学术投稿

利用流感病毒反向遗传学操作系统表达绿色荧光蛋白(EGFP)

徐柯;邢学森;吴杨;喻明霞;龚晓艳;徐军强

关键词:反向遗传学, 荧光蛋白基因, 克隆, 转染, 293T细胞
摘要:目的 构建基于RNP复合体的流感病毒反向遗传学操作系统,并利用该系统表达绿色荧光蛋白.方法 将人源pol Ⅰ启动子分别插入真核表达载体pcDNA3和原核质粒pUC18,获得pol Ⅰ/pol Ⅱ双启动子表达载体pCHBW和pol Ⅰ单启动子表达载体pPol IR;来源于禽流感病毒H5N1湖北分离株A/Chicken/Hubei/489/2004的基因被克隆到pCHBW上,获得pCHBW-PB2、pCHBW-PB1、pCHBW-PA、pCHBW-NP;将荧光蛋白基因置换NA基因的编码区进而克隆到pPol IR上获得pPol IR-NA (EGFP);这些质粒共转染293T细胞并观察荧光.结果 所构建的载体均经酶切和测序验证正确.pCHBW-PB2、pCHBW-PB1、pCHBW-PA、pCHBW-NP和pPol IR-NA (EGFP)共转染293T细胞后能观察到绿色荧光,Western-blot实验证实被转染的293T细胞表达绿色荧光蛋白(EGFP).结论 基于RNP复合体的反向遗传操作系统构建成功,并表达绿色荧光蛋白.
公共卫生与预防医学杂志相关文献
  • 米非司酮和米索前列醇在减少无痛人流并发症中的应用

    近年来,随着无痛人工流产技术在临床上的广泛应用,由此导致的不全流产、子宫穿孔,特别是宫腔粘连等手术并发症的发生率明显增加,现已成为值得关注的问题.2010年1月至2012年1月武汉市洪山区妇幼保健所采用米非司酮联合米索前列醇辅助用于无痛人工流产,在并发症的预防方面取得了良好效果.

    作者:裴全秀 刊期: 2013年第02期

  • 利用流感病毒反向遗传学操作系统表达绿色荧光蛋白(EGFP)

    目的 构建基于RNP复合体的流感病毒反向遗传学操作系统,并利用该系统表达绿色荧光蛋白.方法 将人源pol Ⅰ启动子分别插入真核表达载体pcDNA3和原核质粒pUC18,获得pol Ⅰ/pol Ⅱ双启动子表达载体pCHBW和pol Ⅰ单启动子表达载体pPol IR;来源于禽流感病毒H5N1湖北分离株A/Chicken/Hubei/489/2004的基因被克隆到pCHBW上,获得pCHBW-PB2、pCHBW-PB1、pCHBW-PA、pCHBW-NP;将荧光蛋白基因置换NA基因的编码区进而克隆到pPol IR上获得pPol IR-NA (EGFP);这些质粒共转染293T细胞并观察荧光.结果 所构建的载体均经酶切和测序验证正确.pCHBW-PB2、pCHBW-PB1、pCHBW-PA、pCHBW-NP和pPol IR-NA (EGFP)共转染293T细胞后能观察到绿色荧光,Western-blot实验证实被转染的293T细胞表达绿色荧光蛋白(EGFP).结论 基于RNP复合体的反向遗传操作系统构建成功,并表达绿色荧光蛋白.

    作者:徐柯;邢学森;吴杨;喻明霞;龚晓艳;徐军强 刊期: 2013年第02期

  • DEHP对神经生长因子表达影响的体内实验

    目的 为了探讨DEHP对SPF级昆明纯系雄性小鼠组织中NGF表达的诱导作用,以小鼠肺组织中肥大细胞为实验材料.方法 通过RT-PCR实验,检验了肺组织中神经生长因子(NGF)中mRNA表达水平,结果显示:经125 mg/kg DEHP染毒组染毒两周的小鼠,肺组织中NGF mRNA相对表达水平与空白组相比无明显变化.同时250mg/kg DEHP染毒组的小鼠肺组织中NGF mRNA相对表达水平与空白组相比有极显著上调(P<0.01).结果 表明DEHP有可能是通过NGF途径引发哮喘.结论

    作者:周慧;王黎明 刊期: 2013年第02期

  • 血吸虫病患者数推算两种方法结果比较探讨

    目的 得到较为准确的武汉市血吸虫病患者推算数.方法 以“历史累计新发病人数”为容量变量,采取分层整群结合容量比例概率法(PPS)抽样,从武汉市265个血吸虫病4类村,抽取46个样本村,加上全部3类村(44个),总计90个血吸虫病患者数推算抽样村(简称市抽样村);湖北省按地区分层抽样,分配武汉市22个血吸虫病患者数推算抽样村(简称省抽样村),对以上抽样村开展人群查病,血检阳性者进行粪检,计算各区血吸虫病感染率和推算数,汇总得到武汉市血吸虫病患者推算总数,比较两种方法推算患者数的差异.结果 市抽样村和省抽样村推算武汉市血吸虫病患者数分别为2 811人(其中3类村464人,4类村1 994人)和2 344人(其中3类村482人,4类村1 509人),两类样本推算3类村和4类村患者数,其构成比差异有统计学意义(x2=18.68,P=0.000).结论 以“历史累计新发病数”指导PPS抽样,可以使抽样检出患者的效率提高,得到的血吸虫病患者数推算结果较为准确,其对血吸虫病低流行区人群查病工作也具有一定指导意义.

    作者:王浩;李群英;罗华堂;程忠跃;徐明星 刊期: 2013年第02期

  • 湖北鹤峰县老年人自报慢性病现状调查分析

    当前社会人口老龄化趋势日益加快,老年人健康状况亦成为社会关注的热点,但对于山区少数民族聚集区的老年人慢性病患病状况的研究报道较少.2011年对湖北省鹤峰县≥60岁老年人进行了慢性病患病现状抽样调查,旨在研究者贫困地区农村老年人的健康状况,预防和控制慢性病对老年人健康的危害,进而降低老年人慢性病患病率.

    作者:汤健;向娅妮;沈杰;王银洲;覃仕慧;林玉翠;林坤平;张腊英;徐冬梅 刊期: 2013年第02期

  • 武汉市动物性食品双酚A水平及风险评估

    目的 检测武汉市动物性食品中双酚A(BPA)含量,调查当地居民膳食中动物性食品的结构,计算其双酚A的暴露量,评估当地居民经该途径暴露双酚A的健康风险.方法 随机选取该市常见的13种动物性食品,共78份.用液质检测仪检测样品中的BPA含量.随机选取本市180户居民,共计338人作为膳食调查对象,采用3d24 h膳食调查法,统计其动物性食品的人均摄入量.结合当前BPA的参考剂量评估经该途径暴露BPA的风险水平.结果 BPA在动物性食品中检出范围为0.0~11.7 ng/g.该市居民人均动物性食品的摄入量为277.48 g/d,日均暴露水平(ADI)为11.38 ng/kg bw/day,远低于国际参考标准.结论 BPA在武汉市场上所售的大多数动物性食品中均有微量检出,但经动物性食品暴露的BPA水平,尚不会对居民的健康产生不利影响.

    作者:龙甲;周方;赵娜娜;张睿;贺栋梁;申元媛;应晨江 刊期: 2013年第02期

  • 社区健康教育在2型糖尿病治疗中的效果评价

    糖尿病的治疗中,健康教育(DHE)在糖尿病治疗中是不容忽视的一个方面[1-2].为了解社区健康教育对2型糖尿病患者治疗效果的影响,深圳市宝安区沙井人民医院开展了研究.

    作者:阮细河;杨燕群;仰萍 刊期: 2013年第02期

  • 甘肃武威市2012年吸毒人员艾滋病检测调查分析

    毒品的危害是全球都非常关注的问题,吸毒不仅对经济造成巨大的损失,而且传播艾滋病病毒(HIV)、丙型肝炎(丙肝)、性病等多种疾病,由此带来的社会问题是不可估量的.目前,我国艾滋病的流行在经历传人期和播散期后,正进入快速增长期[1].艾滋病是一种对人类健康和生命有严重威胁的传染病,目前尚无彻底治愈的方法,而吸毒人群是感染艾滋病(HIV/AIDS)的高危人群.

    作者:周雪琴 刊期: 2013年第02期

  • 161例糖尿病孕妇口腔保健意识与行为调查

    近年来研究发现孕妇口腔疾病与低体重儿、妊娠期高血压疾病等有相关性[1-2],且孕妇口腔健康与妊娠期糖尿病亦有着密切关联[3-4].但临床所见妊娠妇女口腔健康不容乐观.孕妇的口腔健康状况与我国传统的孕期饮食习惯、口腔保健重视程度不够等有关.湖北省妇幼保健院于2006年常规产前开展口腔健康检查及保健,为更好的了解产前及孕期口腔卫生保健对妊娠的影响,对该院2011年4~7月在产科住院分娩的2 092例妊娠妇女,其中161例糖尿病孕妇,口腔保健知识进行问卷调查.

    作者:操冬梅;赵云;肖梅;杨莉;赵蕾;汤斐 刊期: 2013年第02期

  • 大豆肽与海洋胶原肽混合粉末抗氧化作用的研究

    目的 探讨海洋胶原肽与大豆肽混合粉末对老年小鼠的的抗氧化作用.方法 用12月龄的健康雌性小鼠,随机分成5组:阴性对照组、阳性对照组、低、中、高剂量组,每组12只.低、中、高剂量组分别灌胃给予0.833 g/kgBW、1.667 g/kg BW、2.500 g/kg BW海洋胶原肽和大豆肽混合粉末,阴性对照组给予蒸馏水,阳性对照组给予0.2g/kg BW VitE.30 d后,称各组老龄鼠的体重并检测各项抗氧化指标:包括血清蛋白质羰基含量、1%的溶血液中丙二醛(MDA)含量、1%溶血液中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、1%的肝匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)活性、血清和肝匀浆中的GSH含量.结果 各剂量组老年小鼠的体重并未出现明显改变(P>0.05);中、高剂量组可明显减少老龄小鼠1%溶血液中MDA含量(P<0.01);高剂量组能明显降低血清中蛋白质羰基含量(P<0.05);低剂量组可明显升高老龄小鼠1%肝匀浆中SOD活性和1%溶血液GSH-PX活性(P<0.05);各剂量组血清和肝匀浆中GSH含量均无明显变化.结论 海洋胶原肽与大豆肽混合粉末具有抗氧化功能.

    作者:田洁;柯翔鸿;王玉娥;樊柏林 刊期: 2013年第02期

  • 一起疑似职业苯中毒事件

    长期接触苯对造血系统有损害,可引起慢性中毒.慢性中毒主要表现有神经衰弱综合症及造血系统的改变,严重的可引起再生障碍性贫血.高浓度苯对中枢神经系统有麻醉作用,可引起急性中毒.1982年国际癌症研究机构(IARC)确立苯为白血病致病因子,我国也于1987年将苯致白血病确定为职业性肿瘤.因此对职业性苯中毒尤为重视.某公司发现在其涂装作业部工位出现7名疑似苯中毒的人,对其涂装作业部进行职业病调查.

    作者:许兵;张耕 刊期: 2013年第02期

  • 宜昌市2011年放射工作人员健康状况调查分析

    为认真贯彻卫生部52号令《放射人员健康管理规定》,保障广大放射工作人员健康状况,进一步了解宜昌市医疗放射和工业探伤人员的卫生防护情况,2011年8月对宜昌市935名从事放射工作人员进行了健康体检.

    作者:张艳丽;黄英;朱西国;徐兵 刊期: 2013年第02期

  • 液质联用法检测黄鱼中的碱性橙、碱性嫩黄和酸性橙Ⅱ

    碱性橙(CAS:532-82-1)、碱性嫩黄(CAS:2465-27-2)和酸性橙Ⅱ(CAS:523-44-4)均为芳香胺类工业染料,主要应于纺织、印染工业,严禁作为食品添加剂使用,具有致癌、致畸变性.由于碱性橙、碱性嫩黄和酸性橙Ⅱ其他水溶性染料如日落黄、柠檬黄等更易于鲜海鱼上染色且不宜褪色,且价格低廉,所以有些不法商贩用碱性橙、碱性嫩黄和酸性橙Ⅱ对黄鱼染色,使黄鱼看上去更新鲜或者把杂鱼染色冒充黄鱼[1-4].

    作者:李永刚;刘潇;陈明;罗苹;闻胜 刊期: 2013年第02期

  • 职业病防治工作现状及对策

    随着市场经济建设推进,国有企业产业结构调整,个体企业蓬勃发展,由于个别企业不依法履行职业病防治规定,劳动者缺乏自我保护意识,加上我国职业卫生监管工作法律体系调整和职业技术服务能力建设相对滞后等原因,导致劳动者健康危害问题日益突出,各种职业病的发生居高不下.

    作者:裴松 刊期: 2013年第02期

  • 早期浸润癌及隐匿型宫颈癌的诊断

    近年来,宫颈上皮内瘤变( cervical intraepithelial neoplasia,CIN)和宫颈癌发病率呈上升及年轻化的趋势.阴道镜在CIN和早期宫颈癌的诊断中起着非常重要的作用.但临床上常有阴道镜下活检为CIN的病例,锥切或全宫切除术后病理诊断为早浸癌或浸润癌的病例,术后因为手术范围不足,又需要补充治疗,给患者带来不必要的痛苦.近年收治的高级别CIN病例常规先行LEEP(loop electrosurgical excision procedure)锥切术或CKC术(cold knife conization),待病理诊断后,再综合考虑治疗方案.

    作者:夏晓红;吴绪峰;高晗;蔡鸿宁 刊期: 2013年第02期

  • 武汉市60岁以上老年人卫生服务需求及利用

    目的 了解武汉市60岁以上老年人医疗卫生服务需求及利用情况,为卫生决策提供依据.方法 采用分层随机整群抽样的方法,随机抽取2 171名在武汉市居住满1年的60周岁以上老年人进行问卷调查.结果 60岁以上老人慢性病患病率高达65.00%,前3位慢性病依次为:高血压、糖尿病和冠心病;在过去1个月中有病而未就医者占24.60%;从未做过体检的占30.00%;他们希望得到的保健知识为常见病知识,需要的保健服务是定期体检.结论 老年人的卫生服务需求不断加大,而卫生服务利用情况不容乐观,公共卫生服务应采取老年人乐于接受的卫生保健服务模式,服务内容应有针对性,要根据老年人的需求进行调整.

    作者:张志峰;周敦金;朱朝阳;张刚;万俊;夏江;龚洁 刊期: 2013年第02期

  • 湖北仙桃市1989-2011年碘缺乏病监测结果分析

    为全面评价仙桃市实施USI前后IDD防治效果及存在的问题,进一步完善可持续防治策略,科学实施IDD防治十二五规划,现对湖北省仙桃市1989-2011年IDD开展了碘缺乏病监测.

    作者:赵淑军;赵球平;边三才 刊期: 2013年第02期

  • 湖北省荆门市蚊类分布及季节变化调查

    目的 了解荆门地区蚊虫种类、季节消长、夜间活动规律以及不同生态环境对蚊类的影响.方法 选取了4种不同生境的采样点,使用紫外诱蚊灯诱集蚊类,并在蚊类活动高峰期进行夜间分时段诱集.所得蚊类样本经实验室分类鉴定、数据统计.结果 7月下旬蚊类密度高,达到693只/(台·夜);夜间21∶00 ~23∶00和03∶00~05∶00蚊类密度较高,分别达到12只/(台·h)和10.5只/(台·h);调查所得1科5属13种蚊种中淡色库蚊(Culex pipiens pallens)(致倦库蚊(Culex pipiens quinquefasciatus))、中华按蚊(Anopheles sinensis)、骚扰阿蚊(Armigeres obturbans)、三带喙库蚊(Culex tritaeniorhynchus)4种密度比较高;平原农村高峰期三带喙库蚊占82.57%,山区农村高峰期中华按蚊占64.33%.结论 荆门地区优势蚊种为淡色库蚊、中华按蚊、骚扰阿蚊、三带喙库蚊;蚊类活动高峰期为7月上旬到8月上旬;蚊类夜间活动有两个高峰期,分别为:21∶00~23∶00和03∶00 ~05∶00;平原农村优势蚊种为三带喙库蚊,山区农村优势蚊种为中华按蚊.

    作者:叶斌;蔡云峰;谭梁飞;鲁方琴;倪建伟 刊期: 2013年第02期

  • 宜昌市疾控机构等级实验室评审工作探讨

    随着越来越多的机构参与原来属于卫生系统的检测工作,疾病预防控制中心实验室面临着竞争.而检测检验和评价是疾病预防控制机构的基本职能之一,它为其它职能的落实提供了技术上的保障和支撑[1].为规范实验室管理,提升技术支撑能力,宜昌市根据湖北省卫生厅部署,在2008年底启动了实验室等级评审工作[2-5].市级和县市区疾病预防控制机构后顺利通过甲级实验室评审.探讨等级实验室创建评审工作的经验和做法,以供借鉴.

    作者:刘军;张皓;陈瑜 刊期: 2013年第02期

  • 北京市顺义区2009-2011年妊娠妇女尿碘监测结果分析

    目的 了解顺义区妊娠妇女碘营养状况,为碘缺乏病防治提供科学依据.方法 采集妊娠期妇女尿样检测尿碘值,采用单因素和多因素方差分析方法对不同年份、年龄和孕期尿碘值进行分析.结果 2009-2011年妊娠妇女尿碘中位数分别为186.08 μg/L、169.27 μg/L和184.64 μg/L;3年来尿碘值<150 μg/L的占总调查人数的37.30%,150 ~249 μg/L占38.70%,250 ~499μg/L占20.70%,≥500 μ/L占3.30%.结论 顺义区妊娠妇女总体上碘营养状况良好,但部分妊娠妇女存在碘缺乏或摄入过量的风险,提示我们应加强妊娠妇女尿碘水平监测,并指导妊娠妇女科学补碘.

    作者:马红梅 刊期: 2013年第02期

公共卫生与预防医学杂志

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主管:湖北省卫生计划生育委员会

主办:湖北省预防医学会;中华预防医学会;湖北省疾病预防控制中心