孙琪；董玉；王环愿；焦昆；刘慧荣；王雯
目的：观察蝎毒多肽提取物（ PESV）对H22肝脏原位移植瘤模型小鼠肝脏NK细胞表达及功能的影响。方法：C57BL／6小鼠肝脏接种H22肝癌细胞株悬液构建原位移植瘤模型，术后给予PESV大、小剂量及生理盐水灌胃，14 d后检测肝脏及浸润癌组织中NK细胞及穿孔素、颗粒酶B的表达变化并观察小鼠生存期。结果：PESV大、小剂量组肝脏移植瘤的生长受到抑制，肿瘤体积和瘤重均低于荷瘤对照组，肿瘤抑制率分别为30．77％和15．38％，生存期观察显示PESV大剂量组与荷瘤对照组相比差异显著；荷瘤对照组肿瘤细胞排列紧密，异型性显著，呈浸润性生长，PESV大、小剂量组出现明显坏死区，细胞异型性减轻；与荷瘤对照组相比，PESV大、小剂量组小鼠肝脏NK1．1＋细胞分别占肝脏总淋巴细胞的（4．13±0．43）％和（5．91±0．49）％，显著高于荷瘤对照组（ P＜0．05）；PESV大剂量组瘤组织中穿孔素和颗粒酶的mRNA表达量分别是荷瘤对照组的3．62倍和5．82倍（P＜0．05）。结论：PESV可通过提高H22肝脏原位移植瘤小鼠肝脏中NK细胞的表达，诱导穿孔素和颗粒酶B的产生，促进NK细胞杀伤活性的恢复，增强对肿瘤细胞的清除。
作者：韩琛；王朝霞；王恒孝 刊期： 2015年第10期
目的：探讨益母草水苏碱对心力衰竭大鼠心肌自噬的影响及作用机制。方法：采用胸主动脉结扎法（ TAC）诱导心衰模型。采用血流动力学检测心功能，免疫印迹法检测自噬相关蛋白、Nox2亚基、磷酸化AMPK及mTOR的表达，免疫荧光法双标记检测Nox2的活化状态，H2DCF检测胞浆ROS产生变化，GFP－RFP－LC3慢病毒转染检测自噬体及自噬溶酶体数量变化。结果：整体水平上，与假手术组相比，模型组心功能下降，自噬相关蛋白表达增加（ P＜0．05）；与模型组相比，益母草水苏碱组心功能得到改善，自噬相关蛋白表达下降（ P＜0．05）。细胞水平上，与正常组相比，模型组自噬体及自噬溶酶体数量明显增多，自噬相关蛋白、Nox2亚基表达、胞浆ROS产生、磷酸化AMPK及mTOR明显减少（ P＜0．05）；与模型组相比，益母草水苏碱组的自噬体及自噬溶酶体数量明显减少，自噬相关蛋白、Nox2亚基表达、胞浆ROS产生、磷酸化AMPK及mTOR增加（ P＜0．05）。结论：益母草水苏碱通过抑制Nox2活化和其亚基的表达，使ROS产生减少，并且经磷酸化AMPK－mTOR途径抑制自噬的过度激活，从而改善心功能。
作者：曹童童；陈会花；章忱；郭炜；卫洪昌；吕嵘 刊期： 2015年第10期
目的：探讨PTEN－Akt－FoxO3a信号通路在H2 S抑制oxLDL诱导的HUVECs凋亡中的作用。方法： HUVECs分为4组：①对照组；②NaHS组；③oxLDL组；④NaHS＋oxLDL组。 Hoechst 33258染色和AO／EB染色检测细胞凋亡，Western blot检测细胞PTEN、p－PTEN、Akt、p－Akt、FoxO3a、p－FoxO3a和Bim蛋白的表达。结果：NaHS＋oxLDL组较oxLDL组细胞凋亡明显减少。与oxLDL组相比，NaHS＋oxLDL组显著增加细胞PTEN、Akt和FoxO3a蛋白的磷酸化，减少Bim蛋白表达（ P＜0．05）；FoxO3a核转位显著减少（ P＜0．05）。结论：硫化氢可抑制oxLDL诱导的HUVECs凋亡，其机制与激活PTEN／Akt／FoxO3a信号通路有关。
作者：任重；唐蕙；彭娟；肖卫晋；任晓晴；王佐；刘录山；屈顺林；姜志胜 刊期： 2015年第10期
目的：探讨上转化纳米颗粒包覆的二氢卟吩（ UCNPs－Ce6）介导的光动力治疗对THP－1巨噬细胞凋亡机制。方法：通过DCFH－DA检测光动力治疗后细胞内活性氧（ ROS）的变化，通过钙黄绿素探针检测光动力治疗之后线粒体通透性转换孔（ MPTP）开放。通过免疫荧光与Western blotting检测光动力治疗后Bax蛋白与细胞色素C蛋白在胞浆和线粒体的表达。结果：光动力治疗后巨噬细胞内活性氧明显升高，线粒体膜电位下降，MPTP开放。免疫荧光与Western blotting结果显示光动力治疗后Bax蛋白发生了胞浆到线粒体的转位变化，细胞色素C从线粒体释放入胞浆，引起caspase级联反应诱导细胞凋亡。NAC阻断光动力治疗后ROS的产生，有效减少了巨噬细胞凋亡发生。结论：UCNPs－Ce6介导的光动力治疗能通过活性氧爆发激活线粒体－caspase通路引起THP－1巨噬细胞凋亡。
作者：朱兴；仲昭宇；姜月晴；田野；杨力明 刊期： 2015年第10期
目的：研究Chk1在杂色曲霉素（sterigmatocystin，ST）诱导人胃黏膜上皮细胞（GES－1）G2／M期阻滞中的作用。方法：采用流式细胞术（FCM）、荧光实时定量PCR（real－time PCR）和蛋白免疫印迹（Western blot）等方法，观察不同浓度ST（3μmol／L、6μmol／L、12μmol／L）处理24 h后，体外培养GES－1细胞周期分布、Chk1及p－Chk1的表达；随后给予Chk1 siRNA干扰后，观察细胞周期分布的变化。结果：FCM结果提示ST能够诱导GES－1细胞发生G2／M期阻滞；real－time PCR结果显示ST可以提高Chk1在mRNA水平的表达；Western blot结果显示ST可以增加Chk1及p－Chk1的蛋白表达；FCM结果显示与control siRNA＋ST处理组相比，Chk1 siRNA＋ST处理组G2／M期细胞比例明显下降（ P＜0．05）。结论： Chk1的激活是ST引发GES－1细胞G2／M期阻滞的重要原因。
作者：姜秀娟 刊期： 2015年第10期
目的：蛋白酪氨酸激酶相互作用蛋白51（protein tyrosine phosphatase interacting protein 51，PTPIP51）定位于线粒体及肌浆网。拟研究其对心肌细胞线粒体及细胞功能的作用及作用机制。方法：冠脉左前降支结扎再通术建立缺血再灌注模型；H2 O2刺激乳鼠原代心肌细胞凋亡；流式细胞术和TUNEL法检测细胞凋亡；MitoTracker Green、ER Tracker Red观察线粒体／肌浆网共定位；电镜检测线粒体／肌浆网接触面积；钙荧光探针检测胞浆和线粒体内钙变化。结果：缺血再灌注损伤心肌及H2 O2诱导的凋亡心肌细胞中，PTPIP51蛋白水平显著升高；过表达PTPIP51导致心肌细胞凋亡，敲低则抵抗H2 O2所致凋亡。 PT－PIP51使线粒体与肌浆网接触面积增加、线粒体钙浓度增高；抑制线粒体钙升高可以逆转PTPIP51引起的细胞凋亡。结论：缺血再灌注损伤时，心肌PTPIP51蛋白上调，通过增加线粒体与肌浆网的接触面积使线粒体内钙超载，参与诱导心肌细胞凋亡。
作者：乔雪；郑铭 刊期： 2015年第10期
目的：为加强学生对机能学实验操作技能的掌握，我校开展了“机能学实验技能大赛”。方法：2010年起，我校5个年级4个专业6000余名学生参与了“机能学实验技能大赛”。观察大赛对学生实验操作技能、团队协作精神、创新能力以及学习成绩的影响。结果：（1）学生对竞赛的满意度（90．3±3．4）％。（2）（89．1±2．9）％认为大赛促进团队协作，（95．1±1．8）％认为大赛促进基本技能的掌握，（86．7±4．1）％认为大赛促进创新。（3）参加大赛同学成绩优秀率（46．3±3．8）％，较未参加大赛同学［（30．7±2．5）％］明显提高。结论：通过大赛，极大增强了学生的动手能力，培养学生团队合作意识和科研创新意识，为培养医学实用人才奠定了良好基础。
作者：李鑫；金成文；崔晓栋；成敏 刊期： 2015年第10期
目的：探讨同型半胱氨酸（Hcy）对NLRP3炎症小体的激活及其在动脉粥样硬化（AS）中的作用。方法：（1）Hcy处理人巨噬细胞，检测NLRP3炎症小体表达及培养上清IL－1β浓度；通过 NLRP3 siRNA 干扰，观察 Hcy 的作用是否被阻断。（2） apoE－／－雄性小鼠，随机分为对照组（CT）、高脂组（HF）、高脂高蛋氨酸组（HFHM）、高脂高蛋氨酸＋control siRNA组和高脂高蛋氨酸＋NLRP3 siRNA组。检测AS面积、NLRP3炎症小体表达以及血脂、Hcy和炎症因子水平。结果：Hcy可激活巨噬细胞NLRP3炎症小体并促进IL－1β分泌，NLRP3 siRNA干扰能阻断Hcy的作用。动物实验结果显示高脂可诱导AS形成；HFHM组AS面积进一步增加，AS斑块处NLRP3炎症小体各成分表达增强，血浆Hcy和IL－1β水平较HF组显著增高；NLRP3 siRNA 干扰能阻断HFHM的作用。结论：Hcy能通过激活NLRP3炎症小体促进AS的发生发展。
作者：谭红梅 刊期： 2015年第10期
G蛋白偶联受体（ GPCR）与心血管疾病病、肿瘤、免疫和感染性疾病等重要疾病的发生、发展密切相关。同时，约50％药物都是以受体为靶点。但目前对受体精密调控机制尚不清楚。利用蛋白质组学、活细胞单分子荧光成像等方法，我们研究发现多种G蛋白偶联受体新调控机制。发现了肾上腺素受体新的调控子HIP－55（ hematopoietic progenitor kinase 1［ HPK1］－in－teracting protein of 55 kD）。 HIP－55通过蛋白质相互作用调控肾上腺素诱导转位激活、双相激活等受体激活方式。 HIP－55通过cAMP非依赖途径调控肾上腺素受体介导的p38、ERK1／2等重要信号通路。 HIP－55通过调控受体Clathrin内吞途径介导受体内吞、减敏及下游信号。此外，我们还发现另外一个生长分化因子15（growth differentiation factor－15，GDF－15）。 GDF－15通过抑制MMP途径，负调控肾上腺素诱导EGFR转位激活信号通路。基于G蛋白偶联受体信号调控机制的研究，我们也探索新的受体功能选择性药物研究开发，获得了一些候选化合物。
作者：李子健 刊期： 2015年第10期
目的：应用TBL为中心的多元教学方法，以提高学生自主学习、团队协作能力，促进高质量、高素质的创新型医学人才的培养。方法：病理生理学理论性强、难教、难懂，学生学习起来比较吃力，这要求教师采用灵活的教学方法、科学先进的教学手段激发学生对病理生理学的学习热情；以2013级口腔和麻醉专业学生为研究对象，口腔专业采用常规多媒体教学；麻醉专业采用TBL为主导有机结合多媒体教学、案例教学法的多元教学法，首先学生通过课前自学提出问题，在课堂上教师引用典型性、相关性和实用性病例通过案例教学法解决学生的问题，将抽象的内容感性化，理论与临床相结合，激发学生学习兴趣，培养学生临床思维能力与综合运用知识的能力。通过形成性评价进行综合分析评价。结果：多元教学的麻醉专业的考试成绩均优于常规多媒体教学的口腔专业，经t检验差异有显著意义（P＜0．01）；两组的问卷调查结果经χ2检验，多元教学优于常规多媒体教学。结论：以TBL为中心的多元教学优于常规多媒体教学；同时培养了学生独立思考、提出问题、分析问题、解决问题的能力，提高了教学质量。
作者：王顺蓉；张春梅；陈蓉；唐华；邹平；黄珀 刊期： 2015年第10期
目的和方法：本课题着重研究高污染北京地区冬季是否增加患慢性阻塞性肺病（ COPD）患者对PM2．5暴露引起肺泡慢性炎症反应的易感性及其机制。同时通过大流量采样器连续收集北京地区冬季PM2．5的组分进行组分分析，分析表明有机物苯并芘（ BaP）是其重要的组分之一。因此进一步通过离体培养人Ⅱ型肺上皮细胞系A549细胞的实验观察BaP是否直接引起A549细胞慢性炎症或放大由内毒素（ LPS；低剂量，1μmol／L）引起的慢性炎症及其机制。结果：20例COPD患者呼出气冷凝液的亚硝酸盐水平、血清炎性趋化因子白细胞介素8（ IL－8）水平均升高，与这些病人前3～4天暴露于室外PM2．5浓度水平升高呈正相关。而培养的A549细胞实验表明，给予BaP（1、2、4和8μmol／L，24 h）呈剂量依赖方式直接刺激诱导型一氧化氮合酶（ iNOS）蛋白表达明显增加。结论：PM2．5暴露可能通过其有机成分BaP直接引起人Ⅱ型肺上皮细胞慢性炎症，其分子机制还需进一步研究。
作者：邵丹青；杜毅鹏；冯娟；黄薇；王宪 刊期： 2015年第10期
目的：RNF41是一种E3泛素连接酶，具有泛素连接酶活性，在心脏的发育过程和功能形成过程中起到关键作用。本研究旨在探讨RNF41基因多态性与中国蒙族先天性心脏病发病易感性之间的关系。方法：采用PCR结合直接测序法检测119例先天性心脏病患儿（病例组）和108例非先心病患儿（对照组）的RNF41基因位点rs116861857的基因型频率和等位基因频率。结果：病例组RNF41位点rs116861857TT和TA基因型频率分别为80．67％和19．33％，而对照组TT和TA基因型频率分别为94．44％和5．56％，两组间有显著差异（P＜0．05）。病例组患者的等位基因频率（T，90．34％；A，9．66％）与对照组（T，97．22％；A，2．78％；χ2＝4．031， P＜0．05）相比也存在显著差异（ P＜0．05）。结论：RNF41基因SNP rs116861857位点多态性与中国蒙族先天性心脏病易感性相关。
作者：张圆；韩丽莎；胡海；张坤；王艳国；刘佳；牛长存 刊期： 2015年第10期
机体局部或全身失控性炎症反应是急性肺损伤（ acute lung injury， ALI）的重要病理生理特征。脂氧素（ lipoxin， LX）是机体重要的促炎症缓解物质。气道上皮细胞是组成气道屏障和气道环境刺激首先受累的细胞，外界刺激和肺组织内异常的活性氧引起气道上皮损伤在ALI中扮演重要角色。本研究发现，LX稳定气道上皮细胞钙黏蛋白（ E－cadherin）的表达保护其完整性，改善气道通透性，有效缓解脂多糖（ lipopolysaccharide， LPS）吸入引起的小鼠ALI。低温成像结果表明LX逆转LPS吸入引起的小鼠肺组织线粒体氧化还原状态失衡，并抑制LPS引起人气道上皮细胞16HBE中活性氧的产生。采用荧光共振能量转移技术监测16HBE细胞中调节抗氧化基因的重要转录因子Nrf2和其胞浆负性调节伴侣分子Keap1的解离，证实LX通过促进Nrf2蛋白ser40位点的磷酸化使其解离活化发挥其保护效应。转入显性负性突变的质粒pDN－Nrf2后，LX对16HBE钙黏蛋白表达的稳定作用几乎消失。综上所述，我们认为LX通过Nrf2调节气道上皮细胞E－cadherin的表达而保护LPS引起的ALI。
作者：程雪；苗烁；吴萍 刊期： 2015年第10期
目的：研究一氧化氮介导的巯基亚硝基化（S－nitrosylation）对磷酸二酯酶5（PDE5）蛋白稳定性的影响，阐明衰竭心脏中PDE5表达增加的分子机制。方法：采用质谱分析和点突变的手段，检测PDE5发生S－nitrosylation的位点。采用Western blot的方法检测一氧化氮和过氧化氢对细胞PDE5表达的变化。结果：在细胞和动物模型中均可以检测到PDE5发生S－nitrosyla－tion，这种修饰发生在第220位的半胱氨酸残基上。发生S－nitrosylation修饰后，PDE5的活力降低20％左右，并很快被泛素－蛋白酶体系降解，引起细胞内PDE5的表达上调。突变第220位半胱氨酸残基、过氧化氢预处理以及抑制sGC和PKG活力均可以抑制一氧化氮引起的PDE5表达下调。突变PDE5的磷酸化位点也有类似效果。反过来，在心肌细胞中抑制一氧化氮合酶（ NOS）活力或敲除NOS3均可以提高PDE5的表达。结论：S－nitrosylation能够引起PDE5的降解，而衰竭心脏中一氧化氮生物利用率的降低可能是导致PDE5表达增加的主要原因。
作者：王月；张萍；徐知遇；陈英杰；陆忠兵 刊期： 2015年第10期
目的：观察灯盏细辛注射液对大鼠急性缺血心肌的保护作用。方法：将30只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组和灯盏细辛组，每组各10只。每组大鼠提前给药1周，灯盏细辛组剂量为50 mg? kg－1? d－1，正常组与模型组每天以相应量的生理盐水。后采用腹腔注射异丙肾上腺素（ ISO）造模，注射剂量2 mg? kg－1? d－1，连续注射2 d。造模后取血和心肌组织，检测超氧化物歧化酶（ SOD）和丙二醛（ MDA）的量。结果：模型组大鼠血清和心肌组织中SOD活性显著低于正常对照组（ P＜0．01），MDA的含量高于正常对照组（P＜0．05）。灯盏细辛组大鼠血清和心肌组织中SOD活性高于模型组（P＜0．05），MDA的含量显著低于模型组（ P＜0．01）。结论：灯盏细辛能提高急性心肌缺血大鼠SOD的活性，降低MDA的含量，表明灯盏细辛对急性缺血心肌有保护作用。
作者：苏娟；秦燕 刊期： 2015年第10期
目的：小檗碱（ berberine， BBR）是一种异喹啉类生物碱，是中药黄连有效成分之一。研究发现BBR调节血脂代谢、降低糖尿病心血管功能异常，其机制与激活AMPK有关。氧位β－N－乙酰葡萄糖胺（ O－linkedβ－N－acetylglucosamine， O－GlcNAc）修饰是一种重要的翻译后蛋白修饰，调控多种信号途径的蛋白磷酸化。 BBR对糖尿病心血管系统的保护作用是否与O－GlcNAc修饰有关尚不清楚。本研究探讨BBR是否减少高糖诱导的人脐静脉内皮细胞（ HUVECs） O－GlcNAc修饰及其机制。方法：正常糖（ NG，5 mmol／L）与高糖（ HG，25 mmol／L）培养HUVECs给予BBR。结果：BBR呈时间、剂量依赖性减少HG诱导的HUVECs蛋白O－GlcNAc修饰。 BBR（50μmol／L）上调HG诱导HUVECs的OGA而非OGT的mRNA及蛋白表达。使用OGA抑制剂PUGNAc（100μmol／L）可逆转BBR对O－GlcNAc修饰的降低，进一步使用AMPK抑制剂Compound C （CC；100μmol／L），BBR对O－GlcNAc修饰的降低明显逆转。分别使用DHE、MitoSOX和JC－1、Rhodamine 123检测ROS和线粒体膜电位（ mitochondrial membrane potential，MMP）。 BBR显著降低HG诱导的HUVECs线粒体来源ROS（P＜0．01），升高MMP （P＜0．01）。使用CC和PUGNAc，BBR作用被逆转。结论：上述结果提示BBR通过激活AMPK减少O－GlcNAc修饰，从而降低高糖诱导的HUVECs氧化应激，调节线粒体功能。
作者：杨红燕；秦兴华；杨兴斌；董玲 刊期： 2015年第10期
目的：探讨激活毒蕈碱乙酰胆碱受体（ mAChR ）能否经调控紧密连接而促进下颌下腺的分泌。方法：跨上皮细胞电阻（ TER）和旁细胞通透性实验评价紧密连接的功能；Western blot和免疫荧光检测紧密连接的表达和分布；转染claudin－4 shRNA或cDNA观察claudin－4对紧密连接功能的影响。免疫共沉淀检测相关信号通路。结果：mAChR激动剂卡巴胆碱可降低下颌下腺细胞TER值，并增加旁细胞途径通透性。卡巴胆碱可下调claudin－4的表达和分布，但不影响其它紧密连接分子。敲低claudin－4可使卡巴胆碱降低TER值的作用消失；而在过表达claudin－4细胞中，卡巴胆碱仍能降低TER值和claudin－4表达。卡巴胆碱可经细胞外信号调节激酶1／2（ERK1／2）促进claudin－4丝氨酸磷酸化。磷酸化的claudin－4可与β－arrestin2结合，招募clathrin引起claudin－4发生内化，并进一步在胞浆中被泛素化降解。结论：激活mAChR通过ERK1／2／β－arrestin2／clathrin／泛素化途径下调claudin－4的表达，进而增加旁细胞途径的通透性。
作者：丛馨；张艳；吴立玲；俞光岩 刊期： 2015年第10期
目的：研究生物钟基因Clock对干细胞分化成熟过程的影响和机制。方法：我们将携带有Oct4、Sox2、c－Myc和Klf4的TetO－FUW－OSKM慢病毒转染入小鼠胚胎成纤维细胞（ MEF）中，利用PCR、免疫荧光法、碱性磷酸酶染色和拟胚体形成实验鉴定细胞的多能性。通过RNAi技术抑制Clock基因表达，观察Clock基因对iPSCs分化的影响。结果：小鼠MEF在转染后12 d形成典型的小鼠ESC样克隆。 RT－PCR显示iPSCs表达多能性基因Nanog、Sox2、Oct4、Dax1、Esg1、ERas、Zfp296和Klf4；细胞碱性磷酸酶染色阳性；细胞免疫荧光检测结果显示有Oct4和SSEA1的表达；培养可见拟胚体的形成。因此，我们成功将小鼠MEF重编程为iPSCs。细胞非定向分化实验发现，转染48 h后，对照组克隆边缘不光滑，有伪足伸出，提示iPSCs存在分化；Clock－siRNA组的iPSCs克隆仍保持边缘光滑，极少有伪足伸出，RT－PCR提示多能性基因Sox2、Oct4和Klf4表达较对照组升高。结论：生物钟基因Clock可能参与了iPSCs的分化过程。
作者：赵冉；杨羊；徐晨；李二敏；陆超；孙宁；钱睿哲 刊期： 2015年第10期
作者： 刊期： 2015年第10期
目的：观察AS－1是否可通过调控肝组织慢性炎症和IR改善NASH，并阐明其调控机制。方法：在体实验，db／db小鼠MCD饮食4周复制NASH模型；体外实验，给予枯否细胞FFA与LPS共刺激，原代肝细胞IL－1β刺激。结果：与MCS对照饮食组相比，AS－1可明显降低MCD饮食组小鼠血浆中ALT水平，减少肝组织炎症细胞的浸润，抑制IRS1的丝氨酸磷酸化以及糖异生基因的mRNA水平增加。 AS－1可降低NADPH氧化酶mRNA水平和MDA含量。体外细胞实验发现，AS－1不仅可抑制FFA与LPS共刺激诱导枯否细胞pro－caspase－1裂解、caspase－1酶活化及IL－1β分泌。而且能够改善IL－1β诱导的肝细胞IR，抑制IL－1R与MyD88的结合及ERK／JNK／p38的磷酸化。结论：AS－1能够通过抑制肝组织炎症和改善IR，从而对NASH肝脏发挥保护作用，其机制与AS－1抑制IL－1R对MyD88的招募并影响MAPKs信号通路的激活，调控NADPH 氧化酶，抑制NALP3炎性小体活化以及IL－1β的分泌和功能的发挥有关。
作者：王晓露；高云；李建涛；宋娟；阙琳俐；李跃华 刊期： 2015年第10期
中国病理生理杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中国病理生理学会
