学术投稿

构建玻片蛋白质芯片的实验研究

侯伟健;潘忠诚;何群;杨宏伟;王绍成;马佳明;赵雨杰

关键词:蛋白质芯片, 微阵列, 玻片, 抗原, 抗体
摘要:目的:探讨玻片蛋白质芯片的构建方法及其中间操作条件的选择与优化.方法:利用生物芯片点样仪将超微量蛋白质点到经特殊处理的玻璃片表面,然后选用不同的化学试剂对玻片背景进行封闭;再用荧光素标记的蛋白质与点样蛋白杂交;后用生物芯片分析仪扫描成像并进行分析,比较不同条件下芯片的显示效果.结果:蛋白质样品与片基稳定结合,并保持原活性状态;封闭试剂选用酪蛋白或明胶效果较佳;点样探针与其特异蛋白质抗体可稳定结合,结合效果与点样蛋白浓度在一定范围内呈正相关;在1.6 cm×1.6 cm的玻璃片面积上,构建了36×36=1269点的蛋白质芯片.结论:本实验条件下,蛋白质抗原或抗体可以稳定地固定于经过处理的玻璃片表面,制成免疫型蛋白芯片,并可通过随后的抗原抗体反应与荧光素标记的相应抗体或抗原结合,用生物芯片分析仪可对其荧光信号进行检测分析.
中国医科大学学报杂志相关文献
  • 血管内皮生长因子在胃癌组织中的表达及意义

    观察血管内皮生长因子在胃癌组织中的表达与胃癌细胞分化、侵袭和转移之间的关系,探讨其在胃癌发生发展及转归过程中的作用机制,为胃癌转移的抗血管治疗提供科学依据.

    作者:王艳萍;陈颖;杨琳;吴东瑛;张素敏;况立革;孙宏伟;郑华川;辛彦 刊期: 2003年第02期

  • 肺表面活性蛋白A、B在内毒素性急性肺损伤时变化的研究

    目的:探讨内毒素性急性肺损伤(ALI)肺表面活性蛋白A和B(SP-A,SP-B)表达的变化及其机制.方法:用内毒素脂多糖(LPS)制备Wistar大鼠ALI模型,分别采用ELISA、免疫组化和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法动态观察LPS致伤后不同时间点肺组织TNF-α,SP-A和SP-B蛋白和mRNA表达的变化.结果:肺组织TNF-α蛋白含量和髓过氧化物酶(MPO)活性分别于LPS致大鼠ALI后0.5 h 和1 h时显著高于对照组(P<0.01),2 h时达高峰;肺内SP-B阳性Ⅱ型肺泡上皮细胞数量减少,染色变浅,SP-B蛋白表达逐渐减弱,其灰度值于LPS致伤后2 h时显著高于对照组 (P<0.01);肺组织SP-A和SP-B mRNA的表达不同程度减弱,2 h时明显弱于对照组(P<0.05),分别于8 h和4 h时达低水平.结论:LPS致大鼠ALI时肺组织SP-A和SP-B mRNA的表达减弱,SP-B蛋白含量减少,这可能与多形核粒细胞在肺内的聚集和TNF-α水平的增加有关.

    作者:蔡栩栩;单莹;韩晓华;杜悦;高红;韩玉昆 刊期: 2003年第02期

  • 原核细胞中人神经生长因子基因的克隆

    目的:克隆人神经生长因子cDNA,为神经生长因子cDNA的表达作准备.方法:采用大肠杆菌JM 109菌株作为宿主菌,以pUC 118作为克隆载体,使用限制性内切酶BamHI,PstI酶切DNA片段,采用磷酸钙转染法转化细菌,α互补和限制性酶切图谱鉴定转化细菌.结果:βNGF cDNA经BamHI 和PstI双酶切后,经过重组,与载体连接在一起,转化大肠杆菌后,形成了克隆.结论:应用JM 109作为宿主,pUC 118为克隆载体,成功克隆了人神经生长因子cDNA.

    作者:尹元琴;马萍;隋承光;任常山 刊期: 2003年第02期

  • 血清胆汁酸谱对肝癌无水乙醇注射治疗监测的临床价值

    目的:探讨血清胆汁酸谱检测对肝内肿瘤无水乙醇注射治疗的指导意义.方法:应用高效液相色谱法对无水乙醇瘤内注射或术中同时行肝动脉化疗栓塞治疗前、后原发性肝癌及肝硬化、正常对照的9种血清胆汁酸进行检测.结果:肝癌血清总胆汁酸和甘氨结合型胆汁酸高于正常对照组(P<0.05),而明显低于肝硬化组(P<0.01).治疗后胆酸/鹅脱氧胆酸比值一过性增高;甘氨结合型胆汁酸/总胆汁酸比值下降;总胆汁酸增高,第7天尚未恢复.结论:血清胆汁酸谱作为肝功能有效指标对肝癌治疗监测有一定价值.

    作者:鞠新华;夏振龙;张玉奎 刊期: 2003年第02期

  • 眼球前段重建术治疗全角膜感染的护理

    我科对24例全角膜感染患者治疗,通过眼球前段重建术及良好的护理,23例取得了满意效果.本文总结了护理经验.

    作者:周铁虹;李洪阳 刊期: 2003年第02期

  • CD44基因内含子9mRNA在子宫内膜癌中的表达及意义

    目的: 探讨子宫内膜癌组织中CD44基因内含子9mRNA的表达情况及临床意义.方法:采用RT-PCR法检测31例子宫内膜癌组织,10例子宫内膜不典型增生组织,10例正常子宫内膜组织中CD44基因内含子9mRNA的表达情况.结果:正常子宫内膜组织中无CD44内含子9mRNA的表达,子宫内膜癌与子宫内膜不典型增生组织中有CD44内含子9mRNA表达;二者表达率分别为83.87%和70.00%,差异无显著性(P>0.05),相对含量分别为85.26±5.40和79.74±4.23,差异有显著性(P<0.05);在子宫内膜癌中CD44内含子9mRNA的表达情况与其临床病理特征无关(P>0.05).结论:CD44基因内含子9表达与子宫内膜癌的早期发生有关.

    作者:王珺;王敏;王欣彦;高红 刊期: 2003年第02期

  • 老年人AMI合并急性左心衰竭20例临床分析

    通过对老年人急性心机梗死(AMI)合并急性左心衰竭20例临床特点的分析,探讨本病发病机制,为临床诊断和治疗提供参考.

    作者:李雅洁;蔡冬梅;胡健 刊期: 2003年第02期

  • 腹部多脏器损伤病人的急诊护理

    本文探讨急诊腹部多脏器损伤病人的护理体会.

    作者:钱红;赵丽萍 刊期: 2003年第02期

  • 多发性骨骺发育不良患者软骨寡聚物基质蛋白基因突变的研究

    目的: 探讨我国多发性骨骺发育不良患者中软骨寡聚物基质蛋白(COMP)基因的突变情况.方法:应用聚合酶链反应-单链构象多态性技术(PCR-SSCP)结合DNA直接测序对我国临床诊断为多发性骨骺发育不良的10例患者,其10名父母及30名正常对照进行COMP基因第10,13和14外显子区域突变分析.结果:正常对照SSCP分析均表现为相同带型.1例散发重型患者COMP基因外显子14区检测到单链泳动变位,测序结果显示第14内含子的近5′端存在纯合性G→A变异.结论:该变异可能是一种新型点突变,与患儿临床表型有关,也可能是COMP基因第14内含子中的一种单核苷酸多态.

    作者:刘晓梅;麻宏伟;姜俊;王阳;王岳平;王立 刊期: 2003年第02期

  • 心肌梗死患者生活质量的调查与分析

    通过对64例心肌梗死患者进行问卷调查,了解心肌梗死患者的生活质量水平,为采取有效的护理干预提高心肌梗死患者的生活质量提供参考.

    作者:高丽红;刘丽杰 刊期: 2003年第02期

  • 甲磺酸甲酯对CAOV3细胞端粒酶活性的影响

    目的:探讨卵巢癌细胞CAOV3经烷化剂甲磺酸甲酯(MMS)作用后端粒酶活性变化与生长状态之间的关系.方法:台盼蓝拒染法计数活细胞,噻唑蓝(MTT)法测定药物作用浓度,流式细胞术观察细胞凋亡,端粒重复扩增法(TRAP)、聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染法检测端粒酶活性.结果:用药组与未用药组活细胞百分率无显著差异.MMS主要使CAOV3细胞受阻于S期,未见凋亡峰.用药组与对照组相比较端粒酶活性增强.结论:MMS对CAOV3细胞端粒酶活性有上调作用.CAOV3细胞对MMS的抗凋亡效应可能与端粒酶活性上调有关.

    作者:刘永萍;赵恂;杨平;时亮;姚阳;于成国 刊期: 2003年第02期

  • HCV抗体3种检测方法的比较

    应用化学发光酶免分析法(CLEIA)、粒子凝集法(PA)和快速金标法分别检测50例血清标本的HCV抗体,对3种方法进行比较分析.化学发光法的阳性率高(78%),敏感性高,特异性好;粒子凝集法和金标法阳性率(76%和60%)均低于化学发光法,虽然阳性率较低,但以化学发光法为基准无假阳性.化学发光法可作为判定HCV抗体是否阳性的标准. 粒子凝集法和金标法操作简便,并且粒子凝集法可测定抗体效价.金标法不需要仪器和配制试剂,15 min即可判定结果,可用于急诊检查.

    作者:徐兰;张丽霞 刊期: 2003年第02期

  • 人工鼻和气体流量设置对气道内吸入气温度和湿度的影响

    目的: 观察麻醉机呼吸环路气体低、中、高流量设置和呼吸环路加入人工鼻对气道内吸入气温度和湿度的影响.方法:选择60名ASA Ⅰ~Ⅱ级病人,随机分为6组,3组呼吸环路内加入人工鼻,流量设置分别是0.5,1.5,4.5 L/min ; 另3组不使用人工鼻,流量设置同上.应用温度湿度仪连续监测吸入气温度和相对湿度,公式计算绝对湿度.机械通气3min后的测量值设为基础值,然后纪录15,30,45和60 min的值.结果:随机械通气时间延长,人工鼻组的不同流量设置均显著增加气道内吸入气温度和湿度,当流量设置为0.5 L/min高,其次是1.5 L/min,再其次为4.5 L/min ;不用人工鼻组,低、中、高流量设置显著影响气道内吸入气温度和湿度,随通气时间延长,流量为0.5 L/min时温度和湿度逐渐升高,1.5 L/min略有下降,4.5 L/min则明显降低.结论:人工鼻能补偿气体中、高流量时气道内温度和湿度的降低,低流量增加气道内的温度和湿度.临床采用低流量麻醉技术和人工鼻对保护病人气道粘膜有利.

    作者:印春铭;赵芸慧;王俊科 刊期: 2003年第02期

  • Na+ /H+交换阻滞剂Cariporide对离体大鼠心肌梗死范围的影响

    目的:探讨 Na+/H+交换阻滞剂Cariporide对离体大鼠心肌梗死范围的影响.方法:用离体大鼠双冠脉分别灌流心肌缺血模型,将大鼠心脏进行45 min的低流量缺血(用原灌流量的5%进行灌流),再灌注2 h.药物在缺血及再灌注的不同时期应用.结果:在缺血及再灌注时和缺血再灌注时联合应用1μ mol/L Cariporide,心肌梗死范围分别是(7±1)%,(7±2)%,(2±1)%,较对照组(20±4)%明显缩小.在缺血后0,10,30 min时分别应用,其心肌梗死范围分别是(7±2)%,(10±1)%,(17±3)%,较对照组(22±3)%明显缩小.在再灌注0,10 min时分别应用,其心肌梗死范围分别是(6±2)%,(15±2)%,而对照组为(19±3)%.结论:Na+/H+交换阻滞剂Cariporide在缺血及再灌注早期应用有明显的缩小心肌梗死范围作用.

    作者:贾大林;张海山;齐国先 刊期: 2003年第02期

  • 硫酸镁治疗妊高征前后钙、镁及一氧化氮的相关性研究

    目的:研究妊高征患者静滴硫酸镁治疗前、后血浆中钙、镁、一氧化氮及红细胞内钙、镁浓度之间相关性,探讨妊高征离子紊乱的原因.方法:以正常晚期妊娠及妊高征患者各30例为观察对象,测定钙、镁采用原子吸收法,一氧化氮采用镉柱还原Griess试剂显色法.结果:治疗前妊高征组血浆中钙离子水平降低,一氧化氮合成减少,镁离子水平正常,红细胞内镁降低;治疗后血浆中钙﹑镁离子显著升高,一氧化氮合成增多,红细胞内镁升高.结论:妊高征患者红细胞内镁降低,使Ca2+ATP酶活性受损细胞内钙离子堆积,细胞外钙离子缺乏,钙离子依赖型、结构型一氧化氮合酶﹙cNOS﹚活性降低,一氧化氮合成减少.低镁是导致妊高征钙、镁离子紊乱的基础.

    作者:张晓平;黄海燕;麻爽 刊期: 2003年第02期

  • 劈裂牙牙龈切除术与牙冠延长术后修复效果的比较

    目的:比较牙龈切除术与牙冠延长术应用于牙体劈裂达龈下较深部位病例的修复效果.方法:选择牙体劈裂达龈下较深部位的患牙23颗,分别采用牙龈切除术与牙冠延长术完全暴露断面,再行常规桩冠修复,通过术前、术后及6个月复查时的龈袋深度,比较两组的临床疗效.结果:牙龈切除术组术前、术后及6个月复查时龈袋深度均数分别为4.3, 2.4,2.3 mm; 牙冠延长术组术前、术后及6个月复查时龈袋深度均数分别为4.4, 1.8, 1.4 mm .两组术后及6个月复查时龈袋深度均比术前明显减少;而术后及6个月复查时,牙冠延长术组的龈袋深度均明显低于牙龈切除术组.结论:牙龈切除术与牙冠延长术应用于牙体劈裂达龈下较深部位患牙均能明显改善龈袋深度,而后者的临床疗效优于前者.

    作者:郝玉全;潘春玲;魏亚琴;韩雪松;代昕 刊期: 2003年第02期

  • 大剂量通液法治疗输卵管性不孕症的临床研究

    目的:通过临床试验评价经宫腔镜输卵管插管大剂量通液法治疗输卵管性不孕症的有效率.方法:对经子宫输卵管造影(HSG)诊断为输卵管堵塞的32例患者(59条输卵管),先行宫腔镜下输卵管插管常规剂量通液法治疗,无效者再行大剂量通液法治疗.结果:32例中经输卵管插管常规剂量通液14例(26条)通畅,18例(33条)不通,占55.9%.经大剂量通液法治疗后,14例(28条)通畅,4例(5条)不通,占15.2%,与常规剂量通液法相比有效率明显提高(P<0.01).经随访,术后妊娠8例.结论:经宫腔镜输卵管插管大剂量通液法治疗输卵管性不孕症能提高术后输卵管通畅率,无不良反应,是治疗输卵管性不孕的有效方法.

    作者:杨清;赵岩;王玉;蔡爱露 刊期: 2003年第02期

  • 退变腰椎间盘组织中细胞凋亡及相关基因bcl-2和bax表达的研究

    目的: 探讨腰椎间盘退变的发病机制.方法:采用原位DNA片段末端标记和免疫组织化学方法,检测40例退变腰椎间盘组织及10例正常腰椎间盘组织细胞凋亡状态及凋亡相关基因bcl-2和bax蛋白的表达.结果:40例退变腰椎间盘组织凋亡指数(AI)均值为70.51,bcl-2蛋白阳性细胞百分比为10.12%,bax蛋白阳性细胞百分比为54.56%.10例正常腰椎间盘组织AI均值为20.02,bcl-2蛋白阳性细胞百分比为53.46%,bax蛋白细胞百分比为10.54%.两组间AI均值、bcl-2蛋白表达、bax蛋白表达差异均有显著性意义(P均<0.05).bcl-2蛋白表达越弱, bax蛋白表达越强,凋亡细胞数越多.结论: bcl-2和bax蛋白均参与了腰椎间盘组织中细胞凋亡的调节,并在腰椎间盘退行性变发生和发展中发挥着重要作用.

    作者:李小川;金明熙;吕刚;谢林;金哲;关宝丽 刊期: 2003年第02期

  • 严重肝损伤的外科处理

    对15例严重肝损伤患者进行了手术,并对其致伤原因,损伤程度,合并伤,手术方式等进行总结,强调了术中各种处理方法的正确应用.

    作者:王镇;夏振龙;戴显伟;戴朝六;石文君 刊期: 2003年第02期

  • 喉癌患者无癌侵及的喉内肌与正常喉内肌的组织学差异

    目的:通过对喉癌患者未被癌组织侵及的喉内肌及正常人的喉内肌肌纤维形态、结构的比较分析,从组织学角度揭示二者之间的差异.方法:将5例喉癌患者未被癌组织侵及的肌纤维和1例健康成人的甲杓肌、环杓侧肌及环杓后肌经HE染色,于镜下观察肌纤维的形态,并采用显微图像分析仪测量肌纤维的横截面积和大宽度.结果:喉癌患者与健康成人相比,各喉内肌肌纤维形态差异较大;肌纤维横截面积、大宽度有显著增加(P<0.01),增加的幅度均为环杓后肌>环杓侧肌>甲杓肌.结论:喉癌患者未被癌组织侵及的肌纤维不仅在形态上有很大的不同,而且肌纤维横截面积及大宽度明显增大,可能是癌变增加了呼吸道的阻力,各喉内肌代偿性活动的结果.

    作者:李君;魏宏权;聂士清;杨式麟 刊期: 2003年第02期

中国医科大学学报杂志

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