学术投稿

野生型INK4a基因转染对肺腺癌A549细胞放疗敏感性的调控

陈忠华

关键词:非小细胞肺癌, INK4a基因, 转染, 放疗敏感性, 细胞周期
摘要:目的研究野生型INK4a基因转染对人肺腺癌A549细胞放疗敏感性的调控.方法利用阳离子脂质体介导的基因转染技术,将含有人全长野生型INK4a cDNA的真核表达重组质粒pcDNA3.1-p16导入该基因位点缺失的人肺腺癌A549细胞系中,确定其编码蛋白p16稳定表达;在设立空白组和空质粒转染组的情况下,检测分析放射线对A549细胞的克隆形成率和杀伤效率的影响.结果转染INK4a基因后的细胞与未转染及空质粒转染的细胞相比:肿瘤细胞S期和G2/M期的比例下降,G0/G1期的比例增加,生长减慢,凋亡指数增加,放射线处理后克隆形成率减少,50%抑制剂量(ID50)略有降低.结论 INK4a基因转染增强了肺腺癌A549细胞对放射线的敏感性,为将来肺癌患者基因治疗提供了一定的实验依据.
第三军医大学学报杂志相关文献
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    目的考察卡铂经微囊化后的小鼠体内组织分布情况.方法小鼠单剂量静脉注射32.5 mg/kg卡铂-乳酸/羟基乙酸共聚物微囊混悬液或卡铂原料药溶液后,等离子体原子发射光谱法测定0.083~48 h心、肝、脾、肺和肾脏的卡铂浓度.结果与卡铂原料药相比,卡铂微囊化后在肺脏的药物峰浓度增加为1.76倍,药物分布百分率保持较高水平(32.97%~45.59%);而心脏和肾脏中的药物峰浓度降低、药-时曲线下面积减小.结论小鼠静脉注射微囊化卡铂后,肺脏的药物浓度和分布百分率均较高,呈明显的肺靶向和缓释双重效应.

    作者:应懿;周世文;汤建林;黄永平;徐颖 刊期: 2006年第08期

  • IGF-1、bFGF对人牙髓干细胞的体外诱导分化的影响

    目的研究IGF-1、bFGF对人牙髓干细胞分化的影响.方法酶消化法获得人牙髓干细胞,形态学观察,计算细胞克隆形成率;第3代牙髓干细胞,以IGF-1、bFGF细胞因子诱导,免疫组化染色和RT-PCR方法检测牙本质涎蛋白(dentin sialoprotein, DSP)、牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein 1, DMP-1)和牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein, DSPP)的mRNA的表达.结果人牙髓干细胞呈集落状生长,在体外具有一定的克隆形成能力,经细胞因子刺激后细胞表达DSP、DMP-1蛋白和DSPP的mRNA.结论人牙髓组织中有呈克隆样生长的成体干细胞,IGF-1、bFGF可诱导人牙髓干细胞定向分化.

    作者:胡静;谭颖徽;何飞;张萍 刊期: 2006年第08期

  • 多药耐药相关蛋白1在梗阻性黄疸大鼠肝组织中的表达及意义

    目的探讨多药耐药相关蛋白1(multidrug resistance-associated protein 1, Mrp1)在梗阻性黄疸大鼠胆红素代谢中的作用.方法将80只Wistar大鼠完全随机分为假手术组(sham operation, SHAM)、胆总管结扎组(common bile duct ligation, CBDL)、胆流复通组(bile reflow, REF),测定各时相点血清前白蛋白(prealbumin, PA)、总胆红素(DBIL)以及尿样直接胆红素(DBIL),采用RT-PCR和间接法免疫荧光染色分别在基因转录、蛋白表达及细胞膜定位上检测mrp1在大鼠肝组织中的表达情况.结果 CBDL术后PA迅速下降(P<0.01);TBIL在CBDL术后急剧升高(P<0.01),峰值出现在术后7 d,然后水平有所回落,尿中DBIL在梗阻期间一直上升(P<0.05);复通术后上述指标逐步好转,至术后7 d接近或已达到正常水平;mrp1 mRNA水平随着梗阻时间的延长明显升高,在梗阻解除后仍处于较高水平,免疫荧光结果显示Mrp1定位表达于肝细胞膜上,变化规律与mRNA一致(P<0.05).结论在梗阻性黄疸以及梗阻解除早期,Mrp1介导了胆红素的排泄.

    作者:祝建勇;陈应果;别平 刊期: 2006年第08期

  • 结缔组织生长因子体外促进人增生性瘢痕成纤维细胞转分化的研究

    目的研究结缔组织生长因子(connective tissue growth factor, CTGF)在人增生性瘢痕成纤维细胞转分化中的作用.方法培养人增生性瘢痕成纤维细胞,分别给予不同剂量CTGF刺激(10 ng/ml),以及CTGF ASODN转染,48 h后用Western blot方法比较各组间α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达变化.结果刺激48 h后,对照组表达少量α-SMA蛋白;小剂量CTGF刺激组和大剂量CTGF 刺激组作用48 h后,α-SMA表达量均显著增多,且成浓度依赖性变化(P<0.01);而CTGF ASODN转染组α-SMA蛋白表达与对照组比较明显减少(P<0.05).结论 CTGF在体外能促进人增生性瘢痕成纤维细胞向肌成纤维细胞(myofibroblast ,MyoF)的转分化,阻断或者抑制其表达可能将更有效的治疗瘢痕挛缩.

    作者:李喆;李世荣;刘剑毅;戴霞;陈康;陶灵 刊期: 2006年第08期

  • 缺氧条件下大鼠单核细胞NF-κB活性及TNF-α、IL-1β表达变化规律的研究

    目的研究缺氧培养的大鼠外周血单核细胞核转录因子κB(NF-κB)结合活性及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)表达的变化规律,探讨缺氧与全身炎症反应综合征的关系,为进一步研究老年多器官功能障碍综合征的肺启动机制奠定基础.方法采用明胶法分离大鼠外周血单核细胞,于低氧条件下(3%O2, 5%CO2, 92%N2)培养0、1、3、6、9、12、24 h后,收集细胞及培养液上清,分别采用电泳迁移分析法(EMSA)、逆转录PCR(RT-PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测其NF-κB活性及TNF-α、IL-1β表达量.结果缺氧1~12 h,NF-κB结合活性及TNF-α、IL-1β表达量均显著高于正常(P<0.01),其峰值见于缺氧6 h.缺氧24 h,上述指标与正常无显著差异(P>0.05).NF-κB结合活性与TNF-α、IL-1β mRNA和蛋白表达水平显著相关(P<0.01,P<0.05).结论缺氧可显著增强大鼠外周血单核细胞的NF-κB结合活性,并可诱导其产生大量的促炎症因子TNF-α、IL-1β,这些变化可能与急性呼吸窘迫综合征时血浆中大量促炎症因子持续存在密切相关.

    作者:徐智;吴国明;钱桂生;王兴胜;陈维中;李淑平;薛桥;王士雯 刊期: 2006年第08期

  • TAT修饰的小鼠IFNγ的制备

    目的制备小鼠IFNγ-TAT, 为TAT影响IFN体内分布等研究作准备.方法采用RT-PCR扩增编码mIFNγ的cDNA序列, 经3轮PCR扩增编码mIFNγ-TAT片段,克隆到质粒pUC19, 测序鉴定正确后构建到pQE80L表达质粒载体中,经BamHⅠ和HindⅢ双酶切后1.2% 琼脂糖凝胶电泳鉴定;利用SDS-PAGE和Western blot检测表达的目的蛋白.结果 PCR扩增得到编码mIFNγ-TAT的cDNA片段,测序结果正确, SDS-PAGE和Western blot分析显示重组蛋白在大肠杆菌中获得了高效表达.结论成功制备了TAT修饰的小鼠IFNγ,为进一步实验室研究奠定了基础.

    作者:胡大强;何凤田;郑英如;李蓉芬;高会广;龚薇;黄刚 刊期: 2006年第08期

  • 丰富环境对缺氧缺血性脑损伤大鼠海马突触超微结构及突触素表达的影响

    目的探讨早期丰富环境干预对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠海马CA1区神经元突触超微结构和突触素(p38)表达的影响.方法按Rcie法制作HIBD新生动物模型,共计20只,随机分为干预组和非干预组.同时设假手术对照组10只.干预组大鼠于术后第2天开始给予丰富环境刺激,持续20 d.干预结束后用透射电镜观察各组海马CA1区锥体神经元超微结构,免疫组化和图像分析技术检测p38的表达.结果与对照组比较,非干预组海马CA1区锥体细胞见部分核膜消失、线粒体嵴模糊、神经元突触数量减少,突触间隙增宽,突触囊泡减少,突触后致密物变薄;干预组神经元和突触无明显异常.非干预组海马CA1区突出素光密度值明显低于干预组和对照组(P<0.01),而干预组和对照组之间无显著差异(P>0.05).结论阻止或减轻HI后突触超微结构的损伤、促进突触的重建可能是丰富环境发挥作用的物质基础.

    作者:蒲昭霞;赵聪敏;鲁利群 刊期: 2006年第08期

  • 儿童急性白血病微小病毒B19感染及临床特征

    人类微小病毒B19(human parvovirus B19,HPVB19)能引起骨髓衰竭,主要抑制红细胞系统克隆形成,导致红细胞发育不良,并可引起再障危象和各种溶血性贫血[1].HPVB19在急性造血停滞和再障患者的检测先后有报道,但在儿童白血病的检测少见报道.本研究对本院99例急性白血病(acute leukemia,AL)患儿进行了HPVB19 IgM检测,并分析了阳性患者的一般临床特征及心肌酶谱特点,报告如下.

    作者:苏庸春;于洁;徐酉华;张渝美;陈启雄 刊期: 2006年第08期

  • 磁共振胆道成像诊断肝门及肝门周围胆管恶性梗阻的价值

    由于肝门部胆道的复杂结构,引起肝门区恶性胆道梗阻的病变常常难以通过外科手术方式切除,而经皮或经内窥镜进行胆道引流减轻黄疸常成为优选的方法.在许多情况下,采用何种方式进行引流,依赖于胆管狭窄部位的精确定位,并明确其与肝管汇合部的关系,否则难以达到对大部分肝脏充分引流的目的.超声波及螺旋CT(computer tomography)在这方面的作用有限,而经皮肝穿刺胆道造影(percutaneous transhepatic cholangiography, PTC)及ERCP(endoscopic retrograde cholangiopancreatography)是评价胆道解剖好的方法,但要对高度狭窄的胆道内注射造影剂或引流常可能引起严重的并发症.

    作者:吴巨海;俞志坚;商雪林;瞿炳刚 刊期: 2006年第08期

  • 急性尿潴留大鼠膀胱功能损害与组织结构改变的关系

    目的研究急性尿潴留对大鼠膀胱功能和组织结构损害及其二者的关系.方法健康雌性Wistar大鼠随机分为正常对照组(C组)及实验组.以2倍于正常膀胱容量生理盐水过度充盈2 h建立急性尿潴留模型.实验组按充盈2 h(E0组,n=5)、排空后1 h(E1组,n=5)、排空后2 h(E2组,n=5)、排空后3 h(E3组,n=5)、排空后4 h(E4组,n=5)分为5个时相点.测定膀胱容量及大膀胱收缩压;观察膀胱形态学变化和组织细胞凋亡(TUNEL法).结果急性尿潴留后膀胱容量及大膀胱收缩压均降低.E0组膀胱组织表现为轻度炎症反应,细胞凋亡率轻度增加;膀胱排空后(E1-E4组)组织炎症反应明显,以黏膜及黏膜下组织渗出更明显,细胞凋亡率明显增加,明显高于C组和E0组(P<0.01),E1-E4各组无显著差异(P>0.05).结论急性尿潴留后组织炎症渗出及细胞凋亡是膀胱功能改变的结构基础.

    作者:李文刚;方强;李为兵;杨景;宋波;文前军 刊期: 2006年第08期

  • 丰富环境干预后HIBD大鼠脑超微结构改变

    目的研究丰富环境刺激对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)大鼠脑超微结构的影响.方法大鼠分为缺氧缺血组及丰富环境干预组,干预组予早期抚触和丰富环境刺激共28 d,利用透射电镜观察两组大鼠海马神经元超微结构、神经丝及突触情况.结果缺氧缺血组海马神经细胞固缩改变,线粒体肿胀,神经丝数量减少,排列稀疏,突触数量减少,突触间隙增宽,突触囊泡减少,突触后致密物变薄.干预组海马神经元和突触无明显异常.结论早期抚触及丰富环境刺激可以促进缺血缺氧的脑组织超微结构恢复,脑组织神经网络重建及脑的可塑性增加是其可能的机制之一.

    作者:于若谷;赵聪敏;王丽雁;张雨平;温恩懿 刊期: 2006年第08期

  • 乳头状肺细胞瘤1例

    乳头状肺细胞瘤(papillary pneumocytoma) [1],又称肺硬化性血管瘤(sclerosing hemangioma of the lung, SHL)是一种较少见的肺部良性肿瘤,绝大多数发生于女性,由Liebow等于1956年首先报道,后陆续有作者报道,但在组织学起源及肿瘤实质等方面仍存在较大争议.

    作者:李杰;张哉根 刊期: 2006年第08期

  • 结核病发病的空间分析

    自20世纪80年代后期,由于贫困、流动人口和耐药等因素,结核病的发病率和死亡率在全球范围内出现回升,再次成为各国关注的公共卫生问题.我国结核感染率为44.5%,患病率为346/10万,死亡率为9.8/10万,每年大约有13万人死于结核病,结核病已成为我国农村因病致贫、因病返贫的主要疾病之一[1].本研究将利用地理信息系统(geographic information system, GIS)技术,采用空间自相关、空间关联等空间统计分析技术探索重庆市黔江区的结核病发病的空间分布规律,为结核病的预防、医疗保健和卫生决策提供理论依据.

    作者:王红光;王文昌;彭斌;张彦琦;王润华;易东 刊期: 2006年第08期

  • 野生型INK4a基因转染对肺腺癌A549细胞放疗敏感性的调控

    目的研究野生型INK4a基因转染对人肺腺癌A549细胞放疗敏感性的调控.方法利用阳离子脂质体介导的基因转染技术,将含有人全长野生型INK4a cDNA的真核表达重组质粒pcDNA3.1-p16导入该基因位点缺失的人肺腺癌A549细胞系中,确定其编码蛋白p16稳定表达;在设立空白组和空质粒转染组的情况下,检测分析放射线对A549细胞的克隆形成率和杀伤效率的影响.结果转染INK4a基因后的细胞与未转染及空质粒转染的细胞相比:肿瘤细胞S期和G2/M期的比例下降,G0/G1期的比例增加,生长减慢,凋亡指数增加,放射线处理后克隆形成率减少,50%抑制剂量(ID50)略有降低.结论 INK4a基因转染增强了肺腺癌A549细胞对放射线的敏感性,为将来肺癌患者基因治疗提供了一定的实验依据.

    作者:陈忠华 刊期: 2006年第08期

  • 甘氨酸/丝氨酸置换146位半胱氨酸对sBAFF功能的影响

    目的探讨甘氨酸/丝氨酸置换146位半胱氨酸对sBAFF功能的影响,为深入探讨sBAFF的功能和机制奠定基础.方法采用一步反向PCR法,将编码sBAFF第146位半胱氨酸(Cys)的核苷酸序列置换为甘氨酸(G)和丝氨酸(S)的编码序列,测序正确后,亚克隆到高效原核表达载体pQE-80L;以IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot检测表达产物,Ni2+-NTA柱层析纯化目的蛋白;后经MTT法检测其促B淋巴细胞增殖活性.结果经一步反向PCR扩增后均得到459 bp的DNA片段,经测序分析表明分别为sBAFF 第146位半胱氨酸残基点突变为甘氨酸和丝氨酸的序列,目的蛋白在大肠杆菌中得到高效表达.活性检测证实其能明显刺激B淋巴细胞系Raji细胞增殖,与正常sBAFF相比,置换为丝氨酸后活性升高,置换为甘氨酸后活性无明显改变.结论在原核表达时,通过置换146位半胱氨酸为丝氨酸可明显提高sBAFF的活性,为进一步探讨sBAFF的功能机制奠定了基础.

    作者:黄刚;何凤田;李蓉芬;高会广;陈麟凤;张立;胡大强 刊期: 2006年第08期

  • 胃肠道肿瘤患者围手术期不同营养支持方法的研究

    目的探讨不同营养支持途径在胃肠道肿瘤患者围手术期营养状况及恢复中的作用.方法将51例胃肠道肿瘤且伴有营养不良的患者,行根治性手术后随机分为3组,对照组为术后常规补液5~7 d,肠内营养(EN)组术后早期给予肠内营养支持5~7 d,完全胃肠外营养支持(TPN)组术后采用TPN治疗3~5 d,.并检测术前、术后营养状况指标及患者恢复情况.结果血清总蛋白、白蛋白、前白蛋白、转铁蛋白水平各项指标中,EN组、TPN组较术前降低,但差异无显著性,对照组术后较术前显著下降(P<0.05).EN组、TPN组患者术后并发症及住院天数均少于对照组.结论术后肠内、外营养支持能够改善胃肠道肿瘤患者营养状况,减少术后并发症的发生、缩短住院天数.术后早期施行EN是安全、可行和有效的.

    作者:张军;王严庆;王致天;王子卫 刊期: 2006年第08期

  • 全反式维甲酸脂质体制备及稳定性研究

    目的通过制备不同配方全反式维甲酸脂质体,对处方进行优化.方法采用逆相蒸发法制备全反式维甲酸脂质体,高效液相色谱法检测活性药物含量及包封率,并进行加速试验检测其初步稳定性.结果 3组全反式维甲酸脂质体包封率分别为33.98%、42.11%、70.34%,各配方稳定性好,冻干前后及0 ℃、25 ℃、40 ℃放置后活性药物含量无显著改变.结论全反式维甲酸脂质体制备工艺可行,质量控制方法简单、准确.

    作者:张敬如;黄复生;王昆 刊期: 2006年第08期

  • 大鼠青光眼慢性高眼压视网膜组织的二维凝胶电泳分析

    目的应用二维凝胶电泳对SD大鼠青光眼慢性高眼压视网膜组织的蛋白进行初步分析.方法分离大鼠青光眼慢性高眼压视网膜组织,以对侧眼视网膜组织为对照,经样本初处理后,进行二维凝胶电泳和凝胶银染色,然后分析电泳图谱,观察蛋白的分离效果,对比、分析其表达蛋白质点的差异,寻找SD大鼠视网膜中与慢性高眼压相关的蛋白质.结果用化学裂解法结合超声波粉碎,可以裂解视网膜神经组织,使其大部分蛋白质得到溶解,成功建立对大鼠青光眼慢性高眼压眼及对照眼视网膜组织进行样本处理、二维凝胶电泳的基本方法和条件,得到两组视网膜组织的二维凝胶电泳图谱.各组织蛋白在小胶上均能显示120~290个左右的斑点.两组视网膜组织的凝胶图谱呈现出9个斑点的差异.结论二维凝胶电泳可以有效分离、显示视网膜特异表达蛋白质.通过双向电泳,我们发现SD大鼠视网膜蛋白质表达与对照眼相比有质和量的差异.

    作者:崔馨;贺翔鸽;许建涛;马建洲;熊仁平 刊期: 2006年第08期

  • 两例疑为X连锁型视网膜色素变性家系的单倍型分析研究

    目的应用遗传连锁分析方法对X连锁型视网膜色素变性家系进行分析,定位其致病基因的所在位点.方法选取已知X连锁视网膜色素变性候选基因附近的短串联重复序列多态性标记(short tandem repeat polymorphism, STRP),即在RP2、RP3、RP6、RP23和RP24处分别选取具有高信息量的微卫星位标,对2例疑似为X连锁型视网膜色素变性家系进行遗传连锁分析;通过对家系成员的单倍型分析,并进行两点法连锁分析,确定其致病基因所在染色体的大致位置.结果 2例家系在DXS 993处得到的大LOD值分别为:1.18和1.03;在DXS 1068处得到的大 LOD值分别为:0.58和-2.69;在DXS 1214处得到的大LOD值分别为:-2.33和-2.45;在DXS 8051处得到的大LOD值分别为:-2.34和-2.51;在DXS 8043处得到的大LOD值分别为:-2.23和-2.62.结论 ZCF家系的致病基因,可能不在RP3、RP6、RP23或RP24位点;而对于FYJ家系,我们则怀疑致病基因位于RP2位点,但也不排除与RP3连锁;用遗传连锁分析方法对确定致病基因所在染色体的范围起到重要的作用.

    作者:陈翠敏;张晓莉;阴正勤;府伟灵;孟晓红 刊期: 2006年第08期

  • 股骨峡部髓腔与全髋置换术中假体选择的关系

    目的探讨股骨峡部髓腔大小对全髋关节置换术股骨假体选择的影响及意义.方法测量分析初次全髋关节置换术患者影像学资料,采用实验-对照方法分析比较峡部髓腔预测股骨假体型号的一致性和准确性.结果峡部髓腔预测型号与实际型号之间存在较高符合率(80%)和良好相关性(r=0.77),两组数据之间无明显差异(P=0.083>0.05).实验组与对照组预测假体型号之间无明显差异(P=0.14>0.05).结论峡部髓腔大小与股骨假体选择之间存在密切联系.利用峡部髓腔预测股骨假体型号可以作为假体型号选择的重要参考.

    作者:吴波;杨柳 刊期: 2006年第08期

第三军医大学学报杂志

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主管:第三军医大学

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