张圆；韩丽莎；胡海；张坤；王艳国；刘佳；牛长存
目的：通过使用自噬激动剂、自噬抑制剂、凋亡抑制剂以及蛋白阻滞剂处理或预处理已由β1－肾上腺素受体自身抗体（β1－AA）造模的H9c2细胞，探讨能否通过人为因素调控细胞自噬从而下调心肌细胞凋亡，改善心功能受损。方法：采用不含ED－TA的0．25％胰蛋白酶消化传代H9c2心肌细胞，用含10％胎牛血清的DMEM高糖培养基进行培养，主动免疫Wistar大鼠获得的β1－AA对细胞进行24 h造模处理，或用自噬激动剂雷帕霉素、自噬抑制剂3－甲基腺嘌呤、自噬抑制剂氯喹、凋亡抑制剂、蛋白阻滞剂分别单独给予或者联合处理细胞，采用Western blot以及RT－PCR对自噬的变化进行检测；对自噬变化组采用流式细胞术以及线粒体跨膜电位检测法对凋亡进行检测。结果：H9c2细胞约90％满时可传代并每隔约2天传代一次；β1－AA可诱导H9 c2细胞发生自噬和凋亡；自噬和凋亡在一定范围内彼此影响，协同决定细胞死亡的发生。结论：β1－肾上腺素受体自身抗体诱导的自噬和凋亡在一定范围内彼此之间相互调节。
作者：李杨；王丽；刘慧荣 刊期： 2015年第10期
目的：明确二甲双胍是否通过腺苷酸活化蛋白激酶（ AMPK）依赖的方式抑制单侧输尿管梗阻（ UUO）诱导的肾间质纤维化。方法：采用WT及AMPKα2－／－小鼠， UUO手术制备肾间质纤维化模型。手术组术前3 d及术后7 d皮下注射二甲双胍0．2 g? kg－1? d－1。利用组化染色、肾功能检测、Western blot、ELISA等方法评价模型。结果：（1）WT小鼠，二甲双胍能够抑制UUO诱导的肾间质纤维化（P＜0．01），其机制是通过抑制TGF－β1－Smad3信号通路。（2）AMPKα2－／－小鼠，二甲双胍仍有部分抑制UUO诱导的肾间质纤维化的作用，但差异不显著。（3）二甲双胍不能抑制AMPKα2－／－小鼠肾脏组织中TGF－β1的产生。（4）二甲双胍有抑制UUO诱导的TGF－β1下游Smad3磷酸化的趋势。结论：二甲双胍通过AMPK依赖及非依赖的途径抑制UUO诱导的肾脏纤维化。
作者：冯晔囡；张幼怡；肖晗 刊期： 2015年第10期
目的：探讨亚甲蓝（ MB）对大鼠百草枯中毒诱导的急性损伤肝脏的保护作用并对保护机制进行研究。方法：24只清洁级雄性成年SD大鼠随机分为正常组、MB组、百草枯（ PQ）组和PQ＋MB组，每组6只。腹腔注射PQ 35 mg／kg建立大鼠中毒模型，PQ＋MB组大鼠于造模2 h后腹腔注射给予MB 2 mg／kg，正常组大鼠给予等量无菌生理盐水。治疗后48 h收集大鼠血清检测ALT、AST和ALP，肝脏组织用于病理学分析、血红素加氧酶1（ HO－1）免疫组化、MPO活性、MDA含量、SOD活性和ATP含量试剂盒检测。另取40只大鼠，按照上述分组方法评估72 h内死亡时间和死亡率。结果：与正常组和MB组比较，PQ组ALT和ALP活性增高，MPO活性增强，MDA含量增加，HO－1表达增加，SOD活性降低和ATP含量降低（ P＜0．05）；MB治疗后能够改变上述生化指标，减轻肝脏病理形态学变化，与PQ组相比，PQ＋MB组HO－1表达量增高，同时大鼠生存时间延长，差异均具有统计学意义（ P＜0．05）。结论：MB能够减轻氧化损伤和抑制炎症反应，对PQ诱导的急性肝损伤大鼠肝脏发挥保护作用。
作者：陈俊良；戴利；张鹏；翁平；柴高尚；庞庆丰 刊期： 2015年第10期
作者： 刊期： 2015年第10期
G蛋白偶联受体（ GPCR）与心血管疾病病、肿瘤、免疫和感染性疾病等重要疾病的发生、发展密切相关。同时，约50％药物都是以受体为靶点。但目前对受体精密调控机制尚不清楚。利用蛋白质组学、活细胞单分子荧光成像等方法，我们研究发现多种G蛋白偶联受体新调控机制。发现了肾上腺素受体新的调控子HIP－55（ hematopoietic progenitor kinase 1［ HPK1］－in－teracting protein of 55 kD）。 HIP－55通过蛋白质相互作用调控肾上腺素诱导转位激活、双相激活等受体激活方式。 HIP－55通过cAMP非依赖途径调控肾上腺素受体介导的p38、ERK1／2等重要信号通路。 HIP－55通过调控受体Clathrin内吞途径介导受体内吞、减敏及下游信号。此外，我们还发现另外一个生长分化因子15（growth differentiation factor－15，GDF－15）。 GDF－15通过抑制MMP途径，负调控肾上腺素诱导EGFR转位激活信号通路。基于G蛋白偶联受体信号调控机制的研究，我们也探索新的受体功能选择性药物研究开发，获得了一些候选化合物。
作者：李子健 刊期： 2015年第10期
目的：探讨尾加压素II（ UII）对肝脏干细胞即卵圆细胞内活性氧（ ROS）的影响及其参与UII促细胞增殖的机制探讨。方法：通过流式细胞术，应用DCFH－DA探针检测UII孵育卵圆细胞WB－F344后，胞内ROS水平变化。通过Western blot方法检测胞内NADPH氧化酶亚基、细胞周期蛋白E、细胞周期蛋白依赖性激酶2及信号通路蛋白ERK表达水平。采用流式细胞术方式分析UII对于细胞周期的影响。应用BrdU掺入法检测细胞增殖情况。结果：UII刺激卵圆细胞可引起胞内ROS水平增加，同时NADPH氧化酶亚基表达上调。给予NADPH氧化酶抑制剂apocynin预处理后，明显改善UII介导的ERK磷酸化水平升高。此外，UII孵育组细胞周期比例S期明显高于G1期，而apocynin预处理组S期比例较UII刺激组有所降低，且细胞增殖检测结果显示apocynin预处理可使UII介导的促细胞增殖效应受到明显抑制。结论：UII可通过上调细胞内NADPH氧化酶介导ROS增加，继而促进ERK激活以及加速细胞从G1期进入S期，参与UII促细胞增殖作用。
作者：禹晓童；王鹏雁；王红霞；王学江 刊期： 2015年第10期
目的：近年来研究发现一线降糖药二甲双胍（ metformin）可通过激活AMPK发挥心血管保护作用。本研究旨在探讨met－formin能否通过激活AMPK抑制Ang II引起的心脏成纤维细胞TGF－β1产生及其相关机制。方法：10周龄野生型C57BL／6和AMPKα2－／－小鼠，皮下植入微渗泵给予Ang II （3 mg? kg－1? d－1）7 d，同时皮下注射metformin（200 mg? kg－1? d－1）。原代分离培养成年小鼠心脏成纤维细胞（ AMCF）。采用real－time PCR、Western blot、双萤光素酶报告基因实验、染色质免疫沉淀技术（ ChIP）等方法进行研究。结果：在野生型C57BL／6小鼠，metformin可抑制Ang II引起的心脏纤维化及TGF－β1的产生，而在AMPKα2－／－小鼠中，metformin则不能抑制Ang II引起的纤维化和TGF－β1产生。在野生型AMCF，metformin抑制Ang II引起的TGF－β1的产生，Compound C（ AMPK抑制剂）能够逆转metformin的抑制作用。进一步研究发现，Ang II上调肝细胞核因子4α（ HNF4α）蛋白表达，增加HNF4α与TGF－β1基因启动子区的结合，双萤光素酶报告基因实验证实HNF4α作用于TGF－β1基因启动子区，并介导其转录。 HNF4α腺病毒过表达可增加AMCF中TGF－β1的产生；相反，通过慢病毒转染HNF4αsiRNA后，Ang II引起的TGF－β1生成增加被抑制。这些结果提示HNF4α介导Ang II引起的TGF－β1转录表达。 Metformin可抑制Ang II引起的HNF4α蛋白上调，Compound C可以逆转此作用，同时ChIP结果也表明metformin能够抑制Ang II引起的HNF4α与TGF－β1的结合。结论：Metformin通过激活AMPK抑制HNF4α蛋白表达及其与TGF－β1转录区的结合，进而抑制Ang II引起的TGF－β1转录表达增加。
作者：陈瑞飞；肖晗；张幼怡 刊期： 2015年第10期
目的：通过CPBL（基于临床问题的学习）教学实践，探索高等中医药院校临床医学专业病理生理学教学新模式。方法：在我校临床医学专业开展CPBL教学，并以传统教学作为对照。 CPBL教学根据教学进度选择休克、心功能不全、肾功能不全等章节的教学以临床典型病例学生分组讨论的形式进行，其他章节则在教学过程中灵活运用临床小病例与临床小问题。开展问卷调查，观察学生学习能力及教学效果的变化。结果：开展CPBL教学的学生在课程认同、自主学习能力、分析问题解决问题能力、沟通表达能力、临床思维及学习成绩等方面较传统教学有明显改善，CPBL教学能活跃课堂气氛、增强师生互动、提高学习积极性，而对教学进度、学生学习压力无明显影响。结论：CPBL教学模式能针对病理生理学课程与临床实际联系紧密的特点，明显提高临床医学专业学生学习能力和兴趣、增强师生互动、提高教学质量，有效解决高等中医院校PBL教学改革与课时不足、难以实施之间的矛盾，值得深入研究。
作者：林信富；郑海音；陈素娟；袁明洲；武一曼；黄秀榕 刊期： 2015年第10期
目的：研究单核巨噬细胞中的原肌球调节蛋白1（ tropomodulin， Tmod1）在动脉粥样硬化发生中的作用。方法：检测Tmod1在高脂喂养ApoE－／－小鼠主动脉的表达及在斑块内的定位。分析野生型和Tmod1敲除小鼠（ TOT／Tmod1－／－）中腹腔CD11b＋F4／80＋巨噬细胞、骨髓Gr1＋CD11b＋单核细胞和血液CD11b＋单核细胞含量。将野生型和TOT／Tmod1－／－小鼠的骨髓移植到LDLR－／－小鼠中并进行高脂喂养，分析其血液、血脂、斑块面积及成分。结果：Tmod1主要定位在斑块内巨噬细胞中。 TOT／Tmod1－／－小鼠的腹腔巨噬细胞含量较野生型高、骨髓和血液的单核细胞含量无区别。移植TOT／Tmod1－／－骨髓的小鼠红细胞计数低于移植野生型骨髓的小鼠，白细胞、总胆固醇和甘油三酯无差异；而流出道斑块面积显著减少，斑块内胶原面积、巨噬细胞与平滑肌的含量也均显著降低。结论：Tmod1表达在动脉粥样硬化斑块的巨噬细胞中；Tmod1的缺失加速巨噬细胞的动员；巨噬细胞中Tmod1的缺失能显著抑制斑块的形成。因此，Tmod1在动脉粥样硬化斑块的形成中发挥重要作用。
作者：姚伟娟 刊期： 2015年第10期
目的：探讨适应病理生理学大班教学的“案例式教学（CBL）”方法的改革及应用效果探索。方法：（1）使用标准化处理的临床病例，提前一星期将包括了“显性问题”和“隐形问题”的病例给到学生小组；（2）学生针对病例展开课下资料查找、讨论及PPT制作；（3）汇报小组课上自主病例讲解；（4）教师评价、学生自我评价、学生互评；（5）问卷调查。结果：（1）学生对此教学法接受度96．1％，满意度90．3％，参与度85．8％；（2）学生认为该方法提高学习兴趣91．5％、提高学习效率88．3％、提高临床思维92．3％、提高知识理解能力96．2％、提高知识运用能力91．6％；（3）集中问题：诊断知识理解不够、基础教师对临床知识指导不够。结论：基于大班教学的“案例式教学”在“以学生为中心，提高自学能力”的理念下，针对现行大班病理生理学教学现状，可以提高学生学习兴趣、学习效率、临床思维能力，提高知识的理解和运用能力。
作者：石磊；刘巍；徐芳；李钰伶 刊期： 2015年第10期
目的：观察WDR26过表达对大鼠心肌细胞缺氧所致线粒体自噬的影响，探讨其作用机制。方法：构建真核表达载体pcDNA3．1，克隆入WDR26ORF，转染H9c2心肌细胞株；实验分为对照组和实验组（转染pcDNA3．1－WDR26）；建立H9c2心肌细胞缺氧模型；采用免疫荧光、Western blot等技术检测缺氧后心肌细胞线粒体自噬情况及PINK1、Parkin线粒体自噬相关蛋白的表达情况。结果：（1）WDR26过表达时可以促进H9c2心肌细胞缺氧时线粒体自噬；（2）WDR26过表达时可以促进缺氧所致的Parkin向线粒体聚集。结论：WDR26参与心肌细胞缺血所致的线粒体自噬，并且通过与线粒体蛋白发生相互作用形成复合物，影响PINK－Parkin信号通路，从而调控线粒体自噬，在心肌缺血过程中起到内源性保护作用。
作者：赵佳 刊期： 2015年第10期
目的：研究4－羟基维胺酯（ N－4－hydroxyphenyl retinamide，4－HPR）联合应用小白菊内酯对宫颈癌HeLa细胞的生长抑制率及诱导凋亡作用，并探讨其凋亡机制。方法：体外培养宫颈癌HeLa细胞，实验分为4个组：对照组、单用小白菊内酯组、单用4－HPR组和4－HPR联合应用小白菊内酯组。采用MTT法检测药物对宫颈癌HeLa细胞的生长抑制率；在倒置显微镜下观察药物对宫颈癌HeLa细胞的形态学变化；利用流式细胞仪技术检测细胞凋亡率；Western blot方法检测内质网应激相关蛋白GRP78与GADD153的表达。结果：4－HPR联合应用小白菊内酯与单用药组相比有明显的抑制细胞增殖及促进细胞凋亡作用；联合用药与单用药组相比GRP78与GADD153蛋白表达明显上调。结论：小白菊内酯增强4－HPR诱导的宫颈癌HeLa细胞凋亡作用，其凋亡机制与可能与内质网应激相关。目的：研究4－羟基维胺酯（ N－4－hydroxyphenyl retinamide，4－HPR）联合应用小白菊内酯对宫颈癌HeLa细胞的生长抑制率及诱导凋亡作用，并探讨其凋亡机制。方法：体外培养宫颈癌HeLa细胞，实验分为4个组：对照组、单用小白菊内酯组、单用4－HPR组和4－HPR联合应用小白菊内酯组。采用MTT法检测药物对宫颈癌HeLa细胞的生长抑制率；在倒置显微镜下观察药物对宫颈癌HeLa细胞的形态学变化；利用流式细胞仪技术检测细胞凋亡率；Western blot方法检测内质网应激相关蛋白GRP78与GADD153的表达。结果：4－HPR联合应用小白菊内酯与单用药组相比有明显的抑制细胞增殖及促进细胞凋亡作用；联合用药与单用药组相比GRP78与GADD153蛋白表达明显上调。结论：小白菊内酯增强4－HPR诱导的宫颈癌HeLa细胞凋亡作用，其凋亡机制与可能与内质网应激相关。
作者：刘兰；杨莎莎；李香丹 刊期： 2015年第10期
目的：结肠癌是消化系统常见恶性肿瘤之一，开发新的抗结肠癌药是提高结肠癌治疗效果的关键之一。中药在抗肿瘤方面的作用是目前国家中药开发的重要课题之一，复方木鸡颗粒（简称木鸡）由云芝、山豆根、菟丝子、核桃楸皮等组成，具有扶正清热解毒功效，能抑制甲胎蛋白升高和调节免疫功能，已用于临床治疗原发性肝癌、肝硬化、肝炎等肝脏疾病。但在抗结肠癌的研究方面较少。本研究观察木鸡对不同p53基因型的人结肠癌细胞（HCT116p53wt、SW620p53mt和SW480p53mt）的抑制作用，初步探讨木鸡的抑瘤机制。方法：MTT法检测木鸡对细胞的生长抑制作用，光镜观察细胞形态，DAPI染色观察细胞凋亡情况。结果：木鸡对不同p53基因型的人结肠癌细胞有明显的生长抑制作用，5％的浓度抑制率可达92．7％。光镜下可见木鸡处理的结肠癌细胞变圆、浮起，细胞边缘呈发泡状，DAPI染色显示木鸡处理的细胞染色质浓缩，核边集，提示凋亡样改变，且p53野生型的人结肠癌细胞变化更明显。结论：木鸡对人结肠癌细胞有明显的抑生长作用，这种作用在p53野生型的人结肠癌细胞上更显著，提示木鸡的抑瘤作用机制与p53抑癌基因可能存在一定联系。
作者：于向洋；王玉；万山荣；刘花丽；张雪；邢嵘 刊期： 2015年第10期
目的：观察endostatin对小鼠巨噬细胞极化的影响。方法：Endostatin转染RAW264．7细胞和小鼠骨髓巨噬细胞（ BM－DMs）；RT－PCR、ELISA、HE染色和MTT检测其对RAW264．7细胞的影响；流式细胞术、ELISA、real－time PCR、Western blot和萤光素酶报告基因检测巨噬细胞极化标记物和NF－κB转录活性。结果：表达质粒能使RAW264．7细胞和BMDMs高表达en－dostatin；HE染色和MTT发现endostatin使RAW264．7细胞的形态发生变化并抑制其增殖；流式细胞术、ELISA和real－time PCR发现，endostatin能使RAW264．7细胞和BMDMs高表达NOS2、IL－6和IL－12p40（M1型巨噬细胞标志物），同时使CD206、IL－10和Arg－1（M2型巨噬细胞标志物）表达下降或不变；萤光素酶报告基因发现endostatin使NF－κB的转录活性增加；Western blot发现p－IκBα、p－p65和p－Stat1表达增加，而p－Stat3表达下降。结论：Endostatin可能通过调节NF－κB通路使小鼠巨噬细胞向M1型发生极化。
作者：郭花；刘莲勤；张平；顾俊莲；王玥；刘亚男；李扬 刊期： 2015年第10期
作者： 刊期： 2015年第10期
目的：探究急性粒细胞白血病（AML）患者的间充质干细胞（MSC）病理生理变化和钠氢交换蛋白（NHE1）的影响及机制。方法：检测AML来源MSC中NHE1的表达量；检测在有无NHE1抑制剂情况下AML来源MSC的成脂成骨分化能力，MTT检测体外增殖能力，流式细胞术检测细胞周期，Transwell检测其迁移能力；Western blot检测NHE1、JAK、AKT等相关蛋白的表达。结果：AML患者MSC的增殖、迁移及成骨能力减弱， NHE1表达量增高，抑制NHE1活性后可以不同程度地恢复这些能力；MSC细胞S期明显延长，G2期明显缩短；p－AKT和p－JAK表达量均降低。结论：AML来源MSC存在异常， NHE1、JAK和AKT不同程度参与AML患者MSC生物学异常。
作者：许华；陈龙；李元叶；王齐；李庆华；庞天翔 刊期： 2015年第10期
医学留学生教育已成为我国高等医学教育的重要组成部分，如何提高留学生教育教学质量的改革是当前形势所需，病理生理实验教学评价体系是实验教学改革的重要内容之一。目前对留学生病理生理实验教学的评价方式仅限于单一、主观的终极性评价，这不符合留学生积极主动、思维活跃的特点，使学生忽视实验课的学习，纵容了学生懒惰、被动学习的不良情绪，压抑了他们探求知识的欲望和能力，而且评价范围窄，代表性差，难以客观、全面地评价教学效果和学生的学习质量，使能力培养这一环节的作用不能充分发挥出来。新评价体系的构建与实施，强化形成性评价在整个评价体系中的比重，不但使实验课程的评价更加科学、客观，而且对于培养学生的知识应用能力、信息获取和选择能力、动手实践能力、创新能力，都起到了积极的促进作用，是监督和检查学生学习效果及应用能力，提高实验教学质量的有效手段，值得全面推广。
作者：张彩华；邢嵘 刊期： 2015年第10期
目的：研究蛋白激酶R样内质网激酶（ PERK）／核因子红系相关因子2（ Nrf2）途径介导的内质网应激反应在不同浓度的毒胡萝卜素（thapsigargin， TG）和衣霉素（tunicamycin， TM）诱导的H9c2细胞凋亡中的作用。方法：在不同浓度TG和TM诱导的H9c2细胞模型上，采用Annexin V／PI双标法和TUNEL法检测细胞凋亡，CCK－8法检测细胞活力；以Western blot检测磷酸化PERK、Nrf2及活化转录因子4（ ATF4）等蛋白水平，免疫荧光法检测Nrf2的核转位。结果：与对照组比较，TG浓度为20 nmol／L、TM浓度为160μg／L处理H9c2细胞48 h时可诱导H9c2细胞凋亡，增加PERK磷酸化、Nrf2核转位和ATF4的表达；内质网应激抑制剂牛磺酸和熊去氧胆酸处理细胞后明显减轻TG和TM诱导的H9c2细胞凋亡，并下调PERK磷酸化、Nrf2核转位和ATF4的表达。结论：PERK／Nrf2途径参与TG和TM诱导的H9c2细胞内质网应激相关细胞凋亡。
作者：陶天琪 刊期： 2015年第10期
目的：通过对人附红细胞体（ eperythrozoon，EH）重度感染患者的血浆中CD35、CD58、CD59免疫相关因子和IgM的测定，观察人附红细胞体对红细胞免疫功能的影响。通过对NO、SOD和MDA指标的检测，观察人附红细胞体对机体抗氧化能力的影响。方法：采集内蒙古国际蒙医院患者的血液，用光学显微镜、透射电镜观察以及PCR 检测的方法，鉴定并筛选出30名重度感染附红细胞体的患者，以30例健康人作对照。用ELISA试剂盒对2组血样分别检测。结果：附红细胞体感染患者SOD活性下降，NO和MDA含量升高，血浆中CD35、CD58、CD59和IgM含量升高，差异有统计学意义（ P＜0．05）。结论：（1）自由基产生增多而清除减少，是人附红细胞体重度感染时机体组织细胞损伤因素之一；（2）附红细胞体感染破坏红细胞，红细胞膜上的CD35、CD58和CD59脱落致血浆含量增高，使红细胞天然免疫功能和特异性免疫失平衡，可能是该病易引起其它病原体继发感染的免疫学理论依据之一。
作者：赵文军；陈瑶；刘志跃；邰秀珍；杨殿相 刊期： 2015年第10期
目的：探讨金丝桃素结合低频超声（ HY－SDT）对THP－1巨噬细胞产生的作用及机制研究。方法：激光共聚焦检测细胞内HY定位、活性氧（ ROS ）产生、线粒体通透性转换孔（ mPTP ）开放和 LC3表达。荧光显微镜观察线粒体膜电位（ MMP ）。Hoechst－PI染色、透射电镜和流式细胞术观察自噬与凋亡。 Western blot（ WB）检测Bax与cytochrome C转位以及凋亡与自噬相关蛋白的表达。结果：HY在THP－1巨噬细胞的细胞核和线粒体等细胞器均有分布。 HY－SDT后2 h细胞内自噬增加；6 h细胞存活率下降，凋亡率、ROS和MDA升高，MMP降低，自噬抑制剂3MA导致凋亡率进一步升高。 WB显示SDT后早期LC3－II和Beclin 1表达增多，随后Bax和cytochrome C发生转位，Bcl－2下调，线粒体－caspase凋亡相关蛋白表达增多。 NAC可明显抑制ROS增加、MMP下降、mPTP开放和凋亡自噬相关蛋白的变化。结论：HY－SDT通过产生ROS早期增加自噬，随后促凋亡因子Bax从胞浆转位锚定在线粒体上，增加Bax／Bcl－2比值，诱导mPTP开放，释放cytochrome C，从而诱导凋亡。
作者：李雪松；郑龙彬；寇佳媛；田野；杨力明 刊期： 2015年第10期
中国病理生理杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中国病理生理学会
