学术投稿

优化PCR条件扩增人IL-10 cDNA及其原核表达载体构建

李明才;何韶衡;陶爱林

关键词:聚合酶链反应, 白细胞介素10, 热启动, 退火温度
摘要:目的:探讨PCR扩增人IL-10基因片段的佳反应条件并构建人IL-10原核表达载体.方法:运用降落PCR扩增5'端GC含量高的人IL-10基因片段,主要对退火温度和热启动等因素进行优化选择;载体和PCR产物经拓扑TA克隆技术连接,常规方法转化、筛选阳性重组质粒.结果:PCR反应的佳退火温度为68.5℃,此时扩增出的DNA片段大小符合预期设想,并通过菌落PCR和DNA测序得到证实.结论:在上述条件下获得的PCR产物纯度高、非特异性产物少,成功地构建了人IL-10原核表达载体.并提示降落PCR是一种潜在的一步找到佳扩增条件的方法.
实用医学杂志相关文献
  • 人类肿瘤组织线粒体基因D310区域的单核苷酸重复序列变异

    目的:拟对线粒体基因D环区的一个特异和高度多态性的D310多聚C区域的变异情况进行评估.方法:对149例肿瘤组织和匹配的正常组织的线粒体基因D环区进行PCR扩增,并同时进行时相温度梯度凝胶电泳扫描和D310区域的序列测定.结果:43个(28.86%)肿瘤具有D310单核苷酸重复区的体细胞性插入或缺失突变,其中绝大部分为1-2 bp插入或缺失,与以前报道的该区域多态性变化一致.约34.9%肿瘤组织中的突变为同质状态,65.1%处于异质状态.结论:线粒体基因D310单核苷酸重复区变异在人类肿瘤组织中是一个常见的现象.

    作者:谭端军;刘玲玲;卢才义;刘鹏;Julia Chang;Kun-Tu Yeh;Lee-Jun C Wong 刊期: 2003年第11期

  • 电气化加丝裂霉素C膀胱灌注治疗腺性膀胱炎45例

    自1995年开始,我院采用经尿道电气化加丝裂霉素C膀胱灌注治疗腺性膀胱炎45例,疗效满意,复发率低.

    作者:简百录;邓小枫;张康泰;王亚晖;宦启明 刊期: 2003年第11期

  • 小儿紫癜性肾炎ACE基因多态性及其血清ACE分析

    目的:探讨小儿紫癜性肾炎(Henoch-schonlein purpura nephritis,HSPN)与ACE基因第16内含子插入/缺失多态性、血清ACE活性的关系.方法:采用聚合酶链式反应(PCR)检测72例小儿紫癜性肾炎患儿和58例正常儿童ACE基因并同时用酶偶联法测血清ACE活性.结果:(1)72例小儿紫癜性肾炎患儿中ACE基因Ⅱ型,ID型和DD型频率分别为27.8%(20/72),25%(18/72)和47.2%(34/72).58例正常儿童ACE基因Ⅱ型,ID型和DD型频率分别为46.5%(27/58),29.3%(17/58)和24.2%(14/58).(2)小儿紫癜性肾炎患儿和正常儿童之间ACE基因I/D多态性频率差异有显著意义(P<0.01).小儿紫癜性肾炎患儿和正常儿童血清ACE活性比较差异没有显著意义(P>0.05).ACE各基因型中血清ACE活性DD型>ID型>Ⅱ型,差异有显著意义.结论:小儿紫癜性肾炎患儿ACE基因多态性与正常儿童分布不同,DD型的发生频率明显高于正常儿童.小儿紫癜性肾炎患儿血清ACE活性与正常儿童没有差异.

    作者:万根平;高岩;顾晓琼 刊期: 2003年第11期

  • 医务人员职业暴露的危害

    据卫生部新闻办公室通报,截至5月19日,我国内地累计报告非典型肺炎临床诊断病例5 236例,其中医务人员960例,占发病人数的18.3%.使人们深深感受到医务人员的职业危险性.然而,医务人员在日常工作中因职业暴露受到的危害,则鲜为人知.

    作者:周永红;白朝晖;白萍 刊期: 2003年第11期

  • 选择素在急性炎症反应中的作用

    1细胞粘附分子概述细胞粘附分子(cell adhesion molecules,CAMs)是泛指一类介导细胞与细胞或细胞与细胞外基质(extracellular matrix,ECM)间相互结合,起粘附作用的膜表面或膜外糖蛋白.CAMs的种类很多,目前根据CAMs的化学结构和功能特点将其分类为:(1)选择素家族(selectin family);(2)整合素家族(integrin family);(3)免疫球蛋白超家族(immunoglobulin supeffamily,IGSF);(4)钙粘附素家族(cadhedn family);(5)尚未被归类的细胞粘附分子,如CD44、CD36等.主要位于血管内皮细胞和各种白细胞表面.

    作者:潘景业;金可可;陈雷;傅国胜 刊期: 2003年第11期

  • 急性白血病并发糖尿病的护理

    化疗是治疗恶性血液病的重要方法,但在治疗过程中,常并发糖尿病.轻者治疗中断,延误原发病治疗,重则引起代谢紊乱,糖尿病性昏迷、甚至死亡.因此在恶性血液病治疗过程中,通过有效的护理措施,及时发现糖尿病并发症,是保证完成治疗的基础,也是取得良好疗效的前提.现将护理体会报告如下.

    作者:黄稳静;陈明 刊期: 2003年第11期

  • 胰腺横断伤的处理及并发症防治

    目的:探讨胰腺横断伤的手术方式选择及并发症的防治.方法:回顾性分析9例胰腺横断伤的临床资料.结果:治愈8例,死亡1例.并发症:胰瘘2例,胰腺假性囊肿1例,腹腔脓肿2例,应激性溃疡1例,ARDS 1例.结论:手术探查为诊断胰腺横断伤的重要手段之一;其手术方式的选择取决于损伤的部位、程度及有无合并伤;术式的正确选择,术中严密止血、合理切除、疏通胰管、充分引流,是防止并发症的重要措施.

    作者:曹胜华;胡志前;陈芝翠;黄家财;郭启智;邓益文 刊期: 2003年第11期

  • 肥胖症脂肪组织表达蛋白差异筛选初步研究

    目的:比较肥胖症患者和非肥胖对照者脂肪组织蛋白表达的差异.方法:采用蛋白双向凝胶电泳技术分离脂肪组织总蛋白,PD-Quest软件分析电泳结果,选择有显著差异的蛋白点做介质辅助的激光解吸飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析.结果:两种脂肪组织标本大部分蛋白点匹配,经MALDI-TOF-MS分析和数据库搜索有一个未知蛋白和两个已知序列蛋白在两种脂肪组织的表达差异有显著性.结论:双向凝胶电泳技术和MALDI-TOF-MS是进行脂肪组织蛋白质组研究的有效手段,通过分析这些表达有差异的蛋白质可以进一步明确肥胖症的病因,为药物治疗提供新的靶点.

    作者:尹晓;刘志芬;王璇;骆天红;李果;罗敏 刊期: 2003年第11期

  • 我院182株血培养病原菌种类及耐药性分析

    目的:探讨近年败血症患者病原菌种类及耐药情况.方法:采用VITAL200全自动血培养仪及ATB自动微生物鉴定仪、VITEK-32全自动微生物鉴定仪,对近一年来所检出的182株血培养病原菌及耐药性分析.结果:引起败血症的主要病原菌为葡萄球菌30.2%、大肠埃希氏菌13.7%,抗生素耐药率高为青霉素、红霉素、复方新诺明.结论:葡萄球菌是败血症的主要病原菌,青霉素、红霉素、复方新诺明已不太适合作为我院抗感染的治疗药物.

    作者:黄淑萱;源孔文;潘练华 刊期: 2003年第11期

  • 稳定转染融合基因TFL舌癌细胞系的建立及辐射敏感性实验

    目的:构建含FADD及TNFR1基因功能结构域的融合基因TFL,稳定转染入人舌鳞状细胞癌细胞系(Tca-8113)中,检测建系细胞T-TFL的生物学性状,并初步观察T-TFL细胞对辐射的敏感性.方法:反转录PCR获得人FADD及TNFR1基因cDNA,重组PCR法构建含二者功能结构域的融合基因TFL;阳离子脂质体法稳定转染TFL基因入Tca-8113细胞中,Westem blot检测融合蛋白TNFR1/DED表达,通过生长曲线检测T-TFL细胞的生物学性状;MTT法检测γ射线对T-TFL细胞的作用效应.结果:获得了人FADD及TNFR1基因并构建成功融合基因TFL,转染入Tca-8113细胞后,能表达融合蛋白TNFR1/DED活性,且T-TFL细胞与亲本Tca-8113细胞的生物学性状无明显差异,T-TFL细胞明显增强了对辐射的敏感性.结论:T-TFL细胞能增强对辐射的敏感性,为进一步临床应用提供实验基础.

    作者:刘大庆;司徒镇强;周树夏;王成济;杨安钢 刊期: 2003年第11期

  • 阿霉素神经干注射联合远中枢段神经撕脱术治疗三叉神经痛临床观察

    目的:探讨治疗三叉神经痛的新方法以求提高疗效.方法:对33例三叉神经痛患者采用手术方法游离出三叉神经周围支,将神经干切断后对近中枢段行阿霉素注射,对远中枢段采用神经撕脱术.结果:33例患者中32例于术后7 d内三叉神经痛症状消失或明显减轻,1例于术后2周疼痛消失,近期疗效满意.结论:对三叉神经痛患者采用神经干近中枢段阿霉素注射及远中枢段撕脱术可取得较好的治疗效果.

    作者:王石光;牛书铭;汪维健 刊期: 2003年第11期

  • 人体必需脂肪酸摄入平衡的临床研究进展

    多不饱和脂肪酸对人类来讲,是一种必需脂肪酸,是指含有两个或两个以上不饱和双键的长键脂肪酸,根据其结构中甲基端起第一个不饱和双键所联结的碳原子在碳链中的位置不同,将此分为n-3、n-6、n-9等系列.人们认识它已有70多年的历史,早期工作的重点在n-6系列中,它包括亚油酸(LA)和花生四烯酸(AA),它是生长、生殖和维护正常皮肤所必需的.近,通过研究可知n-3系列中α-亚油酸(ALA)和二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)对人体更为重要.

    作者:严文波;施诚仁 刊期: 2003年第11期

  • 临产妇女纤维蛋白原水平分析

    目的:检测临产前孕妇血浆纤维蛋白原(fibrinogen,Fbg)水平,以探讨Fbg增高易诱发产妇发生血栓性疾病的临床价值.方法:采用全自动血液凝固仪,检测了63例临产妇,40例中期孕妇及50例正常未孕妇女的血浆Fbg水平.结果:临产组血浆Fbg水平明显高于中期妊娠组和正常未孕组(P<0.01),中期妊娠组也高于正常未孕组(P<0.01).结论:高Fbg是妇女分娩前、中、后并发血栓性疾病的独立危险因素之一,及时观察并给予干预性预防和治疗,对提高产妇的生存质量,减少并发症有较实用的意义.

    作者:王融;唐希才;关秀珍 刊期: 2003年第11期

  • 传染性非典型肺炎83例临床特点

    目的:了解传染性非典型肺炎(SARS)临床特点.方法:回顾分析我院2003年2月9日至5月26日收治的83例SARS患者的临床特征.结果:83例患者男37例、女46例,年龄17~74岁、平均年龄(40.0±14.5)岁.42例(50.6%)有密切接触史,100%有发热症状,20例(24.1%)38.0~39.0℃,59例(71.1%)39.0℃以上,平均热程(11.7±7.6)d,同时伴有咳嗽、畏寒等;78例(94.0%)血WBC正常或降低,46例(55.4%)淋巴细胞低于正常范围以下;胸片多数表现絮状、磨砂玻璃样渗出性阴影,病灶多在下肺野,55例(66.3%)呈多叶病灶,62例(74.7%)重症患者,平均(16.6±6.1)d病灶吸收好转,3例死亡,病死率3.6%,结论:SARS具有传染性,发热为主要症状,血WBC正常或降低,胸片多数表现渗出性阴影,多侵犯下肺野以及多叶病变,主要以综合治疗为主.

    作者:邝浩斌;谭守勇;李德宪;王维勇;陈志宏;何刚 刊期: 2003年第11期

  • 原发性高血压杓型与非杓型患者动态血压变异性分析

    目的:探讨原发性高血压杓型与非杓型患者的动态血压变异性及临床意义.方法:112例原发性高血压患者分为两组,杓型组52例,非杓型组60例,42例正常人作对照组.对3组的血压均值和血压变异性进行分析比较.结果:高血压组的24 h-SBP、24 h-DBP、d-SBP、d-DBP、n-SBP、n-DBP差异均高于对照组,杓型组与非杓型组的24 h-SBP、24 h-DBP、d-SBP、d-DBP差异无显著意义,而夜间收缩压与舒张压差异明显.杓型组与非杓型组的24h-SSD、24 h-DSD、d-DSD差异有显著意义,非杓型组低于杓型组.结论:血压变异性与血压均值水平应同时评价.

    作者:陈效畅;邝健 刊期: 2003年第11期

  • 纳洛酮治疗重型颅脑损伤的实验研究

    目的:探讨纳洛酮对实验性颅脑损伤大鼠血浆内啡肽(β-EP)、内皮素(ET)及脑水肿变化的影响及临床意义.方法:Wistar大鼠63只,随机分为实验组、对照组、空白组,自由落体法制作重型颅脑损伤模型.伤后半小时实验组大鼠腹腔注射纳洛酮(苏诺)10 mg/kg,对照组注射生理盐水,分别于伤后1、3、8、24 d处死,以干湿重法检测脑水肿的变化,放免法监测血浆β-EP、ET改变.结果:实验组脑水肿程度较对照组轻,血浆β-EP、ET轻度升高,与对照组比有统计学差异.结论:纳洛酮可以降低实验型重型颅脑损伤大鼠血浆β-EP、ET的浓度,减轻脑水肿.

    作者:巴特尔;李兴勇;王维平;张建生;丁永忠 刊期: 2003年第11期

  • 听神经瘤的立体定向放射手术

    目的:评价伽玛刀(γ-刀)立体定向放射手术对听神经瘤的治疗效果.方法:用LekseⅡγ-刀治疗听神经瘤119例,并随访1~5年.扫描定位用1.5 Tesla磁共振仪,剂量规划系统为γ-plan4.0版.肿瘤体积0.02~20.8 cm3,周边剂量9~17Gy,平均13.1 Gy;中心剂量18~45 Gy,平均32.3 Gy;靶点数2~10个,平均4.2个.结果:肿瘤体积缩小95例(79.8%),其中显效16例(13.4%),无变化14例(11.8%),增大10例(8.4%).61例(51.3%)听力有保存,11例(9.2%)听力有改善;5例半年后出现面瘫,1例持续5周后消失,2例经再次手术后好转,另外2例有永久面瘫;3例病人出现三叉神经痛,2例为一过性,1例服药好转.结论:伽玛刀治疗对听神经瘤具有良好的控制生长作用,尤其适合体积<6.5 cm3及不宜开颅手术的病人,对颅神经的损伤风险低,是一种安全有效的治疗方法.

    作者:梁军潮;王伟民;吴鸿勋;蒋晓星;李天栋;张聿浩;贺道华;覃子衡;周丽兰 刊期: 2003年第11期

  • 骨髓间质干细胞在治疗心肌梗死中的应用

    一系列的研究表明在成人骨髓中有多种分化潜能的干细胞,它们展示了巨大的功能可塑性,可在新的微环境中生成新的组织所必需的细胞株.这种现象对心肌的生理有巨大的影响,科学家在研究中发现具有多向分化潜能的造血干细胞和间质干细胞可以在啮齿类动物缺血心肌中分化成活并且分化为心肌细胞和血管[1].MSCs易于分离和体外培养扩增,易于外源基因的导入和表达,移植后不需免疫治疗,骨髓再生能力强,易于反复获取,使得其成为细胞替代治疗和基因治疗的理想选择,具有重要的应用前景.

    作者:张勇;蔡振杰;张广福 刊期: 2003年第11期

  • AAI及DDD型起搏器和胺碘酮联合治疗心动过缓并阵发心房纤颤的观察

    目的:观察AAI及DDD型起搏器和胺碘酮联合治疗心动过缓并阵发心房纤颤的效果及安全性.方法:15例患者均行左锁骨下静脉穿刺,成功安装AAI或DDD型起搏器后,按标准方案给予胺碘酮治疗:负荷量0.2g,每天3次,7 d;继以0.2 g,每天2次,7 d;维持量为0.1~0.2 g,每天1次,长期维持.结果:1例囊袋积血,钝性分离伤口1.0 cm清除积血后痊愈,其余病例未出现并发症.随访6~102个月,均获显效,随访期间未发现起搏器的并发症和胺碘酮的副作用;电极导管植入即时、术后3个月和术后6个月的起搏阈值(固定脉宽0.5 ms)心房电极分别为(0.55±0.04)V,(0.62±0.04)V,(0.56±0.04)V;心室电极分别为(0.49±0.09)V,(0.61±0.06)V,(0.69±0.07)V.结论:AAI及DDD型起搏器和胺碘酮联合治疗心动过缓并阵发心房纤颤疗效好、安全.

    作者:靳晨亭;周万兴;陆蕙;刘群峰 刊期: 2003年第11期

  • 肿瘤放疗病人的出院指导

    我们从2002年3月开始对181例放疗病人实施了正规的出院指导,经临床实践,效果良好.现报告如下.

    作者:董淑华 刊期: 2003年第11期

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