学术投稿

抗凝组分Acoagulatin的纯化鉴定及其抗凝特性

李婷;朱正光;余传林;吴曙光

关键词:蛇毒, 纯化, 凝血时间, 凝血酶原时间, 部分凝血活酶时间
摘要:目的从蝮蛇毒中分离纯化一种组分acoagulatin并进行鉴定,观察其抗凝作用.方法经DEAE-Sepharose FastFlow和CM-sepharose Fast Flow离子交换柱层析,从蝮蛇毒中分离、纯化得到acoagulatin,分别采用Biosep-sec-s 2000型HPLC分子筛柱层析、还原性SDS-PAGE(5%浓缩胶,12%分离胶)电泳进行纯度和相对分子质量测定,将不同浓度acoagulatin与抗凝兔血混合,测定凝血时间(TT)、凝血酶原时间(PT)、部分凝血活酶时间(APTT).结果Acoagulatin的相对分子质量为31400,由两个亚基组成,相对分子质量分别为14 400和17000,能显著地延长PT和APTT,对TT没有影响.结论采用DEAE-Sepharose Fast Flow和CM-sepharose Fast Flow两种离子交换柱层析分离蛇毒,能分离出纯度高的组分acoagulatin,该组分具有抗凝活性.
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  • 两种微生物学等级老龄Wistar大鼠血清生化值比较

    目的探讨普通级、SPF级老龄Wistar大鼠血清生化值的差异.方法用Coulter-JT全自动生化检测仪检测血清生化值.结果在老年SPF级Wistar大鼠的雌性与雄性之间,谷丙酶、总蛋白、碱性磷酸酶、总胆固醇、甘油三酯、尿素氮、肌酐、铁、磷、血糖、尿酸、低密度脂蛋白差异非常显著(P<0.01),白蛋白、乳酸脱氢酶、载脂蛋白B差异显著(P<0.05).老年SPF级雄性Wistar大鼠与老年普通级雄性Wistar大鼠间的总蛋白、白蛋白、白球比、总胆固醇、甘油三酯、血糖、载脂蛋白A1、载脂蛋白B、尿酸、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、谷草酶差异非常显著(P<0.01),谷丙酶、铁、镁差异显著(P<0.05).老年SPF级雌性Wistar大鼠与普通级雌性Wistar大鼠间的谷丙酶、总蛋白、白蛋白、白球比、碱性磷酸酶、甘油三酯、尿素氮、肌酐、铁、载脂蛋白A1、载脂蛋白B、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、胆汁酸差异非常显著(P<0.01),镁含量差异显著(P<0.05).结论微生物学等级因素对Wistar大鼠的血清生化值有影响.

    作者:肖育华;詹纯列;李建军;武婕;李新春;郑文岭 刊期: 2004年第07期

  • 超分割放射治疗结合化疗治疗Ⅲ期非小细胞肺癌70例临床分析

    目的评价超分割放射治疗结合化疗治疗不能手术的Ⅲ期非小细胞肺癌(NSCLC)的疗效.方法将70例不能手术的Ⅲ期NSCLC患者随机均分为治疗组和对照组,治疗组采用超分割放射治疗,对照组采用常规放疗,评价并比较两组疗效.结果治疗组和对照组的总有效率分别为60.0%和40.0%(P=0.031,有显著性差异),完全缓解率分别为8.6%和5.7.治疗组和对照组的中位生存期和1、2年生存率分别为12.8个月vs 9.4个月、48.6%vs 34.3%、25.7%vs17.1%,无显著性差异.主要的毒副作用是骨髓抑制、放射性食管炎.结论超分割放射治疗结合同期化疗提高了不能手术的Ⅲ期NSCLC的近期有效率,但未能改善生存率.

    作者:周同冲;郑剑霄 刊期: 2004年第07期

  • 房角后退性青光眼1例报告

    1临床资料患者男,23岁,因左眼被拳击伤后视物不清并眼痛入院.入院检查:全身无其他处损伤,视力右1.0、左0.1,左眼结膜混合性充血,角膜清,色素性KP(+),前房积血2 mm,虹膜纹理尚清,瞳孔固定,直径5mm.入院后按前房积血治疗,2d后积血吸收,视力1.0,眼压21.40mmHg(1 mmHg=0.133 kPa).出院.1月后因左眼痛伴同侧头痛再次入院,检查:视力右1.0、左0.08,左眼睫状充血,前房深,房水闪光(+),瞳孔直径5 mm,眼压50.62mmHg,给予甘露醇、醋氮酰胺、地塞米松等治疗,2 d后眼压34.52mmHg.房角检查:全周房角均为宽角,虹膜根部后陷,睫状体带增宽,色素沉积于小梁网,诊断为房角后退性青光眼.使用减少房水生成的药物降低眼压,入院后第8天眼压26.56mmHg,双眼视力均为1.0,行左眼小梁切除术,第12天痊愈出院.随访6个月,眼压保持稳定,无复发.

    作者:张庆华;黄发明 刊期: 2004年第07期

  • 膀胱原发性粘液腺癌1例报告

    原发于膀胱的粘液腺癌在临床十分少见,现将我科诊治的1例报告如下.

    作者:张鹏;郑少斌;刘成山;张辉见 刊期: 2004年第07期

  • 脑功能成像时磁共振仪器稳定性的一种简单评价方法

    目的发展一种评价脑功能成像时磁共振机器稳定性的简单方法.方法用与脑功能成像相同的快速平面回波成像(EPI)序列和参数对均匀水模作一次扫描,由一个时间序列上的图像表现来评价仪器的稳定性.结果得到了128张水模的EPI图像以及水模的均匀部分在每张图相同部位感兴趣区(ROI)处的信号水平的均值、标准差、极差的质量控制图.结论ROI的质量控制图能用于磁共振机器稳定性的评价.

    作者:冯锡钢;温志波;黄凡衡;林意群 刊期: 2004年第07期

  • 应用70 mer Oligo基因芯片从限制性cDNA片段中钓取目的基因

    目的探讨采用单一探针寡核苷酸阵列从经限制性显示方法制备的cDNA片段中钓取目的基因片段的方法.方法酵母经常规培养,抽提mRNA逆转录成cDNA后,经限制性显示技术制备成限制性cDNA片段,根据目的基因SSA1设计70mer特异性oligo片段并打印成为寡核苷酸阵列.采用荧光标记的通用引物对上述经限制性显示技术获得的限制性cDNA片段进行标记,与oligo阵列杂交,洗脱,扫描.然后进行杂交后剥除,收集剥除液,采用限制性通用引物扩增,产物克隆于PUC18 T载体中,并转化至JM109大肠杆菌中培养,抽提质粒,进行测序鉴定.结果测序结果BLAST同源性比较表明,用该方法成功的克隆出了目的基因片段.结论采用70mer寡核苷酸芯片可以直接从限制性显示方法处理的cDNA片段中钓取目的基因,而无需构建cDNA文库.另外,本方法也可用于oligo芯片的杂交后对有表达差异的基因的获取及研究中.

    作者:石嵘;马文丽;刘翠华;宋艳斌;吴清华;郭秋野;郑文岭 刊期: 2004年第07期

  • 脊髓髓内室管膜瘤和星形细胞瘤的MRI诊断15例临床分析

    目的评估脊髓髓内室管膜瘤和星形细胞瘤的MRI表现.方法回顾分析经手术病理证实的15例室管膜瘤和10例星形细胞瘤的MRI表现.结果两者的平扫MRI表现类似,即疾病变节段脊髓增粗,T1WI呈低信号,边界欠清,T2WI呈高信号.16例患者肿瘤头尾侧可见囊变.6例室管膜瘤行增强T1WI,肿瘤实体部分都均匀强化.4例星形细胞瘤行增强T1WI,1例肿瘤实体部分均匀强化,1例欠均匀强化,2例无强化.结论MRI有助于两者的诊断及其鉴别诊断.

    作者:林日增;张雪林 刊期: 2004年第07期

  • XK469和阿霉素对H460细胞生长的影响及其机制

    目的探讨XK469和阿霉素对H460细胞的抑制作用及其机制.方法采用MTT比色法观察不同浓度XK469、XN472和阿霉素对H460细胞生长的影响,采用流式细胞术观察药物作用下细胞周期的变化,采用Westem blotting检测药物作用后H460细胞内cdc2和phos-cdc2的表达水平.结果不同浓度XK469、阿霉素可明显抑制H460细胞的生长,导致H460细胞发生G2/M期阻滞,胞内phos-cdc2表达明显增高.20μg/ml以上浓度XN472作用24 h可抑制H460细胞生长,但是到120 h时抑制作用消失.结论XK469和阿霉素通过使H460细胞内phos-cdc2水平增高导致其G2/M期阻滞从而抑制其增殖生长,7-氯结构对XK469的抗肿瘤效应有重要的意义.

    作者:凌朝辉;杜华;袁长青;马树东;郑莉;丁振华 刊期: 2004年第07期

  • 右室特发性室性心动过速的射频消融

    目的报道5例右室间隔特发性室性心动过速的电生理标测及射频消融治疗.方法用7FEPT温控大头电极导管进行消融,心动过速时在右室后间隔标侧到明显提前的P电位处为消融靶点,以温控50~55℃、功率30~35 W放电.3 s心动过速终止,巩固放电40 s,然后行常规心内电生理检查,不能诱发心动过速作为消融终点.术后口服Aspirin0.1g/d1个月.结果放电消融5 s内心动过速终止,巩固放电40 s,消融前后体表心电图无明显改变.术后心室S1S2程序刺激,静脉滴注异丙肾上腺素后,重复上述刺激,均不能诱发心动过速,射频消融成功.随访4~22个月,无心动过速发作,无并发症出现.结论(1)在右室后间隔也能形成类似于左室后间隔的特发性室性心动过速,在标测到明显提前的P电位处消融容易获得成功.(2)右室特发性室性心动过速在心动过速时也有典型的体表心电图特征.(3)此型室性心动过速应与束支折返性室性心动过速相鉴别.

    作者:钟志雄;李存仁;叶卓联;张鹏飞;刘添皇;杨平珍 刊期: 2004年第07期

  • C-反应蛋白抑制缺氧状态下人脐静脉内皮细胞表达低氧诱导因子-1α

    目的研究C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)对低氧诱导因子-1α(hypoxiainducible factor-1α,HIF-1α)表达的影响.方法利用CoCl2(浓度为100μmol/L)模拟缺氧环境,使其分别与4个试验组的CRP(浓度分别为5,10,50,100μg/ml)同时作用于脐静脉内皮细胞,以仅加CoCl2(100 μmol/L)组为对照;同时设空白对照组.刺激24 h后提取蛋白.用Westem-blotting半定量检测HIF-1α的蛋白表达量,数据用SPSS11.0软件进行统计分析.结果CRP在5μg/ml水平即减少HIF-1α表达(P<0.001),在100μg/ml水平达到大作用,其作用效果呈剂量反应关系(P<0.001).结论CRP抑制缺氧状态下人脐静脉内皮细胞表达HIF-1α.此结果证实CRP直接作用于血管,抑制缺氧组织血管新生.

    作者:宋云峰;吴平生;赖文岩 刊期: 2004年第07期

  • 高温高湿环境下猫颅脑火器伤的病理学改变

    目的研究高温高湿环境下猫颅脑火器伤后病理学变化特点.方法将杂种猫16只随机分为常温组、常温枪伤组、高温高湿组和高温高湿枪伤组,分别在光镜和电镜下观察其脑组织病理改变.结果常温枪伤组早期表现为血管舒缩功能障碍,血管痉挛及扩张并存;高温高湿组血管痉挛减少,出血性表现增多;高温高湿枪伤组脑组织切片及超薄切片观察发现神经细胞存活数量明显减少,细胞器水肿变性,毛细血管紧密连接增宽,毛细血管破裂出血,髓鞘变性松解等病理变化,较常温颅脑火器伤中明显加重.结论高温高湿环境对颅脑火器伤时的病理变化影响显著.

    作者:朱红胜;郭燕舞;徐如祥 刊期: 2004年第07期

  • 米非司酮联合氨甲喋呤治疗输卵管异位妊娠

    目的探讨米非司酮联合氨甲喋呤治疗输卵管异位妊娠的疗效.方法对早期确诊的102例输卵管异位妊娠患者,口服米非司酮75 mg,2次/d,共服3 d,另单次肌肉注射氨甲喋呤1 mg/kg·b.w.,24h后肌肉注射四氢叶酸钙0.1 mg/kg·b.w..对照组86例,单次肌肉注射氨甲喋呤1 mg/kg·b.w.,24h后肌肉注射四氢叶酸钙0.1 mg/kg·b.w..结果94例米非司酮治疗患者治愈率为92.20%.对照组治疗成功70例,治愈率81.4%,两组疗效差异显著(P<0.05).结论米非司酮联合氨甲喋呤保守治疗输卵管异位妊娠疗效确切,无明显副作用.

    作者:李卓华;全松 刊期: 2004年第07期

  • 闭合性腹部损伤246例临床分析

    目的探讨如何提高闭合性腹部损伤的早期确诊率和救治成功率.方法总结分析246例闭合性腹部损伤的诊断与救治经验.结果5年共救治闭合性腹部损伤246例,其中剖腹探查221例、保守治疗25例.治愈235例(95.53%)、死亡11例(4.47%).结论全面查体和迅速确诊是救治成功的关键,早期抗休克和及时手术治疗是非常重要的,剖腹探查的原则和顺序应得到严格遵循.

    作者:王汉良;桑显富 刊期: 2004年第07期

  • 吡柔比星联合化疗缓解成人高危急性白血病的疗效观察

    目的探讨吡柔比星(T)联合化疗缓解成人高危急性白血病的疗效.方法采用含T药物治疗方案联合化疗治疗高危急性白血病29例,其中急性非淋巴细胞白血病(ANLL)18例、急性淋巴细胞白血病(ALL)8例、混合型白血病3例,选择治疗前条件类同、应用常规化疗方案的配对病例作为对照.实验组给予T+A、V+T+P/V+T+L+P、T+A+V+P(A:阿糖胞苷、V:长春新碱、P:强的松、L:左旋门冬酰胺酶)等联合化疗,对照组给予常规联合化疗.结果实验组ANLL患者治疗有效率显著高于对照组(77.78%vs 44.44%,P=0.031).实验组的骨髓抑制重于对照组,化疗后白细胞平均低值、红细胞平均输注量和感染发生率在两组间均存在显著性差异(P分别为0.033、0.049和0.012).结论含吡柔比星的药物治疗联合化疗较常规药物联合化疗治疗ANLL有更好的效果,但骨髓抑制明显,感染的发生率高.

    作者:黄芬;孟凡义;徐兵;刘晓力;张钰;叶昌雄;张贤 刊期: 2004年第07期

  • 抗凝组分Acoagulatin的纯化鉴定及其抗凝特性

    目的从蝮蛇毒中分离纯化一种组分acoagulatin并进行鉴定,观察其抗凝作用.方法经DEAE-Sepharose FastFlow和CM-sepharose Fast Flow离子交换柱层析,从蝮蛇毒中分离、纯化得到acoagulatin,分别采用Biosep-sec-s 2000型HPLC分子筛柱层析、还原性SDS-PAGE(5%浓缩胶,12%分离胶)电泳进行纯度和相对分子质量测定,将不同浓度acoagulatin与抗凝兔血混合,测定凝血时间(TT)、凝血酶原时间(PT)、部分凝血活酶时间(APTT).结果Acoagulatin的相对分子质量为31400,由两个亚基组成,相对分子质量分别为14 400和17000,能显著地延长PT和APTT,对TT没有影响.结论采用DEAE-Sepharose Fast Flow和CM-sepharose Fast Flow两种离子交换柱层析分离蛇毒,能分离出纯度高的组分acoagulatin,该组分具有抗凝活性.

    作者:李婷;朱正光;余传林;吴曙光 刊期: 2004年第07期

  • 不同超滤膜对体外循环术后呼吸功能的影响

    目的探讨在体外循环术中使用两种不同的膜材料进行超滤对术后呼吸功能的保护效果.方法将30例体外循环心内直视手术患者随机均分成吸附组和对照组,吸附组使用AN69膜,对照组使用PS膜进行术中超滤.各组分别于体外循环前、体外循环结束后5、60、120、180、240 min,测定气道平台压(PPlatemu)、气道峰压(PPeak)、静态胸肺顺应性(Cst)、动态胸肺顺应性(Cdyn)和呼吸指数(RI)的变化.结果在体外循环结束后5~240 min期间,吸附组PPlatemu、PPeak和RI升高、Cst和Cdyn降低的程度显著低于对照组(P<0.05),持续时间短于对照组(P<0.05).两组均无死亡,无血红蛋白尿.结论AN69膜较PS膜超滤可更明显地减轻体外循环引起的肺损伤,改善呼吸功能.

    作者:吴华;张国华;王武军;侯凡凡;邹小明;刘亚湘;毛向辉 刊期: 2004年第07期

  • 葡萄糖神经酰胺合酶基因在多药耐药肿瘤细胞株KBV200的表达及其与肿瘤多药耐药性的关系

    目的观察葡萄糖神经酰胺合酶(glucosylceramide synthase,GCS)基因在人口腔表皮样癌多药耐药细胞株KBV200的表达及其与肿瘤多药耐药性(MDR)的关系.方法采用RT-PCR分析KBV200及其亲本KB细胞株GCS基因表达的差异,运用MTT法分析KBV200经糖脂合成酶抑制剂苯基棕榈酰胺吗啡丙醇(DL-PPMP)及钙离子通道阻滞剂异搏定处理前后细胞MDR的变化,应用RT-PCR技术检测KBV200细胞耐药逆转后GCS及mdr1基因的表达.结果KBV200细胞GCS和mdr1基因的表达明显强于KB细胞,而KB细胞mdr1基因表达为阴性.5~25μmol/L DL-PPMP均可抑制KBV200GCSmRNA表达,25μmol/L时抑制强度大;10μmol/L异搏定即可抑制KBV200GCS mRNA表达,15μmol/L时抑制作用明显.DL-PPMP和异搏定均可抑制mdr1基因的表达,KBV200经25 μmol/LDL-PPMP作用48 h后细胞内mdr1表达为阴性.结论异搏定和DL-PPMP对GCS和mdr1基因表达的抑制调节呈浓度依赖性,它们可通过抑制GCS和mdr1基因表达,逆转KBV200对长春新碱的耐药.KBV200GCS基因的表达与MDR存在正相关,GCS基因可能在肿瘤的多药耐药过程中起着重要作用.

    作者:杨泉;张健;汪森明;张积仁 刊期: 2004年第07期

  • 肝病变程度和维生素K1对慢性肾功能衰竭病人肝活检术后出血的影响

    目的探讨肝脏病变程度及维生素K1对慢性肾功能衰竭病人肝活检术后出血的影响.方法选择92例合并慢性乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒感染的肾移植术前血液透析患者接受肝穿刺活检,以半定量积分法评价肝组织炎症和纤维化程度,其中34例肝活检术前使用维生素K1 10 mg肌肉注射,2次/d,连续3 d.结果92例患者肝活检术后出血11例(12.0%).其中34例术前使用维生素K1者出血4例、58例未使用维生素Kl者出血7例,两者无显著差异(P>0.05);术后出血与肝脏病理分级、分期之间无差别(P>0.05).结论慢性肾功能衰竭患者肝穿刺后出血的发生率较高,穿刺前使用维生素K1并不能明显降低术后出血发生率,术后出血与肝脏病变程度无明显相关关系.

    作者:杨小兵;蒋建平;张训 刊期: 2004年第07期

  • 2型糖尿病患者血清超灵敏C反应蛋白水平的检测

    目的探讨2型糖尿病患者血清超灵敏C反应蛋白(bs-CRP)水平与机体胰岛素敏感性的关系.方法运用高灵敏酶联免疫吸附法检测68例2型糖尿病患者和20名健康对照者的血清hs-CRP水平,同时检测血糖、血清胰岛素、糖基化血红蛋白(HbA1c)、尿白蛋白排泌率和血脂,并计算稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR指数)和胰岛B细胞分泌指数(HOMA-IS)以分别反映机体的胰岛素敏感性和胰岛素分泌功能.结果2型糖尿病患者的血清hs-CRP水平显著高于对照(P<0.01),HOMA-IR指数和HOM-IS指数均低于正常对照(P<0.01).进一步将患者按HbA1c分为血糖控制良好组(n=42)和血糖控制欠佳组(n=23)后发现,控制欠佳组的血清hs-CRP水平显著高于控制良好组(P<0.05).线性相关分析显示,糖尿病患者的血清hs-CRP水平均与HbA1c、空腹血糖、体质量指数、舒张压和HOMA-IS指数呈显著正相关.结论2型糖尿病患者血清hs-CRP水平高于正常人,而且与糖尿病的发生、发展有密切的关系.

    作者:李晨钟;薛耀明;高方;汪敏 刊期: 2004年第07期

  • 去分化与细胞组织损伤再生

    去分化是发育生物学和形态学领域一个古老又常新的现象,既往研究多注重去分化和肿瘤发生的关系.我们的系列研究发现去分化和细胞组织损伤再生有着重要和必然的联系,在周围神经损伤再生中发现局部有大量施万细胞通过自噬机制吞噬消化自身髓鞘成分和衰老的细胞器,同时以胞质脱落的方式芽生出部分胞质脱落体,细胞内含大量游离核糖体和多聚核糖体等原始细胞器,保留极少量有活力的线粒体和高尔基体,呈现去分化后的幼稚化状态.在长春新碱诱导L02(肝细胞株)细胞损伤实验中发现L02细胞中有大量的自噬体,细胞周围也出现大量发芽脱落后游离于细胞外的胞质脱落体,细胞耐过之后呈现幼稚化,我们也称之为去分化.细胞经过去分化减轻代谢负担,清除衰老和受损的细胞器,恢复活力,接着大量增殖以修复重建损伤组织.在当前大部分科研人员一致看好干细胞在组织损伤再生中的重要作用的背景下,本研究根据长期观察实践,提出成熟细胞去分化幼稚化参与再生重建的观点,以供同行专家讨论.

    作者:朴英杰 刊期: 2004年第07期

南方医科大学学报杂志

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主办:南方医科大学