学术投稿

人胚嗅粘膜嗅鞘细胞的分离、培养和纯化

历强;贺西京;石建峰;王斌;朱振中;臧全金;樊沛

关键词:嗅鞘细胞, 鼻粘膜, 细胞培养, 纯化
摘要:目的 采用经我们改良的差速贴壁法结合神经营养因子3(NT3)和低浓度血清的培养方法对人胚嗅粘膜嗅鞘细胞进行分离和原代纯化培养,探讨建立嗅粘膜嗅鞘细胞体外培养的方法.方法 对差速贴壁后的人胚嗅粘膜嗅鞘细胞交替应用含10%胎牛血清和含2.5%胎牛血清、NT3的DMEM-F12培养基进行原代培养.观察嗅粘膜嗅鞘细胞的形态学变化.采用p75NTR和GFAP免疫细胞化学染色进行鉴定和纯度检测.结果 人胚嗅粘膜嗅鞘细胞形态多呈双极、三极,伴有细长的突起.p75NTR和GFAP染色均呈阳性反应,体外培养9 d时纯度可达83%.结论 差速贴壁法结合低浓度血清和NT3应用可以分离培养出人胚嗅粘膜嗅鞘细胞.
南方医科大学学报杂志相关文献
  • 小鼠肝脏细胞质膜蛋白质组的提取和二维液相色谱分离

    目的 提取小鼠肝脏细胞质膜蛋白并建立一种利用二维液相色谱法分离细胞质膜蛋白质组的方法.方法 采用差速离心结合蔗糖密度梯度离心分离和富集分小鼠肝脏细胞质膜蛋白,样品经脱盐及用起始缓冲液置换后,进行一维色谱聚焦分离,然后收集pH 8.5~4.0之间的组分进行二维反相高效液相色谱分离,后将获得的二维UV图通过ProteoVue软件转换成UV/pI图谱.结果 成功提取了肝脏细胞质膜蛋白,并通过二维液相色谱成功建立了小鼠肝脏细胞质膜蛋白的二维UV/pI图谱,收集了一维色谱聚焦分离的pH 8.5~4.0区间的16个组分,并将每个组分分进行二维色谱分离后转换为UV/pI图谱.结论 为进一步全面研究小鼠肝脏细胞质膜蛋白功能和疾病差异蛋白质组研究打下了基础.

    作者:李红梅;陈丽;夏高晓;赵明哲;胡水旺;姜勇 刊期: 2008年第11期

  • 爱维治预防希罗达引起的黏膜损伤和手足综合征的临床观察

    目的 观察爱维治(小牛血去蛋白提取物)预防希罗达引起的黏膜损伤和手足综合征的疗效.方法 41例恶性肿瘤患者随机分成治疗组和对照组.治疗组口服希罗达全疗程静脉滴注爱维治;对照组只给予希罗达治疗.结果 两组患者均发生不同程度的口腔黏膜损伤,治疗组发生率47.6%,Ⅰ度38.1%,Ⅱ度9.5%,Ⅲ度O.O%;对照组发生率50.O%,Ⅰ度25.O%,Ⅱ度20.0%,Ⅲ度5.0%;两组发生率比较无统计学差异(P>0.01);两组各分度之间比较,统计学有显著性差异(P<0.01).两组患者均发生不同程度的手足综合征,治疗组发生率57.1%,Ⅰ度42.9%,Ⅱ度14.2%,Ⅲ度0.0%;对照组发生率70.O%.Ⅰ度25.0%,Ⅱ度35.O%,Ⅲ度10.0%,两组发生率和各分度之间比较,统计学有显著性差异(P

    作者:江素华;黄慧;曾渡航 刊期: 2008年第11期

  • 阳离子脂质体Lipofectamine2000对人胰腺癌Capan-2细胞的毒性作用

    目的 探讨阳离子脂质体Lipofectamine2000(Lipo)在一定浓度下对细胞毒性的作用机制.方法 应用一定毒性浓度的Lipo作用于胰腺癌Capan-2细胞,利用细胞直接记数法和流式细胞术检测其对Capan-2细胞生长、细胞凋亡和周期的影响.结果 Lipo与siRNA的浓度均影响转染率的高低.在2 ml转染体积中,Lipo在5μl的浓度下,使Capan-2细胞生长明显减慢,以第3天后更加明显(P<0.001).随着转染细胞按常规培养的时间延长,早期凋亡细胞明显增多(P<0.05),活性细胞明显减少(P<0.01),而损伤细胞和死亡细胞明显增多(P<0.001),以48 h后更明显:G0~G1期细胞明显增多(P<0.05),Gz-M期细胞明显减少(P

    作者:钟英强;魏菁;傅玉如;邵静;梁倚文;林燕华;刘娟;朱兆华 刊期: 2008年第11期

  • HPLC-MS/MS法测定人血浆中依地普仑浓度

    目的 建立测定人血浆中依地普仑浓度的HPLC-MS/MS检测法.方法 以右美沙芬为内标,血浆样品用乙醚进行提取,在Agilent ZORBAX SB-C18柱(3.5μm,2.1 mmx150 mm),以乙腈(0.1%L酸胺-0.4%乙酸)缓冲溶液(70:30,v/v)为流动相,流速为O.3ml/min,在三级四极杆串联质谱中经ESI源离子化后,以多反应离子监测方式测定依地普仑的浓度.结果 依地普仑血药浓度在0.0866~64.13μg/L范围内线性良好(γ=0.9965),样品绝对回收率为64.98%~78.72%,批内和批间精密度RSD均<10%.结论 该方法灵敏、准确、快速,专属性强,可适用于依地普仑人体药代动力学特征的研究.

    作者:郑恒;杨凌;汤文艳 刊期: 2008年第11期

  • 汶川伤员应激障碍症状观察

    目的 分析地震后创伤后应激障碍(PTSD)的临床特征.方法 对从震区转入我院的26例伤员及其家属进行一般状况、应激症状的调查.结果 患者都出现不同程度的PTSD症状,其中睡眠障碍、不由自主回想地震经历、烦躁焦虑、难以集中注意力为主要临床特征.结论 汶川伤员有不同程度的PTSD症状和体征,发现问题应积极给以危机干预处理,可以避免PTSD的发生和加重.

    作者:许红璐;黄小萍;陈仙;张明;余娜;王若婧 刊期: 2008年第11期

  • AT2参与调控肥大心肌细胞炎症因子的合成和分泌

    目的 观察血管紧张素Ⅱ二型受体(AT2)对压力超负荷性肥大心肌细胞炎症因子合成和分泌的影响.方法 采用腹主动脉缩窄法构建成年SD大鼠压力超负荷性心肌肥大模型,选用缩窄术后8周的肥大心肌细胞,经Ang Ⅱ及losartan或PDl23319处理36 h后.放免法检测培养上清液中IL-1β、TNF-α及IL-6的表达水平.结果 随着浓度增大,AngⅡ可以诱导肥大心肌细胞TNF-α和IL-1β分泌.PDl23319,而不是losartan,预处理可使TNF-α和IL-1β表达下调.实验中未能检测出培养液中IL-6含量.结论 AngⅡ诱导压力超负荷性肥大心肌细胞炎症因子TNF-a和IL-1β的合成与释放主要受AT2的调控.

    作者:周娟;徐心;刘进军;林元喜;高广道 刊期: 2008年第11期

  • 脑膜癌病4例临床分析

    目的 探讨脑膜癌病的临床、MRI和脑脊液细胞学特点。 方法 对4例脑膜癌病患者的临床表现、MRI、脑脊液细胞学改变等进行分析。结果 头痛等颅高压表现出现于所有患者;MRI见到脑室扩大和不同程度脑膜强化;脑脊液检查发现细胞数高、蛋白增高,糖和氯化物降低,脑脊液细胞学检查发现癌细胞。 结论 脑膜癌病容易误诊为感染性脑膜炎,脑脊液细胞学检查对本病具有诊断意义。

    作者:鲍健;胡学强;江滢 刊期: 2008年第11期

  • 干扰素诱导的跨膜蛋白-1对诊断结直肠癌的临床价值

    目的 探讨干扰素诱异的跨膜蛋白-1(IFITM1)基因在肿瘤组织中的表达,血清抗IFITM1的抗体反应以及对临床诊断结直肠癌的意义.方法 应用半定量RT-PCR方法检测IFITMl基因mRNA在正常大肠粘膜、结直肠癌组织、大肠炎性息肉、腺瘤性息肉、胃癌、食管癌和肝癌组织中的表达.采用Western印迹法检测患者血清抗IFITM1的抗体反应.分析有IFITM1基因表达癌肿的病理特点.结果 结直肠癌组织中IFITM1基因mRNA表达率为47.4%(18/38),显著高于大肠腺瘤性息肉的15%(3/20)和胃癌组织的4.8%(1/21)(P<0.05),而正常大肠粘膜、大肠炎性息肉、食管癌和肝癌组织均无表达.结直肠癌组织IFITM1基因mRNA呈强表达,其表达水平(0.8048+0.2273)显著高于大肠腺瘤性息肉(0.4447±0.0989)(P<0.001).结直肠癌血清相应的抗体反应率为36.8%(14/38),明高于胃癌的9.5%(2/21)(P<0.05),而在食管癌、肝癌、大肠炎性息肉和大肠腺瘤性息肉以及健康人血清则末检测出相应的抗体反应.有IFITM1基因表达的结直肠癌多数直径大于5 cm,侵及浆膜,有淋巴结和远处转移,多属Dukes C期和D期,以高分化腺癌为主.结论 IFITM1基因可能在结直肠癌的发生、发展和转移过程中起重要作用,有望成为临床诊断结直肠癌的一个良好标志物.

    作者:刘宇虎;柳娟;郭健;游志坚;王在国;钟东;杨兴龙;张振书;肖冰;郭文英 刊期: 2008年第11期

  • 丙泊酚在治疗局麻药引起惊厥中的应用

    目的 探讨丙泊酚控制急性局麻药毒性反应引起惊厥的效果.方法 将16例出现严重的局麻药毒性反应引起惊厥发作的病例随机分为A,B两组,每组8例.A组病例在出现局麻药毒性反应引起惊厥时给予咪达唑仑(0.1 mg/kg),B组病例在出现局麻药毒性反应引起惊厥时给予丙泊酚(1 mg/kg),观察两组给药治疗后的情况.结果 A、B两组惊厥症状均得到有效控制,两组给药后起效时间无显著性差异(P>0.05),B组病例苏醒时间较A组短(p<0.01).两组治疗后未出现明显的毒副作用,有短暂的顺行性遗忘作用.结论 静脉注射丙泊酚可有效控制急性局麻药毒性反应引起惊厥的发作.

    作者:黄毅然;郭凌燕;陈睿;吴会红;娄镇;曹标;古宜沐;邓丽珍;李文红 刊期: 2008年第11期

  • PLC-γ1信号通路在H2O2诱导的PC12细胞凋亡中的作用

    目的 探讨磷酸脂酶C-γ1(PLC-γ1)信号通路对H2O2诱导的PC12细胞凋亡作用的影响.方法 利用PLC-γ1特异性抑制剂U73122(10 pμmol/L)预处理PC12细胞,阻断50 μmol/LH2O2诱导的PLC-γ1信号通路,Hoechst/P1双染观察细胞形态改变,MTT评估细胞活力,流式细胞仪分析凋亡和坏死细胞比例,DNA电泳验证细胞凋亡状态的改变.结果 H2O2对PC12细胞活力的影响呈时效和量效关系.PLC-γ1信号通路阻断后,PC12细胞出现了凋亡形态学改变,细胞活力明显降低.流式细胞仪检测出现典型的凋亡亚二倍体峰,凋亡细胞所占比例达35.7%,DNA电泳呈现明显的梯形条带.结论 PLC-γ1信号通路在50 μmol/L H2O2诱导的PC12细胞凋亡中发挥重要的保护作用.

    作者:袁文丽;陆地;孙俊;陈光学;陈辉;王廷华;罗深秋 刊期: 2008年第11期

  • 孕酮对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤的保护作用

    目的 探讨孕酬对SD大鼠实验性高眼压视网膜缺血一再灌注损伤后的保护作用及机制,并评估其在视网膜缺血性疾病中的应用价值,为临床应用提供实验依据.方法 采用跟内灌注法,前房灌注生理盐水制成视网膜缺血-再灌注模型.32只SD大鼠随机分为对照组、正常组、二甲基亚砜溶剂对照组、孕酮治疗组.孕酬治疗组于缺血前30 min与再灌注2 h后接4 mg/kg腹腔内注射孕酮溶液;二甲基亚砜溶剂对照组于缺血前30 min和缺血后2 h分别腹腔注射相当体积的二甲基亚砜.各组分别于再灌注6h后空气栓塞法处死动物.用硫代巴比妥法测定丙二醛(MDA)含量,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性,并观察视网膜组织形态学与超微结构的改变.结果 (1)再灌注6h后.对照组视网膜MDA含量较阴性对照组显著增高(P

    作者:卢娜;李超;程远;杜爱林 刊期: 2008年第11期

  • 造影增强超声对孤立性甲状腺结节的诊断价值

    目的 利用造影增强超声评价孤立性甲状腺结节的强化特征,探讨造影增强超声检查甲状腺结节的可行性.方法 对49例孤立性甲状腺结节患者行造影增强超声检查,利用造影增强超声后处理软件定量测量注射造影剂后甲状腺结节内部感兴趣区(ROI)和病灶外正常甲状腺实质RoI的回声强度.比较注射造影剂后不同时间良恶性结节及病灶外正常甲状腺实质ROI的回声强度值,采用SNK检验进行统计学分析.结果 注射造影剂后25 s和60 s良性结节回声强度均高于恶性结节和正常甲状腺实质(P<0.05).结论 造影增强超声检查定性诊断甲状腺结节是可行的,良性结节的强化幅度显著高于恶性结节.

    作者:刘波泉 刊期: 2008年第11期

  • 止泻退热片治疗轮状病毒感染性腹泻的实验研究

    目的 评价止泻退热片治疗轮状病毒感染性腹泻的药理作用.方法 建立人轮状病毒A组G3型709株感染昆明小鼠乳鼠的动物模型,比较药物治疗前后乳鼠的腹泻率、腹泻程度,以及药物治疗后粪便中病毒感染率等指标.结果 止泻退热片能够减少乳鼠的腹泻率、腹泻程度、粪便染毒阳性率.结论 止泻退热片能够治疗轮状病毒感染性腹泻.是具有潜力的抗轮状病毒感染性中成药.

    作者:杨蒙蒙;罗佳波;陈文 刊期: 2008年第11期

  • 抗-MICA抗体在ESRD患者中的表达及其临床意义

    目的 探讨主要组织相容性复合物1类相关链A(MICA)抗体在终末期肾脏疾病(ESRD)患者中的表达.方法 采用液相芯片分析技术和带有11种MICA抗原的荧光微球,对11O例ESRD患者进行抗-MICA抗体的检测和抗-MICA抗体的特异性分析.结果 在30例PRA阳性患者中抗-MICA抗体(+)的几率为40%(12/30),在80例PRA阴性患者中抗-MICA抗体(+)的几率为17.5%(14/80).PRA阳性组患者与PRA阴性组患者抗-MICA抗体(+)几率之间呈显著性差异(x2=6.120,P=0.013).调查发现,26例MICA抗体(+)血清中表达出11种MICA抗原中的10种抗-MICA抗体特异性,其中,26.92%(7/26)为单特异性抗体,73.08%(19/26)为多特异性抗体.在随后的临床研究中还观察到,3例抗-MICA抗体(+)的患者接受尸体肾移植,术后随访2月,没有发生急性排斥并且移植肾功能良好.结论 在PRA阳性患者中抗-MICA抗体(+)的几率亦高,说明抗.MICA抗体(+)的几率与PRA阳性的几率有明显的伴随关联.抗-MICA抗体表现为多特异性,抗-MICA抗体可能包含有IgM和IgG两种免疫球蛋白类型.研究提示,对于这部分ESRD患者未来接受移植替代治疗时,本研究数据将可以作为前瞻性数据提供临床进一步研究MICA与肾移植的关联和影响.

    作者:肖露露;罗敏;于立新;朱伟 刊期: 2008年第11期

  • 骨肉瘤荷瘤裸鼠模型两种不同制作方法的比较

    目的 比较腋下移植与原位移植两种骨肉瘤荷瘤裸鼠模型制作方法在成瘤率、成瘤时间、瘤体生长变化,特别是肺部转移情况的差别.方法 将骨肉瘤细胞分别接种到裸鼠左侧腋下及裸鼠股骨髓腔.6周后处死裸鼠,肉眼及光镜下观察两组肿瘤的肺部转移情况,比较两组肿瘤肺部转移率及转移灶的不同特点.结果 与原位接种方式相比,腋下接种方式操作简单、成瘤快,肿瘤组织表面容易较早发生摩擦破损(P<0.05),肿瘤内部也较早发生缺血坏死现象(P<0.05).在相同接种时间下,腋下接种组裸鼠肺部肿瘤转移率低(P

    作者:管明强;史占军;李鹏;杨澜波 刊期: 2008年第11期

  • IgH不同区域基因重排引物的分析及在石蜡淋巴瘤诊断中的应用

    目的 通过生物信息学方法分析并优化免疫球蛋白重链(IgH)不同框架(FR)区域基因重排的引物,探索其对石蜡包埋的淋巴瘤组织基因重排检测中的应用.方法 通过Clustal W 软件比较44条有效的lgH可变区和6条J区的基因片段,选取3对(IgH FR1、FR2、FR3区各一对,分别为P1c,P2A,P31)IgH基因重排引物作为B细胞基因重排引物.另选一对TCRγ引物作为T细胞基因重排引物.通过PCR扩增,检测经形态学及免疫组织化学确诊的101例(80例B细胞淋巴瘤、14例T细胞淋巴瘤和7例淋巴结反应性增生组织)石蜡包埋组织标本的基因重排状况.以DG75、Jurkat淋巴瘤细胞系DNA作为B和T细胞淋巴瘤基因重排的阳性对照,以反应性增生组织DNA作为阴性对照.结果 IgHFR1、FR2和FR3区域引物对80例B细胞淋巴瘤的阳性检出率分别为37.5%(30/80)、52.5%(42/80)和70.0%(56/80),在14例T细胞淋巴瘤中均为7.1%,三者的检出率两两之间差异有显著性;IgH FR3区和lgH FR2区引物的组合可将其检出率提高到83.9%.以上引物在7例反应性淋巴结中均未检出阳性.结论 IgH不同区域引物比较.FR3区引物检出率明显高于FR1区和FR2区.FR3区和FR2区引物联合检测可明显提高石蜡组织中B细胞淋巴瘤基因重排的检出率.

    作者:齐宗利;张宝;韩西群;朱梅刚;赵彤 刊期: 2008年第11期

  • 白藜芦醇合酶基因的克隆与植物表达载体的构建

    目的 为获得含有白藜芦醇(Res)的转基因植物,进行了白藜芦醇合酶(RS)基因的克隆、植物表达载体构建的研究.方法 以葡萄为材料,从其叶片中提取基因组DNA,并以此DNA为模板,利用PCR法扩增得到RS基因,将此基因连接到克隆载体PGEM-T Vector,得到重组载体pT-RS;经酶切及测序鉴定后,将RS基因克隆到植物表达载体pB1121,得到重组载体pBI-RS,用PCR及酶切方法进行鉴定.结果 重组质粒pT-RS的测序结果表明,RS基因的片段大小为1.522 kb.将此片段正向插入植物表达载体pB1121的CaMV35s启动子和NOS终止子之间,对重组子进行PCR及酶切鉴定,均得到预期大小的片断,证明RS DNA与质粒pB1121已成功连接,植物表达载体pBI-RS构建正确.结论 成功扩增得到RS基因及成功构植物表达载体pBI-RS,为RS转基因生菜的研究奠定了基础.

    作者:朱春燕;雷建军;周浩;吴敏;陈清;陈燕珍;杨素华;俞守义 刊期: 2008年第11期

  • 恶性肿瘤非细胞转移假说的动物实验

    目的 验证肿瘤的转移除了肿瘤细胞转移外还存在非细胞转移机制,即分子水平的物质引起转移.方法 (1)制备雄性小鼠特异性SRY基因引物,并应用PCR技术检测Lewis肺癌细胞中的SRY基因;(2)构建Lewis肺癌细胞与同系的雌性C57BL/6小鼠自发性转移模型.以PCR基因作为原发灶肿瘤细胞分子标记物,分别以雄性小鼠和雌性小鼠组织作为阳性和阴性对照,联合应用PCR和ISH技术分别检测Lewis肺癌小鼠肺、肝脏肉眼可见转移灶和微转移灶.结果 接种后雌性C57BL/6小鼠转移灶检测到SRY基因,证明转移灶肿瘤细胞均来源于原发灶.结论 实验证明了肿瘤转移灶系细胞水平的转移,未能证明非细胞转移机制,但鉴于该实验的局限性,仍有必要通过其他的研究方法进一步研究.

    作者:熊刚;王武军 刊期: 2008年第11期

  • 真菌性败血症的死亡危险因素及预后分析

    目的 分析真菌性败血症的发病情况、临床特点、易患因素,并在此基础上探讨本病的死亡危险因素,利用有统计意义的因素建立数学模型,以期对真菌性败血症的预后进行预测,利于指导临床治疗.方法 对我院近17年确诊的91例真菌性败血症患者临床资料进行回顾性分析,并将其分为治愈和(或)显效组、死亡组,先后以单因素及Logistic多元回归考察死亡危险因素,进一步建立Fisher判别方程对本病死亡率进行预测.结果 真菌性败血症易患因素多、病死率高,91例中治愈和(或)显效60例,死亡31例.单因素分析显示患者高龄(≥60岁)、合并细菌感染、感染性休克、多器官功能衰竭(MODS)、属ICU患者、使用糖皮质激素、外科术后、化疗、增强免疫药物、抗真菌治疗前的住院时间、抗真菌疗程、侵入性操作种类这12项指标在两组问差异有统计意义.Logistic回归显示侵入性操作的种类、MODS、外科手术后、抗真菌治疗前的住院时间这4项指标在两组间差异有统计意义.同时建立了Fisher预测方程.结论 侵入性操作的种类、MODS、外科手术后、抗真菌治疗前的住院时间可能是真菌性败血症患者死亡的独立危险因素,可根据相应的Fisher判别方程进行预测.

    作者:于钟;姜骏;廖日房;曾转萍;蒋龙元 刊期: 2008年第11期

  • 89SrCl2联合云克治疗前列腺癌骨转移疗效分析

    目的 探讨89SrCl2联合云克治疗对前列腺癌骨转移的治疗效果及毒副作用.方法 69例前列腺癌骨转移伴骨痛患者,89SrCl2静脉一次性给药,剂量按2.22~2.96MBq/kg计算,用量148~185MBq.89SrCl2治疗后7d给予云克治疗,按2.6MBq/kg标准注射云克.(1)随访治疗前后患者的疼痛程度及疼痛发作频率,各赋予量化值并获疼痛评分.治疗前后疼痛程度和疼痛频率的比较采用等级资料的秩和检验,疼痛评分的比较采用t检验.(2)根据治疗前后骨显像显示的病灶大小或数目的 变化,对病灶疗效进行分级.(3)检测前列腺特异抗原(PSA),其治疗前后变化采用t检验.(4)治疗前后白细胞和血小板的变化采用t检验.结果 (1)治疗后6个月内,疼痛程度缓解的患者占71.O%(49/69).其中消失率为23.2%(16/69),疼痛程度明显减轻(P<0.05).32例疼痛发作次数减少,减少率81.1%(56/69).其中15例疼痛不再发作,发作频率明显降低(p<0.01).治疗前患者疼痛评分7.4±3.6,治疗后5.2±3.1,降低明显(P<0.001).(2)治疗后病灶消退8例,缩小或变浅16例,总有效率为34.8%;病灶无变化14例,增大21例,出现新病灶10例.(3)治疗前PSA平均(85.6±20.4)ng/ml,治疗后3个月平均为(46.9±12.8)ng/ml,下降显著(P<0.01).(4)白细胞及血小板在注射后1周开始降低,治疗后1个月降至低,自细胞降低幅度约27.6%,血小板降低18.3%,3个月时血象正常率为89.8%(62/69).结论 89SrCl2联合云克治疗前列腺癌骨转移止痛效果好,毒副作用轻微,可提高患者生活质量.

    作者:李德胜;范义湘;高梅菊;吴继珍;刘青竹;李科斌 刊期: 2008年第11期

南方医科大学学报杂志

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主管:广东省教育厅

主办:南方医科大学