学术投稿

荧光实时定量RT-PCR观察伤寒杆菌鞭毛z66和d/j抗原基因表达方法的建立

徐顺高;黄新祥;周丽萍

关键词:实时荧光定量RT-PCR, 伤寒杆菌, 随机引物
摘要:目的:构建荧光实时定量RT-PCR测定伤寒杆菌鞭毛抗原z66和d/j 编码基因mRNA的方法.方法:根据伤寒杆菌鞭毛抗原z66和d/j编码基因序列,设计引物扩增其读码框架内片段,克隆进pGEM-T Easy 质粒.质粒经PCR鉴定后,纯化并定量,作为荧光实时定量PCR的标准品,并制作标准曲线.利用不同渗透压下的鞭毛素基因表达差异,比较三种随机引物(6、8、10核苷酸)与特异性引物的逆转录效果,以确定一种佳的随机引物用于多基因表达观察.结果:标准曲线有较好的线性(r=0.999),cDNA和标准品的PCR产物溶解曲线峰值一致.用8核苷酸随机引物进行逆转录的敏感度高于6、10核苷酸随机引物,低于特异性引物,但用其观测z66抗原基因和d/j抗原基因在高、低渗时表达变化趋势与用特异性引物测得结果一致.结论:成功构建用8核苷酸随机引物进行逆转录同时测定伤寒杆菌鞭毛抗原z66和d/j 基因表达的荧光实时定量RT-PCR方法.
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    咳嗽变异性哮喘(CVA)是支气管哮喘的一个特殊类型,同样存在着患者体内生物节律关系失衡,据时间生物学治疗的新观点,我们于2000年7月~2003年10月对56例CVA患儿按生物节律进行综合治疗,并与普通疗法28例作对照,现将结果报告如下.

    作者:朱海涛;周弘;束静 刊期: 2005年第01期

  • 几种人源乳酸杆菌对大肠埃希菌的生物拮抗作用

    目的:探讨生殖道不同乳酸杆菌菌株对大肠埃希菌的拮抗作用,筛选出作用较强者,用于治疗女性泌尿生殖道感染. 方法:采用液体培养法,将乳酸杆菌和大肠埃希菌同时接种于MRS肉汤,在不同时间点取样并进行活埃希菌计数. 结果:所选乳酸杆菌都可将大肠埃希菌全部抑杀,但是不同菌株的拮抗效力不同. 结论:所选的4株乳酸杆菌对大肠埃希菌的拮抗能力不同,其中L. acidophilus 1和lb.paracasei ssp paracasei 3的抑菌作用发生较快、较强.

    作者:王丽莉;陈其御 刊期: 2005年第01期

  • 重症急性胰腺炎并发多器官功能障碍研究及防治进展

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    作者:张建新;柳益书 刊期: 2005年第01期

  • 荧光实时定量RT-PCR观察伤寒杆菌鞭毛z66和d/j抗原基因表达方法的建立

    目的:构建荧光实时定量RT-PCR测定伤寒杆菌鞭毛抗原z66和d/j 编码基因mRNA的方法.方法:根据伤寒杆菌鞭毛抗原z66和d/j编码基因序列,设计引物扩增其读码框架内片段,克隆进pGEM-T Easy 质粒.质粒经PCR鉴定后,纯化并定量,作为荧光实时定量PCR的标准品,并制作标准曲线.利用不同渗透压下的鞭毛素基因表达差异,比较三种随机引物(6、8、10核苷酸)与特异性引物的逆转录效果,以确定一种佳的随机引物用于多基因表达观察.结果:标准曲线有较好的线性(r=0.999),cDNA和标准品的PCR产物溶解曲线峰值一致.用8核苷酸随机引物进行逆转录的敏感度高于6、10核苷酸随机引物,低于特异性引物,但用其观测z66抗原基因和d/j抗原基因在高、低渗时表达变化趋势与用特异性引物测得结果一致.结论:成功构建用8核苷酸随机引物进行逆转录同时测定伤寒杆菌鞭毛抗原z66和d/j 基因表达的荧光实时定量RT-PCR方法.

    作者:徐顺高;黄新祥;周丽萍 刊期: 2005年第01期

  • 放射介入术皮下埋植导管药盒系统治疗恶性肿瘤

    目的:探讨放射介入术皮下埋植导管药盒系统(Port Catheter.System,PCS)对恶性肿瘤的治疗方法和技术.方法:对82例恶性肿瘤患者经锁骨下动、静脉和股动脉穿刺,皮下共埋植PCS 86个分别埋植于锁骨下区、下腹壁、大腿根部,其中4例患者各埋植了2个PCS,有12例PCS直接采用造影导管留置与埋植,术后2周即作PCS内穿刺灌注和栓塞治疗,每月一次作PCS冲洗复查.结果:82例患者埋植了86个PCS.介入埋植成功率100%,发生气胸2例.发生PCS阻塞7例,占8.14%.其中6例栓塞再通成功.血管闭塞2例.留置导管头移位5例,占5.81%.患者生存4~26个月.平均生存12个月.结论:介入埋植PCS为恶性肿瘤的局部用药开辟了新的方法,技术上是安全可行的.

    作者:唐庆放;黄优华;沈涛;徐强;孙军 刊期: 2005年第01期

  • 应用流式细胞术分析CIK细胞胞内Th1/Th2细胞因子

    目的:建立细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer,CIK)体外扩增的方法,并从单细胞水平分析CIK细胞的胞内Th1/Th2类因子产生的情况,进一步明确CIK细胞的免疫学特性及其参与的免疫效应机制.方法:取健康人外周血单个核细胞(PBMC),按一定的时间顺序分别加入IFN-γ、IL-2和CD3单抗,体外扩增CIK细胞,再应用流式细胞术,经刺激、阻断、固定、穿透和标记等过程测定CIK细胞内细胞因子IFN-γ和IL-4水平.结果:外周血单个核细胞加细胞因子培养两周后CD3+CD56+增加,培养至第21天、28天未见明显下降;诱导后CD3+CD8+细胞量与CD3+CD4+量相比明显增多;单细胞胞内细胞因子测定显示扩增后的CIK细胞Th1/Th2因子状态明显向Th1偏移.结论:采用多种因子组合刺激外周血单个核细胞,可大量诱导出CD3+CD56+双阳性细胞,具高度增殖性,是一类新型的免疫过继疗法细胞;其偏移的Th1/Th2因子状态可作为解释其极强的细胞毒作用的理论依据.

    作者:王文红;缪竞诚 刊期: 2005年第01期

  • 卵浆内单精子注射治疗男性因素不育9例报告

    卵浆内单精子注射(ICSI)技术自1992年[1]首次用于体外受精产生活婴以来,已在世界各地迅速推广,应用于治疗男性有严重因素的不育症.本中心自2004年4月至11月,应用ICSI技术治疗男性因素不育症9例,获得良好的疗效,现报告如下.

    作者:刘云;陈小芳;赵捷;阴鹏;胡嘉波 刊期: 2005年第01期

  • Northern杂交检测多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2在不同肿瘤细胞中的表达水平

    目的:从mRNA水平检测五种不同肿瘤细胞株中多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(pp-GalNAc-T2)的表达情况.方法:采用Northern杂交方法.结果:Northern杂交结果显示了两条区带,并且pp-GalNAc-T2在不同肿瘤细胞中存在表达差异.结论:pp-GalNAc-T2基因在不同细胞存在差异表达并可能存在着剪切现象.

    作者:仇灏;陈克平;周嘉梁;彭淼;吴士良 刊期: 2005年第01期

  • 缩窄性心包炎11例的外科治疗

    我院自1992年1月至2003年7月,共收治缩窄性心包炎11例,并进行随访,现报告如下.

    作者:丁国文;陈锁成;尹俊 刊期: 2005年第01期

  • 肝硬化患者血清总胆固醇高密度脂蛋白胆固醇和载脂蛋白A1检测的临床意义

    目的:探讨肝硬化(LC)患者血清总胆固醇(TC)、HDL-C和载脂蛋白A1(apo-A1)水平变化的临床意义.方法:以108例肝硬化患者为研究对象,并设50例正常门诊体检者为对照组.分别测定血清TC、HDL-C和apo-A1水平及肝功能指标.结果:LC患者TC、HDL-C和apo-A1水平均比对照组显著下降(P<0.01),在肝功能Child-Pugh分级中由A级到C级逐渐下降,且在A、B、C各级间均有显著差异(P<0.01);与血清总胆红素呈显著负相关(P<0.01),与血清白蛋白呈显著正相关(P<0.01).结论:LC患者血清TC、HDL-C、apo-A1水平可以较准确反映LC患者肝细胞受损的严重程度,对于判断病情、估计预后有一定的参考价值,可作为肝功能Child-Pugh分级的一项辅助指标.

    作者:王雪梅 刊期: 2005年第01期

  • 美托洛尔治疗充血性心力衰竭58例临床疗效分析

    目的:探讨美托洛尔治疗充血性心力衰竭(CHF)的临床疗效.方法:将58例CHF患者随机分为美托洛尔治疗组和对照组,对照组患者服用血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)、利尿剂和强心甙,美托洛尔治疗组患者在对照组用药的基础上加用小剂量美托洛尔, 3个月后进行比较.结果:美托洛尔治疗组患者的心功能、心率、左室射血分数(LVEF)、左室舒张末内径(LVEDD),与对照组相比,均有显著差异性(P<0.05).结论:CHF患者在服用利尿剂、ACEI和强心甙治疗的基础上加用美托洛尔可取得更好的疗效.

    作者:张建;李卫东;真亚;郭俊芳;包钟华;张国辉;刁占帅 刊期: 2005年第01期

  • 化疗对急性白血病患者γ干扰素及乳酸脱氢酶水平的影响

    目的:研究化疗对急性白血病(AL)患者体内γ干扰素(IFN-γ)表达水平的影响.方法:以无心、肝、肾疾病及合并感染的住院AL患者为研究对象,初治复发AL及缓解AL各15例,ELISA法检测AL患者化疗前后血清IFN-γ,生化法检测LDH水平.结果:初治复发AL组IFN-γ、LDH化疗后水平较化疗前明显降低(P<0.001),缓解AL组IFN-γ化疗后明显降低(P<0.01),LDH无明显变化(P>0.05).相关分析显示:缓解AL组化疗前IFN-γ与LDH之间正相关性(P<0.05),初治复发AL组化疗前及化疗后、缓解AL组化疗后两者间均无相关性.结论:化疗可抑制AL患者体内IFN-γ表达.

    作者:陆益龙;徐生祥;巴荣;朱彦 刊期: 2005年第01期

  • 1,25-(OH)2D3对白血病细胞株K562和SHI-1 ppGalNAcTs表达的影响

    目的:探讨在维生素D3的作用下,白血病细胞株K562与SHI-1 ppGalNAcTs表达的变化.方法:应用RT-PCR法研究在不同浓度维生素D3的作用下,白血病细胞株K562与SHI-1 ppGalNAcTs表达的变化.结果 1,25-(OH)2D3(10-6~10-8mol/L)可分别上调K562细胞株ppGalNAcT2、T4、T5的表达.但在SHI-I细胞株,随着1,25-(OH)2D3浓度的增加ppGalNAcT1表达增加、T3表达没有变化、T4表达减少.结论:白血病细胞株K562与SHI-1 ppGalNAcTs的表达不同.在不同浓度维生素D3的作用下,白血病细胞株K562与SHI-1 ppGalNAcTs表达的变化也不同,说明不同ppGalNAcTs对1,25-(OH)2D3的反应不同.

    作者:郭向红;莫建华;潘浩;金美芳;吴士良 刊期: 2005年第01期

  • 胸段硬膜外阻滞复合全麻中轻度低温的临床观察

    目的:研究胸段硬膜外阻滞复合全身麻醉中轻度低温的形成规律及其对麻醉恢复期寒冷应激反应的影响.方法:选择ASAⅠ~Ⅱ食管癌根治术患者20例,均采用胸段硬膜外阻滞复合全身麻醉.诱导前20 min开始每间隔10 min记录鼓膜温度.观察记录所有患者术后1 h时的热舒适度评分和术后3 h内的寒战反应发生情况.结果:麻醉诱导后鼓膜温度呈进行性降低趋势,鼓膜温度的降温速度、降低值在各时间点之间的差异有统计学意义 (P<0.05).术后1 h时的热舒适度评分为25±8,术后3 h内有13例患者发生了寒战反应.结论:胸段硬膜外阻滞复合全身麻醉中会导致轻度低温,麻醉后第1 h降温较快,此后相对缓慢但仍呈持续性下降趋势.轻度低温可导致术后寒战和寒冷不适感.

    作者:肖霖 刊期: 2005年第01期

  • 应用放射性生物微球技术测定急性坏死性胰腺炎时肺肾微循环变化

    目的:采用99Tcm-放射性生物微球技术探讨急性坏死性胰腺炎(ANP)时肺、肾微循环的变化. 方法:将SD大鼠64只,随机分为对照组和ANP组,以5%牛磺胆酸钠胰腺被膜下均匀注射诱发ANP模型;应用99Tcm标记牛蛙红细胞技术制备放射性生物微球,测定制模后30 min、2 h、6 h、12 h的肺和肾脏血流量.观察肺、肾组织学改变.结果:99Tcm-牛蛙红细胞符合放射性生物微球在微循环研究中的各项理化指标的要求; ANP组各时相之肺和肾脏血流量明显低于对照组(P<0.05).镜下显示对照组肺、肾组织检查无明显异常,ANP组30 min即有组织学损害,并随时间的延长而更加严重.结论:采用99Tcm标记牛蛙红细胞制备放射性生物微球技术是研究组织脏器微循环的可靠方法;ANP时肺、肾脏微循环血流量明显降低,导致肺、肾脏组织受损.

    作者:李龙;张建新;毛朝明 刊期: 2005年第01期

  • 磁性脂质体的研究现状

    1965年,英国Banghan等将磷脂悬浮于水中首次制得了脂质体.1970年后,Rahman等人首次将脂质体作为药物载体应用.至此,脂质体引起了世界各国学者的关注[1~3].脂质体作为药物载体满足了治疗上的许多要求,药物由脂质体携带后,能改变其体内的药动学行为,降低毒副作用和提高疗效.但因稳定性不够,产品包封率较低和靶向性分布欠佳等不足,应用程度受到限制[4].而磁性靶向给药系统由药物和适当的磁性材料及必要辅料配制而成,在足够的体外磁场引导下,随血流运行,选择性地到达并定位于肿瘤靶区.药物以受控的方式从载体中释放,然后在肿瘤组织的细胞或亚细胞水平上发挥药效作用,故对正常组织无太大影响[6].

    作者:柳益书;张建新;姚礼庆;沈锡中 刊期: 2005年第01期

  • 儿童肾细胞癌3例报告及文献复习

    肾细胞癌是成人常见的泌尿系统恶性肿瘤,而儿童肾癌,尤其是伴砂粒体形成的乳头状透明细胞癌非常少见.我们收集3例报告如下.

    作者:姜锦贵;印洪林;周晓军 刊期: 2005年第01期

  • RhoA和蛋白激酶A对胃癌细胞迁移的影响

    目的:研究RhoA 对胃癌细胞迁移的作用和蛋白激酶A对这一作用的影响.方法:采用Boyden槽迁移率分析法和刮除-迁移分析法,观察RhoA激动剂LPA及PKA激动剂cAMP对人胃癌细胞SGC-7901迁移活动的影响.结果:加入RhoA激动剂LPA后,癌细胞迁移活动明显增强.加入PKA激动剂cAMP后再加入RhoA激动剂LPA,癌细胞迁移活动不再出现明显变化.结论:RhoA活化可促进SGC-7901细胞迁移,PKA可通过抑制RhoA活性而阻止该细胞迁移.

    作者:王瑛;陈永昌 刊期: 2005年第01期

  • 简易有创血压监测系统的系统误差分析及其改良

    简易有创血压监测系统由于取材方便、不需要昂贵的监护仪和换能器,因此即使在基层乡镇医院亦能开展.但传统的装置存在着较大的系统误差,本文试对此系统误差产生原因及如何改良作一分析.

    作者:陈云俊 刊期: 2005年第01期

  • 疝环充填式无张力疝修补术的临床应用

    多年来对疝手术均沿用了传统修补术的方法,如Bassini法,Mcvay法,Halsted法等.这些方法操作繁杂、分离多、损伤大,破坏了原有的生理解剖结构,使患者术后产生伤口剧烈疼痛,恢复时间较长.而且术后复发可达10%~15%.1993年被称为疝手术的里程碑[1].疝环充填式无张力疝修补术的临床应用解决了传统手术的许多缺陷.1997年我国开始开展此类手术,深受广大医生和患者的好评.我院从1999年2月~2003年3月用此新手术方法治疗72例腹股沟疝患者,疗效满意.定期随访1个月至1年,无一例复发.现将治疗结果报告如下.

    作者:姚路斌;周宏 刊期: 2005年第01期

江苏大学学报(医学版)杂志

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