学术投稿

继发性肺结核患者治疗初期FOXP3 TSDR DNA去甲基化变化情况分析

武学成;冀红霞;魏玉娥

关键词:继发性肺结核, 调节T细胞去甲基化区域(treg-specific demethylated region FOXP3 TSDR), 叉头状/翅膀状螺旋转录因子(forkhead box P3 protein, Foxp3)
摘要:目的应用一种 FOXP3 TSDR DNA去甲基化荧光定量PCR技术,并分析该方法在继发性肺结核患者治疗初期变化情况。方法选取2014年6月~2015年5月来深圳市龙华新区慢性病防治中心就诊的继发性肺结核病人47例作为研究组,健康对照40例,分离外周血单个核细胞,筛选 CD4+CD25+T细胞,提取基因组 DNA。利用去甲基化 FOXP3 TSDR特异性引物扩增对照组基因组DNA,通过酶切、克隆和回收纯化等过程构建质粒标准品,优化 FOXP3 TSDR去甲基化实时定量PCR技术,建立CD4+CD25+T细胞比例与 FOXP3 TSDR PCR 拷贝换算关系,用该方法分析对照组和研究组0周及治疗后2,4和8周时的调节T细胞频率(FOXP3 TSDR去甲基化),应用 spss16.0软件统计分析实验所得数据。结果0周时47例研究组抗酸染色均为阳性,对照组均为阴性。以抗酸染色结果分组:对照组、抗酸(1+)组、抗酸(2+)组、抗酸(3+)组和抗酸(4+)组其调节 T细胞频率分别为1.63%±0.70%,1.96%±0.10%,1.32%±0.32%,0.86%±0.21%和0.53%±0.12%,抗酸(2+)组与对照组差异无统计学意义,抗酸(3+)组与对照组差异有统计学意义。研究组0,2,4和8周时调节T细胞频率均值、范围及95%可信区间分别为1.05%(0.32%~2.03%),CI(0.93%,1.18%);2.04%(0.95%~3.95%),CI(1.85%,2.24%);3.44%(2.35%~4.95%),CI(3.27%,3.61%);2.79%,(1.02%~4.27%),CI (2.60%,2.98%)。对照组与研究组0周时人群调节T细胞频率之间差异有统计学意义(t=4.669,P<0.05)。单变量方差分析显示治疗时间对研究组外周血调节T细胞频率(FOXP3 TSDR 去甲基化)水平变化有影响(F=347.2,P<0.001, df=3,组内F=407.4,P<0.001,df=3),治疗时间和分组交互效应呈线性关系(F=678.2,P<0.001,df=1)。结论该方法敏感、特异,可以用于继发性肺结核患者的疗效监测。
现代检验医学杂志相关文献
  • TLR4与MyD88蛋白在慢性肾功能不全组织中的表达研究

    目的通过研究 Toll 受体4(TLR4)及髓样细胞分化因子88(MyD88)在慢性肾功能不全组织中的表达,探讨TLR4/MyD88蛋白在慢性肾功能不全发生发展中的作用。方法选取2011.07~2014.05华北理工大学附属医院确诊的40例肾功能不全的患者为观察对象,40例肾癌切除患者未被浸润的肾组织为对照,通过免疫组化方法检测慢性肾功能不全患者肾脏组织中TLR4及 MyD88的表达情况,通过腺嘌呤(200mg/kg)连续灌胃制备大鼠模型,定时逆转录 PCR(RT-PCR)及 Western blot检测TLR4及 MyD88的表达,同时将大鼠模型分为TLR4组、未阻断组和 IgG对照组分别检测外周血中尿素氮(BNN)及肌酐(RE)的浓度。结果慢性肾功能不全患者肾脏组织中TLR4及 MyD88的表达明显高于正常对照组;腺嘌呤制备的大鼠模型中的TLR4及 MyD88的基因及蛋白的表达明显高于正常大鼠;TLR4阻断组尿素氮(15.65±3.97mmol/L)明显低于未阻断组(23.33±7.62mmol/L)及 IgG对照组(26.33±6.77mmol/L)(t=2.887,P=0.045);肌酐(523.89±52.67μmol/L)也明显低于未阻断组(789.51±98.17μmol/L)及 IgG 对照组(809.51±94.19μmol/L)(t=4.125,P=0.015)。结论 TLR4及 MyD88蛋白在慢性肾功能不全中表达增加,并且显著促进疾病的发展过程。

    作者:吴景华;郭佳培;王志刚;王海欣 刊期: 2016年第03期

  • 全国网织红细胞计数参考区间和决定限现状调查与分析

    目的调查目前中国网织红细胞计数参考区间的来源、上下限分布以及决定限的现状。方法利用基于 Web方式的室间质量评价软件系统,收集参加2014年网织红细胞计数参考区间调查的实验室参考区间上下限、临床决定水平、来源情况、方法原理、仪器和试剂等相关信息。按照仪器对各实验室进行分组,然后使用 SPSS19.0软件对各组结果进行统计描述。结果共276家实验室回报了有效结果。参考区间来源中所占比例依次为《全国临床检验操作规程》(53.99%)、仪器厂家说明书(16.30%)、教科书(9.78%)、试剂厂家说明书(9.06%)等。决定限来源中所占比例依次为《全国临床检验操作规程》(56.06%)、仪器厂家说明书(16.67%)、教科书(7.58%)、试剂厂家说明书(7.58%)等。不同组间的参考区间上下限以及临床决定水平的中位数与均值较为接近,但P2.5和P97.5差异较大。仅有45.65%和48.48%的实验室在使用参考区间和决定限前对其进行了验证。参考区间下限和决定限在不同组间无明显差异(P>0.05),但参考区间上限在不同仪器组间差异具有统计学意义(P<0.001)。结论中国网织红细胞参考区间现状不尽如人意,应建立适应中国大多实验室和主要检测仪器的参考区间和决定限,为网织红细胞技术的标准化工作提供参考。

    作者:章晓燕;王薇;何法霖;钟堃;王治国 刊期: 2016年第03期

  • 髓样细胞白血病-1基因在原发性肝癌组织中的表达及临床意义

    目的探讨髓样细胞白血病-1(myeloid cell leukemia-1,Mcl-1)基因及蛋白在原发性肝癌和肝硬化组织中的表达及临床病理学意义。方法采用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)法,蛋白质印迹法(western blot,WB)和免疫组织化学 ENVISION法分别检测20例肝癌组织,19例肝硬化组织和12例对照肝组织中 Mcl-1的表达,并分析其表达与肝癌临床病理学特征的关系。结果 Mcl-1 mRNA相对表达强度在对照组、肝硬化组和肝癌组中分别为0.52±0.17,3.46±1.7,3.65±2.93,其中肝癌组及肝硬化组分别与对照组间比较,差异均有统计学意义(t=7.925,5.334,P<0.05)。Mcl-1蛋白相对表达量在肝硬化组(0.51±0.35)和肝癌组(0.75±0.36)均显著高于对照组(0.21±0.19)(t=5.526和6.355,P<0.05)。肝癌组Mcl-1的阳性表达率为55.00%(11/20),显著高于对照组33.33%(4/12)(t=7.835,P<0.05),Mcl-1蛋白阳性表达与肿瘤有无坏死和TNM分期有关(χ2=4.201,P<0.05)。结论 Mcl-1基因及蛋白在肝癌组、肝硬化组和对照肝组织中的表达存在差异,可能参与了肝硬化的发生、发展及向肝癌的恶性转化。

    作者:李峰;魏群;周国雄;黄东凤;张弘 刊期: 2016年第03期

  • 抗着丝点抗体在多种疾病中的变化和意义

    目的研究抗着丝点抗体(anticentromere antibody,ACA)在多种疾病中的表达,为临床诊治提供指导。方法回顾性分析129例 ACA阳性患者的临床资料及实验室检测指标。结果①129例 ACA阳性患者中女性116例,男性13例,女性 ACA的血清滴度高,复合型抗体多见,与男性相比差异有统计学意义(χ2=6.28,P=0.01;χ2=6.85,P=0.003)。②118例有详细临床资料的患者中自身免疫疾病65例(55.08%),非自身免疫疾病53例(44.92%)。自身免疫疾病多见复合型、高滴度抗体,与非自身免疫疾病比较差异有统计学意义(χ2=21.97,P<0.001;χ2=11.44,P=0.001)。结论 ACA在自身免疫疾病和非自身免疫疾病中均可见到,临床表现多样,且可引起多器官受累,应引起足够重视。

    作者:邢雪梅;李艳琴;沈刚;张军;刘蓉;李毅;李向东 刊期: 2016年第03期

  • SP-1000i全自动推片染色仪及CellaVision DM96自动阅片仪在形态学检验人员镜下比对中的应用

    目的将 SP-1000i全自动推片染色仪及CellaVision DM96自动阅片仪应用于形态学镜下人员比对工作以提高客观性和一致性。方法实验室两名有经验的员工及其他10名值班人员分别按照传统镜检方法和新比对方法(使用 SP-1000i全自动推片染色仪及CellaVision DM96自动阅片仪)对10例静脉血样本进行白细胞分类形态学比对,并比较两种比对方法所需的时间。结果采用新比对方法较传统方法能够明显提高人员间对各类细胞分类的一致性(P<0.01),大大降低了需重新比对的人数(P<0.01),明显缩短了参比人员所花费的时间(P<0.01)。结论将 SP-1000i和 CellaVision DM96应用于细胞形态学镜下人员比对工作,可以省时、省力、高效地提高实验室质量管理。

    作者:刘艳红 刊期: 2016年第03期

  • 类风湿关节炎患者滑膜抗环瓜氨酸肽表位表达与肽酰基精氨酸脱亚氨酶4基因的相关性分析

    目的探讨类风湿关节炎患者滑膜抗环瓜氨酸肽(CCP)表位表达与肽酰基精氨酸脱亚氨酶4(PADI4)基因的相关性。方法2013年2月~2015年选择在湖北医药学院附属东风医院风湿免疫科住院的类风湿关节炎患者110例作为观察组,同期选择在该院进行体检的健康者110例作为对照组,两组都进行滑膜抗 CCP表位表达阳性率检测与 PADI4基因表达检测,同时进行相关性分析。结果观察组与对照组的滑膜抗 CCP表位表达阳性率分别为70.9%和9.1%,观察组明显高于对照组(χ2=23.289,P<0.05)。观察组 PADI4-104基因型的表达频率与对照组对比差异有统计学意义(χ2=2.984,P<0.05),多为 G/G表达,而对照组多为C/G表达。Pearson相关性分析显示在观察组中,滑膜抗 CCP表位阳性表达情况与PADI4-104基因型表达频率之间存在明显相关性(r=0.344,P<0.05);logistic逐步回归分析显示 PADI4-104基因型表达频率是影响滑膜抗CCP表位表达的主要因素(P<0.05)。结论类风湿关节炎患者的滑膜抗 CCP表位表达阳性率明显增加,同时也存在PADI4基因多态性紊乱情况,两者也存在明显的相关性,从而影响类风湿关节炎的发病状况。

    作者:沈小辉;喻伟;杨菲 刊期: 2016年第03期

  • 应用灰色动态GM(1,1)数学模型进行临床血液采集量预测

    目的探讨应用灰色动态 GM(1,1)模型,分析和预测常态下承德市中心血站血液品种采集数量的动态发展变化趋势,根据模型的应用效果做出定量预测。方法根据承德市中心血站2004年1月~2013年12月的全血(400 ml)(人次)、单采少白血小板(人份)血液品种年采集数据,将2013年预测值与实际值比较,检验模型的预测能力,同时分析2014~2016年血液采集数量。结果以上两类血液采集品种数量灰色动态 GM(1,1)模型的 Y(t)后验差比(均方差)C均<0.35,小误差概率P值均为1。精度均为优,用于血液采集量预测的效果好。结论承德市中心血站以上两类血液采集品种数量呈逐渐增高趋势。灰色系统一阶模型 GM(1,1)作为一种新型预测模型,能够在常态下合理预测采供血系统血液采集量。

    作者:张小伟;王淑香;王岩;马玲 刊期: 2016年第03期

  • IL-19在2型糖尿病患者中的表达及与血管病变的关系

    目的探讨白细胞介素-19(IL-19)水平在2型糖尿病(T2DM)患者中的表达以及与血管病变的关系。方法选取T2DM患者120例(其中并发大血管病变32例,微血管病变52例,无血管病变36例),同期选择健康体检者50例为对照组,分别检测研究对象中 IL-19,空腹血糖(FBG),胰岛素(FINS)和糖化血红蛋白(HbA1c)水平,并与对照组作比较。结果T2DM组中 IL-19水平显著高于正常对照组(41.9±11.9 pg/ml vs 16.2±8.5 pg/ml),差异有统计学意义(t=7.56,P<0.05)。T2DM并发大血管病变组和微血管病变组 IL-19水平显著高于无血管病变组(t=4.57,3.26;均P<0.05),且与病变血管数量有关。IL-19与胰岛素抵抗(HOMA-IR),HbA1c呈显著正相关(r分别为0.523和0.491,均P<0.01)。结论T2DM患者中 IL-19水平显著升高,与 HbA1c和 HOMA-IR抵抗密切相关,并且 IL-19可能参与了 T2DM血管病变的发生和发展。

    作者:李礼;胡娟玉;于正清 刊期: 2016年第03期

  • 丙型肝炎患者自身抗体检出率、丙肝病毒载量及肝功能间的相关性

    目的研究丙型肝炎患者自身抗体检出率、丙肝病毒(HCV)载量及肝功能三者之间的相关性。方法检测168例丙肝患者自身抗体、丙肝病毒载量以及肝功能结果,并选取和检测129例健康对照者的自身抗体,其中计数资料采用卡方检验、计量资料采用t检验或者非参数秩和检验,统计分析丙肝患者与健康对照组自身抗体检出率差异,分析丙肝患者中自身抗体、病毒载量以及肝功能三者间的相关性,并分析自身抗体检出率与患者年龄、性别的关系。结果丙肝患者自身抗体阳性检出率为35.12%(59/168),各抗体阳性率分别为:抗核抗体(ANA)33.93%,抗平滑肌抗体(SMA)2.98%,抗线粒体 M2抗体(AMA-M2)1.80%,抗肝肾微粒体抗体(anti-LKM1)1.20%。抗胞浆抗体和抗可溶性肝抗原抗体未检出阳性。丙肝患者自身抗体总检出率及抗核抗体检出率较健康对照组高(χ2=23.179,P=0.000;χ2=21.360,P=0.000)。丙肝患者中,自身抗体阳性组与阴性组间丙肝病毒载量、总胆红素、谷氨酸氨基转移酶以及天冬氨酸氨基转移酶水平差异无统计学意义(χ2=0.113,P=0.945;Z=-1.087,P=0.277;Z=-1.356,P=0.175;Z=-0.153,P=0.878);自身抗体检出率与性别无关(χ2=2.897,P=0.089),而与年龄相关(t=3.274,P=0.001)。HCV RNA阴性组与阳性组间谷氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶水平以及年龄的差异具有统计学意义(Z=-6.430,P=0.000;Z=-6.123,P=0.000;t=-3.152,P=0.002),HCV RNA阴性组年龄低于阳性组(44.17岁 vs 55.27岁)。结论丙肝患者容易发生自身免疫,自身抗体的产生与年龄有关,而与体内丙肝病毒载量的高低无关,也不能预测患者的肝功能损伤情况。HCV载量与患者年龄及肝损伤相关,高龄组病毒载量较高,肝损伤较严重。

    作者:甘志超;刘莹;赵冰红;郭桂玲;黄前川 刊期: 2016年第03期

  • 儿童呼吸道感染患者金黄色葡萄球菌的分离与耐药性分析

    目的探讨和分析金黄色葡萄球菌在儿科呼吸道感染患者中的分离与耐药性变化,为指导临床用药控制感染提供依据。方法采集2013年1月~2014年12月两年儿科(包括新生儿科)呼吸道感染患者痰液标本共5413例,应用 Mi-croScan-As4微生物自动鉴定分析仪对分离后的菌株进行鉴定和药物敏感试验,用 Whonet5.6软件进行统计分析。结果从儿科呼吸道感染患者标本中共分离出各种病原菌29种1540株。其中金黄色葡萄球菌(S.aureus,SAU)336株(21.82%,336/1540),超过总病原菌的1/5,在儿科呼吸道感染分离率占6.21%,显著高于其它病原菌分离率(除流感嗜血杆菌5%外,其余均<5%)。在所有检出 SAU中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)59株(17.56%,59/336),可以看出 SAU在儿科呼吸道感染患者中占据首要位置。SAU对万古霉素、利奈唑胺、达托霉素、奎奴普丁这4种抗菌药物耐药率为0,对其它抗菌药物呈现不同程度耐药性;MRSA对青霉素、氨苄西林、苯唑西林、氨苄西林/舒巴坦、阿莫西林/克拉维酸、头孢唑林、头孢曲松耐药率为100%,对红霉素、克林霉素耐药率超过50%,对其它抗菌药物耐药性呈低耐药性。结论儿童呼吸道感染 SAU较多,尤其 MRSA多重耐药现象严重。应加强对金黄色葡萄球菌耐药性监测,根据药敏试验结果进行个体化、合理化选用抗菌药物,有效控制和减少耐药菌株产生。

    作者:刘青;樊冰 刊期: 2016年第03期

  • 乙型肝炎病毒SYBR Green I实时荧光定量PCR方法的建立及临床应用

    目的建立 SYBR Green I实时荧光定量 PCR检测乙型肝炎病毒 DNA的快速方法,并探讨其临床应用价值。方法根据GenBank公布的Hepatitis B virus gp1基因序列设计引物,建立SYBR Green I实时荧光定量PCR,并对反应体系和扩增程序进行优化。定量标准品通过基因克隆方法获得,同时以浙江省夸克公司 HBV DNA定量检测试剂盒作对照,应用于随机选取的100份乙型肝炎患者血清检测。结果 SYBR Green I 实时荧光定量 PCR 检出限范围为5×102 copies/ml~5×108 copies/ml,HBV DNA浓度与CT值有良好线性关系,无交叉反应,整个过程仅需2.5 h。在随机抽取的100份临床标本应用中,与浙江省夸克公司的 HBV荧光定量 PCR检测试剂相比,建立的 SYBR Green I实时荧光定量PCR体系灵敏度100%,特异度92.5%。结论 SYBR Green实时荧光定量PCR快速、简便、灵敏度高、特异度强,可用于乙型肝炎患者病情监测,有效指导临床用药,准确评价 HBV感染者的病情。

    作者:何维娜;吕东月;刘和录;韩杰辉;何玥;李培培 刊期: 2016年第03期

  • STING在原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞中的表达及临床意义

    目的探讨刺激干扰素基因(STING)在原发性胆汁性肝硬化(PBC)中的表达及其潜在的临床意义。方法纳入2014年1月~2015年10月期间在上海长海医院和长征医院就诊的PBC患者28例,平均年龄32.5±11.3岁,纳入同期体检的健康对照28例,平均年龄37.5±13.7岁。分离单个核细胞(PBMC),采用实时荧光定量PCR检测 STING mRNA表达水平;采用Spearman检验分析STING表达水平与PBC患者临床指标的相关性;随访5例初诊的PBC患者,观察临床治疗前后 STING表达水平的变化。结果与健康对照组相比,STING mRNA在 PBC患者 PBMC中显著增高,在Ⅲ期和Ⅳ期中的表达显著高于 I期和Ⅱ期,差异有统计学意义(U=0.00,P<0.05)。STING mRNA水平与患者 Mayo评分、GGT正相关(R=0.45,R=0.42,P<0.05),与 AST,ALT和 ALP无相关性(R=0.33,0.21,0.27,P>0.05)。临床治疗有效后,STING mRNA的表达量显著降低,差异有统计学意义(U=0.00,P<0.05)。结论 STING可能参与了PBC的发病机制。

    作者:陈燕;谷明莉;叶辛;李腾达;邓安梅 刊期: 2016年第03期

  • 血清脂蛋白(a)和同型半胱氨酸(HCY)与2型糖尿病胰岛素抵抗的临床研究

    目的分析血清脂蛋白(a)[Lp(a)]和同型半胱氨酸(HCY)在2型糖尿病(T2DM)中的水平,探讨它们与胰岛素抵抗(IR)之间的关系。方法选取2012年5月~2015年12月陕西省康复医院住院并确诊为 T2DM的患者108例作为病例组,病例组按照有无肾病并发症分为单纯糖尿病(SDM)组48例和糖尿病肾病(DN)组60例。同期选择67例健康体检者作为正常对照组(NC组)。收集所有研究对象一般资料并采集他们的全血及血清标本,测定以下指标:糖化血红蛋白(HbA1c)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)、胱抑素 C(CysC)、Lp(a)和 HCY水平;对 SDM组和DN组的研究者同时测定空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);比较各组间上述指标的差异以及分析 Lp(a)和 HCY与 IR间的关系。结果①三组间比较仅在体重上:NC组60.1±10.34 kg,SDM组67.2±11.38 kg和 DN 组68.8±1.35 kg,差异有统计学意义(F=0.457,P=0.035)。②NC组、SDM组、DN 组三组间比较, HbA1c(F=3.421,P=0.013),LDL-C(F=2.963,P=0.041),BUN(F=4.637,P=0.031),SCr(F=2.369,P=0.024), CysC(F=3.697,P=0.011),Lp(a)(F=1.236,P=0.021),HCY(F=4.317,P=0.027),差异均有统计学意义。③SDM组 FPG,FINS和 HOMA-IR分别是5.99±0.94 mmol/L,61.11±28.46 pmol/L 和2.93±1.97。DN 组 FPG,FLNS和HOMA-IR分别是9.01±2.23 mmol/L,98.56±62.14 pmol/L和4.34±2.74。两组间比较 FPG,FINS,HOMA-IR(t=0.47,0.55,0.69,均P=0.024),差异均有统计学意义。④Lp(a),HCY 与 HOMA-IR 呈正相关,相关系数分别为r=0.761,0.840;P=0.044,0.021。结论血清Lp(a)和 HCY水平在DN患者中表达增高,与IR有一定相关性,同时检测血清 Lp(a)和 HCY对DN的早期发现有重要意义。

    作者:余安运;刘夏炎;宋煜;于佩方 刊期: 2016年第03期

  • 基质金属蛋白酶-9在类风湿性关节炎中的诊断价值研究

    目的探讨基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)在类风湿性关节炎(RA)中的诊断价值。方法收集45例 RA患者和28例健康体检者(HV)血清,采用免疫比浊法检测血清类风湿因子(RF)和超敏 C反应蛋白(hs-CRP)含量,魏氏法检测红细胞沉降率(ESR),ELISA法检测 MMP-9含量;Pearson相关分析 MMP-9与 RF,hs-CRP 及ESR相关性。结果 RA患者血清 RF,ESR,hs-CRP和 MMP-9均显著高于 HV组(t=3.93~5.96,P 值均<0.001);RF高滴度组 MMP-9显著高于低滴度组(t=2.10,P<0.05),且高炎症组显著高于低炎症组(t=2.08,P<0.05);同时 RA患者血清 MMP-9与 RF,ESR及 hs-CRP均呈正相关(r=0.30~0.47,P值均<0.05)。结论 MMP-9可能在 RA患者诊断治疗中具有一定价值。

    作者:欧水连;潘志锋;徐灼均;梁映亮;邬静怡;莫和国 刊期: 2016年第03期

  • 黄芩苷对一株产NDM-1大肠埃希菌体内外抗菌作用的研究

    目的观察黄芩苷对产 NDM-1大肠埃希菌的体内外抗菌作用。方法肉汤稀释法测定黄芩苷的小抑菌浓度(MIC)、小杀菌浓度(MBC);棋盘联合药敏试验检测黄芩苷与亚胺培南的协同作用;通过小鼠菌血症模型,观察黄芩苷对感染模型的保护作用。结果黄芩苷的小抑菌浓度和小杀菌浓度相同,均为8 mg/ml;黄芩苷与亚胺培南呈明显的协同作用(FIC=0.125),单独使用黄芩苷使菌血症小鼠死亡率降低25%。结论黄芩苷体内、外均具有一定的抗产 NDM-1大肠埃希菌活性。

    作者:刘志远;潘健;齐杰;张婷菊;马玉芝 刊期: 2016年第03期

  • 自制C肽质控品及其性能评价

    目的应用化学发光法检测血液C肽时,实验室缺乏相应的质控品。探讨自制 C肽混合血清质控品作为该法测定C肽室内质控品的可行性。方法从糖尿病患者和健康体检血清中分别收集 C肽低值血清(浓度在1.20 ng/ml左右)和高值血清(浓度在12.00 ng/ml左右),排除溶血、黄疸及脂浊血清,防止细菌污染,乙型肝炎表面抗原、丙型肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒指标均为阴性,然后分别进行混合、防腐、分装,-20℃保存。使用西门子公司化学发光 C肽试剂盒进行测定,对自制C肽混合血清质控品进行性能评价。结果低值、高值两个水平的血清 C肽质控品的批内不精密度分别是4.46%和4.15%;天间不精密度分别是6.00%,5.56%;-20℃保存稳定期至少6个月;经单因素方差分析,每个月之间相比,低值和高值的F值分别是0.665,0.602,P值分别是0.471,0.568,均>0.05,差异无统计学意义;瓶间无显著性差异。结论-20℃保存的低值和高值两个水平自制C肽混合血清质控品能够符合室内质控品要求。

    作者:张培育;邓演超;李全双 刊期: 2016年第03期

  • 抗 HPV18 E6多肽单克隆抗体的制备及鉴定

    目的制备特异性抗人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)18 E6多肽抗体。方法通过在线分析软件AB-Cpred和Bcepred预测 HPV 18E6特异性多肽序列,将多肽序列与牛血清蛋白(bovine albumin,BSA)偶联,以偶联后多肽为抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗 HPV18 E6多肽单克隆抗体;以 HPV18阳性分泌物标本DNA为模板,聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)获得 HPV 18 E6基因,将该基因插入表达质粒 pET-28a,转化大肠埃希菌BL21(DE3),异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导目的蛋白表达;采用 Western Blot方法鉴定抗 HPV18 E6多肽抗体与目的蛋白的反应性。结果建立的杂交瘤细胞株能稳定产生 HPV18 E6多肽单克隆抗体;重组表达质粒 pET-28a-HPV18 E6测序证明构建正确,成功表达 HPV18 E6蛋白;纯化后的抗 HPV 18 E6多肽抗体可特异性识别原核表达 HPV 18 E6蛋白。结论成功制备抗 HPV18 E6多肽序列,该抗体具有较好的特异性。

    作者:孔倩倩;唐振华;相芬芬;詹月萍;许健;吴蓉;康向东 刊期: 2016年第03期

  • 冠心病患者α-内收蛋白基因多态性与表达水平研究

    目的探讨α-内收蛋白基因(ADD1)的单核苷酸多态性(SNP)及表达水平与冠心病(CAD)的相关性。方法提取2011年1月~2013年10月就诊于火箭军总医院的114例CAD患者和116例健康对照者外周血白细胞DNA和RNA,应用荧光标记单碱基延伸及杂交技术检测ADD1基因的rs3775067和rs1263359多态性,应用荧光标记及毛细管电泳技术检测 ADD1的基因表达水平。结果 ADD1基因2个 SNP的基因型频率和等位基因频率在两组间差异无统计学意义(χ2=0.018~1.317,P 值均>0.05)。CAD 组的 ADD1基因表达水平为0.226±0.284,明显高于健康对照组(0.153±0.144),差异有统计学意义(P<0.05)。通过对不同基因型间表达水平的比较,结果显示 CAD组 rs3775067的 TC型患者的基因表达水平(0.250±0.319)明显高于健康对照组(0.154±0.156,P<0.05),余各基因型两组间表达水平差异无统计学意义(t=0.557~1.867,P 值均>0.05)。结论 ADD1基因表达水平的升高是 CAD 的危险因素,而 rs3775067和rs1263359多态性与CAD的易感性无关。

    作者:张阳东;陈洁;楚瑞雪;王利营;云洁;安娟;方靓 刊期: 2016年第03期

  • 外周血细胞形态学检查与EBV-DNA定量分析在小儿传染性单核细胞增多症早期诊断中的价值

    目的评价外周血异常淋巴细胞(异淋)形态学的检查和实时荧光定量 PCR技术检测 EB病毒 DNA定量在小儿传染性单核细胞增多症早期诊断中的价值。方法回顾性分析了2013年1月~2014年12月收治的212例传染性单核细胞增多症的患儿,分别抽取其发热初期和1周后抗凝静脉血做外周血涂片细胞形态学检查和实时荧光定量 PCR技术检测EBV-DNA定量。结合患儿初诊时的临床表现进行综合分析。异型淋巴细胞>10%及 EBV-DNA定量超过1.0×103拷贝为阳性。结果在212例传染性单核细胞增多症的患儿中,发热初期外周血涂片细胞形态学检查,82例异型淋巴细胞阳性,100例外周血 EBV-DNA定量阳性。1周后复检外周血,156例异型淋巴细胞阳性,高可达56%;180例 EBV-DNA定量阳性。联合检测外周血细胞形态学异型淋巴细胞及 EBV-DNA定量,发热初期,阳性125例,较单纯外周血细胞形态学异型淋巴细胞检测(χ2=17.45,P<0.01)及 EBV-DNA定量检测(χ2=5.92,P<0.05)均明显提高;但1周后,阳性190例,较单纯外周血细胞形态学异型淋巴细胞检测明显升高(χ2=18.16,P<0.01),但与 EBV-DNA定量检测比较,无明显提高(χ2=2.12,P>0.05)。结论联合检测外周血细胞学形态及 EBV-DNA定量对早期诊断小儿传染性单核细胞增多症十分重要,结合临床表现,能提高诊断的及时性及准确性。

    作者:肖波;毛金娥;陈万新 刊期: 2016年第03期

  • 血清胃蛋白酶原和胃泌素-17对萎缩性胃炎及胃癌患者诊断价值

    目的探索血清胃蛋白酶原(pepsinogen,PG)Ⅰ,PGⅡ和胃泌素-17(gastrin-17,G-17)对萎缩性胃炎及胃癌患者的早期临床诊断价值。方法研究采用观察性病例-对照研究,共430例受检者纳入研究。血清测试前,受检者经活检组织病理学检查证实。根据病理结果将受检者分为非萎缩性胃炎160例、萎缩性胃炎118例、胃癌152例,用酶联免疫吸附试验方法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清 PGⅠ,PGⅡ和 G-17含量,并计算 PGⅠ/PGⅡ比值。结果与非萎缩性胃炎组相比,萎缩性胃炎组血清PGⅠ和 G-17均降低,差异具有统计学意义(P<0.05),胃癌组血清 PGⅠ, PGⅡ,PGⅠ/PGⅡ及 G-17均降低,差异具有统计学意义(P<0.05);与萎缩性胃炎组相比,胃癌组血清 PGⅠ和 G-17均降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。根据受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC),PGⅠ,PGⅡ,PGⅠ/PGⅡ及G-17诊断萎缩性胃炎的佳临界值为84.706μg/L,10.873μg/L,11.008和8.265 pg/L,诊断胃癌的佳临界值为65.145μg/L,10.089μg/L,6.375和4.971 pg/L。结论血清 PGⅠ,PGⅡ,PGⅠ/PGⅡ及 G-17水平低下是萎缩性胃炎及胃癌生物学标志,对胃癌早期诊断具有重要的临床意义。

    作者:杨建华;王炳华;林勇 刊期: 2016年第03期

现代检验医学杂志

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主管:陕西省卫生厅

主办:陕西省临床检验中心,陕西省人民医院