学术投稿

炭疽杆菌保护性抗原基因芯片探针的制备

马晓冬;马文丽;吕梁;肖维威;孙朝晖;郑文岭

关键词:炭疽杆菌, 保护性抗原, AT克隆, 序列分析
摘要:目的快速制备炭疽杆菌保护性抗原基因芯片探针.方法根据PubMed上公布的炭疽杆菌保护性抗原的DNA序列设计引物,扩增保护性抗原基因.利用酶切、AT克隆方法快速分析筛选出保护性抗原基因片段的重组子,从而制备成芯片探针.DNA自动分析仪对克隆片段进行序列测定,生物信息学软件对其基因序列进行分析.结果根据炭疽杆菌保护性抗原设计的引物,可以扩增出长2 205bp的保护性抗原基因,经酶切、AT克隆方法筛选出约7个长度不一的片段,对其片段进行序列测定并进行Blast序列比对得知这些片段均属于炭疽杆菌保护性抗原基因.结论利用PCR扩增产物并结合酶切、AT克隆方法可以快速、简便地制备基因芯片探针.
南方医科大学学报杂志相关文献
  • 广州市成人体质指数、腰围与血压关系的研究

    目的探讨广州市城市成年居民体质指数(BMI)、腰围(WC)对于预测和诊断高血压的实用价值和建议值,为确定肥胖和腹部肥胖的诊断指标及其界值提供科学依据.方法多阶段随机抽取广州市越秀区1 265名居民,进行问卷调查及身高、体质量、腰围和血压的测量.进行多元线性回归分析及logistic多因素分析.结果成年人体质指数、腰围分布存在明显的性别、年龄差异;平均收缩压和舒张压随着体质指数和腰围的增加而呈逐渐上升趋势,多元线形回归分析表明体质指数、腰围和血压值有明显的线形相关关系;控制年龄、性别、教育程度等混杂因素后,1ogistic回归分析显示发生高血压的危险性随着体质指数和腰围的增加而升高.结论建议以BMI为肥胖指标,BMI≥23诊断为超重、BMI≥29诊断为肥胖;以腰围为腹部肥胖指标,WC≥80为诊断界值.

    作者:方芳;聂军 刊期: 2003年第08期

  • 产毒性大肠杆菌的致病机制

    目的深入分析产毒性大肠杆菌(ETEC)的致病机制.方法建立ETEC感染豚鼠模型,采用免疫组织化学染色及流式细胞术,观察豚鼠肠组织的病理形态并测定细胞内游离Ca2+、细胞质pH、细胞膜电位及线粒体膜电位.结果豚鼠对人源ETEC菌株敏感,ETEC可导致豚鼠小肠充血、水肿和炎细胞浸润,未发现细菌入侵小肠上皮细胞,但电镜下可见小肠上皮细胞空泡样变性,线粒体增生;不耐热肠毒素(LT)和耐热肠毒素(ST)在回肠组织中分布弥漫;LT和ST均可使豚鼠小肠离体上皮细胞内游离Ca2+、细胞浆pH和细胞跨膜电位上凋,使线粒体跨膜电位下降.结论ETEC可导致豚鼠小肠充血、水肿和炎细胞浸润等炎症反应;LT和ST的作用也不限于上皮细胞,对肌细胞也有影响;对肠毒素作用的分析提示,LT与ST的作用部位与机制可能相似,ETEC腹泻与细胞主动排水过程有关.

    作者:陈清;俞守义;申洪;王雅贤;吴敏 刊期: 2003年第08期

  • 川崎病及其合并冠脉损伤的早期诊断

    目的通过川崎病(KD)合并冠脉损伤(CAL)高危因素分析早期诊断的必要性并探讨其临床和实验室指标.方法参照KD现行诊断标准,统计分析1992年1月~2002年1月住院的84例KD患儿发病早期(7 d内)临床和实验室特点及心电图、超声心动图资料.结果发病7 d内发热、眼结膜充血、唇红或干裂、皮疹、淋巴结肿大的发生率分别为100%、71.4%、80%、66.7%、25%;单因素分析筛选出年龄、白细胞、C反应蛋白和心电图与KD合并冠脉损伤密切相关(P<0.05);多因素Logistic回归分析进一步提示早期白细胞升高、心电图阳性与KD合并CAL显著独立相关(P<0.05).结论持续发热伴眼结膜充血、唇红或干裂、皮疹等可疑KD病例经病史、年龄、血常规、心电图、心脏彩超、C反应蛋白等资料综合分析,可于发病7 d内早期诊断,早期干预治疗,预防冠脉病变,改善冠脉病变预后;早期白细胞升高、心电图阳性可以作为KD合并CAL预测因子.

    作者:胡晓红;徐世侠;栾佐 刊期: 2003年第08期

  • 已烯雌酚对去卵巢大鼠骨骼生长及代谢的影响

    目的探讨己烯雌酚对去卵巢大鼠骨组织形态学及代谢的影响.方法3月龄雌性SD大鼠27只,分对照组、去卵巢未治疗组和去卵巢治疗组3组.去卵巢治疗组在去卵巢术后,给予己烯雌酚0.022 5 mg/d@kg@b.w.灌胃,每周6 d,持续90d.用图像分析仪观测各组大鼠胫骨近端骨计量学参数,并在扫描电镜下观察大鼠股骨的结构改变.检测血中胆固醇浓度及主要内脏的质量.结果与对照组比较,去卵巢未治疗组大鼠胫骨骨小梁面积减少65%,骨小梁间隙增加189%,骨形成率增加92%;股骨的骨小梁几乎消失,骨组织的三维构筑受到破坏.与去卵巢未治疗组比较,治疗组骨小梁面积增加128%,骨小梁间隙减少63%,骨形成率减少49%;股骨的骨小梁排列整齐,连接紧密.去卵巢治疗组大鼠无血中胆固醇增高及内分泌改变,子宫质量增加.结论己烯雌酚能有效地预防骨质疏松症,但具有导致生殖器官癌变的危险性.

    作者:唐道鹤;谢华;吴铁;黄连芳;屈菊兰;原林 刊期: 2003年第08期

  • 肾小球系膜细胞的分离和培养

    目的分离、培养和鉴定正常人肾小球系膜细胞.方法筛网滤过分离正常人肾小球系膜细胞,同时采用免疫荧光技术,利用异硫氰酸荧光素(FITC)间接标记单克隆抗体:抗Ⅷ因子相关抗原抗体、抗结蛋白抗体、抗角蛋白抗体、抗细胞角蛋白抗体、抗Ⅳ型胶原抗体、抗纤维连接蛋白抗体、抗层粘连蛋白抗体对系膜细胞特有的中间微丝进行鉴定.并采用同期培养的同一来源的肾小球内皮细胞作对照.结果抗Ⅷ因子相关抗原、抗角蛋白和抗细胞角蛋白抗体表达均为阴性,而抗结蛋白抗体、抗Ⅳ型胶原抗体、抗纤维连接蛋白抗体、抗层粘连蛋白抗体为阳性,说明培养的细胞为系膜细胞.结论该种方法分离培养的细胞经过免疫荧光染色鉴定为肾小球系膜细胞.

    作者:孙晓艳;安靓;傅博;李进 刊期: 2003年第08期

  • 舌癌术前MRI分期与手术病理对照研究

    目的研究舌癌MRI表现及MRI对舌癌术前分期的价值,以指导临床分期,制定佳治疗方案.方法前瞻性分析39例舌癌患者,行MRI检查;分析其MRI征象,术前MRI分期,并与病理结果进行对照研究.结果MRI对肿瘤的累及部位、深度和范围有较好显示,但对小淋巴结的检测和鉴别淋巴结的性质存在困难.MRI对原发灶T1~T4TNM分期敏感性分别为100%、83.3%、90.9%和82.6%,特异性为63.5%、83.5%、63.6%和82.6%;判断淋巴结转移的敏感性为60.8%.特异性为75.0%,准确性为66.7%,阳性预测值为77.8%,阴性预测值为76.2%;术前AJCC分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期敏感性分别为100%、85.7%、92.3%和88.9%,特异性分别为66.7%、76.3%、76.9%和77.8%.舌癌浸润深度小于3、3~6、6~9和大于9 mm 4组的淋巴结转移有明显差异(P<0.05),6~9 mm组与大于9 mm组之间无明显差异(P<0.05).结论MRI可作为舌癌TNM分期、AJCC分期的重要依据,MRI征象、临床表现结合舌癌浸润深度可提高舌癌术前分期准确性.

    作者:曾辉;梁长虹;周正根;郑君惠;曾琼新 刊期: 2003年第08期

  • 老年脑梗死患者血清胆固醇、高密度脂蛋白及其图谱的变化

    目的观察老年脑梗死患者血清胆固醇、高密度脂蛋白及其图谱的变化.方法采用改良的双梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测118例老年脑梗死患者和60例健康老年人的血清脂蛋白谱(SLPG),同时测定血清总胆固醇(TC)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量.结果与对照组比较,老年脑梗死组血清HDL-C含量[(1.0±0.3)mmol/L]显著降低(P<0.001),TC/HDL-C(5.3±1.4)显著增高(P<0.001),而TC含量](5.0±1.5)rmmo1/L]则无显著统计学差异.老年脑梗死组SLPG异常率为86.4%,不管HDL-C含量降低与否,α脂蛋白在SLPG的表现均显著异常(P<0.001~0.05).结论血清HDL-C水平降低、TC/HDL-C增高以及SLPG异常可能是老年脑梗死发病的危险因素,其中α脂蛋白图谱较HDL-C更具敏感性,而TC水平的预警作用可能不大.

    作者:尹恝;王心宇;张暋 刊期: 2003年第08期

  • 环孢霉素A抑制NIT-1胰岛β细胞胰岛素释放并下调线粒体氧化磷酸化酶系基因的表达

    目的研究免疫抑制剂环孢霉素A(CsA)对NIT-1胰岛β细胞胰岛素分泌的影响及在基因水平上对线粒体氧化磷酸化水平的影响.方法体外培养NIT-1胰岛β细胞,用10μmol/LCsA处理24和48 h.放射免疫测定法(RIA)检测胰岛素释放,半定量RT-PCR检测CsA处理NIT-1胰岛β细胞后线粒体氧化磷酸化酶系中的几种主要成员(nuox23、Cox7c和Atp5K)在mRNA水平上的表达.结果CsA处理24和48 b可显著抑制胰岛素的释放并下调Nuox23、Cox7c和Atp5K基因mRNA表达.结论CsA下调线粒体氧化磷酸化酶系基因的表达可能是其降低ATP合成引起胰岛素释放下降的机制之一.

    作者:余乐;雷林生;吴曙光 刊期: 2003年第08期

  • 新兵心理健康状况及人格与训练伤的关系

    目的了解新兵心理健康状况、人格与训练伤的关系.方法应用症状自评量表(SCL-90)和艾森克个性问卷(EPQ)对某部参加2002年度基础训练的新兵进行测试.结果本年度军训伤累积发生率为9.6%.受伤组(n=58)与未受伤组(n=559)之间训练前各指标未见显著性差异(P>0.05).训练后受伤组精神病性因子分高于未受伤组(P<0.01).训练前受伤组因子分≥2的因子主要为强迫症状(13.79%)、人际关系(10.34%)和抑郁(10 34%),训练后主要为人际关系(13.79%)、强迫症状(12.07%)和精神病性(12.07%).两组之间总分≥160的人数分布、人格类型分布未见显著性差异(P>0.05).结论实施新大纲后训练伤发生率下降,未发现新兵中有心理问题者、人格类型与训练伤有明显的关系.

    作者:栗文彬;王波;吴秀华;徐德忠;骆军强;李辉 刊期: 2003年第08期

  • 手部重度热压伤皮瓣修复疗效分析

    目的探讨应用不同皮瓣修复手部重度热压伤的疗效.方法1990年1月~2000年12月,对39例各种原因所致手部重度热压伤采用不同皮瓣修复,术后尽早给予综合性康复治疗,比较其疗效.结果术后随访6~12个月,不同皮瓣修复术后手部外形和功能恢复有显著性差异(P<0.05).结论小腿内侧皮瓣和前臂掌侧逆行皮瓣优于腹部带蒂皮瓣,可大限度地恢复手的外形和功能.

    作者:何炳根;林联择;张普国;黄明光;曾秋涛 刊期: 2003年第08期

  • 乙型肝炎病毒多表位治疗性抗原基因的合成、表达及抗原性研究

    目的研究乙型肝炎病毒多表位治疗性疫苗基因的合成、表达及其产物的抗原性.方法设计、并合成乙型肝炎病毒多表位抗原基因BPT,克隆入融合表达载体pWR450-1,构建重组质粒PWR/BPT.在大肠杆菌中表达乙型肝炎多表位抗原蛋白并纯化该蛋白,并用Westem-blotting方法初步检测该抗原蛋白的抗原性.结果成功构建了融合表达载体PWR/BPT,在大肠杆菌中表达出乙型肝炎多表位抗原蛋白,Western-blotting检测显示该蛋白具有良好抗原性.结论HBV多表位治疗性抗原基因的设计是成功的,其在大肠杆菌中表达的重组融合蛋白具有良好的抗原性,可能是较理想的HBV治疗性疫苗候选物.

    作者:骆利敏;李明;夏虎;黄建生;陈百虹;王萍 刊期: 2003年第08期

  • 正常人汉语句子事件相关电位N400的研究

    目的研究汉语句子结尾词匹配与不匹配事件相关电位N400的变化,探讨正常人汉语句子N400的特征.方法对15名21~36岁右利手健康受试者,进行汉语正常句子结尾匹配词(匹配)与句子结尾歧义词(不匹配)N400的研究.结果受试者对句子结尾词匹配与不匹配的N400成分在潜伏期及波幅有显著性差异(P<0.05),句子不匹配结尾词的N400潜伏期较长,N400波幅高.N400广泛分布于脑部各区,左侧波幅偏高.结论汉语句子结尾字匹配与不匹配的N400与字词认知中的语义密切相关,可作为一个有临床价值的认知电位而用于临床多种伴有语言障碍疾病的评估.

    作者:陈璇;金梅 刊期: 2003年第08期

  • 除皱术中防止面神经颧支损伤的解剖学研究

    目的为除皱术中防止面神经颧支损伤提供解剖学依据.方法10例防腐固定标本和5例新鲜标本,解剖观察面神经颧支的走行、分布及毗邻,分析颧支的分布特点及预防其损伤的手术操作方法.结果(1)颧支从腮腺上缘或前缘穿出.发出2~3支,分为上、下部分支.(2)上部颧支细小、表浅,由颧弓内1/3处斜行跨越颧弓或走行在颧弓下缘,穿经颧骨韧带基部;下部颧支略粗,位置深,位于上部分支下方(1.0±0.3)cm.(3)颧支上、下部分支在颧大肌表面和深面相互吻合.结论经浅表肌肉腱膜系统(SMAS)下平面分离到颧大肌外缘时,或在骨膜下分离颧骨韧带时,是颧支易损伤部位,操作中避开神经分布的组织层次,勿使用锐性分离及过度牵拉等,可预防神经损伤.

    作者:雷涛;徐达传;高建华 刊期: 2003年第08期

  • 炭疽杆菌保护性抗原基因芯片探针的制备

    目的快速制备炭疽杆菌保护性抗原基因芯片探针.方法根据PubMed上公布的炭疽杆菌保护性抗原的DNA序列设计引物,扩增保护性抗原基因.利用酶切、AT克隆方法快速分析筛选出保护性抗原基因片段的重组子,从而制备成芯片探针.DNA自动分析仪对克隆片段进行序列测定,生物信息学软件对其基因序列进行分析.结果根据炭疽杆菌保护性抗原设计的引物,可以扩增出长2 205bp的保护性抗原基因,经酶切、AT克隆方法筛选出约7个长度不一的片段,对其片段进行序列测定并进行Blast序列比对得知这些片段均属于炭疽杆菌保护性抗原基因.结论利用PCR扩增产物并结合酶切、AT克隆方法可以快速、简便地制备基因芯片探针.

    作者:马晓冬;马文丽;吕梁;肖维威;孙朝晖;郑文岭 刊期: 2003年第08期

  • p38 MAPK通路在佛波酯诱导人绒癌JAR细胞体外侵袭中的作用

    目的研究细胞内p38 MAPK信号传导通路在人绒癌JAR细胞体外侵袭中的作用.方法用ELISA法测定JAR细胞中p38 MAPK的活性变化;用Transwell细胞侵入系统检测细胞的侵袭作用;用MTT法评价细胞生长状况.结果佛波酯(PMA)呈浓度依赖性地激活JAR细胞中p38 MAPK.PMA能促进人绒癌JAR细胞的体外侵袭作用,而p38特异性抑制剂SB203580抑制了JAR细胞的侵袭能力.结论p38MAPK通路在人滋养细胞的侵袭行为以及人绒癌的形成中具有重要作用.p38 MAPK抑制剂可能会为人绒癌的防治提供新的途径.

    作者:张曦倩;赵晓山;庞战军;李红;陈思梅;罗仁;陈士岭;邢福祺 刊期: 2003年第08期

  • 子宫内膜异位症患者腹水与血清中肝细胞生长因子的检测

    扩散因子(肝细胞生长因子)(SF/HGF)是一种多功能的生长因子,与肿瘤细胞的增生、血管生成、侵袭性密切相关.本研究的目的是探索HGF在子宫内膜异位症发病机制中的作用及HGF与子宫内膜异位症发生发展的关联.本研究应用酶联免疫吸附反应技术检测了126位妇女(其中72位为子宫内膜异位症患者,54为正常对照)血清及腹水中HGF浓度.与对照组比较,Ⅰ/Ⅱ和Ⅲ/Ⅳ子宫内膜异位症患者血清和腹水中的HGF浓度升高,3组妇女腹水中HGF浓度分别为(0.337±0.065)、(0.458±0.160)、(0.915±0.113)ng/ml.血清中HGF浓度分别为(0.335±0.663)、(0.456±0.151)、(0.907±0.17)ng/ml.Ⅲ/Ⅳ子宫内膜异位症患者血清和腹水中HGF浓度与Ⅰ/Ⅱ期患者和对照组比较,差异有统计学意义.王组妇女血清与腹水的HGF浓度均呈正相关.HGF浓度与月经周期无明显相关.处于同一月经周期的患者与正常妇女血清及腹水HGF浓度比较,显示HGF浓度的升高主要是子宫内膜异位症的发生和发展相关,与月经周期无明显相关.

    作者:宗利丽;李亚里;哈小琴 刊期: 2003年第08期

  • 谷氨酸脱羧酶抗体检测在2型糖尿病早期诊断中的意义

    目的探讨谷氨酸脱羧酶抗体(GAD-Ab)检测在2型糖尿病患者早期诊断中的意义.方法比较2型糖尿病患者GAD-Ab阳性组12例与阴性组86例的临床特征、体重指数、C肽、糖化血红蛋白等指标.结果GAD-Ab阳性组发病年龄低于阴性组,空腹及餐后2 hC肽值较低,使用胰岛素者比例较高,酮症酸中毒发生率高.结论检测2型糖尿病患者的GAD-Ab可帮助临床上早期发现迟发自身免疫糖尿病病人,尽早采用胰岛素治疗,对保护残存的胰岛功能有重要意义.

    作者:黄玉宇;黄萍;楼慧玲 刊期: 2003年第08期

  • 有关相对数的误用

    作者: 刊期: 2003年第08期

  • 儿童支气管哮喘急性发作时低钾血症相关因素56例临床分析

    目的探讨儿童支气管哮喘急性发作时并发低钾血症的发生率和临床特点.方法对56例支气管哮喘急性发作并发低钾血症患儿的临床资料进行分析.结果并发低钾血症患儿21例,发生率为37.5%.在哮喘急性发作及其治疗过程中,存在多种原因可导致低钾血症,但其临床表现缺乏特异性而易漏诊.结论儿童哮喘急性发作时并发低钾血症的发生率高,具有潜在危险性.尤其对正在使用糖皮质激素,β2受体激动剂的患儿,更应及时补钾.

    作者:王水有;徐庭云 刊期: 2003年第08期

  • 异丙酚对新生大鼠延髓脑片吸气呼吸神经元活动的影响

    目的观察异丙酚对延髓基本呼吸中枢吸气呼吸神经元放电活动的作用规律及其可能的作用机制.方法以改良的Kreb氏液灌流新生SD大鼠离体延髓脑片,随机分成Ⅰ~Ⅵ组(每组n=6).Ⅰ组为对照组(modified Kreb's solution,MKS组),第Ⅱ~Ⅴ组异丙酚浓度分别为5、20、50和100μmol/L持续灌流3 min,第Ⅵ组给γ-氨基丁酸A受体特异性阻断剂荷包牡丹碱(bicuculline,20μmol/L)与异丙酚20 μmol/L,观察给药后1、3、5、10、15、30 min时呼吸吸气神经元放电时程和峰值、呼气时程(吸气神经元放电静止期)和呼吸频率活动的变化.结果(1)第Ⅱ~Ⅴ组在1~30min内吸气神经元放电时程均表现为逐渐显著减小,15 min时作用显著,且各组与MKS灌流的对照组相比均有显著性差异.(2)Ⅲ、第Ⅱ~Ⅴ组1min内呼气时程无显著性变化,3~30min内呼气时程均表现为显著延长,5~15min内达到其大效应.(3)在给药后的30min内放电峰值呈现先增加然后降低的趋势,各组间放电峰值无显著性差异.(4)给予异丙酚3~30 min内呼吸频率逐渐减慢,5~15 min内达到其大抑制效应,各组间呼吸频率的变化无显著性差异.(5)Ⅵ+Ⅳ组的吸气时程与间给药前比无显著性差异.结论(1)异丙酚可抑制新生大鼠离体延髓脑片标本吸气神经元的放电时程,主要表现为吸气时程的缩短和呼气时程延长,且呼吸呈浓度依赖性.(2)GABAA受体在异丙酚对延髓基本呼吸中枢呼吸气吸神经元放电活动的抑制作用中可能起重要作用.

    作者:史玥;吴中海;李自强 刊期: 2003年第08期

南方医科大学学报杂志

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主办:南方医科大学