学术投稿

腺病毒介导HO-1基因转染肾小管上皮细胞及对PBMC增殖影响的实验研究

戴卫华;吴雄飞;金锡御

关键词:血红素氧化酶-1, 基因转染
摘要:目的 观察Ad-HO-1感染对HK-2细胞存活率的影响,探讨表达目的蛋白血红素氧化酶-1(HO-1)的HK-2细胞能否有效降低外周血单个核细胞(peripheral blood monoeuclear cell,PBMC)增殖反应活性.方法 Ad-HO-1按感染强度(multiplicity of infection,MOI)100、200和400分别转染人肾小管上皮细胞株(HK-2)3 h,转染2 d后观察绿色荧光蛋白的表达,转染2、4 d后进行活细胞计数(台盼蓝染色法).激光共聚焦法检测HO-1和GFP蛋白在HK-2中的表达,Western Blot检测HK-2细胞HO-1蛋白表达,3H-TdR法检测HK-2转染后抑制PBMC增殖能力.结果 重组腺病毒Ad-HO-1(MOI200)感染HK-2细胞2 d后90%的细胞表达绿色荧光,2、4 d时活细胞百分率与对照组无显著差异.激光共聚焦检测表达GFP的细胞均表达HO-1蛋白,位置分布基本一致.Western blot检测显示HK-2感染Ad-HO-1后有能与HO-1单抗特异性结合的蛋白免疫印迹条带,对PBMC增殖能力有显著抑制作用.结论 Ad-HO-1能介导HO-1目的蛋白的表达,具有抑制PBMC增殖的生物学活性.
第三军医大学学报杂志相关文献
  • 缺血性脑血管病患者记忆障碍特点的研究

    目的 探讨缺血性脑血管病(ischemic cerebrovascular disease,ICVD)患者记忆障碍特点,提高对脑血管病患者早期认知功能损害的认识.方法 对同期同一医院收集的46例ICVD患者和46例老年志愿者,应用简明精神状态检查量表(mini-mental state examination,MMSE)、临床记忆量表(clinical memory scale,CMS)、Fuld物体记忆测验(Fuld object-memory Evaluation,FOM)、言语流畅性测验(Rapid Verbal Retrieve,RVR)评定认知及记忆功能.结果 ①ICVD组与对照组比较:ICVD组的各项记忆功能均低于正常对照组(P<0.01).②ICVD各亚组与对照组记忆功能比较:各亚组指向记忆和联想学习评分均低于对照组(P<0.01);脑梗死组、多发性脑梗死组及血管性痴呆组记忆商数(memory quotient,MQ)、图形自由回忆及无意义图形再认评分低于对照组(P<0.05,P<0.01);多发性脑梗死组和血管性痴呆组RVR评分低于对照组(P<0.01).③ICVD各亚组组间记忆功能比较:多发性脑梗死组MQ、图形自由回忆、无意义图形再认和FOM评分分别低于椎基底动脉供血不足组(P<0.05,P<0.01);腔隙性脑梗死组(P<0.01)及脑梗死组(P<0.05).结论 表明ICVD患者存在记忆损害,早期以短时记忆,特别是听觉记忆损害为主要表现,随着缺血程度的加重可出现视觉记忆及长时记忆的损害.

    作者:岳阳;郑健;刘勇;戴光明 刊期: 2006年第17期

  • CTLA4Ig转染供者DC对同种异体胰岛移植存活的影响

    目的 探讨共刺激信号阻断剂CTLA-4Ig基因修饰的树突状细胞(dendritic cells,DC)对胰岛移植存活的影响.方法 以BN、Lewis大鼠为胰岛移植供、受体;用CTLA-4Ig基因重组腺病毒转染供、受体骨髓源性DC使之表达CT-LA-4Ig;将供、受体DC于胰岛移植前24 h经股静脉分别注入受体(设为组Ⅰ、组Ⅱ),供、受体DC混合后注入受体(组Ⅲ),注射生理盐水的为空白对照组(组Ⅳ);观察各组糖尿病鼠高血糖改善情况及存活时间,术后第20天,MTT法检测受体脾细胞对供体及无关抗原刺激的反应.结果 与对照组相比,组Ⅰ和组Ⅲ血糖维持正常时间和受体存活时间显著延长[组Ⅰ:(28.75±13.60)d和(35.38±13.21)d,P<0.01;组Ⅲ:(41.25±13.74)d和(49.50±13.87)d,P<0.01],组Ⅱ移植胰岛存活时间无延长[(8.75±3.33)d与(7.33±1.97)d相比,P>0.05].术后第20天,组Ⅰ、组Ⅲ脾细胞对供体抗原刺激的反应均明显低于正常对照[(0.24±0.05)和(0.21±0.05)与(0.70±0.09)相比,P<0.01],而对无关抗原刺激的反应与正常对照无显著差异[(0.66±0.07)和(0.66±0.07)与(0.69±0.05)相比,P>0.05].结论 CTLA-4Ig基因修饰的供体DC可以明显延长大鼠移植胰岛的存活时间,而受体DC则无此作用,但两种DC联合应用可以使移植胰岛获得更长的存活时间.

    作者:张艮甫;黄赤兵;冯嘉瑜;范明齐;王平贤;肖亚;贾维胜;方针强 刊期: 2006年第17期

  • 腺病毒介导HO-1基因转染肾小管上皮细胞及对PBMC增殖影响的实验研究

    目的 观察Ad-HO-1感染对HK-2细胞存活率的影响,探讨表达目的蛋白血红素氧化酶-1(HO-1)的HK-2细胞能否有效降低外周血单个核细胞(peripheral blood monoeuclear cell,PBMC)增殖反应活性.方法 Ad-HO-1按感染强度(multiplicity of infection,MOI)100、200和400分别转染人肾小管上皮细胞株(HK-2)3 h,转染2 d后观察绿色荧光蛋白的表达,转染2、4 d后进行活细胞计数(台盼蓝染色法).激光共聚焦法检测HO-1和GFP蛋白在HK-2中的表达,Western Blot检测HK-2细胞HO-1蛋白表达,3H-TdR法检测HK-2转染后抑制PBMC增殖能力.结果 重组腺病毒Ad-HO-1(MOI200)感染HK-2细胞2 d后90%的细胞表达绿色荧光,2、4 d时活细胞百分率与对照组无显著差异.激光共聚焦检测表达GFP的细胞均表达HO-1蛋白,位置分布基本一致.Western blot检测显示HK-2感染Ad-HO-1后有能与HO-1单抗特异性结合的蛋白免疫印迹条带,对PBMC增殖能力有显著抑制作用.结论 Ad-HO-1能介导HO-1目的蛋白的表达,具有抑制PBMC增殖的生物学活性.

    作者:戴卫华;吴雄飞;金锡御 刊期: 2006年第17期

  • 校正的TIMI帧数法评价梗塞冠脉血管再通后心肌灌注状态的分析

    本研究应用校正的TIMI帧数(CTFC)及ST段回落程度评价急性心肌梗死(AMI)患者经皮冠状动脉介入(PCI)治疗后,血流达到TIMI3级的患者心肌水平血流再灌注的情况.

    作者:颜艳;沈洪;杜洛山 刊期: 2006年第17期

  • Bcl-2和Ki-67在肾细胞癌中的表达

    肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)是常见的肾脏恶性肿瘤,生物学行为及预后难以估计.Bcl-2基因是在t(14;18)染色体易位断点处发现的一种癌基因,是人类滤泡型淋巴瘤的遗传学标志[1-3],具有阻断程序化细胞死亡作用.Ki-67初是以何杰金氏细胞系L428细胞核成份制备的单抗,是针对处于增殖周期的人类细胞核抗原的抗体,其表达与细胞增殖高度相关[2].近年来研究表明它们与人类多种肿瘤有关[2,4,5].我们应用免疫组化法对人肾细胞癌Bcl-2及Ki-67基因产物进行检测,以研究其在肾细胞癌中的表达并讨论其临床意义.

    作者:李鸣;张红宾;张惠中 刊期: 2006年第17期

  • 血小板直方图在判断血小板计数结果中的可靠性评价

    鉴于目前临床对血小板计数结果不稳定反应较大,本研究利用SF-3000血细胞分析仪所提供的血小板计数结果和手工显微镜法结果作对照,对血小板直方图在判断血小板计数结果中的作用进行了探讨.

    作者:雷晓田 刊期: 2006年第17期

  • 同视机训练三级视功能的疗效观察

    斜视、屈光参差、形觉剥夺等均可能破坏儿童三级视功能发育.目前三级视功能训练方法主要有同视机、实体镜、电脑软件、haidinger刷等.我们对同视机训练的疗效观察报告如下.

    作者:刘波;汪辉;周素君;陈利 刊期: 2006年第17期

  • PCR法检测人类脲原体U.Parvum和U.Urealyticum

    目的 建立2个快速、同步检测脲原体U. Parvum和U. Urealyticum的PCR反应体系.方法 根据脲原体尿素酶B基因序列,设计2对分别针对U. Parvum和U. Urealyticum的特异性引物,建立2个PCR反应体系.通过脲原体标准株和临床阳性标本的PCR产物测序以及进行特异性和敏感性实验,对2个PCR体系进行评价.应用2个PCR反应体系对48例临床标本进行脲原体检测以及与培养法检测脲原体进行方法学比较.结果 2个PCR体系能够检测U. Parvum、U. Urealyticum标准株和临床标本中脲原体,扩增产物长度与目的片段大小一致.标准株和2个临床阳性标本扩增产物测序结果与GenBank中公布的序列完全一致.2个PCR体系与其他14株细菌(包括5株有尿素酶细菌)无交叉反应,检测限度均为10拷贝/ul的重组质粒DNA.对48例临床标本同时进行PCR和培养法脲原体检测,PCR的阳性检出率为54.2%,培养法为39.6%(P<0.05).与培养法比较,PCR的灵敏度为94.7%,而与PCR法相比,培养法的灵敏度为69.2%.结论 2个PCR反应体系能够快速、同步进行临床标本中脲原体的分种鉴别,具有高度特异性和灵敏度.

    作者:张新;蒲晓允 刊期: 2006年第17期

  • 重组人促红细胞生成素对大鼠视网膜缺血再灌注损伤的保护作用

    目的 已证实重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rhEPO)对中枢神经细胞有抗凋亡作用.本实验探讨rhEPO对压力诱导的视网膜缺血再灌注的影响.方法 大鼠经前房灌注维持眼压102 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa),60 min,建立大鼠视网膜缺血再灌注模型.随后立即向右眼玻璃体腔注射5μl rhEPO,左眼玻璃体腔注射同等量的生理盐水,利用荧光金(fluorogold,FG)逆行示踪技术,分别于再灌注损伤后1、4、7、14 d行视网膜节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)计数.结果 rhEPO玻璃体腔注射后各时相点视网膜节细胞数明显高于对照组(P<0.05).结论 玻璃体腔内注射rhEPO有助于防止视网膜缺血再灌注后视网膜神经节细胞的凋亡.

    作者:梁淑欣;谢汉平;曾玉晓;翁传煌 刊期: 2006年第17期

  • 机采浓缩血小板-80℃长期冻存的动态的体外黏附、聚集功能和Ⅲ因子活性变化

    目的 跟踪观察机采浓缩血小板(platelet apheresis concentrates,PCs)在5%DMSO条件下于-80℃冻存1~5年的体外功能变化.方法 玻璃珠柱检测血小板黏附功能,花生四烯酸诱导后检测血小板聚集功能,蝰蛇毒检测血小板Ⅲ因子活性.结果 对深低温保存的冻存血小板的动态观察发现:PCs冻存期为1~5年融化复苏后的黏附和聚集功能未发现有统计学意义(P>0.05);冻存至第4年的血小板复苏时4/10样品发生凝集,第5年的有3/11发生凝集;冻存至第5年时,多数样品血小板Ⅲ因子失活.对22℃常温保存的液体血小板的观察发现:血小板的黏附功能和大聚集能力随保存时间的延长逐渐下降,72 h有差异(P<0.05),96 h有显著性差异(P<0.01);5 d之内血小板Ⅲ因子活性无明显改变(P>0.05).结论 22℃保存的液体血小板发生渐进的代谢损伤,而-80℃保存期在3年内的冻存血小板未见明显异常.

    作者:孔令魁;朱为刚;熊文;李雪梅 刊期: 2006年第17期

  • 基于伪F统计量的水质综合评价模型

    目的 针对目前水质综合评价中存在的某些问题,构造出水质综合评价的一个新模型.方法 利用方差分析的思想,采用伪F统计量,得到评价指标的权重系数,再采用加权线性方法建立评价模型.结果 把该模型运用于一个实际数据,得到的结论与实际情况相吻合.结论 该模型对可以克服评价指标的随机性干扰,有一定的自适应性,方法简单、实用.

    作者:王文昌;易东;赵增炜;张彦琦;刘玲;曹佳 刊期: 2006年第17期

  • 冲击波暴露后豚鼠耳蜗基底膜撕裂伤

    目的 探讨爆炸冲击波和实验性冲击波负压引起耳蜗基底膜机械损伤的组织病理学特点.方法 将豚鼠暴露于爆炸冲击波和实验性冲击波负压后,分别应用火棉胶包埋组织切片技术和基底膜硬铺片技术,于光学显微镜下观察.结果 爆炸冲击波和实验性冲击波负压暴露后8~24 h即可见基底膜外毛细胞大部分缺失.当爆炸冲击波超压峰值达到121 kPa和实验性冲击波负压峰值达到-78.4 kPa时,分别发现穿透基底膜全层的位于第二转的横形及纵形机械性撕裂伤,横形撕裂伤穿透基底膜全层,从内毛细胞内侧直至第三排外毛细胞外侧;纵形撕裂形状不规则,长度相当于与其相邻的10个内毛细胞空间位置,宽度累及第二、三排外毛细胞区,一端累及内毛细胞区.结论 较大强度的爆炸冲击波和实验性冲击波负压均可导致豚鼠耳蜗基底膜的机械性撕裂性损伤.

    作者:李朝军;刘兆华;朱佩芳;王正国;杨成;陈海斌;周继红;宁心 刊期: 2006年第17期

  • CO2激光喉显微手术方式及疗效

    目的 探讨CO2激光喉显微手术(CO2 laser endolaryngeal microsurgery,CO2-LELM)治疗某些喉内病变的不同手术方式及其疗效.方法 插管全麻显微喉内窥镜或支撑喉镜下,对425例广基型声带息肉、230例声带小节、72例声带肥厚、29例声带囊肿及44例喉角化喉白斑病患者,在喉显微手术辅助下,用CO2激光分别对病变组织切割、汽化、凝固予以摘除.结果 根据电子喉镜检查结果和声嘶改善情况进行评判,手术后4~5 d,治愈率为22.4%(179/800),有效率为43.4%(347/800);1个月后,治愈率为93.3%(746/800),有效率为97.8%(782/800);3个月后,治愈率为98.3%(786/800),有效率为99.8%(798/800),需二次手术0.2%(2/800).结论 CO2激光喉显微手术是治疗喉内良性增生性疾病的有效手段.

    作者:魏运军;张学渊;袁伟;钟诚;向召兰;黄义 刊期: 2006年第17期

  • 肝再生增强因子重组质粒在大鼠肝组织中的表达

    肝再生增强因子(augmenter of liver regeneration,ALR)是一种具有热稳定性的肝细胞增殖刺激因子,无论内源性还是外源性的ALR都对肝细胞增殖有促进作用[1].

    作者:李青;刘殿武;何海艳;肖永红;刘英丽 刊期: 2006年第17期

  • 人DcR3 cDNA克隆及其在COS-7细胞中的表达

    目的 克隆人DcR3分子的cDNA,将其重组入真核表达载体,并表达于COS-7细胞.方法 以PCR方法克隆编码人DcR3分子的cDNA,对其序列进行测定.将测序正确的DcR3 cDNA克隆入真核表达载体pAAV-IRES-hrGFP,构建重组表达载体.采用脂质体法转染COS-7细胞,用Western blot检测和激光共聚焦检测重组DcR3分子在COS-7细胞中的表达.结果 PCR方法扩增出一1 000 bp左右的基因片段,插入pAAV-IRES-hrGFP构建重组表达载体后,经序列测定证实扩增的片段为人DcR3分子cDNA.将重组子转染COS-7细胞,Western blotting和激光共聚焦检测到DcR3分子的表达.结论 成功地克隆并在COS-7细胞中表达了DcR3分子.

    作者:王槐志;黎万玲;董家鸿;倪兵;姜曼;吴玉章 刊期: 2006年第17期

  • 创伤修复中白细胞蛋白酶抑制因子和中性粒细胞趋化因子差异表达的研究

    目的 研究真皮间充质干细胞(dermal mesenchymal stem cells,dMSCs)参与创伤修复中白细胞蛋白酶抑制因子(secretory leukocyte protease inhibitor,SLPI)和中性粒细胞趋化因子(cytokine-induced neutrophil chemoattractant-2,CINC-2)的差异表达,并探讨其相关功能.方法 采用前期建立的技术分离、纯化并扩增dMSCs,通过RT-PCR检测创伤修复时SLPI和CINC-2在dMSCs中表达,通过3H-TdR掺入实验研究SLPI和dMSCs有丝分裂的关系,利用Boyden趋化小室研究dMSCs对中性粒细胞的趋化作用.结果 分离的大鼠dMSCs呈梭形,在体外显示多向分化潜能.RT-PCR提示伤口液刺激24 h后dMSCs中SLPI,CINC-2表达升高,同时检测到在全层切割伤后1 d大鼠皮肤组织中SLPI和CINC-2均为高表达,3H-TdR掺入实验提示SLPI能够促进dMSCs的有丝分裂,趋化小室实验显示dMSCs对中性粒细胞有趋化作用,加入中和抗体后趋化作用减弱.结论 创伤后SLPI,CINC-2在dMSCs中表达升高,其表达升高可能同dMSCs的增殖和趋化有关.

    作者:江德鹏;向静;文亮;粟永萍;屈纪富;冉新泽 刊期: 2006年第17期

  • 二甲胺四环素对大鼠脊髓损伤后caspase-3、p53表达的影响

    目的 探讨大鼠脊髓损伤后应用二甲胺四环素(minocycline)对caspase-3、p53表达及细胞凋亡的影响.方法 成年大鼠随机分为脊髓损伤后应用二甲胺四环素的治疗组(A组)和应用生理盐水对照组(B组),损伤后不同时间点(4 h、8 h、1 d、3 d、7 d、14 d、21 d)取材,用HE染色观察损伤脊髓组织病理变化,免疫组化染色检测caspase-3、p53表达阳性细胞,原位末端标记法(TUNEL法)标记凋亡细胞,及荧光酶联测定法测定caspase-3的活性.结果 HE染色镜检发现脊髓组织病理学改变A组明显轻于B组.A、B两组均发现凋亡细胞及caspase-3、p53表达,神经细胞凋亡指数及caspase-3、p53表达均为B组>A组(P<0.05).结论 二甲胺四环素能抑制大鼠脊髓损伤后caspase-3、p53表达及细胞凋亡.

    作者:陈钢;梁群;陈安民;郭风劲;徐卫国 刊期: 2006年第17期

  • 连环蛋白P120基因重组腺病毒载体的构建及表达

    目的 构建携带HA-tag的连环蛋白P120(P120ctn)基因重组腺病毒载体,并观察腺病毒感染后P120ctn在HepG-2细胞中的表达情况.方法 把HA-tag和P120ctn基因克隆入腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转染大肠杆菌BJ5183,获得腺病毒重组质粒.再将获取的腺病毒重组质粒转染入293细胞进行包装,获取P120ctn重组腺病毒并进一步感染HepG-2细胞株.结果 P120ctn基因成功克隆到腺病毒载体中,该腺病毒可高效介导P120ctn在HepG-2细胞中表达.结论 成功地构建了含P120ctn基因的重组腺病毒载体,为进一步研究其功能奠定了基础.

    作者:张毅;杨占宇;朱瑾;杨世忠;李晓武;董家鸿 刊期: 2006年第17期

  • AMPA受体拮抗剂对新生鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用

    缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)是造成新生儿死亡和神经系统发育障碍的主要原因之一,目前尚无理想治疗方案.

    作者:王丽雁;赵聪敏;张雨平;温恩懿 刊期: 2006年第17期

  • BKcaα1基因在DI大鼠膀胱中的表达

    目的 研究逼尿肌不稳定(Detrusor instability,DI)大鼠膀胱中大电导钙激活钾α1通道(Big conductance calcium activated potassium channelα1,BKcaα1)基因的表达,探讨BKcaα1通道在逼尿肌不稳定发生中的作用.方法 建立Wistar大鼠DI模型,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫组织化学染色技术,检测BKcaα1基因在DI大鼠膀胱中的表达.结果 BKcaα1基因在DI大鼠膀胱中的表达降低.结论 BKcaα1通道反馈调节逼尿肌的收缩,可能与DI的发生有关.

    作者:张远宁;宋波;金锡御;张艮甫;文前军 刊期: 2006年第17期

第三军医大学学报杂志

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主管:第三军医大学

主办:第三军医大学