学术投稿

胎儿附属物来源细胞的培养冻存

余旭明;薛志刚;戴国胜;徐旭;陈万安;范锟铻;梁德生;夏家辉

关键词:脐带, 胎盘, 细胞培养技术, 低温保存, 二甲亚砜
摘要:目的 研究从胎儿附属物中分离培养及冻存细胞的较佳方法,以期为组织工程、细胞治疗和基因治疗提供种子细胞.方法 取足月产胎儿脐带和胎盘,用酶消化法获得细胞,用相应培养液进行培养传代.将胎盘、脐带组织块冻存,检测加入不同浓度抗冻剂二甲亚砜的组织复苏后的活细胞率,透射电镜下观察其超微结构,并与新鲜组织进行比较;冻存培养所得人脐带血管周细胞和胎膜贴壁细胞的原代细胞,用免疫化学法检测冻存前后各自免疫表型的表达.结果 新鲜脐带组织活细胞率为67.0%,抗冻剂体积分数为5%、10%、15%、20%时,冻存复苏脐带组织的活细胞率分别为23.4%、55.5%、48.8%、31.8%.抗冻剂体积分数为10%时,冻存复苏组织与新鲜组织活细胞率接近(P>0.05),体积分数为5%和20%时与新鲜组织该指标比较,差异均有统计学意义(P<0.01);透射电镜观察结果与之吻合.胎盘组织与脐带组织的情况类同.细胞冻存后免疫表型无明显变化.结论 本方法可以从胎儿附属物中分离培养出大量种子细胞,冻存复苏后细胞免疫表型未发生改变,抗冻剂体积分数为10%时效果好.
中华烧伤杂志相关文献
  • 小儿烫伤并发急性肾功能衰竭二例

    例1 女,1岁6个月.热面汤烫伤后5 d(无尿33 h)收入笔者单位.查体:体温37.5℃,脉搏149次/min,呼吸40次/min,血压96/61 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa);创面分布于会阴、臀部及双下肢;血钾3.31 mmol/L,血钠130.0mmol/L,血氯105.0 mmol/L,尿素氮19.8 mmol/L,肌酐390μmol/L.人院当天患儿尿量为10 ml,静脉输入呋塞米10mg后尿量未增加.

    作者:丁楠;齐鸿燕 刊期: 2007年第06期

  • 鼠神经生长因子促进大张移植皮片感觉康复的临床研究

    目的 观察局部应用鼠神经生长因子(NGF)对大张移植皮片感觉神经末梢再生过程的影响.方法 选择中小面积烧伤和需行瘢痕整形术的成年患者48例共60处创面,随机分为NGF组、对照组(各30处).NGF组术前采用含鼠NGF的等渗盐水(9000 AU/100 ml)纱布包裹皮片,术后用100 ml该盐水行皮片下冲洗;术后20 d起,于移植皮片下多点微量注射NGF,隔日1次,持续1个月.对照组单纯用等量等渗盐水作相同处理.检测术后12个月内移植皮片的两点辨别比并行皮片感觉功能评级.采集再次行整形术患者的术区组织标本行组织病理学检查,观察神经末梢再生和分布情况.结果 术后12个月,NGF组17处皮片达S4级、两点辨别比为1.11±0.14,而对照组仅5处皮片达S4级、两点辨别比为1.56±0.73(P<0.05或P<0.01);其余各时相点2项指标组间差异与之相似.术后6个月,NGF组可在皮片移植区的微血管床、瘢痕结节旁的疏松组织间隙和移植皮片下的瘢痕组织中,见到丰富的感觉神经末梢,附件结构也较为完整;对照组上述组织中神经末梢纤细,稀少.结论 局部应用NGF可加速感觉神经末梢的再生,促进移植皮片的感觉恢复.

    作者:吴志宏;黄静;高微虹;王爱丽;贾卿;陈波;徐顺;顾耀辉 刊期: 2007年第06期

  • 正常人皮肤Ⅰ型Ⅲ型胶原定量测定

    目前已有几种较常用的胶原蛋白测定方法,但仅为定性或半定量分析,结果有失精确,操作较复杂,对实验设备要求较高.笔者将羟脯氨酸法和免疫组织化学法相结合(以下简称结合法)测定正常人皮肤Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的含量,并校正相对粗略的盐析法结果,以期建立一种操作简便、精确度高、重复性好的Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白测定法.

    作者:王成;张国安;荣艳华 刊期: 2007年第06期

  • 胰岛素样生长因子Ⅰ对大鼠缺血缺氧心肌细胞凋亡的影响

    目的 了解胰岛素样生长因子I(IGF-I)对缺血缺氧致心肌细胞凋亡的影响,探讨其调控机制.方法 分离培养SD乳鼠的心肌细胞.于制备缺血缺氧心肌细胞模型(缺血缺氧组)前1 h,用IGF-I(200μg/L)进行干预(干预组),以缺血缺氧组致伤前测定结果为正常对照(对照组).观察不同时相点心肌细胞凋亡的吸光度(A)值、线粒体膜电位变化及磷酸化Akt蛋白表达变化.结果 对照组心肌细胞凋亡A值为0.18±0.03;缺血缺氧后1、3、6、12 h分别为0.33±0.05、0.61 ±0.06、1.17±0.08、2.25±0.11,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01);干预组上述时相点的A值分别为0.26±0.04、0.49±0.05、0.84±0.06、1.63±0.09,与缺血缺氧组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01).缺血缺氧6、12 h,心肌细胞线粒体膜电位荧光强度较对照组40.2±10.1下降,分别为18.7±5.1、6.3±1.9(P<0.01),干预组较缺血缺氧组相对增高,分别为28.8±6.2、12.5±3.1(P<0.05).与对照组比较,其余各组缺血缺氧后6 h磷酸化Akt蛋白表达量增加.结论 IGF-I对缺血缺氧心肌细胞具有抗凋亡作用,其机制可能与IGF-I激活磷脂酰肌醇3-激酶/Akt、增加磷酸化Akt表达、减少细胞色素c的释放有关.

    作者:宋华培;颜洪;张东霞;褚志刚;张琼;黄跃生 刊期: 2007年第06期

  • 治疗Ⅲ度烧伤面积≥80%TBSA患者19例

    1986年5月-2006年5月,笔者单位共收治19例Ⅲ度面积≥80%TBSA的烧伤患者,其中8例救治成功,现总结如下.

    作者:李淑荣 刊期: 2007年第06期

  • 四君子汤药膳对严重烫伤大鼠免疫功能紊乱的调理作用

    目的 了解四君子汤药膳对严重烫伤大鼠免疫功能紊乱的调理作用.方法 将90只健康Wistar大鼠造成30%TBSAⅢ度烫伤后,按照完全随机法分为药膳喂养组30只、肉汤喂养组30只、常规喂养组30只;另设对照组10只(模拟烫伤).药膳喂养组大鼠烫伤后按常规复苏及处理创面,分笼饲养,并于伤后2 h开始向胃内灌注37℃的四君子汤药膳,2 ml/次、2次/d;肉汤喂养组除灌注肉汤外,其余处理同前;常规喂养组伤后常规处理,自由进食、饮水.前3组大鼠于伤后3、7、14 d检测T淋巴细胞亚群和天然杀伤(NK)细胞的活性,血浆IgA、IgG、IgM、C 3、C 4水平,肠道分泌型IgA(sIgA)水平;对照组亦行相应检测.结果 前3组大鼠伤后大部分时相点各项指标(除CD8+T淋巴细胞活性外)均低于对照组(P<0.05或P<0.01).伤后3~14 d,药膳喂养组sIgA水平为(50±8)~(57±11)μg/ml,明显高于其他2个致伤组水平(P<0.05或P<0.01);其余免疫指标组间比较结果与此相似.结论 四君子汤药膳可以改善严重烫伤大鼠T淋巴细胞亚群的分布,提高NK细胞活性,促进血浆IgA、IgM、IgG、C 3、C 4水平的恢复和肠黏膜细胞slgA的分泌,从而改善机体免疫功能.

    作者:詹剑华;严济;陶卫斌;游浩元 刊期: 2007年第06期

  • 增生性瘢痕中基质金属蛋白酶及其抑制因子基因的表达

    目的 了解基质金属蛋白酶2(MMP-2,又称明胶酶A)、MMP-9(又称明胶酶B)及其金属蛋白酶1组织抑制因子(TIMP-1)在增生性瘢痕不同形成时期的基因表达.方法 提取16例人体不同时期增生性瘢痕样本和8例正常皮肤样本总RNA,分离mRNA,用反转录-聚合酶链反应法检测MMP-2、MMP-9和TIMP-1基因在不同样本中的表达.结果 在正常皮肤中MMP-2、MMP-9和TIMP-1基因转录产物的灰度比值分别为(3.8±0.7)%、(5.8±4.4)%、(30.3±3.0)%,在增殖期瘢痕中分别为(13.5±4.5)%、(18.4±4.7)%、(37.7±4.3)%,明显高于正常皮肤(P<0.05).成熟期瘢痕MMP-2和MMP-9基因表达量已恢复至正常水平,但TIMP-1基因较正常皮肤仍持续高表达(P<0.05).结论 MMP-2、MMP-9和TIMP-1基因表达增强可能是增生性瘢痕形成的机制之一,MMP-2和MMP-9基因表达降低可能与增生性瘢痕达到相对稳定的成熟状态有关.

    作者:谢晓繁;贺立新;郝晓凤;陈璧;贾赤宇;孙志刚;曹玉珏;李冬海 刊期: 2007年第06期

  • 烧创伤后免疫功能障碍识别研究进展

    脓毒症是烧(创)伤后的严重并发症之一.欧洲一组临床流行病学资料显示,2527例全身炎性反应患者中,脓毒症发生率为26.0%,病死率16.0%.笔者曾回顾性分析了1970-1999年烧伤面积>30%TBSA的657例患者,并发脓毒症者占36.4%.

    作者:于燕;杨红明;姚咏明 刊期: 2007年第06期

  • 脂肪细胞因子的免疫功能研究进展

    长期以来脂肪组织被认为是储存体内剩余能量的器官.自从发现脂肪细胞能够分泌细胞因子和激素后,人们认识到脂肪组织具有重要的内分泌功能,并把由脂肪细胞分泌的生物活性物质统称为脂肪细胞因子.随着研究的深入,人们了解到脂肪组织与免疫反应亦有密切联系,脂肪细胞因子在炎性反应中发挥着重要作用.理解把握相关作用机制,可能会对烧伤患者全身、局部的免疫反应及严重烧伤后胰岛素抵抗等相关机制的研究有更加全面的认识.

    作者:杨崇志;胡大海 刊期: 2007年第06期

  • 高迁移率族蛋白B1诱导小鼠腹腔巨噬细胞凋亡的受体机制

    目的 了解高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对小鼠腹腔巨噬细胞凋亡的影响及其受体机制.方法 分离培养小鼠腹腔巨噬细胞,在巨噬细胞中加入不同的刺激物,分为HMGB1组:加入10 μg/ml的HMGB1;HMGB1+抗晚期糖基化终末产物受体(RAGE)组:先加入RAGE多克隆抗体5μg/ml孵育2 h后,再加入HMGB1;HMGB1+重组鼠(rm)RAGE/Fc组:将10 μg/ml的HMGB1与10μg/ml的rmRAGE/Fc混合作用2 h后,再加入巨噬细胞;对照组:加入磷酸盐缓冲液.采用流式细胞仪检测细胞表面RAGE的表达强度.激光共聚焦显微镜观察细胞凋亡情况,流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 HMGB1组RAGE阳性细胞率(54±12)%明显高于对照组[(13±5)%,P<0.01],其荧光强度(126±10)也显著高于对照组(34±8,P<0.01).HMGB1+rmRAGE/Fc组、HMGB1+抗RAGE组凋亡细胞明显多于对照组,而HMGB1组晚期凋亡及坏死细胞明显多于其他3组.HMGB1组细胞凋亡率(39.5±2.3)%高于HMGB1+rmRAGE/Fc组[(17.3±3.6)%]、HMGB1+抗RAGE组[(14.8±4.8)%]及对照组[(5.4±2.3)%,P<0.01].结论 HMGB1可诱导RAGE表达上调,RAGE是HMGB1诱导巨噬细胞凋亡的主要受体之一.

    作者:刘峰;姚咏明;董宁;徐珊;盛志勇 刊期: 2007年第06期

  • 喷吸组合盘在创面清洗中的应用

    1 对象与方法1.1 一般资料选择笔者单位收治的胸、背部开水烫伤患者男6例、女3例,年龄20~55岁,烫伤总面积(24±16)%TBSA,深Ⅱ度.LH080Y型氧化电位水生成设备购自江西林河实业有限公司.用无菌等渗盐水与氧化电位水作为清洗液,均选用传统的徒手清洗及喷吸组合盘清洗患者创面.以喷吸组合盘盘口面积(16 cm2)为每次清洗的样本面积.

    作者:王年云;郭光华;史南玫 刊期: 2007年第06期

  • D-氨基半乳糖致敏小鼠内毒素性休克模型的建立

    目的 建立适用于拮抗内毒素/脂多糖(LPS)药物研究的昆明小鼠内毒素性休克模型.方法 将不同剂量的D-氨基半乳糖(D-Gal)及LPS先后注射于小鼠腹腔,根据注射药物不同分为1组:等渗盐水(NS)+LPS 80 mg/kg;2组:Ns+LPS 90 mg/kg;3组:D-Gal 500 mg/kg+NS;4组:D-Gal 500 mg/kg+LPS 25μg/kg;5组:D-Gal 500 mg/kg+LPS 50 μg/kg;6组:D-Gal 500 mg/kg+LPS 250μg/kg;7组:D-Gal 600 mg/kg+NS;8组:D-Gal 600 mg/kg+LPS 10 μg/kg;9组:D-Gal 600 mg/kg+LPS25μg/kg;10组:D-Gal 600 mg/kg+LPS 50 μg/kg.观察注射后小鼠死亡情况,计算其死亡率.选择死亡率100%的剂量组合刺激小鼠,分为对照组:注射D-Gal 600 mg/kg+Ns;LPS组:注射D-Gal 600mg/kg+LPS 50μg/kg.于注射后30、75、120 min取小鼠静脉血,检测其血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平.另取小鼠10只,同前分组,于注射后5 h处死,取其肺、肝、小肠行病理学观察.结果 2、6、10组小鼠死亡率达100%(P<0.01).对照组小鼠血清TNF-α含量保持在较低水平;LPS组伤后各时相点TNF-α含量均显著高于对照组(P<0.01),在注射后75 min时达高峰(6365±2087)ng/L.LPS组小鼠肺、肝、小肠出现明显炎性反应;对照组仅肝脏有轻微病理改变.结论 D-Gal致敏小鼠对LPS的反应符合内毒素性休克的特征,该小鼠模型适用于拮抗LPS的药理学研究.

    作者:高宏富;肖光夏;任建东;夏培元 刊期: 2007年第06期

  • 皮肤混合移植的现状和未来

    1 皮肤混合移植的演变过程皮肤移植是外科修复皮肤缺失的主要方法之一.大面积深度烧伤患者可供移植的自体皮有限,探索相应的皮肤移植技术成为烧伤医学的重要研究课题之一[1].

    作者:彭代智 刊期: 2007年第06期

  • 肠内营养添加谷氨酰胺对烧伤患者的免疫调理作用

    目的 了解烧伤后早期肠内营养添加谷氨酰胺(Gln)对患者免疫调理状态的影响.方法 将24例烧伤患者随机分为2组,每组12例.标准营养(EN)组:给患者喂食标准肠内营养制剂能全力;免疫营养(EIN)组:喂食能全力+Gln.分别于伤后1、4、7、10 d清晨空腹抽血,检测血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、前白蛋白(PAB)、转铁蛋白(TF)和免疫球蛋白IgG、IgA、IgM的浓度以及T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+的比值.结果 伤后各时相点2组患者TP、ALB、TF、CD3+、IgM组间比较,差异均无统计学意义(P>0.05).伤后4、7、10 d,EIN组患者PAB浓度分别为(90±14)、(92±16)、(106±21)mg/L,显著高于EN组(60±15)、(64±13)、(72±17)mg/L(P<0.05).伤后7、10 d,EIN组CD4+细胞百分比为(55±5)%、(56±5)%,明显高于EN组的(45±5)%、(49±5)%(P<0.05);CD4+/CD8+比值为1.92±0.31和2.36±0.36,明显高于EN组的1.53±0.27和1.72±0.42(P<0.05);IgA分别为(2.8±0.6)、(3.1±0.6)g/L,IgG为(12.1±1.3)、(14.2±1.3)g/L,显著高于EN组的IgA[(2.2±0.5)、(2.5±0.5)g/L,P<0.05]和IgG[(9.8±1.2)、(10.4±1.3)g/L,P<0.05].结论 添加Gln的肠内营养制剂可以促进免疫球蛋白IgA、IgG的合成并增加PAB浓度,改善患者营养状况,纠正免疫功能紊乱.

    作者:郭光华;邓志云;王艳霞;邢娟娟;彭燕;李国辉 刊期: 2007年第06期

  • 小腿后侧逆行筋膜蒂皮瓣修复足踝部烧伤五例

    1 临床资料2005年11月-2007年4月,笔者单位收治5例踝部肌腱组织损伤患者,均为男性,年龄21~35岁.其中烧伤2例、热压伤2例、电损伤1例.创面面积6 cm×4 cm-11 cm×8 cm.手术时间为伤后48 h~10 d.

    作者:巴特;王凌峰;曹胜军;张军;荣志东;王宏;侯智慧;孙晶 刊期: 2007年第06期

  • 严重烧伤疼痛治疗研究进展

    烧伤后疼痛与伤后治疗会给患者造成严重的身心负担,疼痛在严重烧伤治愈后还可以持续1年以上.很多大面积严重烧伤患者由于创面换药疼痛而对换药产生恐惧心理,甚至拒绝换药治疗.烧伤患者迫切需要有效的镇痛措施.

    作者:周湘桂;辛国华 刊期: 2007年第06期

  • 胎儿附属物来源细胞的培养冻存

    目的 研究从胎儿附属物中分离培养及冻存细胞的较佳方法,以期为组织工程、细胞治疗和基因治疗提供种子细胞.方法 取足月产胎儿脐带和胎盘,用酶消化法获得细胞,用相应培养液进行培养传代.将胎盘、脐带组织块冻存,检测加入不同浓度抗冻剂二甲亚砜的组织复苏后的活细胞率,透射电镜下观察其超微结构,并与新鲜组织进行比较;冻存培养所得人脐带血管周细胞和胎膜贴壁细胞的原代细胞,用免疫化学法检测冻存前后各自免疫表型的表达.结果 新鲜脐带组织活细胞率为67.0%,抗冻剂体积分数为5%、10%、15%、20%时,冻存复苏脐带组织的活细胞率分别为23.4%、55.5%、48.8%、31.8%.抗冻剂体积分数为10%时,冻存复苏组织与新鲜组织活细胞率接近(P>0.05),体积分数为5%和20%时与新鲜组织该指标比较,差异均有统计学意义(P<0.01);透射电镜观察结果与之吻合.胎盘组织与脐带组织的情况类同.细胞冻存后免疫表型无明显变化.结论 本方法可以从胎儿附属物中分离培养出大量种子细胞,冻存复苏后细胞免疫表型未发生改变,抗冻剂体积分数为10%时效果好.

    作者:余旭明;薛志刚;戴国胜;徐旭;陈万安;范锟铻;梁德生;夏家辉 刊期: 2007年第06期

  • 烧伤感染术语及诊断标准的商榷

    感染是严重烧伤的主要并发症,也是引起死亡的重要原因.制订相关标准、规范感染术语,对于早期诊断并提高其救治成功率具有重要意义.

    作者:彭毅志;袁志强 刊期: 2007年第06期

  • 大面积烧伤并发急性白细胞减少症一例

    患者男,38岁,因火药爆炸烧伤,伤后1 h入院.患者既往身体健康,无药物过敏史.入院查体:体温36.7℃、脉搏90次/min、呼吸20次/min,意识清楚,全身除头部、会阴、臀部、双足背及踝关节外均被烧伤,部分表皮脱落,创基大部分红白相问.

    作者:弓晓媛;李正勇;许学文;岑瑛 刊期: 2007年第06期

  • 救治烧伤合并硝基氯苯中毒五例

    1 临床资料本组患者5例,均为男性,年龄29~44岁.4例因硝基氯苯爆炸致伤,1例被硝基氯苯粉剂喷中致伤.患者均于伤后2 h收入笔者单位,其中1例已在当地医院行气管切开.入院时患者均意识不清、烦躁不安、呼吸困难、口唇青紫、肢端发绀.

    作者:何祥辉;范友芬;张淳;陈维亚 刊期: 2007年第06期

中华烧伤杂志

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