学术投稿

外源性单磷酸鸟苷环二聚体防龋的实验研究

闫文娟;杨德鸿;吴补领

关键词:单磷酸鸟苷环二聚体, SD大鼠, 防龋, 动物实验
摘要:目的 初步探讨外源性单磷酸鸟苷环二聚体(c-di-GMP)对大鼠口腔内龋齿的防龋效果.方法 SPF大鼠感染致龋菌后,随机分成3组,分别用外源性c-di-GMP、氟化钠水溶液,质量体积比为0.9%氯化钠给大鼠施药,用唾液取样细菌培养、龋齿记分观察外源性c-di-GMP在动物口内对致龋菌的生长繁殖以及对龋病发生,发展的影响 结果 通过唾液取样进行变形链球菌培养计数,c-di-GMP组与刚性对照组相比,无显著性差别(P>0.05);Keyes龋齿记分结果显示,c-di-GMP组龋损程度及数量都均少于对照组(P<0.05),从龋病发展程度看,c-di-GMP组为缓慢,仅存在釉质和牙本质浅层龋损.结论 外源性c-di-GMP 可以有效抑制大鼠龋齿的发生和发展,有单成为一种新型防龋药物.
南方医科大学学报杂志相关文献
  • 一种改进的自适应谱聚类图像分割算法

    目的 提出一种改进的内适应谱聚类图像分割算法,该算法能自动选择出优尺度参数从而提高谱聚类算法分割的准确率.方法 利用约束条件优化相关准则函数,对相似度量函数自动学习迭代并得到优尺度参数,再运用基于 Nystr(o)m估计的谱聚类算法得到后的图像分割结果.选择对不同性质的纹理图像采用适合的相似度量函数并应用本文的算法进行图像分割,后与k-均值算法和预分割后再使用人工调整到优参数的谱聚类算法的分割结果进行了比较.结果 这种改进的自动选择优尺度参数的谱聚类算法在分割效果上较其它两种聚类算法能得到更好的分割结果.结论 本文提出的改进方法,能使谱聚类算法的图像分割效果更理想.

    作者:陈姿羽;黄靖;李伟鹏 刊期: 2012年第05期

  • 丙戊酸钠对人肺癌SPC-A1细胞的增殖抑制作用及其机制

    目的 探讨丙戊酸钠对人肺癌SPC-A1细胞的增殖抑制作用及其机制.方法 采用MTT法及克降形成抑制实验观察丙戊酸钠对肺癌SPC-A1细胞的增殖抑制作用,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞早期凋亡水平,Wcstern blotting检测细胞抗凋亡蛋白Bcl-xl,Bcl-2,Mcl-1及Caspase-9,Caspase-3表达的改变.结果 不同浓度的丙戊酸钠作用于肺癌SPC-A1细胞48h,均能显著抑制细胞增殖,SPC-A1细胞的IC50为1.8 mmol/L;丙戊酸钠能显著抑制SPC-A1细胞克隆形成,且导致显著的细胞凋亡,8 mmol/L的丙戊酸钠作用细胞48 h,细胞早期凋亡率达60.44%,细胞抗凋亡蛋白Bcl-xl,Bcl-2,Mcl-1表达减少,Caspasc-9,Caspase-3蛋白酶切活化.结论 丙戊酸钠通过诱导细胞凋亡,显著抑制肺癌SPC-A1细胞的增殖.

    作者:黄志宏;陈庆;马刘红;陈志明;陈文朴;覃莉;蒋建伟 刊期: 2012年第05期

  • 肾移植受者术前主要组织相容性复合物Ⅰ类链相关基因A抗体对移植后早期急性排斥反应的影响

    目的 探讨肾移植受者术前主要组织相容性复合物Ⅰ类链相关基因A(MICA)抗体对肾移植术后早期急性排斥反应和移植肾功能恢复的影响.方法 检测2009年~2010年本院197例未使用免疫抑制剂的肾移植受者术前MICA抗体及其特异性,随访其后接受尸体肾移植手术的139例受者的术后早期急性斥反应(AR)和移植肾功能 结果 197例肾移植受者术前MICA抗体阳性45例(22.84%).MICA抗体特异性分析发现有11种抗体,其中出现频率高的是抗MICA019(占65.7%),出现频率低的是抗MICA015(占8.6%)和抗MICA017(占 8.6%),高、低频率抗体间的差异具有显著性(x2=24.48,P<0.01).45 例阳阳性受者中单一特异性抗体18例(占 51.4%),多种特异性抗体17例(占48.6%).197例受者中139例在术后有39例发生早期AR(占28.1%);其中,45例术前MICA抗体阳性受者中38例接受移植后有14例发生早期AR(占36.8%);152例术前MICA抗体阴性受者中有101例接受移植后有25例发生了早期AR(占24.8%).结论 中国人群中常见的MICA抗体中为抗MICA019,推测MICA019为中国人群中较常见基因是其表现出临床上高频率抗体的原因.

    作者:于立新;张新科;罗敏;肖露露;徐健;杜传福;刘如敏 刊期: 2012年第05期

  • 15例假性甲状旁腺功能减退症的临床分析

    目的 分析假性甲状旁腺功能减退症(PHP)的临床特点、诊断及治疗.方法 回顾性分析解放军总医院1990年1月~2011年7月入院的15例PHP患者(男/女:9/6)的临床资料 结果 15例患者诊时病程长短不一(3 d~21年),均有手足抽搐、乏力等症状,并多有癫痫发作病史.实验室检查常提示低血钙,高血磷、甲状旁腺激素升高等.9例头颅CT提示多发颅内钙化灶,4例合并甲状腺功能异常.本病需终生补充钙及维生素D制剂以防止急性发作和病情进展 结论 PHP为罕见遗传病,首诊误诊率高,对反复手足抽搐,药物控制不良的癫痫样发作及儿童先天性发育缺陷的患者应尽早行血钙、血磷、血甲状旁腺激素及头颅CT等检查 长期治疗包括钙剂和维生素D或其衍生物,患者若同时合并甲状腺功能异常或性腺功能减退,应予以相应治疗.

    作者:曲玲;张婷婷;母义明 刊期: 2012年第05期

  • 腹膜外途径机器人辅助腹腔镜根治性前列腺切除术:附20例报告

    目的 探讨腹膜外途径机器人辅助腹腔镜根治性前列腺切除术的初步经验.方法 前列腺腺癌患者20例,平均年龄65.6(50~75)岁.患者全部是在B超引导下经直肠前列腺穿刺活检病理证实为前列腺癌Gleason评分≤6分7例,7分10例,8分2例,9分1例.影像学检查未见淋巴结及远处转移.病例均采用机器人辅助腹腔镜腹膜外顺行根治性前列腺切除术治疗.结果 本组病例均顺利完成,未因任何原因更改术式.4例病例术后4周PSA>0.2 ng/ml,提示术后肿瘤残留,先行雄激素上除治疗,择期再行外放射治疗.16例随访时间平均15.5( 10~37)月.20例中机器人安装时间]平均48.5( 40~60) min,手术平均时间180( 150~230) min,患者术中平均失血量298(80~800) ml,术后恢复进食时间平均1.7(1~3)d,留胃尿管时间平均10.7(7~14)d,住院时间平均10.7(7~14)d.无手术并发症发生.术后病理Gleason评分≤6分6例,7分5例,≥8分9例.结论 机器人辅助腹腔镜根治性前列腺研除术使腹腔镜易于被术者掌握,尤其在盆腔复杂手术方面的优点十分突出.

    作者:王威;高江平;徐阿祥;朱捷;陈文政;卢锦山;张旭 刊期: 2012年第05期

  • 弓形束导航技术的准确性与可靠性评价

    目的 评价弓形束导航技术临床应用的准确性与可靠性.方法 43例语言区病变,分别于手术前后重建弓形束并评价语言功能.术前记录病变至弓形束的短距离D1与术前失语指数AQ1,术后记录残腔至弓形束的短距离D2与术后失语指数AQ2,分析D1与AQ1以及D2与AQ2的相关关系.术后随访时,评价患者语言功能.结果 43例患者的弓形束均得到重建,不同操作者重建的同一患者的弓形束重复性良好.D1与AQ1(P<0.001),D2与AQ2(P=0.001)均呈正的直线相关关系.术后随访,仅2例(4.7%)存在语言功能障碍.结论 弓形束导航技术能够准确、可靠地重建和定位弓形束纤维,有助于保护语言功能.

    作者:张家墅;陈晓雷;赵岩;李昉晔;郑刚;李晋江;张挺;胡深;许百男 刊期: 2012年第05期

  • 姜黄素对肿瘤坏死因子-α诱导的大鼠平滑肌细胞Syndecan-4蛋白及磷酸化p44/42丝裂原活化蛋白激酶表达的影响

    目的 观察姜黄素对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的离体大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)Syndecan-4蛋白及p44/42丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)表达的影响.方法 分别用20 ng/ml TNF-α、20 μmol/L姜黄素、20 ng/ml TNF-α联合20μmol/L姜黄素作用于体外培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞24 h,MTS/PMS法检测VSMCs的增殖状态,Westem blot蛋白免疫印迹法分别测定VSMCs中Syndecan-4蛋白及磷酸化p44/42MAPK的表达,结果 (1)统计分析表明,与对照组比较,TNF-α能显著刺激大鼠VSMCs的增殖(P<0.01),单独应用姜黄素对大鼠VSMCs增殖无显著作用(P>0.05).与TNF-α组比较,姜黄素能显著抑制TNF-α所诱导的大鼠VSMCs的增殖(P<0.01);(2)统计分析表明,与对照组比较,TNF-α组能显著刺激大鼠VSMCs中Syndecan-4蛋白及磷酸化p44/42MAPK的表达(P<0.01),TNF-α的这一作用能被姜黄素所抑制(P<0.01),单独应用姜黄素对大鼠VSMCs中Syndecan-4蛋白及磷酸化p44/42MAPK的表达无显著作用(P>0.05).结论一定剂量的姜黄素可显著抑制TNF-α诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖和Syndecan-4蛋白及磷酸化p44/42MAPK的表达.

    作者:罗烨;欧阳平;赖文岩;许顶立 刊期: 2012年第05期

  • 腹腔镜与同期开腹直肠癌切除术后长期肿瘤学结果的对比研究

    目的 比较腹腔镜及同期开腹直肠癌切除术术后的长期肿瘤学结果.方法 回顾性分析南方医院自2003年1月~2008年12月收治的514例病人的临床随访资料,对186例腹腔镜组和328例开腹组病人术后复发类型及长期生存结果进行了比较.结果 两组病人的中位随访时间为(48.54±28.76)月,两组间远处转移(3.9%vs 5.5%;P=0.284)、5年累积总生存率(69.5%vs 61.7%;P=0.085)和5年无病生存率(67.7%vs 60.7%;P=0.110)的差异无统计学意义.Ⅳ期病例中腹腔镜组5年累计总生存率和5年无进展生存率均高于开腹组(P<0.05).结论 腹腔镜直肠癌切除术可以获得不劣于开腹手术的长期肿瘤学结果.

    作者:钟秉政;刘峰;余江;梁耀泽;赵丽瑛;牟廷裕;胡彦锋;李国新 刊期: 2012年第05期

  • 血清miR-103可作为乳腺癌潜在的诊断标记物

    目的 探究血清miR-103在乳腺浸润性癌患者中表达的诊断价值及其与乳腺癌临床病理特征的关系.方法 搜集50例首治的乳腺癌患者的血清及相应的石蜡包埋组织和50例正常女性的血清作为对照,从血清中提取总RNA,运用荧光定量PCR的技术检测miR-103在乳腺癌和正常人血清中的表达情况 运用SPSS16.0软件行检验.ANOVA、x2检验、秩相检验及MedCalc 软件进行受试者工作特征曲线(ROC)分析 结果 与对照组相比,miR-103在乳腺癌患者血清中表达量显著上调(P<0.01),血清中 miR-103 上调的相对表达量与乳腺癌临术分期(P<0.05)、淋巴结转移(P<0.05)相关.miR-103所得ROC曲线下面积为84.3%,区别乳腺癌和正常人的敏感性和特异性分别为84%、70%.结论 血清miR-103可作为乳腺癌一项潜在的诊断标记物,并对乳腺癌的临床病理特征具有提示作用.

    作者:王小拍;吴兴平;颜黎栩;邵建永 刊期: 2012年第05期

  • 人甘油激酶慢病毒干涉载体的构建和表达

    目的 构建人甘油激酶( GK)基因 RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,获得稳定下凋GK表达的慢病毒.方法 将具有干涉效果的siRNA序列克隆入慢病毒核心质粒pSicoR中,并转染293T细胞进行病毒包装,用慢病毒感染293T细胞并应用FACS测定病毒滴度.以GK 干涉慢病毒感染人肝细胞系L02细胞后,应用Western blotting方法检测GK的表达 结果 成功构建GK干涉慢病毒pSicoR-GK载体并获得慢病毒颗粒,病毒滴度检测可达3×10 pfu/ml,GK蛋白质表达水平下调至对照的约20%.结论 成功构建人GK基因RNAi慢病毒,为后续GK生物学功能研究奠定基础.

    作者:刘悦;郝玉娥;詹轶群;许望翔;杨永升;葛常辉 刊期: 2012年第05期

  • 1,25-二羟维生素D3对胃癌细胞增殖和TNF-α表达的影响

    目的 研究1,25-二羟维生素D5[1,25(OH)2D3]对胃癌SGC-7901细胞增殖和细胞周期的影响,以及对细胞因子TNF-αmRNA及蛋白表达的影响.方法 用不同浓度1,25(OH)2D3处理胃癌SGC-7901细胞,采用MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞生长周期;RT-PCR和 Western blotting分别检测TNF-α在mRNA和蛋白水平的表达情况 结果 1,25(OH)2D,对胃癌SGC-7901细胞增殖有抑制作用(P<0.05),并呈时间剂量依赖性.经1,25(OH)2D,处理72 h后细胞周期出现向 G0/G1期移行的动力学改变(F=9.81,P<0.05).TNF-α mRNA及蛋白的表达水平均呈剂量依赖性减少(P<0.05).结论 1,25(OH)2D3可抑制胃癌细胞增殖,且与其抑制TNF-α的表达可能有相关性.

    作者:张莉;王璐璐;吴小翎 刊期: 2012年第05期

  • 载多烯紫杉醇脂质微泡增强人胰腺癌BxPC3细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用

    目的 制备载多烯紫杉醇脂质超声微泡、并研究其联合超声靶向微泡破裂技术(UTMD)对人胰腺癌BxPC3细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用.方法 采用机械振荡法制备载多烯紫杉醇的脂质超声微泡,检测其粒径、zeta电位,载药量、包封率等性质,MTT法检测IC50,CCK-8法检测细胞毒性作用,流式细胞术检测细胞周期,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,TUNEL法检测细胞凋亡情况,并与单纯多烯紫杉醇药物组、多烯紫杉醇药物+超声组等进行比较 结果 载多烯紫杉醇超声微泡平均粒径1.6 μm,微泡的包封率为64.2%,平均裁药量为16.1%;载多烯紫杉醇脂质微泡组的细胞毒性作用强于其他各组(P<0.01),细胞凋亡率高于其他各组( P<0.01);载多烯紫杉醇脂质微泡组G2/M期细胞增多,与其他组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 载多烯紫杉醇脂质微泡联合UTMD能够增加G2/M期细胞阻滞,增强对BxPC3细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用;载多烯紫杉醇脂质微泡有望成为一种治疗胰腺癌的新型药物载体.

    作者:杨健;康娟;曾妍;李奥;吴小翎;王志刚 刊期: 2012年第05期

  • 局部应用瘦素对大鼠烫伤创面愈合的实验研究

    目的 建立Wister大鼠的深Ⅱ°烫伤创面模型,外用瘦索来观察和研究瘦素在Waster大鼠烫伤创面愈合中的作用和意义,探讨瘦素在创伤修复过程中的作用及其机制 方法 选用清洁级Wistar大鼠18只,建立深Ⅱ度烫伤模型,将创面分为实验组(创面涂400 ng/ml的瘦素溶液,用PBS释稀)和对照组(外涂PBS).观察创面愈合时间;在烫伤后第3,7,11,15,19天5个时相点测量创面的上皮化率;于伤后第7,14 和21天用手术刀切取各组的伤口及周边皮肤,做HE及免疫组化染色(PCNA),以观察创面的愈合时间和组织形态以及角质形成细胞在烫伤创面愈合过程增殖和迁移情况.结果 实验组创面愈合时间快于对照组2~3 d左右,实验组愈合天数与对照组相比,差异具有显著性(P<0.05).在伤后7、14和21d创缘组织HE和PCNA染色见实验组创周表皮反应性性增生快,表皮层明显厚于对照组,实验组创面上皮化过程短于对照组 实验组PCNA表达与对照组在7 d和14 d,时有明显差异(P<0.05),在21d时没有显著差别(P>0.05).结论 局部外用瘦素能提高深Ⅱ烫伤创面的愈合率,加快创面愈合时间,瘦素能加快深Ⅱ烫伤创面的愈合.

    作者:文辉才;巫国辉;陈雯;杨红华;付建华 刊期: 2012年第05期

  • 大鼠急性脑缺血后CD4+CD25+调节性T细胞、Foxp3表达及其意义

    目的 动态观察大鼠急性脑缺血后不同时期外周血中CD4+ CD25调节性T细胞和脑组织中Foxp3的表达,探讨其在急性缺血性卒中病理生理演变过程中的作用.方法 48只 Wistar大鼠按随机数字表法分为缺血组和假手术组.参考改良的Zea-Longer插线方法将缺血组大鼠制作成右侧大脑中动脉线栓脑缺血动物模型.采用流式细胞术和免疫组化染色检测造模后1、3、7、14 d时大鼠外周血中 CD4+ CD25+调节性T细胞表达和脑组织中Foxp3表达,同时采用改良NSS神经功能评分观察大鼠行为学变化.结果 缺血组和假手术组大鼠神经功能缺损评分在模型制备后逐渐下降(P<0.01).流式细胞术显示脑缺血后1、3d时缺血组大鼠外周血中CD4+ CD25+凋节性T细胞的表达与假手术组比较差异无统计学意义(P>0.05),7,14d时表达明显高于假手术组(P<0.05),且与大鼠的神经功能评分呈负相关( r=-0.68,P=0.01).免疫组化显示脑缺血后1 d时缺血组大鼠脑组织中即可观察到Foxp3表达,且主要集中在缺血灶区域,在未缺血侧也可观察到Foxp3表达,但表达量较少,而假手术组脑组织中未见Foxp3表达.结论 CD4+ CD25+调节性T细胞参与了大鼠急性脑缺血后炎症免疫反应的发生发展过程,且在脑缺血后1d时便开始参与脑缺血性损伤的免疫调节,这种免疫调节对脑细胞有着保护作用.

    作者:陈瑞清;谭盛;陈健;郭阳;李粲;陈镇洲 刊期: 2012年第05期

  • OCT4在膀胱癌中的表达及其临床意义

    目的 检测干细胞标记物OCT4在膀胱癌中的表达,并探讨其与临床病理因素及肿瘤转移的相关性.方法 采用Western blotting 、qRT-PCR检测OCT4在5种膀胱癌细胞株及人膀胱上皮永生化细胞株SV-HUC-1中的表达情况;同时收集46例患者膀胱癌根治手术切除的膀胱癌组织标本,应用免疫组织化学方法检测OCT4蛋白的表达.结果 OCT4在人类膀胱癌细胞株RT-4、Tcc-Sup、KK47、T24、5637中均有表达,而在人膀胱永生化细胞株中无表达.OCT4在膀胱癌组织中的表达率为76.1%,在正常膀胱组织中无表达.其异性染色定位于肿瘤细胞核内;膀胱癌组织 OCT4蛋白阳性表达率显著高于正常组织(P<0.05);膀胱癌组织中的OCT4蛋白的表达与肿瘤病理分级呈正相关(P<0.05),与膀胱癌的浸润深度无相关性(P>0.05);与肿癌转移呈正相关(P<0.05 );与年龄、性别、TNM分期无明显相关性.OCT4阳性膀胱癌患者及阴性患者的3年总生存率分别为42.2%和76.7%,无转移生存率分别为35.4%和59.2%,结果均有统计学意义.结论 膀胱癌组织中OCT4蛋白的表达与肿瘤分化程度及转移相关,对膀胱癌的早期诊断和预后分析有显著意义.

    作者:赵朋朋;刘春晓;许凯;郑少波;李虎林;徐亚文;徐啊白;李炳坤;黄鹏 刊期: 2012年第05期

  • 低频超声促进哺乳期大鼠泌乳的实验研究

    目的 探讨低频超声用于促进哺乳期泌乳的可行性、方法 24只SD哺乳大鼠,每只母鼠1窝带仔10只.随机分为3组,每组8窝,分别为对照组(假辅照)、5 min组(超声辐照5min/乳腺·d)和10 min组(超声辐照10 min/-不腺·d).从分娩第2天起,使用低频超声(频率40 kHz,强度0.26 w/cm2)以母鼠乳腺予以辐照,连续7d.检测母鼠泌乳量、仔鼠体增重、乳腺器官指数.血清催乳素(PRL)以及乳腺组织学检查 结果 10min组泌乳量、仔鼠体增重、乳腺器官指数及PRL浓度均显著大于对照组和5 min组(P<0.05);光镜下10 min 组乳腺腺泡明显增多,腺腔扩张,5min组无明显变化.结论 一定剂量低频超声辐照能够促进PRL分泌和乳腺发育,提高大鼠的泌乳性能,有望成为一种促进哺乳期乳汁分泌的理疗新方法.

    作者:汪琴;乔海;白晋 刊期: 2012年第05期

  • 结核性胸膜炎患者异烟肼胸腔积液浓度测定及胸膜透过性

    目的 采用高效液相色谱法(HPLC)测量结核性胸膜炎患者胸腔积液和血浆中异烟肼浓度,并评价异烟肼从血液经胸膜的透过性、方法 收集15名结核性胸膜炎患者第1天晨服300 mg异烟肼后2h的胸腔积液,并采集笫3天服药后2h的血样和胸腔积液,建立HPLC方法进行样品检测,并计算异烟肼的胸膜透过率.结果 第1天异烟肼在胸腔积液中的平均浓度是(1.156±1.190) μg/ml;第3天异烟肼在胸腔积液中的平均浓度是(1.920±1.294) μg/ml,在血浆中的平均浓度是(2.445±1.463) μg/ml;异烟肼从血浆进入胸腔积液的平均透过率是86.0% 结论 大多数初治患者异烟肼的胸腔积液透过性较高,连续口服异烟肼可以达到有效治疗浓度,对于非耐药结核性胸膜炎不需要胸腔内单独注射异烟肼.

    作者:刘媛;张庆;张军峰;黄国华;朱顺芳;刘思佳;李国锋 刊期: 2012年第05期

  • 晚期肺腺癌患者外周血T淋巴细胞亚群检测的临床意义

    目的 检测55例晚期肺腺癌初治患者治疗前外周血T淋巴细胞亚群的表达,并探讨其与培美曲塞联合顺铂方案化疗疗效间关系.方法 采用流式细胞术检测经病理组织学或细胞学检查确诊的55例晚期肺腺癌初治患者治疗前外周血单个核细胞(PBMC)中总T细胞(CD3+)、Th细胞(CD3+CD4+)、Tc细胞(CD3+CD8+)、CD4+/CD8+、记忆T细胞(CD45RO+)、原始T细胞(CD45RA)的比例.结果 化疗无效组患者外周血原始T细胞高于有效组(P=0.04);化疗有效组患者外周血记忆T细胞较高,但差异尚不具统计学意义(P=0.25);两组总T细胞、Th细胞、Tc细胞及CD4+/CD8+无显著性差异.结论 晚期肺腺癌患者外周血原始T细胞与化疗疗效相关,原始T细胞较高者近期疗效差.检测患者外周血原始T细胞对预测患者化疗疗效有一定的预测作用.

    作者:赵晓;燕翔;孙胜杰;吴志勇;焦顺昌 刊期: 2012年第05期

  • 巢式PCR联合焦磷酸测序法在乙型肝炎病毒耐药基因检测中的敏感性与特异性分析

    目的 评价巢式PCR联合焦磷酸测序法在乙型肝炎病毒(HBV)耐药基因检测中的敏感与特异性.方法 选取rtM204I(ATT)突变型和rtM204(ATG)未突变型质粒,按照不同比例混合后,采用巢式PCR联合焦磷酸测序法对突变位点进行检测,并与常规PCR焦磷酸测序法进行比较,对两种方法的线性及一致性进行分析;选取不同病毒载量临床标本,采用巢式PCR焦磷酸测序法检测耐药突变位点,并与巢式PCR Sanger测序法进行比较,对两种方法的敏感性及特异性进行分析.结果 常规PCR焦磷酸测序和巢式PCR焦磷酸测序结果拟合曲线R2>0.99,P<0.05,线性模型有显著性意义.分别将常规PCR焦磷酸测序和巢式PCR焦磷酸测序结果与预测值的差值进行分析,巢式PCR能够较常规PCR更好的反映实际值,在90%比例处优于常规PCR.临床75例患者标本巢式PCR Sanger测序与巢式PCR联合焦磷酸测序结果灵敏性比较提示,Sanger测序的灵敏性为92%,巢式PCR联合焦磷酸测序的灵敏性达到100%,差异有统计学意义(P<0.01).对于不同病毒拷贝数标本的灵敏性不同,其差异主要表现在低浓度组(HBV DNA≤3log10 copies/ml),Sanger测序的灵敏性为78%,而焦磷酸测序的灵敏性可以达到100%,差异有统计学意义(P<0.01).阴性对照,两种方法均末检出 HBV病毒,两种方法的特异性均较好.结论 巢式PCR联合焦磷酸测序的方法监测乙肝病毒变异同巢式PCR联合sanger测序相比,有更好的灵敏性,尤其是在低病毒拷贝数时,差异明显,这对于临床提早发现耐药突变株,指导临床及时更换用药有重要意义.

    作者:孙树梅;周浩;周彬;胡子有;侯金林;孙剑 刊期: 2012年第05期

  • 西尼罗河病毒preM/EⅢ融合蛋白特异性单克隆抗体的制备以及应用分析

    目的 制备针对西尼罗河病毒preM/EⅢ融合蛋白特异性单克隆抗体,并分析其在临床检测中的应用价值.方法 采用原核表达系统表达西尼罗河病毒preM/E融合蛋白,作为抗原、免疫BALB/c小鼠,按常规单克隆抗体技术将免疫后小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,采用有限稀释法筛选能稳定分泌抗preM/EⅢ单抗的杂交瘤细胞株.接种杂交瘤细胞于小鼠腹腔,抽取腹水纯化单克降抗体.采用间接ELISA和Western blotting对抗体特异性和效价进行分析,并对临床样本进行检测.结果 获得了 1株能稳定分泌preM/E Ⅲ蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为ME1.纯化后抗体效价为10-6、其亚类为IgG1、ME1单抗能与西尼罗病毒preM/EⅢ蛋白以及西尼罗病毒发生特异性反应,而与日本脑炎病毒(JEV)、圣路易斯脑炎病毒(SLEV)、黄热病毒(YFV)和登革热病毒(DENV)无交义反应.临床诊断准确率为97.78%.结论 ME1单克降机体具有较高的特异性,临床诊断准确性较高,具有临床应用价值.

    作者:李林海;陈丽丹;廖杨;陈建芸;石玉玲 刊期: 2012年第05期

南方医科大学学报杂志

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