耿纪群；谢宗涛；蔡铭；李刚；韩悦；游庆军
颅内动脉瘤形成的病因和机制目前仍不清楚,血管内皮细胞钙黏蛋白(VE-cadherin)在保持血管内皮细胞结构的稳定性和完整性、调节内皮细胞之间的通透性中发挥重要作用,而Src激酶参与调控VE-cadherin的磷酸化及各种细胞内信号[1].本研究应用实验性大鼠颅内动脉瘤模型模拟体内颅内动脉瘤形成过程中血管壁的损害,探讨动脉瘤形成过程中Src激酶和VE-cadherin磷酸化的表达.
作者：李美华；聂艳良；张贤华；梁尚栋 刊期： 2012年第11期
目的 观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)小干扰RNA(siRNA)对胰腺癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达水平的影响.方法 利用siRNA技术抑制VEGF及bFGF表达,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测及酶联免疫吸附试验(ELISA)检测胰腺癌细胞株VEGF表达变化.结果 Panc-1及PCT-3细胞VEGF mRNA表达受到显著抑制,Panc-1为0.20 ±0.05,PCT-3为0.23±0.02.sw1990及PCT-3分泌VEGF受到显著抑制,sw1990为(1940.67 ±93.84) ng/L,对照组为(2560.67±181.79) ng/L；PCT-3为(174.00±98.73) ng/L,对照组为(779.33 ±317.52) ng/L.结论 bFGFsiRNA能够抑制胰腺癌细胞VEGF核酸及蛋白水平表达.
作者：闫长青；赵玉沛；刘三光；戚诚；张建生；王文斌 刊期： 2012年第11期
我们在高原环境条件下以体外培养猪肝细胞构建生物人工肝(BAL),探讨其对动物急性肝衰竭(AHF)的支持治疗效果.一、材料与方法随机选取已适应本地高原环境的健康长白仔猪(体质量28.5-33.0 kg,雌雄不拘)4头用于分离肝细胞制备中空纤维型生物反应器[1],6头用于以3％硫代乙酰胺(TAA)制备AHF模型[2].
作者：张明森；李素芝；龙仁玲；宋克轩；江玉兰 刊期： 2012年第11期
有研究结果表明,树突状细胞(DC)是一种异质性的细胞群体,在不同的成熟阶段具有不同功能,其中处于未成熟阶段DC可诱导免疫耐受,而成熟DC诱导机体免疫应答[1].组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACi)主要作为抗癌药物在临床使用,研究结果显示其在非细胞毒性剂量时还具有抗炎、抗过敏等功效[2].本实验旨在观察HDACi曲古霉素A(TSA)在体外对小鼠骨髓源性DC表型及功能的影响.
作者：江涛；刘牧林 刊期： 2012年第11期
目的 观察miR-138对结肠癌细胞SW480人端粒酶逆转录酶(hTERT)表达的影响,探讨miR-138模拟体mimic沉默hTERT在SW480对5-氟尿嘧啶(5-Fu)化疗药物敏感性中的作用.方法 流式细胞仪检测50 nmol/L和10 nmol/L miR-138模拟体(mimic)转染SW480后hTERT的表达；5μl异硫氰酸荧光素(FITC)标记的细胞核增殖抗原(Ki-67)抗体染色转染和未转染50 nmol/Lmimic的SW480,流式细胞仪检测1 mmol/L 5-Fu处理和未处理的细胞增殖；碘化丙锭(PI)单染和膜联蛋白Ⅴ(Annexin Ⅴ)-PI双染转染和未转染50 nmol/L mimic的SW480,流式细胞仪检测1 mmol/L5-Fu处理和未处理的细胞周期和凋亡状态.结果 miR-138 mimic在50 nmol/L和10 nmol/L时,hTERT表达率分别为(30.25±1.34)％和(60.03±2.78)％,而阴性对照组为(87.50±1.63)％；转染miR-138 mimic的SW480细胞组与非转染组Ki-67阳性细胞分别为(58.18±2.90)％和(83.45±2.41)％；sub-G0期分别为(27.33±1.70)％和(1.05±0.19)％；凋亡率达(29.50±2.27)％和(5.30±1.74)％；mimic转染组、5-Fu处理组和mimic转染与5-Fu联合组的细胞增殖率分别为(61.00±1.73)％、(57.00±2.03)％和(23.00±1.24)％,sub-G0期细胞分别为(28.12±1.47)％、(34.87±2.01)％和(70.94±3.04)％；凋亡细胞比例分别为(32.15 ±2.76)％、(40.07±2.58)％和(80.84±3.06)％,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 MiR-138 mimic可以抑制SW480中hTERT表达并增强SW480对5-Fu的敏感性.
作者：曾祥勇；李伟；宋亚锋；吴川清；王继亮；王国斌；陶凯雄 刊期： 2012年第11期
目的 探讨人结肠癌相关成纤维细胞(CAFs)及结肠正常成纤维细胞(NFs)的培养和鉴定方法,分析两者在生物学特性和蛋白表达方面的差异.方法 采用组织块法和胶原酶消化法进行人结肠CAFs和NFs的原代培养；选择第3代人结肠CAFs及NFs,通过形态学观察和免疫细胞化学染色进行鉴定；细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测人结肠CAFs和NFs的增殖活性,并绘制7d生长曲线；酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定结肠CAFs和NFs细胞上清液中骨桥蛋白(OPN)、转化生长因子-β(TGF-β)、血管内皮生长因子(VEGF)及基质金属蛋白酶(MMP)-2含量.结果 结肠CAFs胞质突减少,细胞不规则,排列紊乱,可见双核及多核细胞,除细胞角蛋白(CK)外,波形蛋白(vimentin)与α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)均为阳性表达；与结肠NFs比较,结肠CAFs增殖活性明显增强；ELISA法测定结肠CAFs和NFs细胞上清液中蛋白含量,其中OPN分别为(2.106±0.137) μg/L和(1.499±0.151) μg/L(P ＜0.01),TGF-β分别为(331.203±12.203) ng/L和(315.391±12.998) ng/L(P＜0.01),VEGF分别为(17.216±0.632) ng/L和(14.887 ±0.661) ng/L(P＜0.01),MMP-2分别为(1.830±0.192) μg/L和(1.436±0.102) μg/L(P ＜0.01).结论 通过组织块法和胶原酶消化法原代培养皆可获得高纯度的人结肠CAFs和NFs；两者在形态结构、增殖活性和蛋白表达等方面差异有统计学意义,这些差异可能是人结肠CAFs发挥其促结肠癌发生发展作用的生物学基础.
作者：乌新林；林凯金；苏秀兰；侯明星；董培德；施琳 刊期： 2012年第11期
目的 探讨结肠癌Rho解离抑制因子2(RhoGDI2)基因的表达及其与临床病理的关系.方法 运用组织芯片技术、免疫组织化学法检测75例结肠癌患者原发癌灶和癌旁正常结肠组织的RhoGDI2的表达及其与相应结肠癌临床病理参数之间的关系.运用Western blot和实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测18例配对结肠腺癌原发灶组织和癌旁5 cm正常结肠组织的RhoGDI2的表达.结果 RhoGDI2阳性率在结肠癌原发癌灶和癌旁正常组织分别为73.33％和33.33％ (P＜0.05)；RhoGDI2阳性率与临床TNM分期相关(P＜0.01),与原发灶T分期范围相关(P＜0.05),与淋巴结N分期、远处转移M无明显相关(P＞0.05).18例结肠癌RhoGDI2 Western blot灰度值高于正常组织的4.8倍(P＜0.05).Real-time PCR结果显示癌灶组RhoGDI2相对表达量高于癌旁对照组(P ＜0.05)；RhoGDI2表达阳性率与临床TNM分期明显相关(P＜0.01),与原发灶T分期明显相关(P＜0.05).结论 RhoGDI2在结肠癌中表达上调,与临床TNM分期明显相关.
作者：李守峰；刘璐；伍衡；曾育杰；许鹤洋；来伟；褚忠华 刊期： 2012年第11期
目的 构建载有自体骨骼间充质干细胞(MSCs)的聚ε-己内酯(PCL)/明胶补片,观察其对大鼠肛门括约肌损伤的修复作用.方法 制备Wistar大鼠肛门括约肌损伤模型,分为3组:A组不做处理,B组直接缝合,C组外科缝合+富含MSCs的PCL/明胶补片.术后30 d评估肛门括约肌收缩能力,观察肛管及下端直肠组织形态学改变.结果 MSC均匀分布于PCL/明胶支架,MSCs特异性抗原(81.5±7.1)％ CD45+,(97.6±1.6)％CD90+,(85.3±5.1)％CD44-,(95.4±1.5)％ CD34-,MSCs未发生表型改变；细胞生长较常规方法缓慢[(0.27 ±0.25) ×104比(5.12±0.48) ×104,P ＜0.05).组织学观察C组新生的括约肌区域胶原沉积较少,并有明显的新生血管形成.结论 联合MSC-PCL/明胶补片修补肛门括约肌损伤,具有减少瘢痕和促进组织血管生成的作用.
作者：丁召；陈炜；袁玉峰；刘志苏；Tran Nguyen；江从庆 刊期： 2012年第11期
目的 通过在人皮肤成纤维细胞(HSFs)中过表达TRAP-1-Like Protein(TLP),观察其对细胞生物学性状的影响.方法 通过慢病毒途径在人正常皮肤成纤维细胞中获得稳定过表达TLP基因后,检测细胞增殖、收缩活性以及TLP、Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达变化.结果 慢病毒介导外源性TLP基因在细胞中稳定表达.TLP可协同转化生长因子-β1(TGF-β1)促进细胞活力升高60％(48 h)(P ＜0.05)；纤维凝胶体积变化差异有统计学意义(P＜0.05)；实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot结果都显示Ⅰ/Ⅲ型胶原的合成与TLP的表达量呈正相关(P＜0.05),细胞因子TGF-β1刺激下此反应更明显.结论 TLP可促进人成纤维细胞增殖和收缩,并促进其合成Ⅰ/Ⅲ型胶原.
作者：王雪；陈骏；钱云良；沃雁；王琛；王丹茹 刊期： 2012年第11期
目的 观察柴胡皂苷d(SSd)对阻塞性黄疸大鼠胆汁酸代谢、肝细胞游离钙及基质交联分子1(STIM1)基因表达的影响.方法 将108只SD雄性大鼠随机分为假手术对照组、阻黄组、阳性药物对照组、高、中、低剂量SSd组,同时各组随机分7、14、21d3个时段,每时段每组6只,建模成功后,分别连续给药7、14、21 d,于各时段末取肝组织和下腔静脉血标本,检测血清总胆汁酸(TBA)；应用流式细胞仪通过荧光指示剂Fluo-3/AM测定肝细胞内钙离子浓度；逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测STIM1的mRNA表达.结果 阻黄模型建立7、14、21 d后,阻黄组血清TBA逐步增加,肝细胞游离钙平均荧光强度(MFI)值逐步上升,STIM1 mRNA表达逐步减弱；SSd治疗组7d末,与阻黄组比较,低、中、高剂量组TBA水平逐步下降,差异有统计学意义(P＜0.05)；肝细胞游离钙MFI值逐步下调,差异有统计学意义(P＜0.05)；STIM1 mRNA表达逐步增强,差异有统计学意义(P＜0.05)；14、21 d末各检测指标变化趋势与7d末相同.结论 SSd能降低血清TBA浓度,上调STIM1 mRNA表达,抑制肝细胞钙超载,从而减轻阻塞性黄疸大鼠肝脏损害.
作者：戴维；陈念平；陈赛红；包仕廷；廖博懿；刘刚 刊期： 2012年第11期
目的 比较醋酸钠林格氏液(AR)、乳酸林格氏液(LR)和生理盐水(NS)对失血性休克犬碱剩余(BE)、乳酸(LAC)水平及其血液动力学的影响.方法 将健康成年雄性犬15条随机分为3组:AR组、LR组和NS组,用放血法复制失血性休克模型.分别于放血前、复苏前和复苏后5、30、60 min检测血流动力学参数、动脉血气和血乳酸值.结果 平均动脉压(MAP)恢复至休克前的水平,AR组[(41.10±2.18) ml/kg、(28.15±0.29) min]较LR组[(54.17±2.97) ml/kg、(43.26±0.87) min]、NS组[(59.61±2.88) ml/kg、(48.19±1.23) min]所需输液量更少、时间更短,差异有统计学意义(P＜0.05)；复苏30 min后,MAP AR组[(99.25±12.13) mmHg(1mmHg=0.133 kPa)]较LR组[(84.25±11.87)mm Hg]、NS组[(81.25±13.26) mm Hg]明显升高,且AR组较其他组血液pH值、BE及LAC水平显著改善,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 醋酸钠林格液比乳酸林格氏液和生理盐水更适合失血性休克犬的早期紧急液体复苏治疗.
作者：闵维雄；徐亮；王育斌；袁世荧 刊期： 2012年第11期
目的 检测死亡相关蛋白激酶(DAPK1)在肿瘤组织中的表达,探讨DAPK1表达与肿瘤患者临床特征间的关系及其意义.方法 通过Western blot法检测DAPK1在人肿瘤组织中的表达,高清晰度彩色图文分析系统(HPIAS)分析各组样本相对吸光度(A)值.结果 DAPK1在部分宫颈上皮内瘤样病变(CIN)和宫颈癌组织中表达,相对A值分别为0.64±0.04和0.36±0.03,两者间差异有统计学意义(P＜0.05)；DAPK1在正常宫颈组织均有表达(相对A值为0.89±0.03),且明显高于宫颈CNI和宫颈癌组织,差异有统计学意义(P＜0.05)；无淋巴结转移宫颈癌组织DAPK1表达(相对A值为0.39±0.03)明显高于有淋巴结转移组织(0.16±0.04),差异有统计学意义(P＜0.05).而DAPK1的表达与患者年龄、肿瘤大小无明显相关.结论 DAPK1表达降低可能与肿瘤的发生有关；DAPK1基因可能参与宫颈癌的侵袭与转移.
作者：舒晓燕；袁明；王冬花；陈华明 刊期： 2012年第11期
NS-398是一种选择性环氧合酶-2(COX-2)的抑制剂,其抗肿瘤作用与其抑制COX-2的活性,减少前列腺素生成有关[1].本研究旨在探讨NS-398对人胆管癌细胞QBC939的作用机制.一、材料与方法1.材料:人胆管癌QBC939细胞株购买于上海中国科学院细胞库.0.25％胰蛋白酶、改良RPMI 1640培养液、胎牛血清、噻唑蓝(MTT,美国Hyclone公司),二甲基亚砜(DMSO)、NS-398(美国Sigma公司),人血管内皮生长因子(VEGF)酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒、人COX-2 ELISA试剂盒(烟台塞尔斯生物技术有限公司),细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒(碧云天生物技术研究所),Alexa Flour 488膜联蛋白Ⅴ(Annexin Ⅴ)细胞凋亡检测试剂盒(美国Invitrogen公司),Transwell小室(美国Corning公司),流式细胞仪(美国Beckman Coulter公司).
作者：范友杰；曹景玉；孙文德；韩瑞；李舰；刘世海 刊期： 2012年第11期
目的 观察下调蛋白激酶Cε(PKCε)基因对肾透明细胞癌细胞株769P细胞的生长、侵袭及迁移能力的影响.方法 用脂质体将PKCε小干扰RNA (siRNA)转染至769P细胞中,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot分析PKCε基因及蛋白的表达；噻唑蓝(MTT)及单细胞克隆试验测定细胞的生长；划痕及侵袭试验检测细胞的侵袭和迁移能力.结果 通过siRNA下调769P细胞中PKCε的表达后,细胞的增殖能力下降明显(P＜0.05)；同时,细胞的侵袭和迁移能力较正常细胞降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 PKCε可影响人肾透明细胞癌细胞株769P细胞的生长及细胞侵袭、迁移能力.
作者：陈俊星；黄斌；曹开源；郭胜杰；庄锦涛；潘金成；莫承强；丘少鹏 刊期： 2012年第11期
近年来研究表明组蛋白甲基转移酶SET-和MYND-结构域含有蛋白(SMYD3)在多种肿瘤中均呈高表达,可能与Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)通路及其下游原癌基因c-myc有关.我们通过microRNA沉默SMYD3基因,探讨其分子机制.
作者：张怡；王娟娟；郭宇；戴永平；柯孔亮 刊期： 2012年第11期
目的 观察脑源性神经营养因子(BDNF)基因修饰脂肪间充质干细胞(ADSCs)治疗大鼠急性脊髓损伤效果.方法 获取大鼠ADSCs细胞,观察其生物学特征,行溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记及腺病毒BDNF基因转染.将36只SD大鼠随机分为3组:脊髓损伤对照组(A)、ADSCs治疗组(B)及BDNF转染的ADSCs治疗组(C).在脊髓损伤部位行相应处理:A组植入明胶海绵；B组植入含3.0μl(3×1010/L) ADSCs的明胶海绵；C组植入含3.0μl(3×1010/L)转染ADSCs的明胶海绵.行为学评分及观察免疫荧光染色.结果 成功分离并培养ADSCs,可于体外稳定增殖.术后7、14、28 d,C组运动功能评分为(10.55±0.80、14.39 ±0.25、19.71 ±2.14)分,明显高于A组(5.35 ±0.68、7.93±0.45、10.78 ±1.18)分、B组(7.01 ±0.39、10.33±0.27、14.87 ±0.37)分.免疫荧光染色显示移植ADSCs脊髓组织内,均可见不同程度的分布有BrdU阳性标记细胞；荧光染色结果提示部分BrdU阳性的移植细胞同时呈胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性.结论 ADSCs在移植后能在宿主体内存活、迁移并分化.移植ADSCs之后,运动功能可见改善,证实ADSCs移植能改善中枢神经系统功能.
作者：熊敏；何宁；曾云；陈森；刘志刚；何宏生 刊期： 2012年第11期
目的 观察沉默缺氧诱导因子(HIF)-1α基因表达对于缺氧微环境下人胰腺癌BxPC-3细胞株中糖酵解相关基因表达的影响.方法 通过合成小于扰RNA((siRNA))转染沉默BxPC-3细胞株中HIF-1α基因表达.将细胞分为空白对照组(BxPC-3)、空白质粒转染对照组(GFP)和HIF-1α基因沉默组(sh-HIF-1α),分别在正常环境(21.0％O2)和缺氧环境(0.5％～1.0％ O2)中培养48 h后,检测各组细胞中糖酵解相关基因[如丙酮酸激酶1(PDK-1)、乳酸脱氢酶A(LDH-A)和柠檬酸合成酶(CS)]的表达以及细胞糖酵解产物乳酸含量的改变.结果 与正常环境比较,缺氧培养后sh-HIF-1α组细胞内HIF-1αmRNA增加了12.4％,蛋白增加了1.6倍,显著低于BxPC-3组和GFP组(P＜0.05),PDK-1和LDH-A的表达也明显低于两个对照组(P＜0.05).相应的sh-HIF-1α组的乳酸含量为(4.8 ±0.3)nmol/106个细胞,明显低于BxPC-3组(9.1±0.5)nmol/106个细胞和GFP组(9.2±0.5) nmol/106个细胞(P＜0.05).相反,缺氧时BxPC-3组和GFP组细胞中与线粒体氧化磷酸化相关的CS基因表达明显下降,低于其在sh-HIF-1α组细胞中的表达(P＜0.05).结论 缺氧可以诱导BxPC-3细胞株中HIF-1α基因高表达并促进糖酵解相关的PDK-1和LDH-A等基因表达.而通过沉默HIF-1α基因,可以抑制上述基因的表达,并促进CS基因表达,从而抑制肿瘤细胞的糖酵解代谢.
作者：蒋奕；吴国豪；何国栋；庄秋林；张波；韩寓嵩 刊期： 2012年第11期
索拉非尼能抑制细胞转化分裂介质(Raf-1)、B-Raf、B-Raf V600E、血管内皮生长因子受体(VEGFR)、血小板源性生长因子受体(PDGFR)-h、Flt-3和c-Kit等多种激酶活性,已被美国食品药品监督管理局批准用于晚期肾癌及肝癌的治疗[1-2].国外临床前试验发现索拉非尼对胆管细胞癌也具有抗瘤活性,但确切机制尚不清楚[3-4].本实验旨在观察在体外条件下索拉非尼对胆管细胞癌增殖及凋亡的影响,并探讨其机制.
作者：万云燕；李玲；黄军利；黄榕；应可满；罗琪；李文娇；李文岗 刊期： 2012年第11期
目的 体外诱导甲胎蛋白(AFP)158-166特异性T细胞,检测其对AFP+肝癌细胞的特异性杀伤能力.方法 采用流式细胞术及PCR-SSP法从20例健康志愿者中筛选基因型HLA-A0201阳性者,每例取外周血50 ml获取单核细胞,细胞因子贴壁黏附培养收获树突状细胞(DC).将DC负载HLA-A0201表位态AFP158-166后按1∶10比例与新鲜淋巴细胞混合培养、增殖,噻唑蓝法检测其对HepG2、负载和未负载AFP158-166的T2细胞的杀伤能力.结果 成熟DC表面抗原CD83、CD80和CD86阳性率分别为(81.3 ±2.4)％、(92.8±1.4)％和(70.5 ±1.9)％.诱导的T细胞在效靶比40∶1时对HepG2、负载和未负载AFP158-166的T2细胞杀伤率分别为(61.1±3.4)％、(70.6±2.4)％和(16.3 ±2.7)％.结论 人外周血体外诱导的AFP158-166特异性T细胞可杀伤AFP+ HepG2和负载AFP158-166的T2细胞.
作者：孙龙昊；章由贤；何向辉；章志翔；朱理玮 刊期： 2012年第11期
表观遗传对小分子核糖核酸(microRNA)的表达方式以及肿瘤的诱发起着重要的调控作用.microRNA受甲基化和组蛋白修饰等经典表观遗传机制调控[1],另一方面microRNA对DNA(脱氧核糖核酸)甲基化也能够产生一定的调节作用[2].鉴于microRNA与DNA甲基化在肿瘤发生发展过程中的共同作用,现阐述microRNA与DNA甲基化的相互关系在基因表达调控、肿瘤形成以及在抗肿瘤领域内应用研究的新进展.
作者：洪涛；何小东；万鑫 刊期： 2012年第11期
中华实验外科杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中华医学会
