学术投稿

DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳银染方法的选择

李西平;钱新华;姚英民;刘志杰;刘阳

关键词:DNA, 银染, 聚丙烯酰胺凝胶电泳
摘要:目的比较4种聚丙烯酰胺凝胶银染方法,为初次使用者选择方法时提供参考.方法用24 mer的引物作为上样样本,分别采用氨水法、低浓度硝酸银法、0.1%及0.2%硝酸银法染色.后2种配合不同的显色剂显色.结果前2种未显色,0.1%及0.2%硝酸银可显色.结论0.2%的硝酸银与氢氧化钠显色剂相结合具有高的灵敏度;0.2%的硝酸银与碳酸钠显色剂相结合具有佳的显像效果.
南方医科大学学报杂志相关文献
  • 远程胎儿监护用于妊娠期糖尿病的产前监测

    目的探讨远程胎儿监护网络在妊娠期糖尿病(GDM)产前监测的临床价值.方法采用远程胎儿监护网络,对50例GDM孕妇进行产前无负荷试验(NST)监测(试验组),同期随机选择常规胎动计数和定期到医院进行NST检查的GDM孕妇50例作为对照(对照组),分析两组胎儿监护结果和妊娠结局.结果试验组NST异常率(34.6%)较对照组(25.5%)显著增加(P<0.05).试验组(9.58±0.77)新生儿Apgar评分高于对照组(8.70±1.23)(P<0.05).试验组新生儿窒息和早产儿的发生率分别为12.0%和8.0%,低于对照组的24.0%和22.0%(P<0.05).两组剖宫产率的差异无显著性(P>0.05).结论利用远程胎儿监护进行GDM产前监测,可改善围产儿预后,是GDM孕妇自我监护的新选择.

    作者:詹瑛;相尧美;齐卫红;王爱敏;陈维萍;邵东红 刊期: 2004年第09期

  • 射频消融治疗子宫出血36例报告

    目的观察射频消融治疗子宫出血的效果.方法经中西药治疗无效、无生育要求的子宫出血患者36例,经妇检、B超、诊刮排除恶性变,用探针探测宫腔的宽度和深度,将凝固器送达宫底部,接通开关,依次刮凝宫腔2周.整个过程在B超监护下进行,其强回声光带厚度达0.8~1.0 cm,结果1年内有效率达100%,未发现复发的病例.结论射频消融技术治疗子宫出血简便、经济、安全、有效.

    作者:邹辉璋;曹扬;罗小琴;徐洁萍 刊期: 2004年第09期

  • DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳银染方法的选择

    目的比较4种聚丙烯酰胺凝胶银染方法,为初次使用者选择方法时提供参考.方法用24 mer的引物作为上样样本,分别采用氨水法、低浓度硝酸银法、0.1%及0.2%硝酸银法染色.后2种配合不同的显色剂显色.结果前2种未显色,0.1%及0.2%硝酸银可显色.结论0.2%的硝酸银与氢氧化钠显色剂相结合具有高的灵敏度;0.2%的硝酸银与碳酸钠显色剂相结合具有佳的显像效果.

    作者:李西平;钱新华;姚英民;刘志杰;刘阳 刊期: 2004年第09期

  • 基因芯片筛选大肠侧向发育型肿瘤相关基因的初步研究

    目的应用基因芯片初步筛选大肠侧向发育型肿瘤(LST)相关基因,为进一步研究大肠癌的发病机制提供新的思路和线索.方法抽提大肠侧向发育型肿瘤癌细胞株、SW480细胞株、LoVo细胞株的总RNA并纯化mRNA;将18 816种人类基因及LST片段PCR产物用Biorobotics公司的BG600点样仪点样于纤维膜上,制成基因芯片.将3个样品的mRNA分别逆转录合成探针并33P标记,同芯片杂交.严格洗片后Fuji film公司FLA 3000扫描仪扫描芯片信号图象,ArrayGauge1.0软件分析比较3种细胞株中差异表达基因.结果和结论在18 816种人类基因中存在着一系列LST同普通大肠癌细胞株之间的差异表达基因.在本研究中共有差异表达基因97个,其中共上调58个,共下调39个.表明其可能存在不同的肿瘤发生机制,故进一步研究其相关基因,在分子水平上阐明其发生机制及与大肠癌的关系具有重要意义.

    作者:王新颖;姜泊;赖卓胜;马文敏;耿焱 刊期: 2004年第09期

  • 胼周胼缘动脉起始部双动脉瘤1例

    颅内动脉瘤以单发多见,多发性颅内动脉瘤常发生在多个动脉上,而在1个动脉分叉部同时发生2个动脉瘤尚未见报道.近我科收治1例胼周胼缘动脉起始部双动脉瘤患者,报告如下.

    作者:冯文峰;黄胜平;漆松涛 刊期: 2004年第09期

  • 转染人pIgR的小鼠鼻咽上皮细胞在EBV感染前后基因表达谱差异

    目的应用cDNA阵列技术研究转染人多聚免疫球蛋白受体(hpIgR)的二亚硝基哌嗪(n,n'-dinitrosoperazine,DNP)转化的小鼠鼻咽上皮(TMNE)细胞系在EBV感染前后基因表达谱差异,探索EBV在鼻咽癌发病过程中的作用及鼻咽癌的发病机制.方法提取转染hpIgR的TMNE细胞在EBV感染前后的总RNA,逆转录成α-32p-dATP标记的cDNA探针,与AtlasTM mouse cancerarray1.2阵列膜进行杂交.利用AtlasImageTM软件分析基因表达差异.结果共有25个基因表达水平发生了改变,有23个基因表达上调,2个基因表达下调.结论EBV感染可使转染细胞的多个基因表达发生改变,这些基因可能与鼻咽癌的发生、发展有关.

    作者:王爽;吕丽春;李虹;江培洲;姚开泰 刊期: 2004年第09期

  • ZD1839治疗晚期非小细胞肺癌的临床观察

    目的观察ZD1839治疗晚期非小细胞肺癌的疗效和毒副作用.方法以一定的标准选取32例晚期非小细胞肺癌病人,口服ZD1839治疗,90 d后观察其疗效及毒副反应.结果完全缓解(CR)0%,部分缓解(PR)18.75%,稳定(SD)37.50%,疾病控制率(CR+PR+SD)56.25%.毒副作用中,出现痤疮样皮疹10例(31.25%),腹泻6例(18.75%),转氨酶升高4例(12.50%),恶心、呕吐5例(15.63%),未发现间质性肺炎病例.结论ZD1839是一种新药,其疾病控制率和毒副作用对于肺癌患者来说是可以接受的,在治疗肺癌方面具有良好的前景.

    作者:张琳 刊期: 2004年第09期

  • 重症产后尿潴留1例报告

    产后尿潴留如能及时得当处理,甚至可不必留置尿管.本例患者因未能早期诊断,延误了治疗,致使患者膀胱功能恢复困难,反复留置尿管长达50d之久,应引起医务人员警惕.

    作者:苏桂栋;宋天蓉;万淑梅;张莉英;余艳红 刊期: 2004年第09期

  • 中国广东汉族人C4、Bf多态性及其补体单倍型研究

    目的探讨广东汉族人G4、Bf遗传多态性及其构成的补体单倍型频率.方法用琼脂糖高压电泳及免疫固定的方法对广东正常汉族家系144条染色体作了属于HLA-Ⅲ的Bf、C4A、C4B的遗传多态性及其构成的补体单倍型检测与分析.结果共发现13个补体单倍型,居前4位者为S32、S31、S42、F42,其中有4个单体型呈高度连锁不平衡.表型以BFS(0、8542)、C4A3(0、7291)、C4A4(0、2188)、C4B2(0、5937)、C4B1(0、3542)常见.结论广东汉族C4、Bf多态性及其构成的补体单倍型有自己的遗传背景.

    作者:杨利平;温秀清;关艳冰;徐娟;姜晓丹;赵修竹 刊期: 2004年第09期

  • B超诊断双侧甲状旁腺腺瘤1例

    甲状旁腺机能亢进的病人大部分有甲状旁腺腺瘤,但95%发生在一侧,双侧同时发生甲状旁腺腺瘤者较为少见.1临床资料患者男,52岁,因无明显诱因感全身乏力、行走乏累、上楼时更加明显,左足底疼痛、以足底骨部位明显、碰到硬物时加重而来院就诊.查体未发现颈部包块,实验室检查:血钙增高,血磷降低,甲状旁腺激素明显增高.

    作者:王春美;郑晓娴 刊期: 2004年第09期

  • 重组幽门螺杆菌过氧化氢酶对结肠粘膜上皮细胞氧化应激的影响

    目的探讨重组幽门螺杆菌过氧化氢酶(rHpCAT)对大鼠结肠粘膜上皮细胞氧化应激的影响.方法在分离培养正常大鼠结肠粘膜上皮细胞的基础上,利用FeSO4+H2O2反应产生羟自由基攻击制备结肠粘膜细胞氧化损伤模型,同时预先加入rHpCAT并观察损伤减轻程度.实验设正常对照组、模型对照组、5-氨基水杨酸给药组(0.1 mmo1/L)、重组幽门螺杆菌过氧化氢酶给药组(1×105、1×106、1×107U/kg·b.w.).培养一定时间后,取上清测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)和髓过氧化物酶(MPO)的活性进行测定,并同时测定上述各组谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)含量.结果模型组大鼠结肠粘膜上皮细胞MDA、LDH和MPO水平增高,CAT、GSH-Px和SOD含量减少.不同单位rHpCAT呈剂量依赖性的减少LDH释放,抑制MDA和MPO的形成,而使CAT、GSH-Px及SOD恢复到正常水平.结论重组幽门螺杆菌过氧化氢酶对大鼠结肠粘膜氧化损伤具有保护作用.

    作者:武金宝;王继德;王群英;吕永慧;徐俊;叶方鹏;南清振;李良仁;任玥欣;张亚历 刊期: 2004年第09期

  • 胃窦部异位胰腺1例报告

    异位胰腺多见于上消化道,但异位至胃窦致术前误诊为胃窦肿瘤者少见.我科近期收治1例胃窦部异位胰腺,现报告如下.

    作者:韩景龙;黎镭;吴承堂 刊期: 2004年第09期

  • 宫颈癌发病年龄与预后的关系(附93例分析)

    目的探讨宫颈癌发病年龄与临床预后的关系.方法回顾南方医院1997年1月~2002年12月收治的宫颈癌93例,分为年轻组(≤35岁)和中老年组(>35岁),进行临床分期、病理组织学、细胞分化等临床资料对比分析.结果两组患者在临床分期、组织学上有统计学差异.≤35岁组:≤Ⅱa期占82.61%,≥Ⅱb期占17.39%,磷癌占86.67%,腺癌占13.39%;而>35岁组:≤Ⅱa期占便51.43%,≥Ⅱb期占48.73%,磷癌占82.98%,腺癌占17.02%.细胞分化程度分析,≤35岁组和>35岁组经统计学处理无显著性差异.结论>35岁组宫颈癌患者具有临床期别较高、腺癌较多的不良预后因素.年轻宫颈癌患者预后较好.

    作者:周瑞丽;刘国炳 刊期: 2004年第09期

  • 腹腔镜在宫外孕合并宫内孕治疗中的应用(附5例报告)

    目的探讨微创技术中的腹腔镜手术在治疗宫外孕合并宫内孕中的价值.方法对应用电视腹腔镜技术切除异位妊娠组织或患侧输卵管的宫外孕合并宫内孕的5例患者的临床资料进行总结.结果腹腔镜下均成功切除了异位妊娠病灶或患侧输卵管,宫内妊娠得以继续.结论腹腔镜手术治疗宫外孕合并宫内孕是一种安全可行的治疗方法,具有损伤小、恢复快、对宫内妊娠干扰小等优点.

    作者:张广亮;黄琦丽;邢福祺 刊期: 2004年第09期

  • 紫杉醇和吉西他滨对激素非依赖性前列腺癌的作用

    目的观察紫杉醇(PA)协同吉西他滨(GE)对前列腺癌细胞系PC-3的体内外作用,并探讨其可能约作用机制.方法应用光镜形态学、噻唑蓝(MTT)法、流式细胞仪和免疫细胞化学法观察了10-6、10-7、10-8 mol/L浓度PA和10-7、10-8、10-9mo1/L浓度GE在体外单药或协同对前列腺癌细胞系PC-3的作用、对细胞DNA含量及cyclinD1表达的影响.观察PC-3细胞荷瘤裸鼠单独及协同使用PA和GE前后的体质量、肿瘤质量、血清PSA和肿瘤PSA免疫组化的变化.结果10-8mol/L以上浓度GE作用48 h,可增强10-7mol/L以上浓度PA对前列腺癌PC-3细胞系的生长抑制[抑制率≥(50.8±4.2)%,P<0.05],增强诱导凋亡作用[凋亡率≥(22.9±2.3)%,P<0.05],下调Cyclin D1的表达[表达率≤(9.6±1.6)%],与阳性对照组cyclinD1表达率(25.5±4.1)%相比差异有显著性(P<0.01).GE使PA所致的G2/M期细胞周期阻滞比例由(70.3±9.7)%减至(38.2±4.2)%,部分地逆转了其G2/M期细胞周期阻滞(P<0.01).协同治疗前后裸鼠体质量无明显变化,但肿瘤质量(3.2.±0.5 g)、血清PSA[(51±14)ng/ml]和肿瘤PSA免疫组化的表达率[(30±3.7)%]在协同治疗组显著低于其他组(P<0.05或0.01).结论PA和GE可以在体内外协同增强对前列腺癌细胞系PC-3的生长抑制和诱导凋亡作用,显示了PA和GE协同用于治疗激素非依赖性前列腺癌的可能性,并部分地解释了其作用机制.

    作者:孙明;杨宇如;李虹;陈一戎;王志平;卢一平;魏强;岳中瑾 刊期: 2004年第09期

  • 精子基因表达谱研究初探

    目的应用限制性显示技术,收集正常成年男性的精子基因表达谱探针,制备相应的精子表达谱芯片,以对成年男性正常精子的基因表达情况有一全面、系统的了解.方法提取成年男性正常精子的总RNA,逆转录为cDNA,经限制性内切酶酶切、加接头、PCR扩增、转化、克隆、鉴定等操作,收集成年男性正常精子的基因表达谱探针,制备相应的精子表达谱芯片,并进行初步的杂交分析.结果收集了1 859个基因片段,取其中368个基因探针制备芯片,进行了小量初试.结论证实在精子中有大量基因表达;提示我们自行制备的精子基因表达谱探针也具有较好的特异性和可信性.

    作者:毛向明;马文丽;冯春琼;邹亚光;郑文岭 刊期: 2004年第09期

  • 应用Super SMART cDNA合成技术扩增哮喘嗜酸性粒细胞总RNA

    目的应用Super SMART cDNA合成技术从嗜酸细胞微量总RNA扩增大量双链cDNA.方法利用Percoll密度梯度离心分离哮喘病人血嗜酸性粒细胞,用Trizol试剂盒提取细胞总RNA,利用Super SMART cDNA合成技术合成cDNA第1链及优化扩增第2链.通过梯度电泳鉴定cDNA产品质量,通过对获得的cDNA定量来评估扩增效能.结果从20 ng总RNA成功扩增出双链cDNA 7.155μg,电泳结果显示cDNA质量及纯度较高.结论Super Smart cDNA合成技术可实现从微量总RNA高效扩增高质量的cDNA,为进一步从基因水平研究哮喘机制奠定了基础.

    作者:赵海金;蔡绍曦;邹飞;佟万成;万为人 刊期: 2004年第09期

  • 钩吻总生物碱中钩吻素子的提取与分离

    目的研究钩吻中总生物碱的提取、总量测定方法及其中主要成分钩吻素子的分离、鉴定方法.方法采用加热回流提取与氯仿萃取相结合的方法提取总生物碱;采用碱性硅胶柱层析、梯度洗脱法分离钩吻素子并用薄层层析法和紫外分光光度法定性鉴别.结果从钩吻中分离得到了无色棱柱状钩吻素子晶体.结论本实验所采用的提取钩吻总生物碱及分离钩吻素子的方法行之有效.

    作者:张兰兰;王志睿;黄昌全;张忠义;林敬明 刊期: 2004年第09期

  • 融合表达的副溶血弧菌不耐热性溶血毒素包涵体复性的研究

    目的构建融合表达载体,获得具有生物活性的副溶血弧菌不耐热性溶血毒素.方法克隆t/h基因,构建表达载体pET32a+/tlh,融合表达副溶血弧菌不耐热性溶血毒素,用8mol/L的尿素溶解包涵体,亲和层析纯化目的蛋白,采取逐步透析、降低蛋白浓度、加入氧化还原剂等复性方法.结果复性蛋白具有溶血活性及免疫原性.结论通过克隆tlh基因,构建融合表达载体pET32a+-tlh,采取纯化、复性方法,获得具有融血活性及免疫原性的副溶血弧菌不耐热性溶血毒素.

    作者:李志峰;聂军;戴迎春;陈清;俞守义 刊期: 2004年第09期

  • 基于Intel RNG的真随机数生成器研究

    目的构建基于特定Intel芯片组中random number generator(RNG)单元的真随机数生成器.方法在Intel 815E芯片组的个人电脑上安装Intel Security Driver(ISD)后,使用Microsoff Visual C++6编程,通过寄存器读取的方式获取RNG中的随机数.结果生成的500个随机数通过的NIST FIPS 140-1和x2拟合优度检验(α=0.05),表明本方法所生成的随机数满足独立性和分布均匀性的要求.生成7500个随机数经域值变换后与随机数表中的同等数目的随机数进行了统计学比较,结果显示前者的均值偏移、SD,SE和CV均小于后者.结论基于IntelRNG的真随机数生成器可以生成满足独立性和分布均匀性的真随机数,生成的随机数效果与随机数表中的随机数没有显著性区别.但是基于IntelRNG的真随机数生成器能解决使用随机数表获取随机数中可能存在的问题,具有较好的普遍性和实用性.

    作者:黄枫;申洪 刊期: 2004年第09期

南方医科大学学报杂志

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