学术投稿

多重RT-PCR技术检测儿童呼吸道标本中的常见病毒

曾凡胜;陆学东;王琼;罗小芳;黄烈;吴润香

关键词:呼吸道病毒, 多重RT-PCR
摘要:目的 建立多重RT-PCR技术检测儿科呼吸道标本中常见病毒的方法.方法 参照病毒核酸序列设计多重RT-PCR引物,并检索NCBI数据库初步验证其特异性,以实验室阳性株验证引物特异性,优化多重RT-PCR反应条件.并对2008年61份儿童呼吸道标本进行检测,阳性片段测序验证扩增片段特异性.结果 采用多重RT-PCR引物对流感病毒A型(IVA)、流感病毒B型(IVB)、副流感病毒1型(PIV1)、副流感病毒3型(PIV3)、呼吸道合胞病毒(RSV)和鼻病毒(RHV)等6种病毒进行扩增,均无非特异性扩增条带,分别获得171,489,307,585,155,501 bp片段,与设计相符;对引物的相关性实验结果表明引物之间不会因相互干扰而出现假阳性结果,61份儿童呼吸道标本多重RT-PCR扩增,阳性率为50.82%(31/61),核酸序列与经NCBI数据库Blast比对同源性高.结论 实验证明,所建立的多重RT-PCR技术检测儿童呼吸道标本中常见病毒的方法,敏感度、特异度和可重复性均较好,为常见呼吸道病毒检测提供了一种方便易行的方法.
现代检验医学杂志相关文献
  • 血清肿瘤标志物CYFRA21-1,CEA,SCC,NSE,CA72-4对肺癌诊断价值的评价

    目的 探讨血清肿瘤标志物细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)、癌胚抗原(CEA)、鳞状细胞癌抗原(SCC)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、糖类抗原72-4(CA72-4)对肺癌的诊断价值.方法 应用化学发光及电化学发光技术测定经病理确诊的肺癌患者(145例)、肺良性疾病患者(43例)及健康对照者(45例)血清CYFRA21-1,CEA,SCC,NSE,CA72-4水平,并计算阳性率、敏感度、特异度及准确度,采用方差分析及χ2检验的方法进行统计学分析.结果 肺癌组血清五种肿瘤标志物水平显著高于肺良性疾病对照组及健康对照组(P<0.01).CYFRA21-1在肺鳞癌、CEA在肺腺癌、 NSE在小细胞肺癌、SCC在肺鳞癌中水平高,与其它组相比具有统计学意义(P<0.01);CA72-4在肺鳞癌、肺腺癌的水平显著高于小细胞肺癌(P<0.05).五项指标联合检测后灵敏度、准确度均显著提高(P<0.01).结论 五种肿瘤标志物对于肺癌的辅助诊断均具有实用价值,且联合检测有助于肺癌的早期诊断和治疗.

    作者:黄震英;张淑琴 刊期: 2009年第03期

  • Siglec-1与原发性胆汁性肝硬化的相关性研究

    目的 检测Siglec-1(sialic acid-binding immunoglobulin-like lectins,唾液酸结合的免疫球蛋白样凝集素,CD169)在原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)患者外周血单核细胞上的蛋白及mRNA表达水平,并探讨其在原发性胆汁性肝硬化发生发展中的作用.方法 流式细胞术检测45例PBC患者及36例健康对照者、40例肝炎后肝硬化对照者外周血CD14,CD169双阳性细胞的表达率;实时荧光相对定量RT-PCR方法检测入选对象单核细胞中Siglec-1mRNA的含量;生化常规测定所有入选者血清生化指标水平.结果 流式细胞术检测结果显示:PBC组单核细胞CD14,CD169双阳性率为13.0%±2.5%,显著高于健康对照组(1.0%±0.2%,P<0.01)及肝炎后肝硬化对照组(4.1%±0.5%,P<0.01).PBC组Siglec-1mRNA的相对表达量为健康对照组的3.42倍,差异具有统计学意义(P<0.01).结论 PBC患者单核细胞表面siglec-1蛋白表达显著增高,mRNA含量显著增加,说明PBC患者外周血单核细胞已经发生巨噬细胞化,单核巨噬细胞介导的免疫炎症反应在PBC发生发展过程中起重要作用.

    作者:周晔;奚伟强;蒋廷旺;陈燕;姚定康;邓安梅;仲人前 刊期: 2009年第03期

  • 肿瘤患者化疗前后血小板平均体积的变化及意义

    目的 探讨血小板平均体积(MPV)在预示肿瘤患者骨髓造血功能恢复方面的意义.方法 采用Sysmex SF-3000全自动血液分析仪动态观察50例肿瘤患者化疗前后的白细胞数(WBC)、血小板数(PLT)、血小板平均体积(MPV).结果 在化疗后6 d左右WBC,PLT,MPV先后明显低于化疗前(P<0.05).在化疗后10 d左右MPV回升,与化疗前相比差异无统计学显著性意义(P>0.05),而WBC,PLT与化疗前相比差异仍有统计学显著性意义(P<0.05).结论 MPV比WBC,PLT在评价骨髓造血功能恢复方面更有意义,MPV可以优先作为评价骨髓造血功能恢复的指标.

    作者:葛艾莉;任广利 刊期: 2009年第03期

  • 改良Coombs试验测定孕妇IgG抗A(B)效价的临床应用

    目的 探讨改良Coombs试验及经典Coombs试验在测定孕妇血清中IgG抗A(B)效价的差异及其临床应用.方法 分别用改良Coombs试验和经典Coombs试验测定355例孕妇血清中IgG抗A(B)效价并计算阳性率、特异度和敏感度.结果 改良和经典Coombs试验检测孕妇血清中IgG抗A(B)效价的阳性率分别为49.86%和48.73%,两者的差异无统计学意义(P>0.05).孕妇血清IgG抗A(B)效价在≤1∶32 ,1∶64 ,1∶128 ,≥1∶256时,以经典Coombs试验为标准,改良法的敏感度和特异度分别为99.4%和97.3%.其新生儿溶血病(HDN)发病率分别为1.7%,9.2%,33.9%,55.0%.结论 改良和经典Coombs试验检测孕妇血清中IgG抗A(B)效价的检测结果具有良好的一致性,但改良后的检测时间缩短一倍以上,操作更为简单,值得临床推广.同时经研究发现HDN发病率与孕妇血清IgG抗A(B)效价成正相关.

    作者:陆红;张永顶;陈延娥 刊期: 2009年第03期

  • IQM:POCT质量控制新趋势

    随着即时/床旁检验(POCT)在临床的广泛应用,因其环境和操作人员越来越复杂,除了分析前后的质量难于控制外,分析中的质量控制也面临极大的困难,甚至很多POCT分析仪未进行室内质控就用于测定临床标本.很多POCT检测项目是临床急诊或重症监护项目,其检测结果的快捷、准确直接影响病人的救治.因此,如何保证方便、快捷、准确的检测报告质量,进行分析中的智能化管理是佳的解决方案.IL公司的GEM Primer 3000血气分析仪融入了智能化的管理模式(Intelligent quality management,IQM),实现了分析过程的全自动监控、质量控制和常规故障排除.这种新的质量管理模式给临床提供了质量保证,进行着强制的质量控制,也给非专业的操作者减轻了负担,避免了POCT中许多常见的质量问题,适应了POCT发展的需要.

    作者:贺勇;李萍 刊期: 2009年第03期

  • 促纤维组织增生性小圆细胞瘤骨髓转移1例报道

    促纤维组织增生性小圆细胞肿瘤(desmop lasticsmall round cell tumor,DSRCT) 是一种罕见、高度侵袭性、预后差的恶性肿瘤.自1989年Gerald等[1]首次报道1例以来国外报道约200例,国内报道约50例.

    作者:沈迪 刊期: 2009年第03期

  • POCT质量管理和信息管理的探讨

    P0CT是目前检验医学中具有革命性的新领域,它的发展和应用越来越受到检验医学界的重视.P0CT的出现和应用为医院的快速检验带来了很多方便之处,满足了医生和患者在时间上的需求.但作为新事物,P0CT在质量管理和信息管理等方面仍存在一些不足之处.该文章重点介绍和分析了P0CT的质量管理和信息管理,供检验同行参考.

    作者:柯培锋;王淑媛;欧财文;徐建华;黄宪章;庄俊华;李强;王美兰 刊期: 2009年第03期

  • 2006~2007年Mohnarin西北地区十家医院非发酵革兰阴性杆菌耐药性监测分析

    目的 总结西北地区十家教学医院2006~2007年度临床分离非发酵革兰阴性杆菌的菌群分布和耐药状况.方法 常规方法培养分离医院内感染病原菌,并应用半自动或全自动细菌鉴定分析仪鉴定到种,药敏试验方法按CLSI规定的标准进行.监测数据按卫生部全国细菌耐药监测(Mohnarin)中心设计方案的要求定期上报.采用WHONET5.4软件进行数据统计分析.结果 2006~2007年度西北地区10家教学医院共分离出非发酵革兰阴性杆菌3 148株,其中假单胞菌属细菌1 414株,占分离菌的44.92%(1 414/3 148),不动杆菌属细菌1 403株,占分离菌的44.57%(1 403/3 148), 嗜麦芽窄食单胞菌150株,占分离菌的4.76%(150/3 148).结论 铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌仍是医院内感染的主要监控病原菌,碳青霉烯类和头孢吡肟对医院内感染分离的非发酵革兰阴性杆菌仍有较好的抗菌活性,但应根据细菌的耐药表型检测和药敏结果慎重应用,同时对临床常用其它抗菌药物普遍敏感性降低.应加强对产酶菌和多重耐药菌的监测,为临床正确合理使用抗菌药物提供实验依据.

    作者:徐修礼;陈潇;孙怡群;郝晓柯;牟立东;赵志军;魏莲花;常威;孟灵;周海凤;黄文辉;韩艳;季平 刊期: 2009年第03期

  • LH750血液分析仪VCS数值判断异型淋巴细胞的实验研究

    目的 通过受试者工作特征曲线(riceiver operating characteristic curve,ROC)对Beckman-Coulter LH 750血液分析仪VCS数值进行分析和临床诊断试验评价,建立佳报警阈值.方法 经显微镜检查确认为异型淋巴细胞超过20%,但仪器未有报警提示样本30例;同时收集对照样本30例,进行LH750自动上样测定及显微镜检查,评价VCS两组间差异,并通过ROC曲线计算VCS诊断价值.结果 异型淋巴细胞组VCS值与正常淋巴细胞组VCS值比较,体积较大、电导升高并散射增强,差别具有显著性;体积值AUC为0.412;电导AUC为0.849,cutoff值为122,特异度为86.3%,敏感度为80.0%;光散射AUC为0.765,cutoff值为53,特异度为92.2%,敏感度为66.7%.结论 VCS数值可在无白细胞分类异常情况下提示异型淋巴细胞存在.

    作者:王小林;苑腾;胡晓舟 刊期: 2009年第03期

  • 全血反复冻融对工作站提取基因组DNA的影响

    目的 研究全血样本在反复冻融后对DNA工作站抽提基因组DNA含量和纯度的影响.方法 研究随机抽取100份样本,相隔一天连续进行反复冻融四次,将每次融化的样本运用DNA工作站抽提基因组DNA,并用紫外分光光度仪测定其浓度和纯度及琼脂糖电泳检测DNA完整性.结果 全血样本反复冻融组间比较抽提基因组DNA的含量和纯度,含量(μg)方面,第一次为2.220±1.004,第二次为2.956±0.768,第三次为2.540±0.817,第四次为2.760±0.881;纯度(A260nm/A280nm)方面,第一次为1.748±0.076,第二次为1.780±0.069,第三次为1.855±0.058,第四次为1.750±0.071.检测结果提示差异均无统计学意义(P>0.05),检测DNA长度大于15 kb.结论 反复冻融次数对DNA工作站抽提全血样本基因组DNA的含量和纯度均无影响,具有快速、高通量化的特点和广泛的应用前景.

    作者:王大明;邹红岩;李桢;邓志辉 刊期: 2009年第03期

  • i2000SR全自动免疫分析仪的维护及故障处理

    化学发光免疫分析是以化学发光物质为示踪物,具有灵敏度高、速度快等特点.主要试剂包括氧化剂、发光剂和催化剂等,测试中不使用有害的试剂,因此成为非放射性免疫分析法中有前途的方法之一.i2000SR具备实现完全自动化和不污染环境等优点,特别是能在较短的时间内得到实验结果,而对该仪器的维护、保养及故障排除尤为重要.

    作者:刘检;邓海峰;陆明洋;李敏;徐斌;郑晓;蒋敬庭 刊期: 2009年第03期

  • 四川地区健康农民血清部分生化检测指标的调查分析

    目的 对四川地区健康农民血清部分生化检测指标(Tp,Alb,TG,Chol,UA,Crea,ALP,CK,ADA,5'-NT,AFU,LDH,HDL,LDL,PA,LP(a),ApoA,ApoB,Urea)进行调查分析.方法 选取四川省十一个不同地区健康农民1 396例,其中男性697例,女性699例;按年龄段分为18~35岁,36~45岁,45~55岁,检测其19个血清生化指标.结果 不同性别健康农民的血清生化检测指标中Urea,Crea,UA,Tp,ALP,ADA,AFU,ApoA,PA,HDL,CK等11项差异具有统计学意义(P<0.05),Alb,LDH,5'-NT,Chol,TG,LDL,ApoB,LP(a)等8项指标差异无统计学意义(P>0.05);Chol有年龄差异(P<0.05),其余检测指标年龄差异无统计学意义(P>0.05).结论 四川地区健康农民血清生化检测指标存在年龄、性别上的差异,其参考范围的确立具有较高的临床应用价值.

    作者:饶绍琴;邓君;传良敏;曹万惠;王文建;刘静芸 刊期: 2009年第03期

  • 患者治疗前后血清维生素B12、叶酸水平的变化

    目的 了解慢性疲劳综合征与血清维生素B12和叶酸的关系.方法 分别测定58例慢性疲劳综合征患者按照中医辨证分型服用汤剂治疗前、后的血清维生素B12和叶酸含量,并与健康对照组进行比较.结果 患者组于服用汤剂治疗前,血清叶酸含量(8.54±0.74 ng/ml)与健康对照组(9.12±0.83 ng/ml)相比,差异无统计学显著性意义(t=1.126,P>0.05);而血清维生素B12含量(307±25.78 pg/ml)明显低于健康对照组(503±29.19 pg/ml),差异有统计学显著性意义(t=1.874,P<0.05);患者组服用汤剂治疗后,其血清叶酸含量(8.85±0.77 ng/ml)与健康对照组(9.12±0.83 ng/ml)相比,差异无统计学意义(t=1.187,P>0.05) ;血清维生素B12含量(451±27.99 pg/ml)与健康对照组(503±29.19 pg/ml)相比,差异也无统计学意义(t=1.536,P>0.05) .结论 血清维生素B12缺乏很可能是慢性疲劳综合征的原因之一.

    作者:阮豪骥;吴昆仑 刊期: 2009年第03期

  • 不同制备方法对新鲜冰冻血浆中凝血因子Ⅷ活性含量的影响

    目的 探讨一次成浆与二次成浆法对制备出来的血浆中凝血因子Ⅷ活性含量的影响.方法 对新鲜采集的全血离心分离血浆并在8 h内冻结成块,然后在37℃水浴中复溶后测定两种方法制备的新鲜冰冻血浆中凝血因子Ⅷ的含量.结果 一次成浆法制备的新鲜冰冻血浆中凝血因子Ⅷ的含量为0.70±0.16 IU/ml,二次成浆法制备的新鲜冰冻血浆中凝血因子Ⅷ的含量为0.84±0.16 IU/ml.结论 两种方法制备的新鲜冰冻血浆中凝血因子Ⅷ的含量差异有统计学意义(P<0.05),二次成浆法比一次成浆法制备出来的新鲜冰冻血浆中凝血因子Ⅷ的活性含量要高,值得推广使用.

    作者:叶柱江;刘赴平 刊期: 2009年第03期

  • 葡萄球菌耐消毒剂基因qacA/B检测及临床意义

    目的 了解临床分离的葡萄球菌mecA基因及耐消毒剂基因qacA/B的存在状况.方法 临床分离的40株葡萄球菌,分别用头孢西丁(30 μg)筛查法和聚合酶链反应(PCR)法检测mecA基因,同时采用PCR法检测其耐消毒剂基因qacA/B.结果 40株葡萄球菌中36株mecA基因阳性,占90.0%(36/40);11株检出qacA/B基因者均为mecA阳性葡萄球菌,其中10株为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),1株为耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS),qacA/B阳性率为27.5%(11/40).结论 含qacA/B基因的葡萄球菌全部为mecA基因阳性,提示对临床常用消毒剂耐药的金黄色葡萄球菌同时也对甲氧西林耐药.因此检测葡萄球菌耐消毒剂基因,对合理选用消毒剂,控制葡萄球菌感染传播具有临床意义.

    作者:袁应华;李永明;张雯雁 刊期: 2009年第03期

  • 过敏性儿童白细胞介素4受体Q576R与血清总IgE相关性探讨

    目的 探讨过敏性儿童白细胞介素4(IL-4)受体Q576R与血清总IgE的关系.方法 采用聚合酶链反应(PCR)和垂直电泳方法,检测80例患过敏性疾病的儿童和20例正常对照儿童IL-4R是否存在Q576R突变位点,并用测序进行确认.采用日本HITACHI的CLA-1过敏原分析仪检测80例患过敏性疾病的儿童和20例正常对照组儿童血清总IgE水平,然后进行χ2检验及成组t检验.结果 IL-4受体Q576R突变位点和血清总IgE在过敏组与对照组相比差异有统计学显著性意义(均P<0.05).结论 过敏性儿童IL-4受体Q576R与血清总IgE有相关性.

    作者:周君纯;吴兆勇;吴建锋;龙亚银;王东生 刊期: 2009年第03期

  • ACCESS 2免疫分析系统工作站的升级修复

    Access 2是Beckman Coulter公司生产的全自动微粒子化学发光免疫分析系统,具有高灵敏度、高准确度、检测项目多、24 h待机等特点.

    作者:吴刚珂 刊期: 2009年第03期

  • 无偿献血者血液筛查开展HBcAb检测的必要性分析

    目的 研究血站无偿献血者血液筛查开展HBcAb检测的必要性.方法 对114份HBsAg灰区可疑样本(0.8≤S/CO<1)及1 000份HBsAg阴性初次献血者样本(S/CO<0.8,无溶血、脂血等外观异常)做HBV-M五项(HBsAg,HBsAb,HBeAg,HBeAb,HBcAb)检测,对HBcAb阳性样本做荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测HBV-DNA,对HBV-DNA阳性样本再做HBcAb滴度测定.结果 114份HBsAg灰区可疑样本,HBcAb阳性37例;37例HBcAb阳性样本中HBV-DNA阳性21例;21例HBV-DNA阳性样本HBcAb滴度测定2例为1∶64,其余19例均≥1∶128.1 000份HBsAg阴性初次献血者样本中,HBcAb阳性51例;51例HBcAb阳性样本中HBV-DNA阳性2例;2例HBV-DNA阳性样本HBcAb滴度测定1例为1∶64,1例≥1∶128.结论 血站HBsAg检测应加设灰区(0.8≤S/CO<1),去除灰区可疑样本;再对HBsAg检测阴性样本进行HBcAb筛查,淘汰HBcAb阳性高滴度样本,才能确保输血安全.

    作者:蔡红军;袁克宇;任红红;杨恬;黄劲华 刊期: 2009年第03期

  • 中国人群β-珠蛋白基因增强子区多态性分析

    目的 对中国人群β-珠蛋白基因3'端增强子区序列进行分析,探讨β-珠蛋白基因增强子区的核苷酸多态性.方法 采集100名正常中国人外周血并抽提基因组DNA,通过聚合酶链反应扩增β-珠蛋白基因3'端增强子区,经DNA测序确定增强子区序列的变异.结果 在中国人群中,β-珠蛋白基因3'端增强子区共存在五个单核苷酸变异位点,它们分别是101G/C,182G/A,184C/A,221G/A,340A/T.其中101G/C,182G/A,184C/A和340A/T位点的单核苷酸在人群中出现的频率均大于1%.结论 在β-珠蛋白基因3'端增强子区的五个单核苷酸变异位点中,101G/C,182G/A,184C/A和340A/T为单核苷酸多态性,221G/A可能为突变.

    作者:邹德学;陈卫东;陈伟忠 刊期: 2009年第03期

  • 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药基因及致病毒素基因的研究

    目的 研究金黄色葡萄球菌耐药基因及致病因子中毒休克综合征毒素-1(TSST-1)基因和杀白细胞毒素 (PVL) 基因的分布特征及致病性.方法 收集临床分离的80株金黄色葡萄球菌,PCR法检测毒素基因TSST-1,PVL和 mecA耐药基因.结果 80株金黄色葡萄球菌经PCR法,mecA基因检出率为56.3%(45/80),其中2006年为65.8%(25/38),2007年为47.6%(20/42),2007年的mecA基因检出率低于2006年.PVL+菌株的分离率为30.3%,PVL阳性的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)为13株(13/45,28.9%),金黄色葡萄球菌(MSSA)为11株(11/35,31.4%),差异无统计学意义(P>0.05).TSST-1基因检出率为6.3%(5/80),MSSA中未检出TSST-1基因.结论 产PVL和TSST-1的MRSA致病力更强,增加了临床治疗的难度,对MRSA引起的感染应加强控制,防止其在医院播散流行.

    作者:王凤玲;冯秀河;刘静;张竟宇 刊期: 2009年第03期

现代检验医学杂志

现代检验医学杂志

主管:陕西省卫生厅

主办:陕西省临床检验中心,陕西省人民医院