耿纪群；谢宗涛；蔡铭；李刚；韩悦；游庆军
目的 观察聚乙烯亚胺(PEI)转染骨髓间充质干细胞(BMSCs)的效率,从而优化可用于转染实验的条件.方法 利用细胞计数试剂盒(CCK-8)比色法检测0.2％～2.0％ PEI的细胞毒性,利用荧光显微镜和流式细胞仪测定N/P 3.97～ 37.75的转染效率、培养液中的氯喹(0～100 μmol/L)、10％白蛋白、5％血清及0～ 20 mmol/L Mg2+对PEI转染BMSCs效率的影响.结果 当完全培养基内的PEI浓度低于0.8％,BMSCs存活率为70％；N/P 15时PEI转染BMSCs的效率为14.4％；溶酶体抑制剂氯喹可增加PEI的转染效率,培养液中的10％白蛋白、5％血清及Mg2+可降低PEI转染效率.结论 PEI是一种有效的BMSCs非病毒转染剂.
作者：方志辉；谭金海；简超 刊期： 2012年第11期
目的 体外诱导甲胎蛋白(AFP)158-166特异性T细胞,检测其对AFP+肝癌细胞的特异性杀伤能力.方法 采用流式细胞术及PCR-SSP法从20例健康志愿者中筛选基因型HLA-A0201阳性者,每例取外周血50 ml获取单核细胞,细胞因子贴壁黏附培养收获树突状细胞(DC).将DC负载HLA-A0201表位态AFP158-166后按1∶10比例与新鲜淋巴细胞混合培养、增殖,噻唑蓝法检测其对HepG2、负载和未负载AFP158-166的T2细胞的杀伤能力.结果 成熟DC表面抗原CD83、CD80和CD86阳性率分别为(81.3 ±2.4)％、(92.8±1.4)％和(70.5 ±1.9)％.诱导的T细胞在效靶比40∶1时对HepG2、负载和未负载AFP158-166的T2细胞杀伤率分别为(61.1±3.4)％、(70.6±2.4)％和(16.3 ±2.7)％.结论 人外周血体外诱导的AFP158-166特异性T细胞可杀伤AFP+ HepG2和负载AFP158-166的T2细胞.
作者：孙龙昊；章由贤；何向辉；章志翔；朱理玮 刊期： 2012年第11期
目的 运用基因芯片技术分析胃泌素(GAS)高表达与无GAS表达大肠癌组织的差异表达基因,以筛选GAS依赖型大肠癌相关及候选基因.方法 运用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测43例大肠癌手术标本癌组织中GAS的含量,选择GAS高表达(实验组)与无GAS表达(对照组)的癌组织进行基因芯片分析,通过实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)技术验证芯片分析出的在信号传导通路中起关键作用的10个差异基因.结果 两类癌组织发生显著表达变化的基因有1182个,与对照组比较,在实验组中上调表达的基因有738个,下调表达的基因有444个,其中包括与细胞生长及增殖调控相关的基因、与癌细胞转移相关的基因以及与细胞骨架结构相关的基因,且主要集中于Wnt等多条信号传导通路中.选择10个在通路中起关键作用的基因进行Real-time PCR验证,验证的数据与芯片中的数据一致.结论 cDNA微阵列法可以用于筛选与GAS有关的大肠癌的相关基因,获得的差异表达基因具有强烈的代表性.
作者：徐洪海；吴佩；茆家定；吕坤；卢林明 刊期： 2012年第11期
目的 建立不同照射剂量下大鼠放射性肠炎模型及比较其各自特点,探讨其发病机制.方法 雄性SD大鼠90只,随机分为正常对照A组(18只)、小剂量5GyB组(24只)、中剂量10 Gy C组(24只)及高剂量15 Gy D组(24只),直线加速器对大鼠腹部一次性照射,在照射后2、4、7d,观察大鼠的体质量变化、死亡率、回盲部细菌移位率,光镜下观察小肠组织形态学变化,检测空肠一氧化氮(NO)的含量及采用酶联免疫吸附试验(ELESA)法检测空肠黏膜促炎细胞因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子(TNF)-α和抗炎细胞因子IL-4、IL-10、IL-1受体拮抗剂(IL-1ra)的蛋白含量.结果 放射后第2天,放射组均出现不同程度的精神差、进食少、腹泻、黏液血便等症状,与A组比较,B组各指标均无统计学意义(P＞0.05),而C、D组差异有统计学意义(P＜0.05),出现放射性肠炎,且D组较C组改变更大(P＜0.05)；第4天放射组各症状均加重,且D组大鼠全部死亡,与A组比较,B、C、D组各指标差异有统计学意义(P＜0.05),均存在放射性肠炎,且程度B组＜C组＜D组(P＜0.05)；第7天,C组仍存在各症状但较前缓解,与A组比较,B组各指标差异无统计学意义(P＞0.05),C组差异有统计学意义(P＜0.05),C组与B组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 本模型在不同的时间段均有各自典型的特点,适合放射性肠炎治疗研究的模型需要；放射性肠炎发病机制与NO及细胞因子变化存在密切的关系.
作者：洪智攀；武寒飞；赵克；丁健华；尹淑慧 刊期： 2012年第11期
目的 构建DNA电化学传感器用于快速检测结核杆菌的新方法.方法 根据互补序列一段设计捕获探针,另一段设计信号探针,两段探针与互补链结合构建“三明治”电化学传感模式,结合酶的催化作用放大电化学信号,实现对靶序列的高灵敏检测.结果 在优化条件下目标链浓度(10 nmol/L)检测结果的相对标准偏差(RSD)=5.0％(n=5)；目标DNA在浓度为50 ～ 200 pmol/L范围内与电流值呈线性相关,回归方程:电流(I) =720.4 +93.6×浓度(c),r=0.9982,检出限为1.6×10-12 mol/L.结论 此方法构建的传感器具有较高的检测灵敏度与良好的特异性.
作者：洪国粦；刘银环；潘鸿锦；傅希；章涛 刊期： 2012年第11期
目的 制备不同浓度的阿仑膦酸钠/磷酸钙骨水泥释放体系,观察阿仑膦酸钠对磷酸钙骨水泥结构的影响及复合释放体系体外释放的规律.方法 分别制备1wt％、3wt％和5wt％的载阿仑膦酸钠磷酸钙骨水泥释放体系,分别采用傅氏转换红外线光谱分析仪、扫描电子显微镜和高效液相色谱仪研究载阿仑膦酸钠磷酸钙骨水泥的结构和药物体外释放规律.结果 阿仑膦酸钠的载入没有改变磷酸钙骨水泥相成分的官能团；扫描电镜下各实验组微观结构相似,均呈珊瑚样状结晶体相互交织成网状结构；各组药物在同一时间点释放量(％)的差异无统计学意义(P＞0.05),各组药物的释放均分为48 h前的突释阶段和48 h后的缓释阶段,符合Higuchi机制扩散释放模型.结论 阿仑膦酸钠的载入对磷酸钙骨水泥的晶体结构基本没有影响,且在磷酸钙骨水泥释放体系中能够持续、稳定的释放.
作者：殷力；徐晨阳；李树山；韩奇财；娄超举；杜振宁；李红帅 刊期： 2012年第11期
目的 在小鼠胚胎干细胞(ESC)源性肝细胞移植中,应用半成熟树突状细胞(smDC)诱导免疫耐受.方法 绿色荧光蛋白(GFP)标记的129小鼠ESC按前期方法向肝细胞诱导分化,129小鼠smDC亦按前期方法由骨髓单核细胞诱导获得.smDC注入BALB/C小鼠3d后,再将ESC分化的肝细胞移植入BALB/C小鼠肝被膜下.检测肝转氨酶、外周血白细胞介素-2(IL)-2和IL-10水平变化,观察移植细胞生长及淋巴细胞浸润情况.结果 移植后7d,smDC组肝功能指标丙氨酸转氨酶(ALT)为212.58 U/L,较对照组512.27 U/L明显改善(P＜0.05),7d和14 d外周血IL-10水平较对照组明显升高,而IL-2水平较对照组明显降低(P＜0.05).移植细胞存活率在14、21 d smDC组较对照组明显增高,CD4 +T细胞浸润较对照组明显减轻.结论 在ESC源性肝细胞异基因移植中,smDC预输注可诱导部分免疫耐受,有望作为一种良好的移植耐受原应用于ESC分化细胞移植研究中.
作者：胡安斌；何晓顺；付必莽；商昌珍；闵军；蔡继业 刊期： 2012年第11期
目的 观察柴胡皂苷d(SSd)对阻塞性黄疸大鼠胆汁酸代谢、肝细胞游离钙及基质交联分子1(STIM1)基因表达的影响.方法 将108只SD雄性大鼠随机分为假手术对照组、阻黄组、阳性药物对照组、高、中、低剂量SSd组,同时各组随机分7、14、21d3个时段,每时段每组6只,建模成功后,分别连续给药7、14、21 d,于各时段末取肝组织和下腔静脉血标本,检测血清总胆汁酸(TBA)；应用流式细胞仪通过荧光指示剂Fluo-3/AM测定肝细胞内钙离子浓度；逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测STIM1的mRNA表达.结果 阻黄模型建立7、14、21 d后,阻黄组血清TBA逐步增加,肝细胞游离钙平均荧光强度(MFI)值逐步上升,STIM1 mRNA表达逐步减弱；SSd治疗组7d末,与阻黄组比较,低、中、高剂量组TBA水平逐步下降,差异有统计学意义(P＜0.05)；肝细胞游离钙MFI值逐步下调,差异有统计学意义(P＜0.05)；STIM1 mRNA表达逐步增强,差异有统计学意义(P＜0.05)；14、21 d末各检测指标变化趋势与7d末相同.结论 SSd能降低血清TBA浓度,上调STIM1 mRNA表达,抑制肝细胞钙超载,从而减轻阻塞性黄疸大鼠肝脏损害.
作者：戴维；陈念平；陈赛红；包仕廷；廖博懿；刘刚 刊期： 2012年第11期
索拉非尼能抑制细胞转化分裂介质(Raf-1)、B-Raf、B-Raf V600E、血管内皮生长因子受体(VEGFR)、血小板源性生长因子受体(PDGFR)-h、Flt-3和c-Kit等多种激酶活性,已被美国食品药品监督管理局批准用于晚期肾癌及肝癌的治疗[1-2].国外临床前试验发现索拉非尼对胆管细胞癌也具有抗瘤活性,但确切机制尚不清楚[3-4].本实验旨在观察在体外条件下索拉非尼对胆管细胞癌增殖及凋亡的影响,并探讨其机制.
作者：万云燕；李玲；黄军利；黄榕；应可满；罗琪；李文娇；李文岗 刊期： 2012年第11期
目的 探讨异基因骨髓注射在大鼠小肠移植中的免疫耐受作用和意义.方法 选用近交系大鼠F344/N和Wistar/A进行全小肠异位移植,实验组在异基因移植前7d取供体BMC行受体胸腺内注入,对照单纯同基因及异基因大鼠移植模型了解异基因供体骨髓在受体胸腺内注射能否减少移植后急性排斥反应的发生,观察其生存时间、病理结果及CD4、CD8、CD25的变化.结果 (1)A组移植大鼠平均存活时间为(7.33±1.03) d;B组为(43.76 ±4.57) d;C组为(55.28±7.48)d.(2)异基因大鼠异位全小肠移植术后3、7、15 d可出现典型的轻、中、重度排斥反应,而同基因组和实验组中未出现排斥反应.(3)异基因移植组术后CD4、CD25+,高于其他组(P＜0.05).而CD8的变化差异无统计学意义(P＞0.05).结论 移植术前7d异基因供体骨髓在受体胸腺内注射能显著减少小肠移植后急性排斥反应的发生,并可以抑制移植肠CD4、CD25细胞的表达.
作者：罗长江；焦作义；李继鹏；王为忠 刊期： 2012年第11期
目的 改良大鼠腹腔心脏移植术式,建立符合生理条件、稳定的动物模型.方法 取封闭群雄性SD大鼠248只为供受体,进行同种同基因腹腔心脏移植术,主肺动脉、左肾静脉的吻合方法为改良袖套法.结果 定向实验阶段共完成84例大鼠腹腔心脏移植手术,供心热缺血时间0 min,冷缺血时间(26.63±1.14) min,并发症主要为术中大出血、血栓形成.手术成功率为88.7％(72/84),72例术后7d存活率为100％.结论 改良大鼠心脏移植手术能明显缩短供心冷缺血时间,保证吻合口无出血,从而提高手术成功率.
作者：尧凯；高晓燕；董培；王祥慧；徐达；周芳坚；韩辉 刊期： 2012年第11期
目的 探讨结肠癌Rho解离抑制因子2(RhoGDI2)基因的表达及其与临床病理的关系.方法 运用组织芯片技术、免疫组织化学法检测75例结肠癌患者原发癌灶和癌旁正常结肠组织的RhoGDI2的表达及其与相应结肠癌临床病理参数之间的关系.运用Western blot和实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测18例配对结肠腺癌原发灶组织和癌旁5 cm正常结肠组织的RhoGDI2的表达.结果 RhoGDI2阳性率在结肠癌原发癌灶和癌旁正常组织分别为73.33％和33.33％ (P＜0.05)；RhoGDI2阳性率与临床TNM分期相关(P＜0.01),与原发灶T分期范围相关(P＜0.05),与淋巴结N分期、远处转移M无明显相关(P＞0.05).18例结肠癌RhoGDI2 Western blot灰度值高于正常组织的4.8倍(P＜0.05).Real-time PCR结果显示癌灶组RhoGDI2相对表达量高于癌旁对照组(P ＜0.05)；RhoGDI2表达阳性率与临床TNM分期明显相关(P＜0.01),与原发灶T分期明显相关(P＜0.05).结论 RhoGDI2在结肠癌中表达上调,与临床TNM分期明显相关.
作者：李守峰；刘璐；伍衡；曾育杰；许鹤洋；来伟；褚忠华 刊期： 2012年第11期
目的 观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外增殖及其分化潜能的影响.方法 体外培养大鼠BMSCs,分别设对照组和bFGF处理组,bFGF作用浓度分别为1、10、100 μg/L.作用72 h后,噻唑蓝(MTT)测吸光度(A)值反映细胞增殖.细胞免疫组织化学测细胞CD44的累积A值；逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞CD44的mRNA相对表达量.结果 在1 μg/L bFGF作用下其MTT A值为0.334±0.036较对照组A值0.251 ±0.033明显增高(P＜0.05).在1 μg/L bFGF作用下其细胞免疫组织化学测得CD44的累积A值较对照组明显增高(P＜0.01)；其RT-PCR测得CD44的mRNA相对表达量较对照组明显增高(P＜0.01).结论 作用浓度为1 μg/L的bFGF可促进BMSCs的体外扩增并有助于保持BMSCs的分化潜能.
作者：黄桂玲；邓宇 刊期： 2012年第11期
目的 探讨骨髓CD34+干细胞与骨髓单核细胞(MNCs)应用于组织工程小血管内皮化的效果,并作比较.方法 采集犬骨髓,经免疫磁珠分离出CD34+细胞,内皮细胞生长因子(VEGF)诱导分化为内皮细胞并扩增,行细胞免疫荧光、免疫组织化学和体外成血管实验鉴定；将培养后的细胞和未经分离的MNCs分别种植于人工小血管支架,扫描电镜观察,比较两组组织工程小血管的内皮化.结果 经流式细胞仪测定,分离后的细胞中CD34+细胞含量为(78.46±6.37)％.CD34+细胞培养2周后细胞基本铺满培养瓶底面,细胞呈“铺路石”状排列,CD31和Ⅷ因子免疫细胞化学染色均为阳性,体外成血管实验显示6h后CD34+细胞组出现较多毛细血管样网状结构.CD34+细胞组人工血管内膜化面积为(68.4±2.3)％,明显高于MNCs组人工血管内膜化面积(41.3±3.4)％,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 通过免疫磁珠方法可分离得到高纯度的骨髓CD34+细胞,经体外培养VEGF诱导后可定向分化为内皮细胞,种植于人工血管内表面,较MNCs组内皮化效果理想.
作者：耿纪群；谢宗涛；蔡铭；李刚；韩悦；游庆军 刊期： 2012年第11期
目的 筛选与中国人群的结直肠癌发生相关的抑癌基因.方法 构建包含1号染色体长臂高频杂合缺失区域的基因芯片,对19例结直肠癌标本进行表达谱分析,并与临床病理特征加以统计学分析,筛选该区域与结直肠癌相关的未知抑癌基因.结果 通过数据库检索,我们挑选了25个基因进行相关基因筛选.发现CSRP1、LMOD1、PPP1R12B和CFHL3 4个基因表达显著下调,分别在15、16、16、16例肿瘤组织中表达下调,其中下调比例超过2倍的例数分别为11、11、14、10例.统计学分析发现这4个基因表达与临床病理特征之间无相关.通过生物信息学分析,推测CSRP1基因可能是与结直肠癌发生相关的抑癌基因.结论 表达谱芯片以及生物信息学分析表明CSRP1基因可能是结直肠癌发生相关的抑癌基因.
作者：周崇治；韩杨；王晓亮；裘国强；彭志海 刊期： 2012年第11期
目的 观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对大鼠缺血再灌注(IR)急性肾损伤(AKI)的修复作用.方法 将50只SD大鼠随机分为3组,干细胞移植组(IR+ BMSCs组)18只,生理盐水注射组(IR组)18只,正常组(Sham组)14只.分离及培养大鼠BMSCs到第3代,建立大鼠缺血再灌注AKI模型,24h后移植干细胞；检测血清及尿肌酐值,并以细胞核增殖抗原(Ki-67)进行肾脏免疫组织化学观察.结果 BMSCs培养后,得到纯度高、生长状态良好的第3代(P3) BMSCs.造模后第4天,细胞治疗组血清肌酐浓度为(37.34±4.22) μmol/L,尿肌酐水平为(22.75±6.23) μmol,而生理盐水注射组血清肌酐浓度为(238.34±32.42) μmol/L,尿肌酐水平为(7.68±1.03) μmol,两组比较差异有统计学意义(P＜0.01)；组织切片学观察,与对照组比较,IR+ BMSCs组肾小管结构改善及上皮细胞数量增多、刷状缘部分恢复,Millar法评分IR+ BMSCs组为0.799±0.023,IR组为2.798±0.055,两组比较差异有统计学意义(P＜0.01).以Ki-67进行免疫组织化学IR+ BMSCs组有大量增殖抗原阳性表达.结论 BMSCs对缺血再灌注性AKI有良好的修复作用.
作者：黄凤华；郑新民；姚惟琦 刊期： 2012年第11期
目的 通过有限元分析的方法评估人工寰齿关节置换对寰枢关节三维活动度的影响.方法 将CT扫描数据导入Mimics软件重建寰枢椎体及人工寰齿关节三维模型,去除模型中寰椎前弓、齿状突和枢椎部分椎体,模拟前路减压术,将人工寰齿关节模型装配于处理过的寰枢椎模型上.导入Ansys软件分析计算模型的三维活动度.结果 人工寰齿关节在前屈、后伸、右侧弯、右旋转状态下的位移分别为1.109、3.310、0.528、9.678 mm,活动度分别为1.6°、5.1°、4.6°和22.0°.结论 改良人工寰齿关节置换既可稳定寰枢关节又可保留寰枢关节运动.
作者：胡勇；赵红勇；袁振山；张美超；徐荣明；顾勇杰 刊期： 2012年第11期
目的 构建大鼠腹主动脉瘤模型并观察大鼠腹主动脉瘤中骨桥蛋白(OPN)及核因子-κB(NF-κB)的表达,探讨大鼠腹主动脉瘤发生的分子机制.方法 将30只大鼠分为3组,每组10只,用酶灌注法灌注30 min构建大鼠腹主动脉瘤模型；测量动脉直径；苏木素-伊红(HE)染色及特殊染色检测主动脉的结构改变及炎性细胞浸润；免疫组织化学技术、Western blot法检测动脉组织中OPN、NF-κB及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达.结果 成功构建大鼠腹主动脉瘤模型；腹主动脉瘤组术后直径扩张率明显高于对照组(P＜0.01),并且中层弹力蛋白明显减少,炎性细胞浸润程度显著增高；免疫组织化学结果显示OPN、NF-κB及MMP-2在腹主动脉瘤组中的表达均明显增加(P＜0.05).Western blot结果同样显示OPN、NF-κB及MMP-2在腹主动脉瘤组中的表达均明显增加(P＜0.01),OPN、NF-κB及MMP-2呈正相关.结论 在大鼠腹主动脉瘤模型中,OPN可能通过NF-κB途径上调MMP-2的表达,进而加速细胞外基质的降解,终导致主动脉瘤的发生发展.
作者：童雪影；周洪莲；武亚丽；聂斌 刊期： 2012年第11期
目的 调控前列腺癌干细胞(PCSCs)中微小RNA-101(miR-101)表达,观察细胞中EZH2表达及其增殖迁移能力的变化.方法 通过流式分选从LNcap细胞株中获取PCSCs;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western blot、双荧光素酶、细胞凋亡、细胞周期、细胞迁移实验观察miR-101对前列腺癌干细胞EZH2表达及增殖迁移能力影响.结果 在PCSCs中转染miR-101后,实验组较未处理组EZH2表达量下降46％ (P ＜0.05)；双荧光素酶实验证实PCSCs中miR-101直接调控EZH2；凋亡实验中,实验组细胞凋亡率为(3.79±0.24)％,较对照组凋亡率明显增加(P＜0.05)；周期实验中,实验组细胞G1期比例为(82.95±0.78)％,较对照组比例增加(P＜0.05),细胞被阻滞在G1/S期；迁移试验中,细胞迁移率为0.38±0.01,明显低于对照组(P＜0.05).结论 过表达miR-101能下调前列腺癌干细胞中EZH2的表达并能降低细胞的增殖迁移能力.
作者：周邦奋；李奎庆；范新兰；毕良宽；刘成；许可慰 刊期： 2012年第11期
骨肉瘤是青少年常见的恶性骨肿瘤,恶性程度高,易发生转移[1].本实验旨在检测Ether à go-go 1(EAG1)在人骨肉瘤中的表达、意义及对人骨肉瘤细胞增殖和周期的影响.
作者：吴进；吴欣宇；甘璐；王建勋；杨彤涛；周勇 刊期： 2012年第11期
中华实验外科杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中华医学会
