学术投稿

2009H1N1流感病毒神经氨酸酶基因克隆与表达

张玲;魏绍静;肖春花;钟剑波;陈伟烈;张复春

关键词:2009 H1N1病毒, MDCK细胞, 神经氨酸酶, 原核表达
摘要:目的 制备2009 H1N1流感病毒神经氨酸酶(NA)重组蛋白,为建立H1N1快速检测方法 和神经氨酸酶抑制剂筛选模型奠定基础.方法 采用MDCK细胞方法 分离2009 H1N1流感病毒,提取病毒RNA,RT-PCR生成NA基因,构建原核表达载体PET- 102/D-TOPO-NA,IPTG诱导表达重组蛋白,SDS-PAGE凝胶电泳、Werstern Blotting鉴定重组蛋白.结果 成功分离2009H1N1流感病毒,NA蛋白119、152、275、292位氨基酸分别为Glu、Arg、His和Cys.SDS-PAGE凝胶电泳蛋白分子相对分子质量约为64 000,与预期一致.Western Blotting证实该蛋白具有神经氨酸酶抗原活性.结论 IPTG诱导原核表达神经氨酸蛋白的适浓度为0.1 mmol/L.实验得到的蛋白尚需进一步纯化.
热带医学杂志相关文献
  • 非清髓异基因造血干细胞移植治疗低增生性MDS1例并文献复习

    目的 探讨非清髓性异基因外周血造血干细胞移植治疗低增生性骨髓增生异常综合征(MDS)的疗效,观察其植入及并发症的发生情况.方法 我院诊断为低增生性MDS患者1例,采用氟达拉滨+阿糖胞苷+环磷酰胺的非清髓预处理方案,环孢素A+甲氨蝶呤+骁悉预防移植物抗宿主病.结果 STR-PCR证实移植后30 d及3个月骨髓植人为完全供者型,移植后3个月发生多发性脑梗塞,6个月出现面部皮疹及口腔溃疡,通过调整免疫抑制剂及输注间充质干细胞(5×107/次,2次)后症状明显好转.结论 非清髓性异基因外周血造血干细胞移植治疗低增生性MDS获得较好的疗效.

    作者:范蕊芳;刘相富;李旭东;林东军 刊期: 2011年第09期

  • 潮州市湘桥区人群华支睾吸虫粪检阳性率调查和分析

    目的 了解湘桥区华支睾吸虫的感染状况,探讨防治策略.方法 采用改良加藤氏厚涂片法粪检韩江东西两岸3个自然村人群粪便中的华支睾吸虫卵.结果 调查1 145人,检出华支睾吸虫感染者13人,均为轻度感染,感染率为1.14%,其中意溪镇锡美村为1.74%,城西街道春光村为1.57%,桥东街道社光村为0%.男女性别感染率差异无统计学意义(P>0.05);以成人感染为主,10岁以下人群未检出华支睾吸虫;职业分布以医务人员、工人、干部职员感染率较高分别为3.85%、3.57%和1.96%;文化程度以高中组感染率高(2.09%),其次为初中文化组(1.32%).结论 湘桥区是韩江流域华支睾吸虫的低度流行区,应以监测工作为重点进行防控.

    作者:杨少逵;许奕涛;刘少群;吴培标;林松炎;肖烈 刊期: 2011年第09期

  • 5个中间型β-地中海贫血家系临床结果分析

    目的 了解现行PCR-RDB法对中间型β-地贫基因诊断的准确性.方法 对5个中间型β-地贫家系进行血常规、血红蛋白电泳和β-地贫基因的PCR-RDB法检测,并用长链PCR法检测家系1和家系2中的先证者及母亲的β-地贫基因的缺失突变.结果 5例先证者HbF含量均增高,其中2例为轻度贫血,3例为中度贫血;4例先证者PCR-RDB法结果 为杂合子与其表现的临床症状不符,1例先证者PCR-RDB结果 为纯合子与父母基因检测结果 不符;先证者1及其母亲长链PCR法显示阴性,先证者2及其母亲长链PCR法均为东南亚(SEA)缺失型HPFH.结论 若在产前诊断时仅用PCR-RDB法检测β-地贫基因,会造成缺失型β-地贫基因漏诊,引起一系列严重的社会问题.

    作者:陈冬;郑有为;梁敏文;林婷;钱靖琳;李运雄 刊期: 2011年第09期

  • 2007-2010年广州市海珠区疑似麻疹风疹病例血清学检测结果分析

    目的 分析广州市海珠区2007-2010年麻疹及风疹的流行特征.方法 采用IgM抗体捕捉ELISA对广州市海珠区2007-2010年麻疹、风疹疑似病例血清标本进行IgM抗体检测.数据用SPSS13.0进行统计分析.结果 麻疹IgM抗体总阳性率为44.30%,风疹IgM抗体总阳性率为13.09%,各年度麻疹、风疹的阳性率差异有统计学意义(x2=171.708,P<0.05;x2=34.191,P<0.05).男女麻疹、风疹病例性别分布差异均无统计学意义.麻疹阳性病例年龄主要分布在8月龄~7岁及15~29岁,风疹阳性病例年龄主要分布在15~29岁.4年间麻疹、风疹阳性病例分别集中在3~7月、3~6月.结论 海珠区2010年麻疹阳性率较前几年明显降低,说明防控措施有力,但2010年风疹的阳性率升高应引起足够的重视.麻疹的发病人群主要为学龄前儿童和青年,风疹的发病人群以青年为主.春季为麻疹、风疹的高发季节,应适时进行防控,避免暴发流行.

    作者:王国玲;郭鹏娟;杨波;潘捷云;李集宇;甘标 刊期: 2011年第09期

  • 阿德福韦酯治疗黎族CHB患者疗效与HBV基因型的关系

    目的 评价阿德福韦酯治疗黎族慢性乙型肝炎(CHB)患者疗效与乙型肝炎病毒(HBV)基因型的关系.方法 42例HBeAg阳性、HBV DNA> 105copies/ml、ALT>2倍正常值上线的黎族CHB患者,每天口服阿德福韦酯胶囊10 mg,治疗48周.在治疗前及治疗后48周,动态观察HBeAg、HBV DNA和ALT的变化.结果 42例患者中,HBV C型是优势基因型(57.14%),其次为B型(38.10%),也有D型(2.38%)和C+D型混合感染(2.38%)的存在.经阿德福韦酯胶囊治疗48周后,B型患者HBeAg阴转率(37.50%)、病毒应答率(56.25%)和血清ALT复常率(62.50%)均高于C型的29.17%、50.00%和54.17%,但两组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 HBV C型是海南岛黎族HBeAg阳性CHB患者的优势基因型,HBV基因型可能对阿德福韦酯的治疗效果无影响.

    作者:曾俊涛;陈静;顾贤志 刊期: 2011年第09期

  • 氧化应激性肠上皮细胞损伤与MAPK信号通路的系研究

    目的 观察氧化应激引起肠上皮细胞(IEC-6)损伤后丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路活化的情况,从而探讨氧化应激损伤的机制.方法 采用MTT法检测不同浓度(100、200、300、400、500、800、1 000、2 000μmoL/L)H202对IEC-6生存率的影响;用Western Blot法检测H202作用不同时间(0.25、0.5、1、2、3、4h)下ERK、JNK以及p38磷酸化的激活情况.结果 与正常组相比,随着H202刺激浓度的增加,IEC-6的生存率逐渐降低,呈浓度依赖性.当H202刺激浓度为200 μmol/L时细胞的生存率约为50%.ERK 1/2、JNK1/2、p38在H202刺激0.25 h开始磷酸化,在刺激0.5 h达到高,随后磷酸化水平恢复到基础值.结论 氧化应激早期可通过激活ERK、JNK以及p38的磷酸化引起IEC-6的损伤.

    作者:陈茜;屠伟峰 刊期: 2011年第09期

  • 血小板活化因子乙酰水解酶临床治疗研究进展

    血小板活化因子(PAF)是具有多种生物学活性的磷脂,能够活化血小板和其他炎症因子,在变态反应及呼吸、消化等系统的炎症反应中扮演重要的角色.血小板活化因子乙酰水解酶(PAF-AH)能够水解PAF和相关的氧化磷脂并使之失活,从而发挥有效的调节作用.本文对PAF-AH的结构特性以及对相关疾病的未来治疗进展进行综述.

    作者:吴宜娟;王丽娟 刊期: 2011年第09期

  • IL-6预处理保护H2O2致心肌细胞损伤作用机制初探

    目的 初步探讨IL-6预处理对H2O2致心肌细胞氧化应激损伤的作用机制.方法 采用心肌细胞原代培养方法,以H2O2刺激心肌细胞,建立细胞氧化应激模型;采用MTT法检测细胞活力;AnnexinV-FITC染色法和流式细胞术检测细胞凋亡率;检测心肌细胞内谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的表达情况.结果 H2O2可降低心肌细胞存活率并能增加其凋亡,IL-6预处理后能显著改善细胞活力及凋亡情况,与模型组相比差异有统计学意义(P<0.05).低浓度IL-6能明显增加细胞内GSH与SOD的水平,并降低MDA的含量,随着IL-6浓度的增加,这种效应逐渐消失.结论 IL-6预处理能保护H2O2致心肌细胞损伤作用,这可能与IL-6调节细胞GSH、SOD、MDA表达有关.

    作者:周凤华;贾钰华;李丽君;杨萍;李杰 刊期: 2011年第09期

  • S系统及时序布尔网络模型构建鼠疫耶尔森菌基因调控网络的初步研究

    目的 应用S幂率系统构建鼠疫耶尔森菌小尺度基因调控网络.方法 收集鼠疫耶尔森菌基因时间序列表达数据,数据经预处理后,分别用布尔网络模型和S幂率系统网络模型构建小尺度基因调控网络,并对两个网络结构进行比较.结果 应用布尔网络模型构建的小尺度基因调控网络中存在2种基因调控模式,而应用S幂率系统网络模型构建的小尺度基因调控网络中存在4种基因调控模式.结论 S幂率系统可用于构建基因调控网络模型.

    作者:江凌晓;江凌云 刊期: 2011年第09期

  • 青春期学生峰值骨量干预对策的现状

    目的 预防骨质疏松的佳策略是使青春期峰值骨量获得大化,本文探讨对青春期学生的生活方式和生活习惯进行健康干预,使其峰值骨量获得大化,以达到从生命早期预防和减轻原发性骨质疏松的发生.

    作者:曾鸿毅;苟凌云;李兵 刊期: 2011年第09期

  • 来氟米特联合激素治疗过敏性紫癜性肾炎的疗效观察

    目的 观察来氟米特联合激素治疗伴肾功能不全的紫癜性肾炎,探讨来氟米特的疗效及安全性.方法 选择紫癜性肾炎伴肾功能不全的住院患者77例,随机分为两组,A组39例,B组38例.A组给予口服来氟米特0.8 mg/(kg·d),5d后改为维持量20 mg/d;B组采用环磷酰胺0.75 g/m2静脉滴注,每月1次,总量达到6~8 g;同时,两组均给予泼尼松1 mg/kg,口服8周减量,疗程6个月.观察治疗后各组患者24h尿蛋白定量、尿红细胞计数、Ccr、BUN等指标变化及药物不良反应.结果 用药3、6个月后,两组24h尿蛋白定量、尿红细胞计数以及血肌酐水平较治疗前均显著下降,血浆白蛋白水平显著升高(P<0.05).3个月后,A、B两组间的24h尿蛋白定量、尿红细胞计数及血浆白蛋白水平差异有统计学意义(P<0.05),但两组间的血肌酐水平差异无统计学意义(P>0.05).6个月后,A、B两组间的24 h尿蛋白定量、尿红细胞计数、血浆白蛋白水平和血肌酐水平差异均有统计学意义(P<0.05).结论 来氟米特是治疗过敏性紫癜性肾炎的一种安全有效的药物,优于环磷酰胺,且能延缓肾功能衰竭.

    作者:李中;黄承胜;徐敏;尹莉;刘婷;潭小平 刊期: 2011年第09期

  • 2008-2010年重庆市北碚区流行性腮腺炎流行病学特征分析

    目的 了解重庆市北碚区2008-2010年流行性腮腺炎流行病学特征,为制定防制措施提供科学依据.方法 采用描述性流行病学方法 对全区近3年的流行性腮腺炎疫情资料进行分析.结果 北碚区3年累计报告流行性腮腺炎病例1 028例,无死亡病例,年平均报告发病率56.81/10万;11-12月和5-7月为发病高峰;全区发病数居前三位的是天生街道(192例)、歇马镇(189例)和童家溪镇(120例),城区发病率高于农村,差异有统计学意义(P<0.05);主要集中在≤14岁(79.57%),各年龄组发病率差异有统计学意义(P<0.05);病例以学生(71.1 1%)和幼托儿童(16.15%)为主.结论 加强人群健康教育和疫情监测,提高重点人群疫苗接种覆盖率,是预防与控制流行性腮腺炎的主要措施.

    作者:张莉 刊期: 2011年第09期

  • 2006-2010年清远市狂犬病流行特征与防制策略分析

    目的 了解清远市狂犬病流行病学特征,探讨预防控制策略.方法 收集2006-2010年清远市狂犬病个案调查及疫情报告资料进行统计分析.结果 2006-2010年清远市共报告狂犬病280例,年发病率介于1.24/10万~2.11/10万之间,病死率100%,发病率呈逐年上升趋势;疫情以清远北部农村地区较为严重,10月为全年发病高峰,≥50岁人群报告发病占52.14%,职业以农民和学生为主;90.09%的病例由犬伤引起,59.05%的病例未对伤口进行任何处理,93.53%的病例未注射狂犬病疫苗.结论 近年来清远市狂犬病疫情由较偏远的县(市)向市内中心区域迅速扩散,农村是重点防控地区,加强宣传教育以及落实狂犬病综合防制措施是今后的工作重点.

    作者:华卫平;孙小康;卢文涛;黄金英 刊期: 2011年第09期

  • 我院就诊人群华支睾吸虫感染的临床分析

    目的 掌握华支睾吸虫感染和患病情况的临床特点,探讨临床简便的确诊方法,指导相应的防治对策.方法 对我院2007 -2009年随机就诊的广东人群进行大便常规检查,并对发现华支睾吸虫卵的患者的临床资料进行统计分析.结果 56 140例受检患者发现,华支睾吸虫感染1 029例(1.83%).主要临床症状为肝区疼痛486例(47.2%)、上腹疼痛297例(28.9%)、腹泻173例(16.8%)、乏力147例(14.3%)、食欲不振107例(10.4%),主要疾病有胆囊炎462例(44.9%)、胆囊息肉213例(20.7%)、胆管壁增厚182例(17.7%)、胆石症132例(12.8%).实验室辅助检查中,华支睾吸虫感染组的嗜酸性粒细胞比例(EOS%)及血清γ谷氨酰转肽酶活性( GGT)显著高于非感染患者组(Z_-10.837,P<0.01;Z=-6.622,P<0.01)和健康对照组(Z=-7.320,P<0.01;Z=-6.920,P<0.01).丙氨酸氨基转移酶活性(ALT)在华支睾吸虫感染有症状组中显著高于非感染患者组(Z=-3.528,P<0.01)和健康对照组(Z= -4.948,P<0.01),而在华支睾吸虫感染无症状组中与非感染患者组和健康对照组无显著性差异(Z=-1.561,P=0.119;Z=- 1.834,P=0.067).结论 肝区疼痛和上腹不适是华支睾吸虫病的主要临床表现,在EOS%和GGT增高的患者中华支睾吸虫卵的检出率明显提高.

    作者:谢文锋;严海燕;曾华;谢晓英;鲍蕴文 刊期: 2011年第09期

  • 肠道病毒71型外壳蛋白VP1的可溶性表达、纯化及活性鉴定

    目的 克隆、表达和鉴定肠道病毒71型(EV71)VP1基因,得到可溶性的蛋白VP1,为制备EV71的抗体和诊断试剂的开发打下基础.方法 优化EV71 VP1蛋白基因,克隆并构建重组表达质粒pET15b/VP1,转化大肠杆菌BL21.使用NP亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用Western blotting检测目的 蛋白.以重组蛋白VP1为抗原,ELISA检测抗原活性.结果 重组蛋白在大肠杆菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示其相对分子质量为36 000,与预计大小一致.ELISA实验证实,重组蛋白具有良好的抗原性.结论 本研究成功克隆和表达了EV71 VP1蛋白,并得到可溶性的蛋白,对肠道病毒71型诊断试剂的开发有进一步潜在的应用价值.

    作者:周亚萍;史伟峰;朱荫昌;曹利民;朱思梅;史梅;李坤;姜庆波 刊期: 2011年第09期

  • 流动人口肺结核患者跨区域管理转入地违规重新登记影响因素分析

    目的 初步探讨转入地结核病防治机构违规重新登记原因,为今后流动人口管理工作的顺利开展和相关政策的制定提供科学依据.方法 将南山区2007年10月至2009年9月转入其他地区且2个月内到位治疗的流动人口肺结核患者作为研究对象,收集患者的一般情况、患病情况和跨区域管理相关资料,分别用单变量、多变量统计方法 分析转入地违规重新登记的可能影响因素.结果 多变量统计显示,第一项目年转出患者和痰涂片阳性患者被转入地违规重新登记率较高,差异有统计学意义(P<0.05);第二项目年我区转出患者主动告知率为67.5%,到位率为60.8%,转入地结防机构信息反馈率为95.8%,代管率为41.1%,较第一项目年各项指标均有大幅提高.结论 跨区域管理工作随着开展的深入已初现成效,但由于为完成当地涂阳病人发现和登记治疗管理任务等原因,转入地结防机构违规重新登记现象仍较为严重,政府需对此加强规范管理力度.

    作者:郭旭君;王健;钟涛;卢俊江 刊期: 2011年第09期

  • 化学发光法与免疫透射比浊法检测血清纤维连接蛋白的方法评价

    目的 分析化学发光法与免疫透射比浊法测定血清纤维连接蛋白(FN)的偏倚,为临床实验室选择项目提供一定的依据.方法 根据美国临床实验室标准化研究所(CLSI)EP9-A2文件提供的实验流程,每天随机选取临床标本8份,分别用两种方法 进行检测,共测定6d,记录实验结果.结果 以免疫透射比浊法(X)为参比方法,对化学发光法(Y)进行评估.两种方法 测定的回归方程式为y= 1.034x- 1.308,r2=0.958.当免疫透射比浊法的浓度为100、200、300 mg/L时,它们的相对偏倚为2.1%、2.7%、3.1%.结论 化学发光法与免疫透射比浊法测定偏倚比较评价均可接受,两种方法检测血清FN均具有良好的相关性,建议各临床实验室对不同方法 建立参考值范围.

    作者:高玲;颜绵生;马品宁;姚真荣;郑憬 刊期: 2011年第09期

  • 新疆昌吉部分地区动物感染恙虫病东方体调查

    目的 了解新疆昌吉部分地区野生动物自然感染恙虫病东方体(0t)的情况.方法 采用多种方法 捕鼠类,提取DNA,应用巢式PCR检测Ot-Sta56基因;阳性核苷酸序列片段测序,通过美国国家生物技术信息中心网站对基因序列进行BLAST比较分析.结果 共捕获鼠432只、鸟类53只,仅在木垒县的鼠类、鸟类脾样本中检测到阳性片段,感染率分别为5.3%、11.1%;其他县市未检测到阳性.DNA序列分析表明,鼠类、鸟类阳性标本中扩增产物的核苷酸序列相同,碱基长度均为442 bp.BLAST表明目的 基因与Karp型的碱基序列同源性高(98.5%),应属于Karp型.结论 新疆昌吉地区木垒县啮齿类及鸟类动物中可能存在Ot感染.

    作者:任立松;党荣理;刘晓明;高金拽;马德新 刊期: 2011年第09期

  • 广州市年轻女性流动人口性行为知信行现状调查

    目的 了解广州市年轻女性流动人口性行为知信行现状,为今后女性流动人口健康性行为的指导提供科学依据.方法 采用随机整群抽样方法,在广州市黄埔区劳动密集型工厂中随机抽取8家,对18~29岁非广州籍女性工人进行问卷调查.结果 1 374名调查对象中,性健康知识平均得分为(61.57±26.02)分,及格率为56.6%.多因素分析发现,文化程度低、未婚、未接受过生殖健康信息或服务者性健康知识及格率低.婚前性行为的发生率为21.1%,年龄大、未接受过生殖健康信息或服务者更有可能发生婚前性行为.在过去6个月有过性行为的661名调查对象中,3.9%存在多性伴侣,17.2%存在非意愿性行为,14.5%未采取避孕措施.在有过性行为的785名调查对象中,8.5%在过去1年中发生人工流产.结论 流动女工知识和行为分离现象严重,虽然性健康知识掌握情况较好,但婚前性行为发生率高,高危性行为和人工流产比例较高.

    作者:邓雪清;洪令瑶;王莹;王圆;刘宇;王志瑾;卢次勇 刊期: 2011年第09期

  • 不同年龄组基孔肯雅热患者的临床表现比较

    目的 分析不同年龄组基孔肯雅热患者的临床表现.方法 130例基孔肯雅热患者,按年龄分为三组:<30岁、30~岁、≥60岁组,分析其临床症状的差异.结果 三组患者均出现发热,皮疹的发生率分别为86.8%、91.4%、90.9%,关节痛的比例分别为86.8%、91.4%、95.5%,关节痛持续时间超过14d的比例分别为2.6%、30.0%、36.4%;与<30岁组比较,30~岁和≥60岁组患者出现关节痛持续时间超过14 d以及累及3个或以上关节的比例高,差异均有统计学意义(x2= 13.026,P=0.001;x2=6.792,P=0.034).结论 基孔肯雅热主要表现为发热、皮疹、关节痛,中、老年组患者出现关节疼痛持续时间较长,累及的关节多.

    作者:翟洁卿;吴福全;黄育波;李鸿超;陈桂轩;林炳亮 刊期: 2011年第09期

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主办:广东省寄生虫学会 中华预防医学会