学术投稿

实时荧光定量RT-PCR法检测TNF-αmRNA基因表达

陈晓;王宇学

关键词:实时荧光定量, 反转录聚合酶链反应, TNF-α基因
摘要:目的 建立实时荧光定量反转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测TNF-α基因mRNA表达.方法 用T-A克隆技术构建含TNF基因的载体作为标准模板,采用荧光Taqman方法及探针标记技术,建立实时荧光定量RT-PCR方法,制备标准曲线,检测肿瘤患者与正常人外周血单个核细胞的TNF-α mRNA表达水平变化,并与半定量RT-PCR检测结果进行比较.结果 实时荧光定量RT-PCR检测肿瘤患者外周血单个核细胞TNF-αmRNA表达明显高于正常人,且半定量RT-PCR结果显示TNF-α出现类似的变化趋势.结论 所建立的实时荧光定量RT-PCR用于检测TNF-α mRNA表达,结果用拷贝数表示,比半定量RT-PCR更灵敏、准确.
现代检验医学杂志相关文献
  • 麻疹的实验室诊断和鉴别诊断

    目的 了解单份血清标本检测麻疹-IgM抗体在麻疹的实验室诊断中的作用和意义.方法 研究对象为该院2005年1~6月间门诊诊断的疑似麻疹病例共705例,男390例,女315例,其中<8 mo 298例,8 mo~3 y 210例,3~6 y 115例,>6 y 82例.采用酶联免疫吸附方法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清中的抗麻疹病毒特异性IgM抗体.对抗麻疹病毒特异性IgM抗体阴性的标本,同时检测抗风疹病毒、人类疱疹病毒6型、柯萨奇病毒和埃克病毒特异性IgM抗体.结果 705例疑似麻疹病人中,抗麻疹病毒IgM抗体阳性547例(阳性率77.6%,547/705),其中<8mo248例(45.4%,248/547),8 mo~3 y143例(26.1%,143/547),3~6 y 93例(17.0%,93/547),>6 y 63例(11.5%,63/547);麻疹-IgM阴性共158例,占总病例数的22.4%(158/705).该158例麻疹可疑病例中,45.6%(72/158)的病例通过检测风疹病毒、柯萨奇病毒、艾柯病毒、人类疱疹病毒6型-IgM而确诊.结论 6 y以下儿童为麻疹的高发人群,其中8 mo以下婴儿患病率高,提示母传抗体的保护作用不足.单份血清在麻疹实验室确诊中存在缺陷,对于麻疹IgM阴性的临床麻疹疑似病例,不能除外麻疹,应查恢复期血清以明确诊断;另外临床麻疹疑似病例需要与风疹、肠道病毒感染和人类疱疹病毒6型等其它病毒感染所致的发热出疹性疾病相鉴别.

    作者:刘亚谊;闫静;王燕;张辉;买颖;刘春艳;谢正德 刊期: 2006年第04期

  • CD 94/NKG2家族及其配体研究进展

    NK细胞是重要的天然免疫细胞,具有广泛的生物学功能,其特征是表型为CD3-,CD16+(FcγR Ⅲ A),CD56+(N-CAM),不需要预先刺激即可直接杀伤肿瘤和被病毒感染的靶细胞[1],也可分泌细胞因子调节其他免疫细胞的功能,在机体免疫监视和早期抗感染免疫过程中起重要作用.NK细胞表面的受体目前已发现数十种,按功能可分为活化性受体和抑制性受体两大类.以NK细胞受体基因定位可分为KIR家族、ILT/LIR家族、CD94/NKG2家族、NCR家族、Ly49家族和NKP-P1家族等[2].

    作者:沈亚娟;李春悦;宋晓斐;张建 刊期: 2006年第04期

  • 哮喘患者血清ECP与相关细胞因子浓度变化的临床意义

    目的 了解嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ECP)及有关细胞因子在哮喘患者发作期和缓解期的浓度变化,以探讨其与哮喘发病的作用.方法 观察哮喘发作期患者55名,缓解期患者70名,测定血清中ECP,白细胞介素4(IL-4)和肿瘤坏死因子a(TNFa)浓度,并与40名健康者比较.结果 哮喘发作期和缓解期患者血清中3项指标均明显升高,而缓解期患者的ECP浓度与健康组无明显差异,其它2项仍升高.结论 哮喘患者的发病与ECP,IL-4,TNFa有明显相关,ECP可作为急性发作、疗效判定及预后指标,而IL-4和TNFα可能与复发有关.

    作者:靳宝英 刊期: 2006年第04期

  • 流式细胞仪三色法检测外周血Th细胞亚群培养方案的研究

    目的 改进流式细胞仪三色法检测外周血Th细胞亚群的刺激培养方案.方法 外周全血经RPMI1640培养液和终浓度为25μg/L的PMA、1 mg/L的Ionomycin、20μg/的Monensin培养2 h后,用流式细胞仪分别检测CD4、CD69阳性细胞及CD3阳性细胞表达IFN-γ和IL-4的比例.同时检测培养前CD4阳性细胞及培养4 h后CD3阳性细胞表达IFN-γ和IL-4的比例.结果 淋巴细胞门中CD4+细胞与CD4-细胞能明显区分,培养前与培养2 h后CD4+细胞比例差异无显著性(P>0.05);T淋巴细胞中90%以上表达CD69;刺激培养2 h和4 h后CD3+细胞表达IFN-γ和IL-4的比例差异无显著性(P>0.05).结论 该实验确定的培养方案能满足流式细胞术CD4、IFN-γ、IL-4三色法检测Th细胞亚群的培养要求.

    作者:叶卫东;张循善;翟志敏 刊期: 2006年第04期

  • 全自动干式生化分析仪测定胆碱酯酶的实验研究

    目的 通过胆碱酯酶在全自动干式生化分析仪上测定的实验观察,从而建立一种临床上可靠的简单易行的胆碱酯酶测定方法.方法 利用全自动干式生化分析仪来测定胆碱酯酶并进行方法学评价.结果 高值与低值的批内批间的变异系数(CV)分别为3.8%,3.9%,3.2%,3.3%,与全自动生化分析仪测定结果相比,相关性好(r=0.962).一定范围的胆红素、血红蛋白、抗坏血酸干扰小,但要避免溶血,试剂稳定,通过临床病例观察实验,在有机磷中毒的诊断中,其阳性结果预示值(PV+)和诊断灵敏度以及诊断特异性都达到94%,阳性似然比(PLR)为15.7,阴性似然比(NLR)为0.063.结论 独特的测定原理和试剂片独立的包装,使该实验方法更可靠,有更好的临床实用价值,加上该实验方法操作简单、测定快速,更适于临床有机磷中毒急救中推广应用.

    作者:陈丽峰;马增煌;吴琴 刊期: 2006年第04期

  • 变性高效液相色谱技术在线粒体基因突变检测中的应用

    目的 以变性高效液相色谱(DHPLC)技术分析检测线粒体肌病患者线粒体基因突变,以明确诊断.方法 收集4例临床诊断为线粒体肌病的患者,以50例健康体检者作为对照,提取患者肌肉组织及对照组外周血细胞DNA,用聚合酶链反应(polymerase chin reaction,PCR)扩增线粒体22个tRNA基因,利用变性高效液相色谱分析技术(denaturing high-performance liquid chromatography,DHPLC)对PCR产物进行突变筛选,出现异常峰型的tRNA基因进行核苷酸序列测定,明确突变位点.结果 4例线粒体肌病患者均检测出线粒体基因突变,突变分别为:例1tRNA-Val基因发生A1625G纯合突变,例2 tRNA-Val基因发生A1625G/A杂合突变,例3 RNA-Arg基因发生A10411C/A杂合突变,例4 RNA-Trp基因发生T5553C纯合突变.结论 DHPLC能有效地用于线粒体基因突变的检测,该方法简便,结果稳定,可作为大样本筛查突变位点的一种便捷可靠手段.

    作者:张炳峰;牛琦;陈晓婷 刊期: 2006年第04期

  • 实时荧光定量RT-PCR法检测TNF-αmRNA基因表达

    目的 建立实时荧光定量反转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测TNF-α基因mRNA表达.方法 用T-A克隆技术构建含TNF基因的载体作为标准模板,采用荧光Taqman方法及探针标记技术,建立实时荧光定量RT-PCR方法,制备标准曲线,检测肿瘤患者与正常人外周血单个核细胞的TNF-α mRNA表达水平变化,并与半定量RT-PCR检测结果进行比较.结果 实时荧光定量RT-PCR检测肿瘤患者外周血单个核细胞TNF-αmRNA表达明显高于正常人,且半定量RT-PCR结果显示TNF-α出现类似的变化趋势.结论 所建立的实时荧光定量RT-PCR用于检测TNF-α mRNA表达,结果用拷贝数表示,比半定量RT-PCR更灵敏、准确.

    作者:陈晓;王宇学 刊期: 2006年第04期

  • 乙型肝炎病毒前S1抗原的检测及临床意义探讨

    目的 探讨乙型肝炎病毒前S1抗原与HBV血清标志物和HBV-DNA的相关性及临床意义.方法 ①HBV血清标志物检测采用ELISA法;②HBV-DNA检测采用PCR法;③前S1抗原检测采用ELISA法.结果 1 369例HBsAg阳性者中,前S1抗原阳性者1 061例,阳性率为77.5%;HBeAg阳性者578例中,前S1抗原阳性者530例,阳性率为91.7%.另HBsAg阳性110例并HBeAg阳性者29例,其前S1抗原阳性27例,阳性率为93.1%,HBV-DNA阳性24例,阳性率为82.8%.结论 前S1抗原与HBeAg和HBV-DNA高度相关,提示前S1抗原能够较好地反映病毒复制状况,有可能作为体内病毒复制存在的实验指标.

    作者:郑彦;李芳芹 刊期: 2006年第04期

  • 西部地区小型血站采供血现状及对策

    金昌市地处甘肃河西走廊,辖区人口46.3万,63所医疗单位,其中三级医院1所,二级医院5所,一级医院3所,其他医疗机构54所,年输血量3 300 U左右.由于临床用血机构的无计划性和随意性,造成血站和医院在采供血层面上出现了差异性,常常出现血液偏型现象,为此将本站2000~2004年采供血情况统计分析如下:

    作者:王菊梅;赵肃民;王芳 刊期: 2006年第04期

  • 细菌微量快速生化鉴定方法学研究

    目的 建立细菌微量快速生化鉴定系统,用于临床实验室细菌学的快速诊断.方法 应用所研制的27种微量快速生化反应试剂与传统试管方法检测208株临床分离菌及8种质控菌株生化反应符合率,依据杭州24 h的JYZ-15E及JYZ-11E肠杆菌生化编码鉴定管的项目要求组合了该法的肠杆菌15种(RE15n)及肠杆菌11种(RE11n)生化鉴定试验条,用208株临床分离菌及8种质控菌菌株进行鉴定试验.结果 27种细菌微量快速生化反应试剂与传统试管法生化反应总符合率为93.5%~100%.对208株临床分离菌及8株质控菌的菌种鉴定,其完全符合率15种(RE15n)为99.9%,11种(RE11n)为100%.8种质控菌株鉴定完全正确.结论 用细菌微量快速生化反应系统鉴定细菌,具有简单、快速的特点,无需特殊设备,成本低廉,所得结果准确、可靠,能够满足临床需要.

    作者:赵院利;任健康;闫福堂 刊期: 2006年第04期

  • SDS-琼脂糖凝胶电泳分析蛋白尿来源的临床意义

    目的 分析尿蛋白成分来鉴别蛋白尿来源.方法 应用十二烷基磺酸钠-琼脂糖凝胶进行非浓缩尿蛋白电泳分析49例蛋白尿患者的尿蛋白成分.结果 在肾后性蛋白尿中往往可以检测到巨球蛋白等一类大分子蛋白,而在肾性则往往缺乏.并且以巨球蛋白作为鉴别蛋白尿的标准,其敏感性和特异性均达到95.8%.结论 该方法客观性强,诊断符合率高,重复性好,简便快速,值得临床应用.

    作者:周铁成;秦庆;杨小云;徐焰;程晓东;肖鹏涛;张路;郝晓柯 刊期: 2006年第04期

  • 生化自动分析仪的参数设置与质量保证

    实验室开展的每项化验项目都有其操作规程,有的简写成操作卡放在实验台上,便于随时查看.操作规程和操作卡的建立则体现在实现全自动生化分析的实验室根据试剂盒说明书和仪器的性能原理而设置的实验参数中.全自动生化分析仪的实验参数大多可分为三个方面:①通用参数,又称鉴别参数,包括项目编号、实验名称、计算实验、双项同测实验选择、实验项目组合等.②具体的实验参数,有的称为化学参数,包括的项目有:样品体积分数、波长的选择、方法的类型、反应方向、反应温度、信号的拾取时间、试剂空白核对、样品空白、反应线核对等.③其它一些参数,包括校正参数、质控参数、参考值范围设置、比色杯使用参数等.只有对每一参数的含义、用途和影响因素有全面清晰的了解,并结合对试剂盒和仪器说明书的全面深入的掌握,才能正确设置实验参数.下面就几方面具体的实验参数设置讨论如下.

    作者:尹秀华;李立和 刊期: 2006年第04期

  • 连续监测尿电导率对老年心力衰竭利尿治疗前后的临床意义

    尿电导率代表溶液质点电荷与溶液中所含电解质的浓度和电解质数量成正比关系.老年性心力衰竭病人多发生钠水潴留,造成水肿,心脏负荷加重;利尿剂治疗能促进排钠、排水而快速减轻水肿,缓解症状.但在临床实际工作中,由于缺乏一些有效、简便的监测手段,临床医生往往凭主观经验,这样就会影响到利尿治疗的决策和疗效.本研究将经济、简便无创性尿电导率与渗透压、Na+进行相关分析,旨在为老年慢性心衰患者利尿治疗中提供临床依据.

    作者:沈大江 刊期: 2006年第04期

  • IL-8和IL-10的表达在大鼠肝纤维化机制中的作用

    目的 探讨白细胞介素8(IL-8)和白细胞介素10(IL-10)在大鼠肝损伤和肝纤维化机制中的作用.方法 以四氯化碳(CCl4)诱导大鼠形成肝纤维化模型,以秋水仙碱治疗以延缓肝纤维化进程,采用酶联免疫吸附双抗夹心法(ELISA)检测IL-8、IL-10水平,同时检测肝功能,并对肝组织进行病理检查.结果 IL-8水平在对照组、秋水仙碱组、肝纤模型组的表达分别为:51.25±10.61 ng/L,86.56±23.82 ng/L,167.76±34.52 ng/L,肝纤模型组显著高于对照组和秋水仙碱组(P<0.01);IL-10水平在三组的表达分别为:46.32±9.23 ng/L,38.41±11.53 ng/L,32.28±7.65 ng/L,肝纤模型组显著低于对照组和秋水仙碱组(P<0.01).结论 IL-8可能参与肝纤维化过程,其表达随着肝纤维化的严重程度加重而增加;IL-10有拮抗肝纤维化作用,随着纤维化和肝功能损伤的加重而显著降低.

    作者:梁劲松;张锡流;梁健 刊期: 2006年第04期

  • STA Compact全自动血凝仪缓冲瓶液面感应器故障一例排除

    STA Compact全自动血凝仪为法国STAGO公司生产,操作简便,自动化程度高,结果准确,干扰小,报警信息明了,常见故障参考英文解释一般即可解决,但是前段时间却遇到了一例感应器损坏的故障,通过仔细探讨,终于解决了,现将一点经验作以总结:

    作者:刘丹 刊期: 2006年第04期

  • F-820血细胞分析仪废液收集瓶的改制

    日本希森美康株式会社生产的F-820血细胞分析仪因该仪器具有的技术优势--如15项检测参数和3个细胞分布直方图,高稀释倍率,碳精浮球绝对定量加时间的双重定量技术,自动浮动界标功能;且为我国卫生部临床检验中心进行室间质评定标仪器;再加之仪器的价格性能比,优质的售后服务,使其在国内占较大的市场分额.我科于1999年购置该仪器,因该仪器所带的废液收集瓶容量小,加之我们工作量较大;每天要开启废液瓶1~2次,给工作带来较多不便,因经常开启,瓶口磨损,密封不紧,在2001年底仪器不能进行标本检测处理;购置新废液瓶需花费一定的资金且要等6~8 d时间,为了不影响日常标本的检测工作,我们与医院设备科维修室同志一道,用20 L龙口瓶代替仪器所带废液瓶,恢复仪器工作可以达到每周倒一次废液的效果,经过3年多的实际应用,现报道如下,供同道参考.

    作者:张薇;杨兴江;李竣玲;曾玉琼;许强 刊期: 2006年第04期

  • 丙基硫氧嘧啶导致抗中性粒细胞胞浆抗体阳性的小血管炎相关分析

    目的 研究丙基硫氧嘧啶(PTU)引起的抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)阳性小血管炎的临床表现,提高临床对该疾病的认识.方法 对2例PTU引起的ANCA阳性的小血管炎患者进行临床分析.采用ELISA法检测患者血清的靶抗原及抗体滴度.结果 2例病人均为女性,平均年龄28 y,服PTU时间为29与36 mo.2例均有肾外表现,且为P-ANCA阳性,患者血清均识别MPO和PR3.而服PTU无小血管炎临床表现的甲状腺功能亢进(甲亢)病人的10份血清仅有1例ANCA阳性.2例患者均停用PTU,1例应用激素,1例无特殊处理,2例小血管炎的临床症状均得以缓解,停药和治疗后各种抗体滴度均有所下降.结论 PTU可引起ANCA阳性小血管炎,及时停用PTU或进行相应治疗,预后较好.

    作者:崔丽艳;张捷 刊期: 2006年第04期

  • Beckman LX20全自动生化分析仪急诊部分日常保养及常见故障排除

    美国Beckman Coulter公司生产的LX-20全自动生化分析仪,自动化程度高,结果准确稳定可靠,操作简便.我院自2001年购进使用至今,对于日常工作中的仪器保养维护和常见的故障排除基本都能自己解决,也积累了一定的经验,现介绍如下:

    作者:卢德国;朱爱菊;杨爱;诸葛宝忠 刊期: 2006年第04期

  • 观测外周血血小板、白细胞数量及平均血小板体积对脑梗死的意义

    目地研究外周血白细胞、血小板数量及平均血小板体积与脑梗死的关系.方法 用全自动血细胞分析仪测定100例脑梗死患者急性期和恢复期白细胞、血小板数量及平均血小板体积.对照组为50例健康查体者.结果 脑梗死急性期白细胞计数显著升高;血小板计数显著降低;平均血小板体积显著性增大,脑梗死恢复期则均无统计学差别.结论 观察白细胞数量、血小板数量及平均血小板体积对脑梗死的预防、治疗有一定的临床意义.

    作者:晋兴;曹义战;安良 刊期: 2006年第04期

  • 低浓度DMSO冰冻保存血小板的初步研究

    目的 了解2%(v/v)DMSO结合第二信使效应剂冰冻保存浓缩血小板的可行性.方法 通过在含2%(v/v)DM-SO的浓缩血小板中加入不同浓度的第二信使效应剂,经-80℃冰冻保存1 w,然后分别测定PLT、MPV、Leakage of LDH及血小板表面CD62的表达.结果 硝普钠(SNP)达25 μmol/L时能显著降低CD62分子的表达(P<0.05).结论 SNP对血小板在2%(v/v)DMSO条件下-80℃冰冻保存的效果有所改善,但氨氯吡脒(A7410)的效果不明显.

    作者:洪俊;袁爱莲;徐洪卫;姚锦炎;王浦南 刊期: 2006年第04期

现代检验医学杂志

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主管:陕西省卫生厅

主办:陕西省临床检验中心,陕西省人民医院