学术投稿

两种显色方法在免疫组化和原位杂交技术中应用

肖庆邦;王海青;郭瑞珍

关键词:免疫组织化学, 原位杂交, 显色
摘要:免疫组织化学(immunohistochemistry, IHC)和原位杂交(in situ hybridization, ISH)技术是科研和临床病理诊断工作中经常同时采用的两种技术.在国内这两种方法均是通过二氨基联苯氨(diaminobenzidin, DAB)进行后显色,其阳性信号均显示为棕黄色颗粒.两种方法中IHC显示的是蛋白水平,而ISH显示的是分子水平,若仅根据阳性信号的颜色进行区别,宜混淆.为了进行有效的区别,本组实验分别采用了国内通用的DAB显色方法和国外应用广泛的3-氨-9-乙基咔唑(3-amino-9-ethyl- car bazole,AEC)显色方法对上述两种方法进行显色,效果满意,有效区分IHC和ISH的阳性信号,现报道如下.
临床与实验病理学杂志相关文献
  • 两种制片方法在胸腹水细胞学诊断中联合应用

    胸腹水细胞学检查是病理科和细胞室常见标本之一,传统细胞学制片方法存在一定不足,给细胞学诊断带来困难.我们采用液基细胞学制片和细胞块制片联合应用的方法,取得了满意效果,现介绍如下.

    作者:孙春龙 刊期: 2012年第11期

  • 原发性乳腺恶性淋巴瘤36例临床病理分析

    目的 探讨原发性乳腺淋巴瘤(primary lymphoma of breast,PBL)的临床病理特点、免疫表型及鉴别诊断.方法 回顾性分析36例PBL的临床病理资料和免疫表型,结合文献对其临床病理特点进行分析.结果 36例PBL均为女性,年龄28~74岁,中位数49岁,≥49岁者19例,占52.7%,肿块位于右侧乳腺者19例(占52.7%),位于左侧乳腺者15例(占41.7%),双侧乳腺2例(占5.6%);弥漫大B细胞淋巴瘤(diffused large B cell lymphoma,DLBCL)22例,占61.1%;黏膜相关淋巴组织(mucosa associated lymphoid tissue,MALT)淋巴瘤7例,占19.4%;滤泡性淋巴瘤(follicular lymphoma,FL)2例,占5.6%;T淋巴母细胞性淋巴瘤(T lymphoblastic lymphoma,T-LBL)2例,占5.6%;外周T细胞淋巴瘤(peripheral T-cell lymphoma,PTCL)3例,占8.3%.结论 PBL少见,多发生于中老年女性;PBL大多是B细胞淋巴瘤,DLBCL常见,其次是MALT淋巴瘤.PBL确诊依赖组织病理学,免疫组化标记对明确诊断、分型和鉴别诊断具有一定的价值.

    作者:郭庆;沈勤;王少华;马恒辉;陆珍凤;余波;石群立 刊期: 2012年第11期

  • 下调EMS1/cortactin对人高转移潜能肝癌细胞株迁移和内吞的影响

    目的 观察下调人高转移潜能肝癌细胞株(MHCC-97H)中EMS1/cortactin对细胞迁移和内吞的影响,探讨EMS1/cortactin在细胞内可能存在的功能.方法 构建靶向EMS1的shRNA真核表达质粒(EMS1-PSilencer4.1-GFP-shRNA,EMS1-shRNA);通过Lipofectamine 2000处理后将EMS1-shRNA转染MHCC-97H细胞,免疫荧光显微镜下观察转染效率;采用RT-qPCR和Westen blot分别检测EMS1 mRNA和cortactin蛋白表达水平;利用划痕、Transwell小室实验、转铁蛋白(transferrin,Tfn)内吞实验分别研究细胞迁移和内吞作用.结果 成功构建EMS1-shRNA.免疫荧光显微镜下见转染细胞中明显的绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP),荧光强度在48 h达到峰值,其转染效率达84.76%.与未处理组相比,转染EMS1-shRNA细胞中EMS1 mRNA水平下降至19.00%,cortactin蛋白水平下降至36.74%、细胞相对迁移距离下降至55.52%、相对穿膜细胞数下降至27.79%、细胞内吞荧光标记Tfn水平显著减弱(P均<0.05).结论 下调EMS1/cortactin后,MHCC-97H细胞迁移、内吞能力明显下降,提示EMS1/cortactin与原发性肝癌(primary human heptatocellular,HCC)转移的生物学行为有关.

    作者:周家名;陈莉;叶蕴瑶;孙树刚;王桂兰;吴圆圆 刊期: 2012年第11期

  • 肺硬化性血管瘤的组织发生及p63表达的意义

    目的 探讨p63在肺硬化性血管瘤(sclerosing hemangioma,SH)中的表达及意义,并探讨SH的组织起源、病理形态学特征、诊断.方法 对12例SH作回顾性研究,其中9例行p63、SPB、TTF-1、EMA、CKpan、vimentin、SMA、CgA、Syn和CD34等免疫组化EnVision法标记.结果 SH组织主要表现为实性区、乳头区、血管瘤样区和硬化区等四种结构.瘤细胞主要由立方形和多角形或圆形两种肿瘤细胞组成.免疫组化示8例SH乳头状表面及实性区腺腔样或裂隙样结构衬覆的立方形细胞肿瘤表达p63,所有肿瘤细胞同时表达TTF-1和EMA,立方形肿瘤细胞表达SPB,多角形或圆形肿瘤细胞表达vimentin,仅1例多角形或圆形肿瘤细胞CgA局灶性,Syn弱阳性.结论 p63阳性的立方形肿瘤细胞可能是多潜能的原始呼吸道上皮细胞,它具有多方向分化的能力.p63免疫标记对SH的诊断可能具有重要的价值.

    作者:张昶;刘海燕;乔海国;吴健 刊期: 2012年第11期

  • 病毒感染与乳腺癌发病的相关性

    乳腺癌居全球女性癌症发病率的第1位,其病因、发病机制复杂.研究者认为月经初潮早、绝经晚、肥胖以及不恰当的激素治疗等因素与乳腺癌的发病相关,但仍有近50%的乳腺癌的病因无法用目前已知的乳腺癌危险因素进行解释.近年来许多研究者在乳腺癌中检测出人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)、EBV和小鼠乳腺肿瘤病毒(mouse mammary tumor virus,MMTV),提示这些病毒可能与乳腺癌的发病有关.很多研究者均在乳腺癌中检出上述病毒的存在,由于检出率高、低不等,病毒感染在乳腺癌发病中的机制尚不清楚,目前仍是颇具争议的科学问题之一,有待于继续深入研究.

    作者:白慧丽;马志萍;张文杰 刊期: 2012年第11期

  • p63和S-100蛋白在富于巨细胞骨肿瘤及瘤样病变鉴别诊断中的作用

    目的 观察p63和S-100在骨巨细胞瘤中的表达,探讨此两种抗体在骨巨细胞瘤中鉴别诊断的意义.方法 采用免疫组化SP法对骨巨细胞瘤进行p63和S-100染色,并与富于巨细胞的骨肿瘤进行鉴别诊断.结果 p63在骨巨细胞瘤和软骨母细胞瘤中呈阳性(P>0.05),在动脉瘤样骨囊肿、骨纤维组织细胞瘤和骨肉瘤中呈阴性(P<0.05).S-100在骨巨细胞瘤中呈阴性,在软骨母细胞瘤中呈阳性(P<0.05),在动脉瘤样骨囊肿等其他富于巨细胞肿瘤中呈阴性(P>0.05).结论 联合检测p63和S-100在骨巨细胞瘤的表达有助于诊断及鉴别诊断.

    作者:王冬;刘俊茹;赵玉峰;王小萌 刊期: 2012年第11期

  • 口咽喉部早期梅毒的临床病理学观察

    目的 探讨口咽喉部早期梅毒的临床病理学特征.方法 结合临床病史、血清学检查、W-S染色对5例口咽喉部梅毒进行报道,并复习相关文献.结果 5例均诊断为口咽喉部Ⅱ期梅毒.临床表现为慢性鲜红色炎症、溃疡和白斑.组织学特征包括黏膜上皮棘层肥厚、水肿,明显浆细胞浸润,动静脉炎症,血管内皮细胞增生、水肿.结论 口咽喉早期梅毒的诊断很具有挑战性,结合临床、病理学特征和血清学检查对诊断梅毒必不可少的.早期梅毒具有很高的传染性,不适当的治疗虽可缓解部分症状但患者仍保持较高的传染性,临床病理医师必须高度警惕.

    作者:赵燕;吴波;黄永久;章如松;于鸿;周晓军 刊期: 2012年第11期

  • 乳腺癌组织中midkine的表达及临床意义

    目的 探讨中期因子(midkine,MK)的表达与乳腺癌临床病理特征的关系.方法 采用免疫组化PV两步法检测44例乳腺癌及相应癌旁组织(癌旁2 cm)中MK蛋白的表达,并分析其与不同临床病理特征之间的关系.结果 (1)乳腺癌及相应癌旁组织中MK蛋白的阳性率分别为90.91%(40/44)、11.36%(5/44),差异均具有统计学意义(P<0.05).(2)MK蛋白在乳腺癌组织中的表达与淋巴结转移相关(P<0.05),与患者年龄、肿瘤大小、病理分级、临床分期无关(P>0.05).结论 MK蛋白在乳腺癌组织中的表达增高与淋巴结转移相关,提示MK可能成为乳腺癌转移的标记物之一,为乳腺癌的诊断和治疗提供新依据.

    作者:王坤华;王庆苓;来瑞娜;吴永平 刊期: 2012年第11期

  • 寄生性甲状腺结节临床病理观察

    患者女性,24岁.5年前发现甲状腺功能减退,行血清学检查诊断桥本甲状腺炎,持续甲状腺激素治疗.现因颈前缓慢性增长结节3个月入院.体检:双侧甲状腺稍增大、质硬,无压痛,右颈部触及多个大小不等淋巴结样结节,与甲状腺无联系.血清TT3、TT4、FT3、FT4均低于正常,TSH>60 U/ml,提示桥本甲状腺炎改变.

    作者:王玉民;张洁 刊期: 2012年第11期

  • 伴嗜酸性肺炎的成人肺先天性囊性腺瘤样畸形1例

    患者女性,24岁.因发现右肺病变1年余,痰中带血4天就诊.患者于1年前查体发现右肺有囊性空泡,无自觉症状.4天前无明显诱因出现间断咳嗽,咳白色稀痰,带有血丝.患者一般情况尚可,无发热、胸痛、胸闷等症状.查体:胸廓对称无畸形,气管居中,右下肺呼吸音低,未闻及干湿罗音.胸片示右肺下叶基底段见一不规则含气囊肿,似有分隔,内有一直径8 cm液气平面贯通囊腔.胸部CT示右肺下叶多发囊性病变,呈蜂窝状(图1),腔内有大量液体,有气液平面.

    作者:丁洪基;陈朝晖;刘春燕;刘志强;张传森 刊期: 2012年第11期

  • 甲状腺混合性髓样-滤泡细胞癌2例临床病理分析并文献复习

    目的 探讨甲状腺混合性髓样-滤泡细胞癌(mixed medullary and follicular cell carcinomas,MMFCC)临床病理特征、免疫组化表型及诊断与鉴别诊断.方法 对2例MMFCC临床资料进行分析,免疫组化分别采用EnVision法和LSAB法检测Calcitonin、TTF-1、CK19、Tg、Galectin-3、CgA、Syn、CEA、p53、Ki-67、PTH等抗体表达,并结合相关文献复习.结果 例1肿瘤组织由大小不等的梭形细胞巢及甲状腺滤泡性肿瘤构成,梭形细胞巢呈浸润性生长,滤泡癌细胞侵犯被膜和血管,两者相互分离,淋巴结内见转移性髓样癌.例2肿瘤细胞大小中等,较一致,呈圆形、椭圆形或立方形,核圆,核染色深,胞质内分泌有少许蓝染黏液,形成大小不等的腺腔和扩张的小囊,似筛状和蜂窝状结构,腺腔和囊内含有淡蓝色的黏液,形成腺样囊性癌样分化.淋巴结内有甲状腺滤泡型乳头状癌转移.免疫表型:滤泡区CK19(),TTF-1、Tg、Galectin-3均(+),Calcitonin、CgA、Syn、CEA、p53均(-),Ki-67增殖指数5%.巢状区(包括腺样囊性癌样区域)Calcitonin、CEA、CK19、CgA、TTF-1均(+),p53、PTH均(-).结论 MMFCC临床罕见,依据肿瘤呈浸润性生长方式,同甲状腺髓样癌或甲状腺滤泡细胞癌有一致的细胞特征,结合免疫表型可确诊.

    作者:杜雪梅;昌红;陈奕至;张建英;沈兵;高颖 刊期: 2012年第11期

  • 手术中快速冷冻切片3303例病理诊断分析

    目的 探讨冷冻切片和石蜡切片诊断的符合率,分析冷冻切片误诊与延迟诊断的原因.方法 回顾性分析3 303例手术中快速冷冻送检标本的组织分布,与术后石蜡切片诊断符合率及误诊、延迟报告情况.结果 术中快速冷冻送检组织以甲状腺、乳腺、骨组织和卵巢居多,该组病例中确诊3 093例(93.64%),延迟诊断204例(6.18%),误诊6例(0.18%).造成延迟诊断和误诊的主要原因是取材局限、制片不良及对某些疾病的认识不足.结论 快速冷冻诊断是手术中明确病变性质的可靠手段,由于制片和诊断受诸多因素的制约,具有一定的误诊性.冷冻病理诊断要注意与临床医师的沟通,注意形态改变与临床表现相结合.技术操作需规范,保证制片质量.诊断中尤其加强对良、恶性病变的认识及鉴别能力,抓住病变特点,准确客观做出报告.对当时不能明确性质的病变要如实告知临床医师,可延迟诊断,避免误诊.定期复查总结,不断提高诊断符合率.

    作者:施昀;马世荣;杨巧;惠延平 刊期: 2012年第11期

  • 宫颈癌中N-cadherin、E-cadherin和p63的表达及相关性

    目的 探讨N-cadherin、E-cadherin和p63在宫颈鳞状细胞癌中的表达及三者与临床病理因素的关系.方法 采用免疫组化SP法检测131例宫颈癌及30例正常宫颈组织中N-cadherin、E-cadherin和p63的表达.结果 131例宫颈鳞状细胞癌组织中N-cadherin、E-cadherin和p63的阳性率均与宫颈癌的组织分化、临床分期、有无淋巴结转移以及术后复发有关(P<0.05),而均与年龄无关(P>0.05).30例正常宫颈上皮组织细胞不表达N-cadherin,而E-cadherin和p63则呈强阳性表达;N-cadherin强阳性表达患者生存期明显低于阴性表达者,E-cadherin、p63阴性表达患者生存期明显低于强阳性表达者.结论 N-cadherin高表达和E-cadherin、p63的低表达与宫颈癌的发生、发展和转移相关,检测N-cadherin、E-cadherin和p63的表达可能是预测宫颈癌恶性程度及预后的重要指标之一.

    作者:江文静;胡卫平;周颖;田园 刊期: 2012年第11期

  • 解读2012年WHO乳腺肿瘤分类

    国际癌症研究机构(IARC)近期发表了2012年WHO乳腺肿瘤分类(第4版,以下简称新版分类)[1].新版分类单独成册发表,体现了近10年来乳腺肿瘤研究领域的新进展.与2003年WHO分类(第3版,以下简称旧版分类)比较[2],新版分类延续了原有分类的基本架构,仍然以形态学特征为骨架,但疾病的分类更加细化,对一些病变的分类、命名和亚型加以调整,增加一些新的、独立的病理类型.此外,新版分类更加注重病理形态学类型、分子学改变、临床治疗与预后方面的联系.本文就新、旧两版WHO分类加以比较,简要分析新版分类中的一些要点和变化.

    作者:刘标;周晓军 刊期: 2012年第11期

  • 乳腺浸润性导管癌中TBX2和MDM2的表达及临床意义

    目的 探讨TBX2和MDM2蛋白在乳腺浸润性导管癌组织中的表达及临床意义.方法 应用免疫组化SP法检测TBX2、MDM2蛋白在90例乳腺浸润性导管癌和30例正常乳腺组织中表达.结果 90例乳腺癌浸润性导管癌中TBX2和MDM2蛋白的阳性率分别为75.6%和81.1%,明显高于正常乳腺组织中的阳性率16.7%、23.3%,差异均有统计学意义(P<0.01).TBX2过表达与病理分级、临床分期、腋窝淋巴结转移密切相关(P均<0.05),与患者年龄、肿瘤大小无关(P>0.05).MDM2过表达与病理分级、腋窝淋巴结转移密切相关(P均<0.05),与患者年龄、肿瘤大小、临床分期无关(P>0.05).TBX2和MDM2蛋白在乳腺癌表达呈正相关(rs=0.240,P<0.05).结论 TBX2、MDM2蛋白在乳腺癌组织中的异常表达,可能在乳腺癌的发生、发展过程中起重要作用,联合检测两者可为监测乳腺癌的预后及治疗提供理论依据.

    作者:陈樱;王本忠 刊期: 2012年第11期

  • 乳腺癌细胞中HIF-1α对MMP1、8、15、16、17的调节作用

    目的 探讨HIF-1α和基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMPs)1、8、15、16、17在乳腺癌细胞系MDA-MB-231中的表达及相关性.方法 应用RNAi和实时荧光定量PCR技术检测乳腺癌细胞系被HIF-1α干扰前后的MMP1、8、15、16、17基因的表达变化.根据2-△△Ct相对定量法表示实验组相对于对照组目标基因原始拷贝数的倍数差异.结果 在HIF-1α的干扰效率是46.7%的基础上,MMP17上调0.561倍,MMP8上调2.023倍,两者与干扰前相比差异有统计学意义(P<0.05);MMP1上调0.289倍,MMP15下调0.171倍,MMP16下调0.233倍,差异无显著性(P>0.05).相关性分析表明:HIF-1α分别与MMP17、MMP8之间存在明显相关(r=0.537,P<0.05);HIF-1α与MMP1、MMP15和MMP16之间的相关性不明显.结论 HIF-1α可在mRNA水平上通过对靶基因MMP8、MMP17表达水平的调节,来参与乳腺癌细胞的侵袭和转移过程.

    作者:姜丽丽;师永红;肖瑞;牛丽丽;莎仁高娃;王秀娟 刊期: 2012年第11期

  • 乳腺原发癌和淋巴结转移癌中Hedgehog信号蛋白的表达及意义

    目的 探讨Hedgehog信号通路相关蛋白在乳腺原发癌与相应淋巴结转移癌中的表达及意义.方法 采用免疫组化PV-6000法检测57例乳腺浸润性导管癌的原发灶和相应淋巴结转移灶,以及35例癌旁正常乳腺上皮组织中Shh、Ptch、Smo和Gli-1蛋白的表达.结果 在正常乳腺导管上皮中Shh、Ptch、Smo和Gli-1蛋白表达呈阴性或弱阳性,而在乳腺原发癌灶中Shh、Ptch、Smo和Gli-1蛋白表达的阳性率分别为91.2%(52/57)、86%(49/57)、91.2%(52/57)和71.9%(41/57);在其相应淋巴结转移灶中的阳性率分别为82.5%(47/52)、91.2%(52/57)、75.4%(43/57)和22.8%(13/57).Shh和Ptch蛋白表达在乳腺癌原发灶和其淋巴结转移灶中的差异均无统计学意义(P均>0.05),而Smo和Gli-1蛋白表达在乳腺癌原发灶和其相应淋巴结转移灶中的差异有统计学意义(P<0.05和P<0.01),且Smo与Gli-1蛋白表达在乳腺癌原发灶和转移灶中均呈正相关(P均<0.01).结论 Shh和Ptch蛋白在乳腺癌原发灶和淋巴结转移灶中均呈高表达,且表达一致;而Smo和Gli-1蛋白在乳腺癌原发灶中的表达明显高于淋巴结转移灶,尤其是Gli-1蛋白在原发灶的高表达可能在乳腺癌的侵袭和淋巴道转移过程中起到调控的作用.

    作者:徐珊珊;韩玉贞;马文浩;朱玉红 刊期: 2012年第11期

  • 不同亚型乳腺癌中p16基因启动子甲基化

    目的 检测4种不同分子亚型乳腺癌(腺腔A型、腺腔B型、基底样型和HER-2过表达型)中的p16蛋白表达和启动子甲基化状态及其与临床病理参数的关系,探讨p16甲基化在乳腺癌发生、发展中的意义.方法 分别采用免疫组化PV法和甲基化特异性PCR(MSP)法检测73例乳腺癌组织中p16蛋白表达和启动子甲基化水平,并分析其与临床病理参数的关系.结果 (1)腺腔A型、腺腔B型、HER-2过表达型及基底样型乳腺癌中p16蛋白阳性率分别为55%、35%、30%和15.4%,甲基化率分别为10%、25%、10%和46.2%.基底样型乳腺癌中的p16蛋白阳性率低,与腺腔A型差异有显著性(P<0.05),而甲基化率高,与腺腔A型和HER-2过表达型差异均有显著(P<0.05).(2)p16启动子甲基化、无甲基化的乳腺癌组中p16蛋白阳性率分别为13.3%和41.4%,差异有统计学意义(P<0.05).(3)淋巴结转移组p16基因的甲基化率为29.3%,明显高于无淋巴结转移组(9.4%)(P<0.05).(4)p16甲基化率随着组织学分级增高而增高,组织学Ⅰ级乳腺癌p16甲基化率明显低于组织学Ⅱ、Ⅲ级乳腺癌(P<0.05).结论 p16基因启动子甲基化可能是基底样型乳腺癌分子特征之一,并与乳腺癌进展相关.

    作者:聂艳红;刘慧;周卫宁;吴永平 刊期: 2012年第11期

  • 手指多发性血管球瘤3例临床病理分析

    目的 探讨多发性血管球瘤(glomus tumor,GT)的临床及病理学特征.方法 回顾性分析3例手指多发性GT的临床资料、组织学形态及免疫表型.结果 手指多发性GT好发于指端,疼痛明显;组织学形态与单发性GT相似,瘤细胞呈规则的圆形,胞质淡嗜伊红色,细胞境界清晰,核圆形,居中,瘤细胞巢间可见丰富的薄壁血管.免疫表型:瘤细胞vimentin、SMA、HHF-35均阳性.电镜下示瘤细胞可见密体、密斑.结论 多发性与单发性GT均属良性肿瘤,肿瘤细胞来源于血管球变异的平滑肌细胞,结合患者临床症状、好发部位、组织病理学特点和免疫组化标记一般可明确诊断.

    作者:房惠琼;杨克非;李启明;毛荣军;谢乐 刊期: 2012年第11期

  • 两种显色方法在免疫组化和原位杂交技术中应用

    免疫组织化学(immunohistochemistry, IHC)和原位杂交(in situ hybridization, ISH)技术是科研和临床病理诊断工作中经常同时采用的两种技术.在国内这两种方法均是通过二氨基联苯氨(diaminobenzidin, DAB)进行后显色,其阳性信号均显示为棕黄色颗粒.两种方法中IHC显示的是蛋白水平,而ISH显示的是分子水平,若仅根据阳性信号的颜色进行区别,宜混淆.为了进行有效的区别,本组实验分别采用了国内通用的DAB显色方法和国外应用广泛的3-氨-9-乙基咔唑(3-amino-9-ethyl- car bazole,AEC)显色方法对上述两种方法进行显色,效果满意,有效区分IHC和ISH的阳性信号,现报道如下.

    作者:肖庆邦;王海青;郭瑞珍 刊期: 2012年第11期

临床与实验病理学杂志

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主办:安徽医科大学;中华医学会安徽分会