本存放时间延长而升高.结论温度和血标本存放时间对血粘度的检测结果影响较大,应严格控制测定温度和标本存放时间,以确保血粘度测定值的准确性和可靠性.

    作者:佟海侠;陆春伟 刊期: 2005年第01期

  • Alzheimer病血脂代谢异常的研究

    目的探讨Alzheimer病(AD)与血脂代谢异常的关系.方法对25例AD患者和对照组30例健康老人的的血清ApoE、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)进行定量测定.结果 AD组ApoE为(39±5)mg/L、TG为(1.35±0.31)mmol/L、TC为(4.4±0.5)mmol/L,均明显低于对照组[分别为(43±8)mg/L、(1.55±0.22)mmol/L、(4.8±0.6)mmo1/L],差异有显著性(P<0.05).结论 AD患者体内存在血脂代谢异常.

    作者:杨虹;李栋;高锦声;徐培君 刊期: 2005年第01期

  • 血细胞分析仪检测尿红细胞MCV的可行性探讨

    目的探讨血细胞分析仪检测尿红细胞MCV的可行性.方法对稀释血样本在COULTER JT、MEDONIC CA570血细胞分析仪进行MCV测定,以结晶、上皮细胞、白细胞加入稀释血样本,测定红细胞MCV.结果 JT血细胞分析仪在红细胞数量小于112/HP时,误差随数量减少而增大.MEDONIC血细胞分析仪在红细胞数量小于35/HP时误差随数量减少而增大.结晶对MCV检测结果影响大.上皮细胞、白细胞大于5/HP时,MCV值不可接受.结论无稀释血模式的血细胞分析仪不可用于尿红细胞MCV检测.有稀释模式的血细胞分析仪必须排除结晶等杂质的干扰,且红细胞数量必须大于35/HP,才可得到较为准确的MCV值,否则将导致结果判定失误.

    作者:潘扬 刊期: 2005年第01期

  • 低分子肝素干预下肺心病凝血功能与肺功能的相关性

    目的通过低分子肝素的干预,改善肺心病患者的凝血功能,同步改善患者的肺功能.探讨肺心病患者在常规治疗基础上,配合有效的降纤、抗凝药物,是提高肺心病治疗效果的重要关键.方法 (1)治疗组(低分子肝素治疗)51例,对照组(常规治疗)45例,治疗前后分别检测各组凝血功能(TT、PT、APTT、FIB)、血液流变学指标(包括:红细胞压积、血浆粘度、全血表观粘度)、肺功能(FEV1),并进行统计学处理.结果(1)对照组治疗前后凝血功能及血液流变学指标略有改善,但统计学处理无显著性差异(P>0.05),肺功能有所改善(P<0.05),显示常规治疗虽能使肺心病患者得到改善,但无法有效地改善患者血液的高粘、高凝状态;治疗组治疗前后凝血功能、肺功能及血液流变学指标改善明显,统计学处理有显著性意义(P<0.01或P<0.05),而且治疗后肺功能与对照组治疗后肺功能比较呈显著性差异(P<0.05),显示在改善患者凝血功能同时能更好的改善患者的肺功能,提高肺心病患者的治疗效果.结论肺心病患者常规治疗同时必需配合降粘、抗凝及降纤治疗,效果肯定,对病情的控制及转归起着重要的作用,值得重视.

    作者:黄林锋;董仁寿 刊期: 2005年第01期

  • 白血病细胞株K562和SHI-1糖基转移酶表达的差异

    目的探讨白血病细胞株K562与SHI-1糖基转移酶表达的差异.方法应用RT-PCR法研究白血病细胞株K562与SHI-1糖基转移酶mRNA表达的差异.结果 K562和SHI-1细胞株均表达OGnT、β3GnT1、β3GnT5、β3GalT2,但表达量不同.K562细胞株主要表达ppGalNacT2、T4、T5、T7,但表达量有差异,而SHI-1细胞株ppGalNacT1、T2、T3、T4均有表达但表达量亦有不同.

    作者:郭向红;仇灏;潘浩;金美芳;吴士良 刊期: 2005年第01期

  • 外阴血管肌纤维母细胞瘤的临床病理及鉴别诊断

    目的探讨血管肌纤维母细胞瘤(AMF)的临床病理特征及鉴别诊断.方法通过4例AMF的病理形态和免疫组化研究,结合复习文献,总结AMF的临床病理特征及鉴别诊断.结果肿瘤境界清楚,瘤细胞梭形或卵圆形,常围绕血管排列,呈疏密交替分布特征.免疫组化表型:瘤细胞Vimentin(4/4)、Actin(2/4)、SMA(2/4)、CD34(2/4)、ER(2/4)、PR(2/4)阳性,Desmin、S-100、Ck均阴性.结论 AMF是一种主要发生于生育期女性外阴的良性软组织肿瘤,需与侵袭性血管粘液瘤、浅表性血管粘液瘤、富细胞性血管纤维瘤等鉴别.

    作者:赵华;陆以农;印永祥 刊期: 2005年第01期

  • 光量子血液疗法与肝素和酚妥拉明联合治疗肺心病临床疗效观察

    目的对照观察光量子血液疗法、肝素、酚妥拉明联合治疗肺心病的疗效.方法 80例肺心病患者随机分为光量子血液疗法、肝素、酚妥拉明联合治疗组40例和常规治疗组(对照组)40例,治疗前后观察其疗效及血气、血液流变学指标的变化.结果治疗一个疗程后总有效率治疗组为92.5%,对照组为77.5%,治疗组明显优于对照组(P<0.01).治疗组与对照组全血粘度、血浆粘度治疗前后差异具有显著性(P<0.05).治疗组治疗前后比较PaCO2降低明显(P<0.05),PaO2明显提高(P<0.05).结论光量子血液疗法、肝素、酚妥拉明联合治疗肺心病疗效显著,可明显改善血液流变学指标.

    作者:吴晓秋 刊期: 2005年第01期

  • 血清干扰素α与乙肝病毒相关肾炎的实验性研究

    目的探讨乙型肝炎病毒相关肾炎(HBV-GN)与血清干扰素α(IFN-α)量的相关性,及IFN-α治疗HBV-GN的必要性.方法将56份受检血清分4组,通过ELISA法,分别检测血清IFN-α浓度.结果实验组Ⅰ血清IFN-α浓度明显低于对照组Ⅰ(P<0.01),并明显低于对照组Ⅱ(P<0.01);实验组Ⅱ血清IFN-α浓度明显低于对照组Ⅰ(P<0.01),并低于对照组Ⅱ.结论乙型肝炎患者是否伴有肾脏损伤,与患者内源性IFN-α浓度有关,当机体IFN-α浓度降低时,HBV就有可能引起肾脏损伤,所以有应用外源性IFN-α治疗的必要性.

    作者:阚周密;王侠;张艳宁;冯江敏 刊期: 2005年第01期

  • 大鼠肾脏冷缺血-再灌注损伤模型的建立

    目的建立一种简便、实用的大鼠肾脏冷缺血再灌注损伤模型,为研究缺血再灌注损伤与移植后肾脏损伤的关系提供实验基础.方法雄性SD大鼠36只,腹正中切口,采用显微外科技术在后腹膜间隙游离左、右侧肾蒂、肾脏和腹主动脉和下腔静脉.实验组(A组)和对照组(B组)各18只.A组:阻断左侧肾脏血流,24GA静脉留置针经腹主动脉缓慢匀速灌注10mL0℃~4℃HC-A液至肾脏颜色变白,缺血1h后恢复左肾血流,切除右肾;B组:假手术组,采用同样方法游离左右侧肾脏后,不实施阻断左肾脏血流和肾脏灌注,切除右肾;A、B组分别于肾脏复灌后1d、3d、7d检测肾功能和切除左肾作病理检查.结果 A组1d和3d血清Cr、Bun值均高于B组,差异无统计学意义(P<0.01);7d时血清Cr、Bun值略高于B组,但差异无统计学意义(P>0.05);A组术后1d和3d肾脏病理切片可见典型肾脏缺血再灌注损伤改变,B组未见明显改变.结论大鼠肾脏冷缺血-再灌注损伤模型手术操作简便,手术成功率高,充分模拟临床上肾移植时以冷缺血为主的特点,是研究肾脏移植缺血再灌注损伤的理想动物模型.

    作者:吕金星;平季根;严春寅 刊期: 2005年第01期

  • 荧光染料CFSE检测淋巴细胞增殖的研究

    目的评价荧光染料羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)用于淋巴细胞及其亚群增殖状况追踪的效果.方法利用荧光染料CFSE作为细胞标记,结合荧光标记的抗体,通过流式细胞仪检测淋巴细胞及其亚群体外增殖情况.结果该方法不仅可以测定淋巴细胞及其亚群的增殖情况,而且可以估算细胞分裂的周期.结论荧光染料CFSE是一种可以监测淋巴细胞及其亚群增殖状况的很好的示踪剂.

    作者:丘凌;何珊;黄瑞;张雁云 刊期: 2005年第01期

  • 跆拳道运动进行大强度训练对血液流变学的影响

    对30位跆拳道运动员在大强度训练前后观察血液流变的有关指标,进行比较,发现大强度训练后测定的全血粘度(高切,中切,低切)、血浆粘度、红细胞压积及纤维蛋白原,明显高于运动前(P<0.01).这些指标的变化可能是引起运动员能力下降和运动性疲劳的原因之一.

    作者:樊道明;顾洪璋 刊期: 2005年第01期

  • 血容量减少时动脉压力感受性反射的仿真研究

    目的建立心血管系统计算机数学模型,对颈动脉窦压力感受性反射进行数字仿真.方法利用包含多种心血管反射的血流动力学模型,采用ODE45可变步长算法模拟急性失血.结果动脉压力感受性反射处于低值运行或是在高值运行时,静脉非压力容积对心输出量和总外周阻力起了重要的调节作用.结论仿真模型可以作为动物实验的预研手段.

    作者:周希平;王国卿;邹容 刊期: 2005年第01期

  • 老年脑梗塞患者血液流变学指标检测分析

    目的探讨老年脑梗塞患者血液流变性的改变.方法对200例老年脑梗塞患者进行全血粘度(高切、低切)和血浆粘度、红细胞压积、血沉、纤维蛋白原等有关血液流变学指标进行测定.结果老年脑梗塞患者除血沉以外,其它全血粘度(高切、低切)、血浆粘度、红细胞压积、纤维蛋白原明显增高.结论提示血液呈高度的浓、聚、粘状态造成血液流变异常,是诱发脑梗塞的重要因素.

    作者:高中芳;席向红 刊期: 2005年第01期

  • 血磁疗对脑血管病人血液流变学及血脂的影响

    目的通过对脑血管病人进行血液磁极化治疗,观察对治疗前后血液流变学及血脂各项指标的影响.方法运用血液磁极化疗法共治疗了42例脑血管病人,将治疗前后血液流变学及血脂的各项指标进行统计学处理.结果治疗前后血液流变学及血脂各项指标中的全血粘度(高切、中切、低切)、血浆粘度、红细胞压积、全血还原粘度、红细胞聚集指数、红细胞变形指数、红细胞计数、红细胞电泳时间、胆固醇、血浆甘油三酯均有统计学意义(P<0.01).结论血液磁极化疗法能够明显地改善血脂和血液流变学的多项指标.

    作者:马臣;胡泽溪;李岚;崔旻;杜国玲 刊期: 2005年第01期

  • 淋巴细胞功能相关抗原-1研究进展

    淋巴细胞功能相关抗原-1(lymphocyte function associated antigen-1, LFA-1, CD11a/CD18),即白细胞功能相关抗原-1(leukocyte function associated antigen-1).属白细胞整合素(leukocyte integrin)亚家族(β2亚家族),或白细胞黏附分子(leukocyte cell adhesion molecule)亚家族.LFA-1局限在白细胞上表达,分布广泛,可参与细胞毒T细胞(cytotoxic T lympholyte,CTL),自然杀伤细胞(natural kill cell,NK细胞)和淋巴细胞激活的杀伤细胞(lymphokine activated kill cell, LAK细胞)的杀伤效应;辅助性T淋巴细胞对外来抗原和丝裂原的增生反应;粒细胞及单核细胞介导的抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用(antibody dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC);白细胞的定位、渗出和迁移、淋巴细胞向外周淋巴结的归巢(homing)等.近来发现LFA-1在骨髓造血、干细胞归巢和移植免疫中也具有重要作用.以下就这一方面作一综述.

    作者:常保萍;刘文励;孙汉英 刊期: 2005年第01期

  • 有限内固定与单侧外固定支架治疗胫腓骨开放性骨折76例分析

    胫腓骨开放性骨折,随着内固定器械的发展,目前治疗方法众多,但由于其解剖特点,易发生皮肤软组织坏死、骨外露感染、骨不愈合等并发症,我院自1993年12月~2003年12月,收治经有限内固定与单侧外固定支架治疗的胫腓骨开放性骨折共76例,经随访,取得满意效果,现报告如下.

    作者:孙春华;王银喜 刊期: 2005年第01期

  • 脑梗死和TIA间血流变学参数的差异分析

    目的探讨脑梗死和TIA患者血液流变学特点及临床意义.方法 66例TIA患者与138例脑梗死患者的血流变学参数与对照组进行比较.结果脑梗死组全血粘度和Hct、Fbg、ESR、血浆粘度、血小板计数及WBC计数等值均高于对照组(P<0.01);而TIA发作组仅见血小板计数和血浆粘度增高.结论血液流变学各参数通过不同的机制,导致血流动力学改变,在缺血性脑卒中发生发展中起着重要的作用.血液流变学改变在一定程度上反映疾病的严重程度.而血沉、WBC的增加更显示了脑梗死患者急性期机体的系统性应急反应.

    作者:朱国燕;邵国富 刊期: 2005年第01期

  • 糖尿病餐后血糖水平与血液流变学指标相关性探讨

    目的观察糖尿病空腹血糖正常,餐后2h血糖>11.1mmol/L的血液流变学指标变化,并与餐后血糖<8.0mmol/L的病例比较.方法对2000年~2004年8月68例糖尿病患者进行个体化治疗,空腹血糖<6.1mmol/L维持1个月,剔除8.0mmol/L<餐后血糖<11.1mmol/L6例.对餐后血糖>11.1mmol/L和<8.0mmol/L病例作血液流变学指标检测.结果两组血栓指数Q值、纤维蛋白原、血浆黏度、全血黏度和血小板聚集率差异有显著性(P<0.05).结论餐后血糖>11.1mmol/L组,血液仍处于粘、聚、浓状态,易形成血栓,增加并发症危险.提示对糖尿病治疗的监测,必须要注意餐后血糖的控制,方能减少并发症的发生.抗凝治疗是DM治疗中的重要组成部分.

    作者:李军平 刊期: 2005年第01期

  • 中年女性血沉参考值与地理因素的灰色关联度分析

    目的为制定中年女性血沉参考值的统一标准提供科学依据.方法搜集了中国291个单位用温氏法制定的20 028例健康中年女性血沉参考值,运用灰色关联度分析的方法研究了其与地理因素的关系.结果发现海拔高度是影响中年女性参考值主要的因素,随着海拔高度的逐渐增大而中年女性血沉参考值在逐渐的减少(灰色关r1(y,x1)=0.73185).用GM(1,N)模型与灰色微分方程的方法得到了一个灰色微分模型,y∧(k)=0.008664z(1)(k)+0.0001881x1(1)(k)+0.00008914x2(1)(k)-0.009112x3(1)(k)-0.03588x4(1)(k)+0.0008267x5(1)(k)±4.70.结论如果知道了中国某地的地理因素,利用此模型并求出其相应的近似时间响应式,就可以估算出这个地区的中年女性血沉参考值.依据中年女性血沉参考值与地理因素依赖关系把中国分为青藏区,西南区,西北区,东南区,华北区,东北区等六个区.

    作者:金浩;葛淼;刘新平;庹书炜;晏文隽;杨云锋;瞿红艳 刊期: 2005年第01期

  • 人血管内皮生长因子DNA克隆和在大肠杆菌中的表达

    克隆人血管内皮生长因子165(Vascular endothelail growth factor165,VEGF165)并在大肠杆菌中诱导表达.用RT-PCR法从人白血病细胞株TF1扩增VEGF165 DNA片段,将该片段插入质粒pUCmT中并测序鉴定.将测序正确的pUCmT-VEGFl65与PET20b(+)均用EcoRI和SalⅠ双酶切,回收纯化目的基因片段与表达载体,构建VEGF165的原核表达载体PET20b(+)-VEGF165,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,IPTG诱导表达,表达产物用Ni-NTA Resin纯化,SDS-PAGE及Western Blot鉴定重组蛋白.结果表示:1.测序结果示扩增的VEGF165序列与文献报道相符;2.SDS-PAGE电泳示IPTG诱导后出现分子质量约23kd的重组蛋白条带;3.Western Blot分析表明重组蛋白可与兔抗人VEGF单克隆抗体特异性结合.成功克隆、表达及纯化VEGF165,为研究其功能奠定基础.

    作者:张明辉;安广宇;董宁征;白霞;余自强;阮长耿 刊期: 2005年第01期

中国血液流变学杂志

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主管:中国科学技术协会

主办:中国生物医学工程学会,苏州大学