学术投稿

一种简易高效的大鼠胰岛分离纯化方法

张桦;蔡德鸿;徐春生;陈宏;刘宏

关键词:胰岛, 纯化, 培养, 移植
摘要:目的探索一种高效、高纯度大鼠胰岛分离纯化方法,并研究纯化后的胰岛细胞在体内外环境中的基本生物学功能状况.方法采用Hanks液经胰管内注射法机械性扩张破坏大鼠胰腺的腺泡组织,然后将其剪碎置于含1 g/L胶原酶的Hanks液中,于37℃中静止消化25~30min后移入含10%胎牛血清的RMPI-1640完全培养液中,24℃短期培养,Ficoll-400非连续密度梯度液离心纯化胰岛,纯化后的胰岛进行异种移植.结果经Ficoll-400纯化后,平均每只成年Wistar大鼠胰腺能获得920~1 230个胰岛,纯度可达98%以上;在葡萄糖刺激下胰岛素释放量约为基础分泌水平的2.2倍(P<0.001)纯化后的胰岛异种移植可逆转实验性糖尿病BALB/C小鼠的高血糖平均达(8.7±1.6)d.结论胰腺清化物经短期培养后再透行胰岛纯化的方法具有耗酶量少、技术难度小、胰岛纯度和产率及活率高的特点,是一种简便易行的高效分离纯化方法.
南方医科大学学报杂志相关文献
  • 肝吸虫卵与灵芝孢子的鉴别诊断

    随着人们生活水平的提高,癌症及肝病病人中服用灵芝类保健品(如灵芝孢子粉、灵芝茶、大汉灵芝等)的人越来越多.在该类病人的大便中经常可以见到一些与肝吸虫卵(图1,见封底)形态相类似的物质,该物质体积较小[(9~17×(5~12)μm],外壳较厚,无肩峰、无卵盖,尾部无小疣状突起,内部无毛蚴,颜色呈深红褐色.取灵芝类保健品涂片亦可见到大量该种形态的物质,可确定其为灵芝孢子(图2,见封底).由于其与肝吸虫卵在外观上极为相似,在低倍镜下,特别是单个出现时,很难鉴别,极易与肝吸虫卵相混淆,甚至引起误诊.所以应予以高度重视.肝吸虫与灵芝孢子的鉴别要点详见表1.

    作者:孙德华;周小棉;项兴达;张蒙恩 刊期: 2001年第02期

  • 肠扭转的病因诊断与防治

    目的探讨肠扭转发病原因与防治方法.方法分析22例患者的临床资料.结果 7例乙状结肠扭转为乙状结肠臃长所致,15例小肠扭转多因小肠肿物、肠粘连所致.根据典型临床特征结合腹部X线检查多可确诊,部分小肠扭转术中确诊.治疗采用急诊手术行扭转肠管复位或病变肠管切除吻合.结论肠扭转多见于小肠,肿物、肠粘连所致多见,确诊后应尽快急诊手术.

    作者:吴爱国;黄宗海 刊期: 2001年第02期

  • 高温高湿环境肢体火器伤病理形态学变化

    目的通过建立高温高湿环境下犬肢体火器伤动物模型,探讨这一特殊环境下肢体火器伤的病理形态学变化,为其临床救治提供理论基础.方法将8只杂种犬随机分为高温高湿组(5只)和常温常湿组(3只),分别于火器伤后4、8、12、24h进行大体观察并通过光镜和电镜进行病理形态学观察.结果大体观察可见高温高湿组6~8 h后较常温常湿组伤道及肌肉变色区明显扩大,肢体肿胀加重,挫伤区色泽暗红,肌肉无收缩且有腐败臭味,有感染征象;而常温常湿组12~24 h伤道始出现臭味.光镜及电镜观察到高温高湿组各区肌肉纤维的病理变化均较常温常湿组显著,且损伤呈进行性加重,而常温常湿组的震荡区及震荡外区24h伤道组织损伤均有减轻趋势.结论高温高湿环境下肢体火器伤伤道肌肉组织病理损伤严重,且随时间的延长而逐渐加重,救治时更应强调早期彻底清创.

    作者:赵东升;裴国献;魏宽海;罗炳德;王前 刊期: 2001年第02期

  • 轻度过度通气下施行CO2气腹对呼吸和动脉血气的影响

    目的观察轻度过度通气下施行CO2气腹对呼吸和动脉血气的影响.方法行择期腹腔镜胆囊切除术(LC)病人术前快速诱导麻醉,气管内插管后行机械通气,吸入N2O、持续静脉输注异丙酚维持全麻,硬膜外间断给药.分别在诱导前5 min、气腹前1min和气膜后5、10、20、30、40、50、60min及放气后5 min记录各监测值,同时采桡动脉血作血气分析.结果气腹开始后20~60min,呼气末CO2分压(PETCO2)和Co2排出量(VCO2)较气腹前显著升高.气腹开始后,pH值逐渐降低,30 mm时较诱导前显著降低;PaCO2逐渐升高,60min时较诱导前显著升高,但PETCO2、VCO2、PaCo2及pH的变化均在正常范围.在气腹初期,气道压(PAW)较气腹前显著升高,而呼气分钟通气量(MVE)较气腹前明显降低.结论采用异丙酚静脉全麻复合硬膜外麻醉及气腹前适当过度通气的呼吸管理方式在LC中是切实可行的.

    作者:梁仕伟;林春水;古妙宁 刊期: 2001年第02期

  • 1.5岁幼儿3指离断再植1例报告

    儿童手受伤机会较成人少,加之血管纤细、菲薄、吻合难度大,因此有关儿童断指再植的文献报道很少[1~7],幼儿多指离断再植更为罕见.我科收治了1例3指离断的1.5岁幼儿,行断指再植成功,现报告如下.

    作者:朱立军;相大勇;裴国献 刊期: 2001年第02期

  • 腹腔镜肝脓肿切开引流术的护理

    利用腹腔镜为5例肝脓肿患者切开置管引流,其护理要注意术前的心理护理,皮肤、肠道的准备,床上排尿训练和屯病情观察;术后监测生命体征,保持引流和冲洗管的通畅,观察引流液的性质和量,掌握拔管时机,注意严格无菌操作,防止术后并发症.

    作者:黄平;张思云 刊期: 2001年第02期

  • 骨髓移植治疗重型β地中海贫血(附2例报告)

    目的探讨骨髓移植治疗重型地中海贫血的可行性.方法 2例4和4.5岁男性患儿,经地贫基因检查确诊为重型β地中海贫血,分别移植其胞兄的骨髓850和475ml.两例HLA-DR位点均有一个不合,血型均相同;用白消安、环磷酰胺、抗人胸腺免疫球蛋白(ATG)预处理,例2未用ATG;环孢A和粒系集落刺激因子预防移植物抗宿主病.结果 2例白细胞数大于1.0×109/L的时间分别为移植后第14天和第17天,红细胞数大于4.5×109/L的时间分别为移植后第18天和第27天,例1因更昔洛韦影响白细胞曾一度下降,3个月后恢复正常;2例血小板和Hb术后均恢复正常,后一次输血时间分别为移植后第103天和第18天.移植后例1出现Ⅱ度急性GVHD和巨细胞病毒性间质性肺炎,获治愈.两例移植后至今均无需输血,Hb持续100g/L以上,地贫基因均已转为供者型.结论骨髓造血干细胞移植可根治重型β地中海贫血.更昔洛韦治疗移植后巨细胞病毒感染间质性肺炎用量要准确,疗程要足够.

    作者:朱为国;杨明;李夏新;潘惠明;黄良;官贵先;程少杰 刊期: 2001年第02期

  • 妊高征患者红细胞钙、镁和环核苷酸含量变化

    目的探讨妊高征患者红细胞内外的Ca2+、Mg2+和环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)的含量变化、相互关系及与妊高征发病机制的关系.方法采用生化方法测定25例妊高征患者和27例正常晚期妊娠妇女红细胞膜ATP酶活性、红细胞内外Ca2+、Mg2+含量;采用竞争性蛋白质结合分析方法测定血浆cAMP、放射免疫方法测定cGMP.结果妊高征组红细胞膜Na+、K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性明显降低(P<0.001),而Mg2+-ATP酶活性未见改变.红细胞内Ca2+含量显著增高(P<0.01),而Mg2+含量明显降低(P<0.01).血浆Ca2+、Mg2+的浓度显著低于对照组(P<0.05),而血浆cAMP和cGMP的浓度显著增高(P<0.05).妊高征组的平均动脉压(MAP)与红细胞膜的Ca2+、Na+-、K+-ATPase的活性呈负相关,与Ca2+、cAMP和cGMP呈正相关.Ca2+ATP酶与Ca2+呈负相关;Ca2+与cAMP和cGMP呈正相关.结论在妊高征的发生机制中缺镁比缺钙更有意义.细胞Ca2+转运障碍和cAMP、cGMP的代谢异常可能与妊高征的发生有关,它们在妊高征的发展和转归中起着举足轻重的作用.

    作者:张凌云;张为远;杨建萍 刊期: 2001年第02期

  • 无胸壁缺损的心外胸骨旁小切口的可行性研究

    目的研究以带蒂复合组织瓣修复胸骨旁小切口术后胸壁缺损的可行性.方法观察尸体前胸壁深层结构的血供规律,测量胸骨外侧缘与胸廓内动脉之间的距离,并在此基础之上设计出以胸阔内动脉为蒂的肋软骨肋间肌瓣.结果前胸壁深层各结构均由胸廓内动脉及其分支供血,胸廓内动脉距胸骨外侧缘的距离为1 cm左右.紧挨胸骨外侧缘切开肋软骨,可以避免胸廓内动脉的损伤.以该动脉为蒂,可以保证数种肋软骨肋间肌瓣有良好的血供.结论用以胸廓内动脉为蒂的肋软骨肋间肌瓣修复心脏外科术后的胸壁缺损具有良好的可行性.

    作者:王文林;钟世镇;王武军;蔡开灿;李忠华 刊期: 2001年第02期

  • 亲和素放大促排在抗CEA单抗二步法预定位放免显像中的实验研究

    目的提高抗CEA单抗二步法预定位放免显像的诊断效果.方法荷人结肠癌裸鼠经尾静脉注射生物素化抗CEA单抗100μg,48h后腹腔注射亲和素80μg,0.5 h再经腹腔注射153Sm标记的SA 3.7 MBq/15μg(放大促排组).以二步法(生物素化CEA单抗-153Sm标记链霉亲和素)和153Sm标记的CEA单抗作为对照组.在注射放射性标记物后4和24h进行体外γCT显像和体内标记物分布测定.结果亲和素放大促排组4h即见肿瘤部位浓聚放射性,而对照组无明显显影.亲和素放大促排组瘤/血放射性比值在注药后4h和24h分别为1.55±.0.058和4.62±1.076,高于对照组(二步法组和直接标记法组分别为1.004±0.221和2.028±0.367及0.260±0.084和0.847±0.368).结论亲和素放大促排能迅速降低血本底,提高靶/非靶(T/NT)放射性比值,缩短显像时间,改善显像质量.

    作者:李贵平;朱承谟 刊期: 2001年第02期

  • PTCA、支架植入治疗缺血性心肌病心力衰竭

    目的探讨冠状动脉再灌注治疗缺血性心肌病(ICM)心力衰竭的效果.方法确诊为ICM心力衰竭患者44例,按有无行介入冠脉再通治疗(PTCA)分为内科药物治疗组(简称常规组)和PTCA、支架治疗组(简称介入组).常规组20例行内科综合治疗,介入组24例均行PTCA,必要时放置支架.结果经28.1±20.9(1~102)月随访,两组病人症状均有不同程度的改善,介入组心功能改善和左室、左房缩小程度明显大于常规组(P<0.05);介入组射血分数明显提高(P<0.05),常规组则无明显变化.随访期内常规组再住院次数明显高于介入组,分别为4.8±1.2次和2.1±0.8次,且常规组总住院费用高于介入治疗组,并有6例死亡(33.3%),死因多为顽固性心力衰竭;而介入组仅有2例死亡(14.3%),且均非心力衰竭所致.结论 ICM心力衰竭为一进展性疾病,预后差,常规治疗效果一般,病死率较高;PTCA、支架置入术是治疗该病的有效方法,对于EF<40%的患者成功率较高,也较安全.

    作者:李公信;傅向阳;刘映峰;钱学贤;赵霞 刊期: 2001年第02期

  • 手术治疗多发性脑膜瘤(附16例报告)

    目的探讨Ⅰ期和分期手术对多发性脑膜瘤的疗效.方法回顾性分析经手术治疗的多发性脑膜瘤16例,手术均按Simpson分级行Ⅰ、Ⅱ级全切除,其中Ⅰ期手术切除13例,分期手术3例.结果 16例随访1~7年,复发3例,其中2例为分期手术病例.结论手术治疗仍是多发性脑膜瘤佳治疗方法,无论是双发还是多发病例,好行Ⅰ期手术全切除,防止新病灶产生和肿瘤复发.

    作者:欧阳辉;邱炳辉;漆松涛;黄胜平;方陆雄;张嘉林 刊期: 2001年第02期

  • 肝纤维化血清指标与慢性肝炎肝组织炎症及纤维化的相关性

    目的探讨血清透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、层粘蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)等肝纤维化血清学指标与慢性肝炎肝组织炎症活动度及纤维化程度的相关性.方法 278例慢性肝炎患者经肝脏活检行常规病理检查,肝活检前采血检测血清HA、PCⅢ、LN、Ⅳ-C水平.结果肝组织纤维化程度与炎症活动度呈正相关;HA可反映中度以上慢性肝炎炎症活动及肝纤维化,并与之呈正相关;肝脏存在纤维化时LN水平升高,与肝纤维化程度呈正相关;PCⅢ、Ⅳ-C水平升高与炎症活动度有关.结论血清HA、PCⅢ、LN、Ⅳ-C水平均不同程度反映肝组织纤维化程度,可作为血清肝纤维化检测指标;HA更能反映肝硬化发展趋势.

    作者:黄莉萍;陈永鹏;丁红兵;吴爱华 刊期: 2001年第02期

  • 假肥大型肌营养不良的分子生物学和基因诊断

    假肥大型肌营养不良(D/BMD)是一种等位基因X-连锁隐性遗传病,本文综述了D/BMD基因的定位、结构、突变和致病机理,并重点阐述了目前对D/BMD携带者检测和产前诊断几种基因诊断方法的适用范围和各自的优缺点.

    作者:刘咏梅;封志纯;方振伟 刊期: 2001年第02期

  • 颈静脉孔区骨巨细胞瘤1例

    1 临床资料患者,男,25岁,因头痛、呕吐2月,声嘶、吞咽困难十余天于1998年11月25日入院.查体:左周围性面瘫,左耳传音性耳聋,左角膜反射迟钝,左半面部感觉减退,左软腭抬举无力,舌前2/3味觉减退,伸舌左偏,口角右歪.头颅CT及MRI检查提示左颈静脉孔区占位病灶,大小4.4cm×2.9cm×4.1cm,明显强化,边界尚清,伴骨质破坏.入院后在神经安定麻醉下行全脑血管造影,显示肿瘤染色丰富,呈团块状,由左枕动脉、左咽升动脉及左椎动脉肌支参与供血,左乙状窦、颈静脉完全闭塞.采用300μmPVA经导管分别超选于左枕动脉、左咽升动脉分支实施栓塞,瘤染色基本消失.栓塞后3d,在全麻下取左乳突后切口行肿瘤切除术,见肿瘤侵犯乳突内岩锥中外1/3、颈静脉孔周围颅骨,累及硬脑膜及整个乙状窦,并突入硬膜内,瘤组织呈鱼肉状,出血不多,仔细分离并保留后组颅神经,将肿瘤组织及受累颅骨次全切除.病理报告:骨巨细胞瘤Ⅰ-Ⅱ级.术后一目,病人突发呼吸困难,气管切开后症状缓解.两周后复查头颅CT,示肿瘤少许残留,行X-刀治疗.经抗炎、对症处理,病人精神、饮食好转,发声、吞咽恢复正常,左软腭抬举有力,面瘫、左耳听力障碍等症状未加重.

    作者:汪求精;柯以铨;李铁林;徐如祥 刊期: 2001年第02期

  • 一种简易高效的大鼠胰岛分离纯化方法

    目的探索一种高效、高纯度大鼠胰岛分离纯化方法,并研究纯化后的胰岛细胞在体内外环境中的基本生物学功能状况.方法采用Hanks液经胰管内注射法机械性扩张破坏大鼠胰腺的腺泡组织,然后将其剪碎置于含1 g/L胶原酶的Hanks液中,于37℃中静止消化25~30min后移入含10%胎牛血清的RMPI-1640完全培养液中,24℃短期培养,Ficoll-400非连续密度梯度液离心纯化胰岛,纯化后的胰岛进行异种移植.结果经Ficoll-400纯化后,平均每只成年Wistar大鼠胰腺能获得920~1 230个胰岛,纯度可达98%以上;在葡萄糖刺激下胰岛素释放量约为基础分泌水平的2.2倍(P<0.001)纯化后的胰岛异种移植可逆转实验性糖尿病BALB/C小鼠的高血糖平均达(8.7±1.6)d.结论胰腺清化物经短期培养后再透行胰岛纯化的方法具有耗酶量少、技术难度小、胰岛纯度和产率及活率高的特点,是一种简便易行的高效分离纯化方法.

    作者:张桦;蔡德鸿;徐春生;陈宏;刘宏 刊期: 2001年第02期

  • 流行病SIR模型的进一步研究

    通过对流行病SIR模型的进一步研究,得出了SIR模型的几个重要指标.Vsate是决定流行病是否发生的阈值;Imax是当流行病发生后被感染者的大数目;Rtotal是被感染者得到免疫后恢复为正常人的全部人数.另外,得到了一个全局稳定的平衡点.

    作者:颜刚 刊期: 2001年第02期

  • 一种新型脂质体的制作方法

    目的制备独立于药物的新型脂质体.方法在脂质体悬液中加入骨架物,冻干,制成超微孔分子膜,遇水即可成脂质体.结果和结论冻干法制备的脂质体便于运输、贮存,药物包裹简易.

    作者:胡俊;章康;冯筱榕;陈永鹏;刘定立 刊期: 2001年第02期

  • 低强度毫米波对血流动力学特性的影响

    目的研究低强度超高频电磁波的细胞生物学非热效应,为后续实验确定理想照射强度和照射时间.方法取35例健康人血样(每例共20 m1)分为3组,分别采用8 mW/cm2(n=12)、5 mW/cm2(n=12)及2 mW/cm2(n=11)3档照射强度进行用低强度毫米级电磁波(波长8mm,频率37.5 GHz)照射,照射时间分别为15、30和60min.结果血液在低强度毫米波照射下,血流动力学特性指标,包括血液粘度及红细胞的变形性和聚集性等都有不同程度的改变.结论微波对血液有非热效应作用,微波的照射强度和照射时间都可以影响其效应.

    作者:吴瑛;赖声礼 刊期: 2001年第02期

  • 胆胰管疾病的磁共振胆胰管成像诊断

    目的探讨磁共振胆胰管成像(MRCP)的临床诊断价值.方法对48例结石、胆管癌、胰头癌、炎症及其它胆胰管病变的MRCP图像进行分析.结果胆胰管结石的MRCP表现为胆胰管高信号胆汁、胰液内大小、形态不同的低信号改变,肝内胆管结石可见结石局部胆管撑大表现,胆总管结石可见倒量杯口状低信号改变;胆管癌阻塞端可显示为截断状或鼠尾状改变;胰头癌可见胆总管下段突然变窄或移位;胆管炎除见肝外胆管轻度扩张表现外,胆总管下端形态基本正常;胰腺炎可显示为串珠状胰管扩张、假性囊肿.本组MRCP定性诊断率为88.1%.结论 MRCP在胆胰管疾病的诊断中具有重要的应用价值.

    作者:全显跃;梁文;虞春堂;曾盛;贾洪顺 刊期: 2001年第02期

南方医科大学学报杂志

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