刘兰；杨莎莎；李香丹
作者： 刊期： 2015年第10期
目的：通过抑制或沉默人皮肤成纤维细胞来源的诱导性多能干细胞（ hiPSCs ）内赖氨酸特异性去甲基化酶1（ LSD1）基因的表达，建立一种hiPSCs高效、定向分化为胰岛素分泌细胞（ IPCs）的方案，并初步探讨其调控分化机制。方法：采用shRNA或LSD1抑制剂，沉默或抑制hiPSCs内LSD1基因表达，筛选出利于hiPSCs向定型内胚层分化的LSD1活性；利用四步法将hiPSCs诱导分化为IPCs，并对IPCs分化效率及成熟度进行检测；将IPCs移植到糖尿病模型免疫缺陷小鼠肾包膜下，评估其体内降糖疗效；ChIP－qPCR检测抑制LSD1前后hiPSCs细胞核内相应组蛋白水平的变化情况。结果：抑制LSD1可促使hiPSCs提前进入定型内胚层分化，终IPCs的效率由21．52％提高至39．32％；体外胰岛素分泌量由1／8提高到1／6；移植的IPCs可在1周内使糖尿病小鼠血糖恢复至正常水平；ChIP－PCR结果显示hiPSCs的分化基因启动子区域H3K4me2／me3和H3K9act水平提高，H3K9／H3K27me3和HDAC1水平下降，而多潜能基因表达情况相反。结论：适当抑制LSD1活性可显著提高hiPSCs向IPCs的分化效率和成熟度，并在体内发挥有效降糖作用；LSD1通过调控hiPSCs多能性基因和分化基因启动子区域组蛋甲基化、乙酰化修饰水平来影响IPCs分化效率。
作者：周淑艳；孙倓；桑金凤；张根葆 刊期： 2015年第10期
目的：观察新型气体信号分子二氧化硫（ SO2）对老年ALI大鼠肺泡巨噬细胞分泌和吞噬功能的影响。方法：将48只20～24月龄，体重758±47 g的老年大鼠随机分为3组：对照组、ALI组和SO2治疗组。 SO2治疗组和ALI大鼠气管内滴注脂多糖（LPS，每只200μg）后，分别立即腹腔注射SO2供体Na2SO3（0．54 mmol／kg）／NaHSO3（0．18 mmol／kg）和等体积生理盐水。对照组大鼠气管内滴注等体积无热原生理盐水。各组大鼠气管内滴注LPS或生理盐水6 h后，留取支气管肺泡灌洗液用于分离和培养大鼠肺泡巨噬细胞（ AM）。 ELISA测定AM培养上清炎症因子IL－1β、IL－6和IL－10的含量，并观察AM对白色念珠菌吞噬功能的变化。结果：气管内滴注LPS可使AM分泌IL－1β、IL－6和IL－10增多，同时使其对白色念珠菌的吞噬率降低。与ALI组相比，给予SO2溶液后可抑制IL－1β、IL－6的分泌而促进IL－10的分泌，同时使AM对曲霉孢子的吞噬率增加。结论：外源性给予SO2可调节老年大鼠急性肺损伤时AM分泌及吞噬功能的变化。
作者：黄新莉 刊期： 2015年第10期
目的：观察体外培养大鼠肝星状细胞（ HSCs）活化过程中组蛋白修饰的改变以及与HSCs活化指标α－平滑肌肌动蛋白（α－SMA）的关系，探讨组蛋白修饰在HSCs活化过程中可能的作用。方法：体外分离、鉴定、培养大鼠HSCs，光镜观察HSCs活化过程中的形态变化，细胞免疫荧光染色和Western bloting检测desmin和α－SMA的表达，比较静止型HSCs和激活型HSCs中H4K12乙酰化、H3K9乙酰化、H3K4二甲基化和H3K9二甲基化的变化。结果：（1）细胞学形态观察结果表明HSCs在培养过程中形态由静止状态向高度分化的肌成纤维细胞转化。细胞免疫荧光染色及Western bloting检测结果显示，分离培养24 h的HSCs有desmin表达，但几乎不表达α－SMA；随培养时间延长，HSCs内α－SMA和desmin表达逐渐增加。（2）根据HSCs细胞形态变化及HSCs活化标志蛋白检测结果，确定培养24 h的HSCs为静止型HSCs，培养15 d的HSCs为激活型HSCs，分别检测其组蛋白修饰变化。结果显示，与静止型HSCs比较，激活型中H4K12乙酰化、H3K9乙酰化、H3K4二甲基化和H3K9二甲基化修饰水平明显降低，而H3K4二甲基化修饰水平明显增加，且H3K4二甲基化修饰水平变化与α－SMA表达变化一致。结论：在体外培养HSCs活化过程中，组蛋白修饰发生明显异常，提示组蛋白修饰改变有可能参与HSCs活化以及肝纤维化的发生。
作者：田甜；杨勤 刊期： 2015年第10期
目的：观察CTRP3在心肌纤维化中的作用并探讨其可能的分子机制。方法：结扎冠状动脉左前降支制备大鼠心肌梗死模型，采用马松三色法评价心肌纤维化程度；培养大鼠心肌成纤维细胞，采用real－time PCR与免疫印迹法检测纤维化相关指标。结果：心肌梗死大鼠心脏CTRP3表达水平降低；心肌注射腺病毒过表达CTRP3可以减轻心肌梗死引起心肌肥大，抑制间质纤维化，减少肌成纤维细胞数量。 CTRP3孵育心肌成纤维细胞可以显著抑制TGF－β1诱导的SMA表达，减少结缔组织生长因子、胶原I和胶原III的生成。 siRNA敲低CTRP3的表达进一步增加TGF－β1诱导的SMA和胶原分子的表达。 CTRP3激活大鼠心脏和培养的成纤维细胞中AMPK的磷酸化；AMPK抑制剂AraA预孵育可消除CTRP3抑制TGF－β1诱导的Smad3磷酸化、核转位以及与p300结合的作用，逆转CTRP3的抗纤维化作用。结论：CTRP3通过激活AMPK抑制TGF－β1诱导的Smad3核转位和与p300的结合，抑制肌成纤维细胞表型转化，从而抑制心肌梗死大鼠的心肌纤维化。
作者：冯寒；张城林；吴丹；雷虹；王瑾瑜；符凤英；李丽；吴立玲 刊期： 2015年第10期
探讨与医学相关的社会热点问题，如对WHO提出的各种世界“疾病日”的认识，结合多媒体展示融入病理生理学教学的意义。以认识“世界肾脏病日”、“世界COPD日”等为例，从话题提出到相关知识引入，再到体现“以学生为中心”，借助不同教学模式，如Sandwich或PBL教学对历年“疾病日”主题的深入探讨和相关知识延伸，引导学生对所学知识融会贯通。不但能激发学生的学习热情，提高探究问题的兴致和积极性，培养科学的临床思维、自主学习和创新能力，增强其自信心和社会责任感，而且使授课形式多样化，知识掌握更易形成系统，并能拓宽师生知识视野，从而提高病理生理学教学效果。
作者：赵爽；蒙山；卢露碧；高洁；朱名毅 刊期： 2015年第10期
目的：针对脓毒症（ sepsis）发病机制的复杂性和非线性特点，采用多种组学技术与系统生物学整合研究策略，以发现脓毒症新的生物标志物群，揭示脓毒症的组学／网络机制，探讨脓毒症多靶点整合性干预的新思路。方法：采用大鼠盲肠结扎穿刺脓毒症模型和选用部分脓毒症病人，采用GEO数据库查询和iTRAQ蛋白质组学技术分析其血清蛋白质组学变化，采用亚网络富集分析揭示重要节点蛋白和可能的干预靶点。结果：通过iTRAQ蛋白质组学技术，在脓毒症大鼠中发现47个差异蛋白，其中PTX3、MMRN1、FCN1、CPN2、PRSS1和PF4可用于脓毒症的诊断；MMRN1、PPBP、FGα和FGβ这4个生物标志物的组合可用于脓毒症的预后预测；PTX3在临床脓毒症患者的诊断和预后预测方面优于传统的降钙素原（ PTC）和C反应蛋白（ CRP）， IL－1R2是诊断脓毒症和鉴别G－和G＋菌脓毒症的新的血清生物标志物；采用亚网络富集分析发现CCAAT增强子结合蛋白（ C／EBP）和内皮抑制素（ endostatin）是脓毒症的重要节点蛋白和潜在干预靶点。结论：组学技术和系统生物学整合研究策略为脓毒症机制阐明和多靶点整合性干预带来新希望。
作者：肖献忠；王慷慨；张华莉；焦京；高敏；彭玥；蒋宇 刊期： 2015年第10期
目的：研究单核巨噬细胞中的原肌球调节蛋白1（ tropomodulin， Tmod1）在动脉粥样硬化发生中的作用。方法：检测Tmod1在高脂喂养ApoE－／－小鼠主动脉的表达及在斑块内的定位。分析野生型和Tmod1敲除小鼠（ TOT／Tmod1－／－）中腹腔CD11b＋F4／80＋巨噬细胞、骨髓Gr1＋CD11b＋单核细胞和血液CD11b＋单核细胞含量。将野生型和TOT／Tmod1－／－小鼠的骨髓移植到LDLR－／－小鼠中并进行高脂喂养，分析其血液、血脂、斑块面积及成分。结果：Tmod1主要定位在斑块内巨噬细胞中。 TOT／Tmod1－／－小鼠的腹腔巨噬细胞含量较野生型高、骨髓和血液的单核细胞含量无区别。移植TOT／Tmod1－／－骨髓的小鼠红细胞计数低于移植野生型骨髓的小鼠，白细胞、总胆固醇和甘油三酯无差异；而流出道斑块面积显著减少，斑块内胶原面积、巨噬细胞与平滑肌的含量也均显著降低。结论：Tmod1表达在动脉粥样硬化斑块的巨噬细胞中；Tmod1的缺失加速巨噬细胞的动员；巨噬细胞中Tmod1的缺失能显著抑制斑块的形成。因此，Tmod1在动脉粥样硬化斑块的形成中发挥重要作用。
作者：姚伟娟 刊期： 2015年第10期
目的：探讨银杏叶提取物（ GBE）对阿尔茨海默病（ AD）的预防与治疗作用及其机制。方法：大鼠尾静脉注射高半胱氨酸（ Hcy）2周构建AD模型。实验分为对照组（生理盐水）、模型组（ Hcy）和预防组（ Hcy＋GBE），治疗组（ Hcy注射2周后给予GBE 1周）。水迷宫检测大鼠学习记忆。 Western blot检测大鼠海马和皮质中tau及其磷酸化、GSK－3β及其磷酸化、PP2A及其甲基化、PSD95、synapsin I的变化。结果：（1）水迷宫提示模型组大鼠潜伏期显著高于其它3组。（2）大鼠海马和皮质中tau、GSK－3β和PP2A表达无变化，tau磷酸化和PP2A甲基化模型组显著高于其它3组，GSK－3β磷酸化和PSD95、synapsin I表达模型组显著性低于其它3组。结论：GBE能通过调节GSK－3β和PP2A活性预防和治疗Hcy导致的大鼠学习记忆障碍和tau过度磷酸化。
作者：曾宽；黄芳；包建；李梦珠；王小川 刊期： 2015年第10期
目的：Seipin突变或缺失可导致患者肥厚性心肌病和心衰，但机制不明。本课题研究seipin基因缺失（ seipin－／－）对小鼠心肌重塑的影响及机制。方法：用2月龄的雄性seipin－／－及野生型（WT）小鼠主动脉缩窄手术（TAC）后12周（n＝8）研究seipin缺失对心肌重塑的影响及机制。同时体外检测 seipin－／－及WT 小鼠心肌细胞钙流。结果：和 WT TAC 组相比， seipin－／－TAC组出现了更加严重的心腔扩大、心肌肥厚和左室舒张功能障碍；心肌胶原沉积，炎症细胞浸润和凋亡小体增加；有更为明显的心肌细胞内质网扩张，微管和线粒体变形病变；心肌内质网应激相关基因、心衰和心肌肥厚因子及炎症基因表达增加，钙流相关基因（SERCA2a、RyR和NCX）下降。 Seipin－／－小鼠和WT小鼠相比，心肌细胞出现慢钙瞬变衰减和肌浆网钙离子含量增加。结论：Seipin缺陷加重小鼠TAC术后心肌肥厚和舒张性心力衰竭，可能与心肌钙离子通道的受损并促进心肌细胞内质网应激、炎症和细胞凋亡相关。
作者：刘雪静；吴晓月；王欢；杨诚志；李子健；张幼怡；刘国庆；杨宏远；黄薇 刊期： 2015年第10期
目的：探讨游离脂肪酸（ free fatty acid， FFA）激活上皮细胞钠通道（ epithelial sodium channel， ENaC）的分子机制，以及H2 S对抗FFA引起ENaC异常激活的作用和机制。方法：应用肾皮质集合管上皮细胞，采用膜片钳技术研究H2 S对抗FFA引起ENaC异常激活的保护作用和分子机制；应用激光共聚焦显微镜技术观察FFA能否调节细胞内钙水平和细胞内ROS水平。结果：FFA通过胰岛素受体磷酸化、NADPH、PI3K和IP3受体介导的钙释放调节ENaC活性；H2 S通过氧化还原反应抑制FFA引起的ENaC的异常激活。结论：FFA通过诱导胰岛素受体磷酸化，引起细胞内钙释放，进而激活NADPH升高细胞内活性氧水平，引起ENaC异常激活。气体信号分子H2 S通过氧化还原反应抑制FFA引起的ENaC异常激活。
作者：王秋石；张志仁 刊期： 2015年第10期
目的：探讨Neuro－2a细胞株用于A型肉毒毒素重链（ botulinum neurotoxin serotype A heavy chain， BoNT／A HC）体外细胞模型的可行性。方法：体外培养Neuro－2a细胞检测HC相关受体，确定是否可用于HC作用的体外模型；后于Neuro－2a细胞培养液内加入一定浓度的HC，于不同时点在相差显微镜下摄取图片观察HC对细胞突起生长状况的影响，包括有突起细胞的百分比、细胞突起的长度以及突起总数。结果：（1）培养一定时间的Neuro－2a细胞表达HC的高亲和力（synaptic vesicle 2，SV2）和低亲和力（trisialoganglioside 1b，GT1b）受体。（2）培养液内加入一定剂量的HC可促进Neuro－2a细胞突起再生及增长。在HC影响下，有突起的Neuro－2a细胞百分比、神经突起的总数量以及平均突起的长度皆较对照组明显增加，且差异具有统计学意义（ P＜0．05）。结论：Neuro－2a细胞可用于HC体外研究的细胞模型；Neuro－2a对HC比较敏感；一定剂量的HC能够促进神经突起的生长。
作者：王红；李夏青 刊期： 2015年第10期
目的：探究急性粒细胞白血病（AML）患者的间充质干细胞（MSC）病理生理变化和钠氢交换蛋白（NHE1）的影响及机制。方法：检测AML来源MSC中NHE1的表达量；检测在有无NHE1抑制剂情况下AML来源MSC的成脂成骨分化能力，MTT检测体外增殖能力，流式细胞术检测细胞周期，Transwell检测其迁移能力；Western blot检测NHE1、JAK、AKT等相关蛋白的表达。结果：AML患者MSC的增殖、迁移及成骨能力减弱， NHE1表达量增高，抑制NHE1活性后可以不同程度地恢复这些能力；MSC细胞S期明显延长，G2期明显缩短；p－AKT和p－JAK表达量均降低。结论：AML来源MSC存在异常， NHE1、JAK和AKT不同程度参与AML患者MSC生物学异常。
作者：许华；陈龙；李元叶；王齐；李庆华；庞天翔 刊期： 2015年第10期
目的：研究局部热激对大鼠睾丸生精细胞凋亡和增殖的动态变化及二者相关性的影响，以探索生精细胞凋亡与增殖的关系。方法：HE染色分析各组大鼠曲细精管形态变化；TUNEL法检测各组生精细胞凋亡情况；免疫组化法分析各组大鼠曲细精管Ki－67表达与分布的变化。结果：与对照组相比，热激后生精细胞逐渐脱落、缺失，至第4天为严重，而第5天生精细胞有所恢复；热激后各组的TUNEL凋亡信号显著增加（ P＜0．01），2 d组达到高峰，3～5 d组凋亡信号逐渐降低；热激后各组的Ki67表达显著下降（ P＜0．01），1 d组很少见到Ki67表达，2～5 d组Ki67表达逐渐增加；比较各组Ki67与TUNEL的比值，发现1～2 d组比值小于1，3 d组比值几乎等于1，4 d组比值大于1。结论：睾丸局部热激可导致生精细胞凋亡，生精细胞增殖抑制，热激后早期凋亡过程胜于增殖，热激后期增殖强于凋亡过程，表明凋亡过程的可逆可能在于增殖活性增强。
作者：张婷婷；何萌萌；李悦；郭健 刊期： 2015年第10期
先天性心脏病是导致新生儿死亡的主要疾病之一，由于心脏发育过程是个复杂的级联调控网络，引起胚胎心脏畸形的原因非常复杂，包括大量的转录因子及其相关的信号通路的相互作用。抑制和干扰这些转录因子的表达能诱导心肌异常发育，造成心功能受损。本研究选择常见的环境危险因素--吸烟（尼古丁）为研究对象，分别从体内胚胎心脏的动物模型和体外干细胞心肌细胞分化模型探讨尼古丁如何影响心脏早期发育和心肌分化，并探讨其表观遗传学的调控机制，结果显示：长期、持续的尼古丁暴露能明显抑制胚胎心脏的发育和拟胚体向心肌分化；妊娠期持续给予尼古丁与母体被动吸烟具有相同的抑制左心功能的效应，包括降低LV mass、LVESV、LVEDV和LVPWTH等；持续给予尼古丁处理可选择性抑制心肌转录因子（ Tbx5和GATA4）的mRNA和蛋白水平，并降低GATA4阳性的心肌祖细胞数量，从而抑制拟胚体向心肌细胞的分化，该抑制效应能被尼古丁乙酰胆碱受体的抑制剂所阻滞；尼古丁促进干细胞DNA整体甲基化水平，影响心肌的发育。因此，环境因素吸烟（尼古丁）通过改变干细胞的表观甲基化修饰，进而调控心肌特异转录因子表达，诱发心脏的发育异常。
作者：余细勇 刊期： 2015年第10期
目的：探讨胆汁酸（ CDCA）及其受体FXR对肠道缺血再灌注（ I／R）的保护作用及其机制。方法：采用小鼠肠系膜上动脉缺血再灌注模型，用病理和测定二胺氧化酶（ DAO）方法评估肠道损伤。结果：与假手术组比，小鼠肠道I／R后出现坏死，DAO升高，而胆汁酸组（I／R前喂食0．5％CDCA 7 d）坏死长度明减少，血DAO明显降低（P＜0．05）。病理显示野生型和FXR－／－小鼠的肠道I／R都出现了明显的损伤，但FXR敲除小鼠I／R后损伤加重，DAO升高（P＜0．05）。肠道Western blot结果显示：肠道I／R后紧密连接蛋白occludin表达下调，给CDCA后occludin表达上调。与野生型I／R组相比，FXR敲除小鼠肠道I／R后occludin表达下降。结论：胆汁酸CDCA能减轻肠道I／R损伤，其保护的机制之一是通过激活FXR，上调occludin表达，增强肠道黏膜屏障实现。
作者：李烁；王璇；张楚旌；陈曼；祝世功 刊期： 2015年第10期
目的：研究环境致癌物甲基硝基亚硝基胍（ MNNG）转录激活人核糖核苷酸还原酶小亚基M2（ RRM2）参与DNA损伤修复的分子机制。方法和结果：MNNG刺激显著激活RRM2基因的表达。γ－H2AX、细胞周期分布及凋亡的改变显示表达上调的RRM2转位入核参与DNA损伤修复。通过RRM2启动子探针介导的DNA pulldown、LC－MS／MS 及 ChIP－PCR分析发现MNNG刺激后，E2F3直接结合到RRM2启动子上，激活其表达。另外，转录因子NFY与E2F3相互作用，增强MNNG诱导的RRM2转录激活。 MNNG处理上调E2F3蛋白水平依赖于ATR－CHK1信号通路介导的其S124位磷酸化。结论：MNNG通过激活ATR／CHK1磷酸化E2F3 S124，增加其蛋白稳定性。上调的E2F3与NFY转录共调控RRM2基因的表达，参与DNA损伤修复过程。
作者：宫朝举；邵吉民 刊期： 2015年第10期
15－脂氧合酶（15－LO）是参与肺动脉高压发病的重要因子。然而，15－LO在肺血管外膜成纤维细胞中的表达及作用却不清楚。本研究将探讨15－LO对外膜成纤维细胞活性的调节作用。大鼠低氧培养7 d，或给予15－LO抑制剂NDGA处理。通过WST－1、细胞划痕、流式细胞术及蛋白印迹等检测成纤维细胞增殖、表型、迁移及周期改变。结果显示缺氧刺激15－LO表达， NDGA减轻缺氧大鼠外膜重构。缺氧激活JNK通路，阻断15－LO或JNK抑制成纤维细胞活性改变。应用干扰RNA沉默MMP－2和p27 Kip1的表达后，15－LO诱导的成纤维细胞变化被抑制。阻断JNK或敲除Elk－1抑制缺氧诱导的15－LO表达。 Lucif－erase及ChIP分析揭示15－LO启动子与Elk－1存在结合位点，缺氧促进Elk－1与15－LO结合。上述结果表明：缺氧刺激JNK依赖的Elk－1促进15－LO表达，15－LO调节MMP－2及p27Kip1，促进成纤维细胞增殖、迁移、细胞周期等改变，从而介导血管外膜重构和肺动脉高压的发生。
作者：张莉；陈明刚；王晓燕 刊期： 2015年第10期
目的：观察自然衰老大鼠中硝化应激对阻力血管内皮依赖性舒张功能的影响，探讨衰老血管内皮功能障碍的机制。方法：3月龄、9月龄和20月龄健康雄性SD大鼠分为：青年组、中年组、老年组及各自给予过氧亚硝基（ peroxynitrite， ONOO－）清除剂（ FeTMPyP）组。 Weastern blot检测肝脏衰老相关蛋白P53和P21水平；免疫组化法检测血管3－硝基酪氨酸（3－nitroty－rosine，3－NT）水平；离体动脉血管环灌流，观察其对不同浓度乙酰胆碱（ acetylcholine， ACh）的反应；流式细胞术检测外周血内皮祖细胞数量。结果：免疫组化结果显示衰老大鼠肠系膜动脉3－NT水平升高，提示出现明显的硝化应激反应，采用FeTMPyP干预可明显降低3－NT水平；衰老大鼠肠系膜动脉内皮依赖性舒张功能和外周血循环内皮祖细胞数量较青年和中年大鼠显著下降，采用FeTMPyP干预可明显提高衰老阻力血管内皮依赖性舒张功能和外周血循环内皮祖细胞的数量。结论：外周内皮祖细胞减少参与了硝化应激引起的衰老大鼠阻力血管内皮依赖性舒张功能降低。
作者：孙琪；董玉；王环愿；焦昆；刘慧荣；王雯 刊期： 2015年第10期
病理生理学课程在医学生的培养中发挥重要作用，改革传统教学模式弊端，落实“以学生为中心”的理念势在必行。近几年我们在践行“以学生为中心”的教学中积极探索，具体方法：（1）扭转以教师为主体的心态，设立课程协调员了解学生的学习情况，倾听学生的不同见解，与学生展开讨论，建立民主平等的教学关系。（2）探索尝试有利于学生接受理解的教学方式。利用构建主义原理，抽取部分学生进行支架式教学实践，期末成绩显示教学效果优于传统方式。（3）启发、鼓励学生掌握良好的方法提高自学能力。提前布置某一命题，鼓励学生检索数据库收集相关研究进展制作成PPT分组对其进行讲解阐释，教师点评总结。（4）改革“一考制”为提问、案例分析、写报告、口头汇报、闭卷等形成性评价形式。（5）实施人本教育，教育学生尽早树立“以人为本、仁术勤和”的良好医德和服务意识题。通过以上实施方法，在教学中更有利于发挥学生的主体地位，获得较好的学习效果。
作者：骆亚莉；王雅莉；李能莲；李长天；黄勇；胡树名 刊期： 2015年第10期
中国病理生理杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中国病理生理学会
