学术投稿

胶原酶解离体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞

李红霞;程绪杰;陈弹;周琳;杨向军;刘志华

关键词:大鼠, 平滑肌细胞, 培养, 酶解离法
摘要:用0.2%胶原酶Ⅰ解离原代培养大鼠主动脉平滑肌细胞.取出主动脉胸、腹段,剥除外膜,血管纵向剖开,去除内皮细胞.撕下中膜,快速剪切,用0.2%胶原酶液置摇摆仪上振摆消化约8 h(37℃,35次/min),离心弃上清,加培养液,在37℃温箱培养.结果光电显微镜下见细胞呈梭形或长梭形.用抗肌动蛋白α-actin的单克隆抗体鉴定平滑肌细胞的特异性肌动蛋白,见胞浆内有明显的细胞细丝,呈现淡黄棕色,细丝与细胞长轴相平行,呈现阳性.表明用0.2%胶原酶解离原代培养法进行平滑肌细胞培养,细胞产量高、质量好、培养时间短、稳定性强、培养成功率高,是一种快速简便的培养方法.
苏州大学学报(医学版)杂志相关文献
  • TF-1细胞增殖特性与信号蛋白JAK2/STAT3表达研究

    目的探索JAK/STAT途径活化与细胞增殖和凋亡之间的关系.方法通过表达内源性GM-CSF受体的TF-1细胞,观察细胞增殖与凋亡;建立免疫沉淀和Western blot印迹方法,检测经GM-CSF 100 ng/ml瞬时诱导的TF-1细胞信号蛋白JAK2和STAT3酪氨酸磷酸化情况.结果经过GM-CSF刺激,细胞不但免于凋亡,TF-1细胞还呈现剂量与时间信赖性的增殖反应.当耗竭细胞因子6~12 h后,倒置显微镜下TF-1细胞呈现折光性改变,细胞开始凋亡,呈现凋亡特征性形态改变和出现DNA梯形条带,而加入0.1 ng/ml的GM-CSF,TF-1细胞即开始进入增殖状态,提示GM-CSF对细胞具有凋亡保护作用.经过100 ng/ml GM-CSF的瞬时诱导,在分子量130 kd区域见到JAK2蛋白条带,显示GM-CSF可诱导TF-1细胞磷酸化JAK2表达;而在分子量90 kd区域未见到STAT3蛋白条带,显示无磷酸化STAT3表达;而未经GM-CSF诱导的TF-1细胞,既无磷酸化JAK2也无磷酸化STAT3表达.结论 GM-CSF为TF-1细胞增殖诱导和凋亡保护所必需;GM-CSF诱导的TF-1细胞生物学效应涉及到胞浆信号分子JAK2磷酸化而非STAT3磷酸化.

    作者:谌登兵;张日;夏学鸣 刊期: 2004年第01期

  • 非接触眼压计与Schiotz眼压计对正常人眼压的检测比较

    与传统的压陷式眼压计--Schiotz眼压计相比,非接触式眼压计因其方便、元污染、安全等优越性已在我科临床工作中受到重视和广泛应用.

    作者:钟蕾 刊期: 2004年第01期

  • 闭孔疝的诊断和治疗

    报告5例闭孔疝,均为老年女性,瘦弱体型,以不完全肠梗阻为首发症状.腹部平片均提示肠梗阻,B超检查未能提示梗阻原因,2例腹部CT检查示闭孔内幽闭的肠管从而确诊,余均经剖腹探查后确诊.术后并发症较多,治愈4例,死亡1例.认为闭孔疝术前诊断率极低,病死率较高,应加强对该病的认识.腹部CT检查是闭孔疝重要的诊断手段,对老年患者不明原因肠梗阻,常规行急诊CT检查,将显著提高闭孔疝的术前诊断率,有效降低病死率.

    作者:李国强;邢春根;纪建松 刊期: 2004年第01期

  • 原位逆转录PCR检测ppGalNAcT-2在胃癌细胞株SGC-7901的表达

    目的探索建立原位逆转录聚合酶链式反应方法以用于检测ppGalNAcT-2在细胞株中的表达.方法采用原位逆转录聚合酶链式反应检测胃癌细胞株SGC-7901中ppGalNAcT-2的表达.结果胃癌细胞株 SGC-7901中ppGalNAcT-2表达有差异,在细胞株中约有30%的细胞表达.结论原位逆转录PCR技术用于探索 ppGalNAcT-2在肿瘤细胞中的表达是可行的,它有助于对ppGalNAcT-2功能的进一步了解.

    作者:胡笳;徐爱华;莫建华;周迎会;吴士良 刊期: 2004年第01期

  • 肩袖损伤MRI检查各序列对照分析

    分析30例肩关节疼痛患者的MRI检查资料,所有病例MRI检查均作SE/T1WI、TSE/T2WI及STIR扫描.比较STIR序列与SE/T1WI、TSE/T2WI序列在肩袖损伤诊断中的敏感性和特异性.结果诊断肩袖完全撕裂6例,部分撕裂14例,肩袖结构完整10例.提示MRI各序列检查对肩袖损伤的诊断价值高,能很好地显示病变部位和组织成分变化;相对SE或TSE序列而言,STIR技术的应用提高了肩袖损伤检出的敏感性.

    作者:朱建兵;黄文才;杨晓春;沈钧康 刊期: 2004年第01期

  • 骨髓移植中骨髓处理与造血恢复的关系

    红细胞血型主次均不合的异基因骨髓移植中,抽取的骨髓在输注前需要去除骨髓中的红细胞、保养液、血浆、抗凝剂和脂肪等物质,有效地收集骨髓中的单个核细胞(MNC)和CD34+的造血干/祖细胞,从而减少因血型不合而引起的输血反应及保证回输中造血干/祖细胞的数量.

    作者:常惠荣;吴德沛;朱子玲;孙爱宁;仇惠英;唐晓文;傅铮铮;马骁;顾婷婷 刊期: 2004年第01期

  • 竞争性定量RT-PCR检测妊高征患者血清对脐静脉内皮细胞TR基因表达的影响

    目的建立一种能有效检测培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中硫氧还蛋白还原酶(TR)基因表达的方法.探讨硫氧还系统与妊高征(PIH)发病之间的关系.方法以RT-PCR方法克隆TR基因,用内部缺失法构建其竞争模板,将竞争模板加入目的基因的逆转录扩增体系中,根据标准曲线得出模板中目的基因的含量.用该方法分别检测22例PIH患者及15名正常孕妇血清对体外培养的HUVEC中TR基因表达水平的影响.结果建立了竞争性定量逆转录-聚合酶链反应(cQRT-PCR)半定量分析TR基因表达水平的方法;用该方法测得PIH患者及正常孕妇血清均能使HUVEC中TR基因表达显著上调,且两者上调幅度无明显差异.结论 PIH患者内在TR基因调节缺陷是导致患者体内抗氧化能力不足的主要因素,与血清中病理性细胞因子改变无明显关系.

    作者:丁洁;庞爱明;何杨;杨伟文 刊期: 2004年第01期

  • 鼠脑缺血再灌注损伤后P-、L-选择素表达的研究

    目的研究P-、L-选择素在鼠局灶性脑缺血再灌注后的表达规律,探讨P-、L-选择素在脑缺血再灌注损伤中的作用.方法 72只雄性SD鼠随机分为假手术组和脑缺血2 h再灌注2 h、3 h、4 h、6 h、12 h、24 h、48h组,采用尼龙线栓塞法建立鼠局灶性脑缺血再灌注模型,用免疫组化法检测脑组织缺血再灌注不同时间点P-、L-选择素的表达.结果假手术组未见P-、L-选择素的表达.P-选择素在脑缺血再灌注后3 h出现少量表达,12 h达高峰,48 h仍有表达;L-选择素在脑缺血再灌注后2 h出现少量表达,6 h达高峰,24 h仍有表达.结论鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中,P-、L-选择素表达明显上调,提示两者介导了白细胞、脑微血管内皮细胞的黏附,参与了脑缺血再灌注损伤的病理过程.

    作者:张世明;孙雪波 刊期: 2004年第01期

  • 重型肝炎血清甲胎蛋白水平与预后的关系

    采用放射免疫分析法检测40例重型肝炎患者血清AFP水平.结果显示,血清AFP呈高水平者(>400 μg/L)预后良好;血清AFP呈低水平者(≤4100 μg/L)常病情恶化.提示观察血清AFP的水平变化对判断重型肝炎的预后有参考价值.

    作者:林斌 刊期: 2004年第01期

  • 50例散发性乳腺癌患者BRCA1基因的检测

    应用PCR和直接测序方法检测50例散发性乳腺癌中国汉族患者的BRCA1基因突变情况,结果未发现BRCA1基因突变现象.提示散发性乳腺癌中国汉族患者BRCA1基因突变较为罕见,与国外报道一致.

    作者:王旭芬;丰美芳;杨吉成 刊期: 2004年第01期

  • 大脑原始神经外胚层肿瘤的临床与病理分析

    目的分析大脑原始神经外胚层肿瘤的临床与病理特点.方法 使用光镜、免疫组化和临床资料对7例大脑原始神经外胚层肿瘤进行观察和分析.结果7例中5例为儿童和青少年,病程短且颅内高压症状突出;肿瘤组织由小圆形细胞构成;免疫组化:NSE阳性5例,Syn阳性1例,CD99阳性2例,Vimentin阳性1例,GFAP、S-100均为阴性;CT表现为混合密度或均匀高密度肿块,MRI呈长T1、长T2信号. 结论大脑原始神经外胚层肿瘤的临床预后极差,诊断主要依靠病理.

    作者:傅军;周幽心;徐峰;叶明;周岱;鲍耀东;康苏娅 刊期: 2004年第01期

  • Wolter 钢板治疗Ⅲ型肩锁关节脱位17例

    用Wolter钢板治疗Tossy Ⅲ型肩锁关节脱位17例,其中新鲜脱位14例,陈旧性脱位3例.所有病例切口均一期愈合.术后1周开始活动肩关节,6周内绝大部分达正常范围.随访6~12个月,按Karlsson疗效评定标准,优良率达92.9%.表明用Wolter钢板治疗Ⅲ型肩销关节脱位,固定牢靠,安全,方便,是一种较好的治疗方法.

    作者:张圣兵;姜为民 刊期: 2004年第01期

  • 术后早期炎性肠梗阻18例分析

    分析18例术后早期炎性肠梗阻的临床表现特点、发病机制、诊断与治疗方法.其中17例行保守治疗,1例手术治疗无效后继续保守治疗,结果均治愈,平均治愈时间10.9 d.提示术后早期炎性肠梗阻发病机制以肠道功能障碍为主,多发生于术后1~2周,宜采用保守治疗.

    作者:陈彦;汪良;朱兴国 刊期: 2004年第01期

  • 呼吸道合胞病毒毛细支气管炎患儿T细胞亚群和相关细胞因子的变化及其临床意义

    对58例呼吸道合胞病毒(RSV)毛细支气管炎患儿(RSV组)及20名正常儿童(对照组),采用间接免疫荧光检测外周血T细胞亚群CD4、CD8的比例,ELISA方法及多标记免疫分析系统检测血清IL-4和INF-γ的表达水平.结果显示,RSV组与对照组外周血T细胞亚群CD4和CD8无明显差异(P>0.1),CD4/CD8比值RSV组显著高于对照组(P<0.02);血清IFN-γ两组无明显差异(P>0.1);IL-4和IL-4/IFN-γ RSV组均显著高于对照组(分别P<0.05和P<0.02).表明RSV毛细支气管炎患儿存在T细胞亚群变化(CD4/CD8比值增高);以IL-4为代表的Th2类细胞因子表达和释放增多,导致Th1/Th2免疫反应失衡.这与支气管哮喘有相似变化,提示两者的发病机制存在一定的联系.

    作者:黄莉;季伟;周卫芳;朱灿红 刊期: 2004年第01期

  • 反复自然流产患者血凝变化与抗心磷脂抗体的关系

    目的探讨反复自然流产(RSA)患者血凝改变与抗心磷脂抗体(ACA)的相关性.方法采用金标免疫斑点法测定40例RSA患者和同期40名已育健康妇女(正常对照组)的ACA,并用ELISA法分别检测了她们血浆中的6-酮-PGF1α、蛋白C(PC)、蛋白S(PS)、Annexin V抗体的含量. 结果 40例RSA组中ACA阳性率为47.5%.与正常对照组比较,RSA组中ACA阳性患者血浆6-酮-PGF1α、PC、PS水平有不同程度的下降,抗 Annexin V抗体的含量升高. 结论 ACA阳性患者自然流产的机制可能是ACA致抗凝物质抗凝效应降低,舒血管作用减弱,血液高凝,孕期胎盘血栓形成.

    作者:陈洁;沈宗姬;李红;徐文新;华月琴;徐新红 刊期: 2004年第01期

  • 套式聚合酶链反应直接测序法分析产超广谱β-内酰胺酶菌TEM全基因

    目的建立套式聚合酶链反应直接测序方法分析产超广谱β-内酰胺酶菌TEM全基因,以便TEM分型和发现新的亚型.方法根据Genbank核酸数据库已登录的TEM各亚型序列,在保守区自行设计4条引物,分A、B两段半套式重叠扩增TEM全基因;并对A段作正向测序,B段作反向测序. 结果大肠埃希菌TEM1、TEM2、TEM26等3种典型菌株均成功扩出A、B两段,产物直接测序波峰锐利,信噪比值高.该三株菌测得的序列与已在Genbank登录的序列一致.结论套式聚合酶链反应直接测序可用于TEM分型研究.

    作者:丁云芳;糜祖煌;张建华;秦玲 刊期: 2004年第01期

  • 凋亡调控基因Fas/APO-1、bcl-2在胆囊癌中的表达及与生物学特性的关系

    目的研究肿瘤凋亡调控基因Fas/APO-1、bcl-2在胆囊癌发生发展中的作用.方法应用免疫组化法对28例胆囊癌及其癌旁组织、20例胆囊息肉和腺瘤组织检测基因Fas/APO-1、bc1-2的表达,并分析它们与胆囊癌生物学特性的关系.结果胆囊癌组织中bc1-2表达率与癌旁组织、息肉和腺瘤组织相比显著增高,而Fas/APO-1表达明显降低(均P<0.05);与肿瘤生物学特性的关系,bc1-2蛋白表达率在高、中分化组中明显低于低、未分化组,NevinⅠ、Ⅱ、Ⅲ期低于Ⅳ、Ⅴ期,而Fas/APO-1蛋白表达则相反(均P<0.05).结论 bc1-2为胆囊癌细胞凋亡抑制基因,而Fas/APO-1则为促进基因,两者在胆囊癌的发生发展中起重要作用.

    作者:颜鸣;吴晓阳;李海 刊期: 2004年第01期

  • 胶原酶解离体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞

    用0.2%胶原酶Ⅰ解离原代培养大鼠主动脉平滑肌细胞.取出主动脉胸、腹段,剥除外膜,血管纵向剖开,去除内皮细胞.撕下中膜,快速剪切,用0.2%胶原酶液置摇摆仪上振摆消化约8 h(37℃,35次/min),离心弃上清,加培养液,在37℃温箱培养.结果光电显微镜下见细胞呈梭形或长梭形.用抗肌动蛋白α-actin的单克隆抗体鉴定平滑肌细胞的特异性肌动蛋白,见胞浆内有明显的细胞细丝,呈现淡黄棕色,细丝与细胞长轴相平行,呈现阳性.表明用0.2%胶原酶解离原代培养法进行平滑肌细胞培养,细胞产量高、质量好、培养时间短、稳定性强、培养成功率高,是一种快速简便的培养方法.

    作者:李红霞;程绪杰;陈弹;周琳;杨向军;刘志华 刊期: 2004年第01期

  • GDNF基因克隆及表达载体的构建

    目的克隆大鼠胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)全长基因,构建真核细胞表达质粒.方法从孕17 d大鼠胚胎脑组织中提取RNA,参照分子克隆指南,合成cDNA第1、2链,加入引物PCR扩增目的基因,与 pcDNA3质粒连接,构建表达质粒.结果提取的总RNA经纯化后电泳出现18 s和28 s两条带,PCR扩增的目的基因为630 bp大小的条带,测序结果为633 bp.结论正确地克隆了大鼠GDNF基因全序列,为进一步获得重组活性的GDNF蛋白和神经系统疾病的基础和临床研究奠定了基础.

    作者:王运良;张志琳;包仕尧;石向群 刊期: 2004年第01期

  • 抗内皮细胞抗体测定在鉴别特发性血小板减少性紫癜和系统性红斑狼疮中的临床意义

    目的研究抗内皮细胞抗体(AECA)测定在鉴别特发性血小板减少性紫癜(ITP)和系统性红斑狼疮(SLE)中的临床意义.方法用ELISA法分别测定76例ITP患者、41例SLE患者及50名正常人血清中的AECA水平. 结果 SLE组、ITP组患者的血清AECA水平明显高于正常对照组(P<0.01);SLE组患者的血清AECA水平显著高于ITP组(P<0.01). 结论 AECA的测定对鉴别ITP和SLE有显著的临床意义.

    作者:庄茜;庞爱明;赵益明;阮长耿 刊期: 2004年第01期

苏州大学学报(医学版)杂志

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主管:江苏省教育厅

主办:苏州大学