黄展勤；李金玉；姜红岩；刘幸平；郑燕珊；石刚刚
目的 探讨衣霉素(tunicamycin,TM)联合奥沙利铂(oxaliplatin,L-OPH)对人口腔癌KB细胞增殖和凋亡的影响及其相关分子机制.方法 MTT法检测药物对KB细胞增殖抑制的影响;集落克隆形成法检测药物对KB细胞增殖的影响;碘化丙啶(propidium iodide,PI)单染流式细胞仪检测KB细胞凋亡;半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)活性检测试剂盒检测Caspase-3的活性变化;Western blot检测:Caspase-3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12(Caspase-12)及葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)的表达.结果 不同浓度衣霉素和(或)奥沙利铂对人口腔癌KB细胞具有增殖抑制作用,0.125 μmol·L-1衣霉素处理人口腔癌KB细胞的24、48、72 h后细胞的存活率分别为90.37%、89.44%、88.91%.0.125 μmol·L-1衣霉素与1 μmol·L-1奥沙利铂联合使用对人口腔癌KB细胞24、48、72 h的存活率低于单用衣霉素、奥沙利铂组,分别为50.78%、37.77%、23.24%;0.25 μmol·L-1衣霉素可增强奥沙利铂抑制人口腔癌细胞KB的集落克隆形成的作用.0.5 μmol·L-1衣霉素诱导KB细胞48 h的凋亡率为8.3%.0.5 μmol·L-1衣霉素与1 μmol·L-1奥沙利铂联合刺激人口腔癌细胞KB 48 h 的凋亡率为50.3%,高于奥沙利铂本身诱导的凋亡率24.6%.衣霉素上调GRP-78的表达以及增强联合用药组Caspase-3的活性及表达.结论 衣霉素具有增强L-OPH抑制人口腔癌细胞增殖的作用,并增强奥沙利铂诱导人口腔癌细胞的凋亡,其机制可能是通过引起过度的内质网应激反应以及增加Caspase-3的活性.
作者：徐锦程；夏飞；张配；浦龙健；黄莹莹；李阳；张媛媛；刘浩 刊期： 2013年第07期
目的 探讨胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)在化学性缺氧损伤PC12细胞中的作用.方法 应用化学性低氧模拟剂氯化钴(CoCl2)处理PC12细胞建立化学性缺氧损伤模型.应用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)比色法检测细胞存活率;罗丹明123(Rh123)染色荧光显微镜照像检测线粒体膜电位(MMP);流式细胞术检测凋亡细胞百分比;Western blot法测定caspase-3、ERK1/2和p38MAPK蛋白的表达水平.结果 应用600 μmol·L-1 处理PC12细胞60 min可使磷酸化(p)ERK1/2的表达明显升高;在600 μmol·L-1 CoCl2处理PC12细胞前,应用500 μmol·L-1N-乙酰半胱氨酸(NAC,为活性氧的清除剂)预处理1 h可抑制CoCl2对p-ERK1/2表达的上调作用;在600 μmol·L-1 CoCl2处理PC12细胞前,应用10 μmol·L-1U0126(ERK1/2抑制剂)预处理2 h可保护PC12细胞对抗CoCl2引起的损伤,使细胞存活率升高,凋亡细胞数目和cleaved caspase-3表达及线粒体膜电位(MMP)丢失均减少;10 μmol·L-1U0126预处理还能抑制CoCl2对p-p38MAPK表达的上调作用.此外,应用20 μmol·L-1 SB203580(p38MAPK抑制剂)预处理能抑制CoCl2对p-ERK1/2表达的上调作用.结论 活性氧激活的ERK1/2通路介导CoCl2对PC12细胞的损伤作用,并与p38MAPK通路存在相互的的激活作用.
作者：徐文明；兰爱平；林建聪；郭润民；沈宁；陈培熹；冯鉴强 刊期： 2013年第07期
前期研究表明,具有健脾功效的中药五类新药参术胶囊对胃癌及癌前病变具有治疗和预防作用[1-3],但其机制尚未完全阐明.目前,用药物治疗肿瘤的重要机制之一就是诱导细胞凋亡[4].为研究参术胶囊治疗胃癌与诱导细胞凋亡之间的关系,我们采用免疫组化法研究参术胶囊对脾虚胃癌小鼠细胞凋亡线粒体途径上游基因的影响.
作者：敖慧；彭成；邓青秀 刊期： 2013年第07期
目的 研究白藜芦醇(resveratrol,Res)预处理对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤后自噬的影响,探讨Res保护局灶性脑缺血/再灌注损伤的作用机制.方法 将64只SD ♂大鼠随机分成4组,假手术组(S组)、模型组(M组)、Res低剂量(15 mg·kg-1)干预组(R1组)和Res高剂量(40 mg·kg-1)干预组(R2组),用线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,缺血2 h,再灌注24 h后,观察大鼠神经功能评分;透射电镜法观察神经元的超微结构及其内自噬空泡数量的变化;免疫组化法检测LC3的蛋白表达;RT-PCR法分别检测LC3和Beclin 1的mRNA表达.结果 与M组相比,Res可明显减轻大鼠脑缺血/再灌注损伤的神经功能评分(P<0.05);使自噬泡数量明显增加;上调缺血皮质区脑组织LC3和Beclin 1蛋白及mRNA的表达(P<0.05).结论 Res对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤后神经元有保护作用,其机制可能与其诱导自噬的生成,上调LC3和Beclin 1的表达有关.
作者：郭倩；余音；潘乾广；石瑶；叶秀峰 刊期： 2013年第07期
目的 建立新型腹型肥胖实验动物模型.方法 30只小鼠随机分为空白对照组、模型组、食量控制组.空白对照组一次性注射生理盐水并自由饮食;模型组一次性注射氯丙嗪4 mg·kg-1并自由饮食;食量控制组一次性注射氯丙嗪4 mg·kg-1并控制食量同空白对照组,3组均喂饲基础饲料,共15 d.测定小鼠体重、Lee's指数、内脏脂肪湿重、血糖和血脂水平,病理切片观察脂肪组织形态学差异.结果 模型组、食量控制组小鼠均表现出内脏脂肪大量堆积,形成腹型肥胖,并出现GLU、TG、TC升高和HDL-C降低的糖脂代谢紊乱.结论 一次性注射氯丙嗪的小鼠具有与中老年人腹型肥胖相似的临床特征,可作为中老年腹型肥胖相关药物研究的筛选模型.
作者：田辉；王玉婷；陶莉；丁虹 刊期： 2013年第07期
目的 采用绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)标记的大肠杆菌构建大鼠细菌性前列腺炎模型,观察细菌在组织中的侵袭路径和机体免疫反应,并建立感染菌在体直接定量的分析方法.方法 于分组大鼠左侧前列腺背叶注入大肠杆菌K88-GFP液(1.49×109cfu·ml-1)0.05 ml,采用腺体表面荧光成像及组织切片荧光显微镜观察,研究荧光菌的感染侵袭过程以及机体的免疫反应,建立可视化细菌性前列腺炎模型.结果 ① 通过表面拍照和病理切片得出细菌在腺体内主要侵袭途径,以及组织的病理变化过程.②测定从感染腺体内提取分离的GFP荧光强度,初步建立直接测定感染菌数量的方法.结论 利用GFP标记的细菌可以构建可视化细菌性前列腺炎模型,利用荧光成像技术可以标定感染的程度并进行直接细菌计量,为进一步开展抗菌药PK/PD研究提供新思路.
作者：张晓燕；陈慧慧；王海鹰；姚银辉；鲁澄宇 刊期： 2013年第07期
目的 探讨建立抑郁型动脉粥样硬化大鼠模型的实验方法并评价模型的有效性.方法 给大鼠喂食高脂饲料,利用慢性不可预见性应激造成抑郁表现,观察动物摄食量的变化,用旷场试验测定动物行为,检测血清学生化指标,HE染色观察腹主动脉和肝组织病变情况.结果 与正常组相比,模型组大鼠食物消耗量明显减少(P<0.01);旷场实验中垂直得分、水平得分、总得分均明显降低(P<0.01);肝、脾、胸腺的脏器系数明显减少(P<0.01);血清中总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)、碱性磷酸酶(ALP)、丙二醛(MDA)含量明显升高(P<0.01),高密度脂蛋白(HDL)含量明显降低(P<0.01),超氧化物歧化酶(SOD)活性降低(P<0.05);主动脉内膜-中膜明显增厚、内膜单核细胞、巨噬细胞浸润与聚集增多,内膜表层可见脂纹脂斑病变.结论 高脂饲料饲养叠加慢性不可预见性应激,可造成大鼠兼具动脉粥样硬化和抑郁两方面的症状,与伴有抑郁症的动脉粥样硬化病人的临床表现有较好的相似性,是较理想的动物模型.
作者：王术玲；高晓玲；刘树强；曾元儿 刊期： 2013年第07期
目的 建立人肝癌HepG2/VCR耐药细胞株,检测ZNF300基因在HepG2/VCR中的表达并初步分析其在肝癌多药耐药( MDR)中发挥的功能.方法 采用体外低浓度梯度递增的诱导方法建立长春新碱 (VCR) 获得性HepG2/VCR耐药细胞株.MTT 法检测确定HepG2/VCR耐药细胞株对VCR的耐药性,用Western blot方法检测人锌指蛋白ZNF300基因编码的ZNF300及多药耐药基因编码的P糖蛋白(P-gp)在HepG2和HepG2/VCR细胞中的表达差异;在HepG2/VCR细胞中转染ZNF300基因正向或反向cDNA质粒后,MTT法检测VCR对耐药细胞IC50值的变化,Western blot方法检测细胞内P-gp表达的影响.结果 MTT检测确认HepG2/VCR耐药细胞构建成功,Western blot检测发现耐药细胞中ZNF300及P-gp的表达相对于HepG2细胞明显增高.在HepG2/VCR细胞中转染正向ZNF300 cDNA质粒后,MTT和Western blot检测发现ZNF300过表达可使VCR对耐药细胞的IC50值增高,并使细胞内P-gp表达上调;在转染反向cDNA质粒Knockdown ZNF300基因表达后得到相反的结果.结论 ZNF300基因在HepG2/VCR耐药细胞中表达明显增高,并能通过上调耐药蛋白P-gp的表达促进肝癌细胞耐药性,可以作为逆转肝癌多药耐药的分子作用靶点.
作者：李静；王涛 刊期： 2013年第07期
CD4+T细胞各亚群在类风湿关节炎(RA)的发生发展过程中发挥不同的作用.其中,辅助性T细胞1(Th1)/Th2细胞、Th17/调节性T细胞(Treg)细胞比例的失衡及细胞因子白细胞介素-1(IL-1)、IL-2、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等产生的免疫损害,是导致RA慢性炎症的关键因素.TNF-α作为一种重要的促炎细胞因子在RA致病过程中起到了重要作用.TNF-α有两个受体,TNF受体1(TNF receptor 1,TNFR1)在大多数细胞上表达,而TNFR2仅在T细胞等免疫细胞上表达,调节T细胞的存活、活化和增殖.反之,T细胞对TNF-α信号通路也有影响.该文就RA的发病机制中TNF-α及其信号通路和CD4+T细胞各亚群功能的关系加以综述,为RA的防治提供新的思路.
作者：黄蓓；汪庆童；刘亢亢；姜玲；魏伟 刊期： 2013年第07期
目的 利用雷帕霉素探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)在支气管哮喘小鼠气道重塑中的作用机制.方法 30只♂清洁级BABL/c小鼠,随机数字表法分为3组,每组10只,分别为生理盐水对照组、卵蛋白(OVA)哮喘组、雷帕霉素治疗组.在末次激发24 h后所有小鼠取左肺组织行苏木精-伊红(HE)染色,PAS染色及mTOR免疫组织化学染色.分别用酶联免疫吸附法 (ELISA)和Western blot 检测支气管肺泡灌洗液 (BALF)中 IL-4、IL-5、IL-13含量以及右肺组织mTOR蛋白表达.应用小鼠肺功能仪检测气道阻力的变化.结果 哮喘模型组小鼠与对照组相比较BALF中IL-4、IL-5、IL-13水平增高;肺组织 mTOR蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.01).雷帕霉素治疗组与哮喘模型组相比较BALF中IL-4、IL-5、IL-13含量及肺组织mTOR表达水平均降低,差异具有显著性(P<0.05).结论 雷帕霉素可抑制哮喘小鼠气道重塑的发生,其机制有可能是通过阻断mTOR信号通路而实现的.
作者：延光海；金光玉；朴红梅；郑明昱；李良昌；李光昭 刊期： 2013年第07期
目的 研究阿魏酸钠(SF)对Aβ1-42所致培养海马神经元凋亡的抑制作用及机制.方法 原代培养海马神经元,SF(50、100、200 μmol·L-1)预处理6 h后,加入50 nmol·L-1的Aβ1-42作用72 h,JNK阻断剂SP600125(5 μmol·L-1)在加入SF前30 min加入,Hoechst33258核染色观察细胞凋亡变化,ELISA法检测细胞色素C释放量,Western蛋白印迹法检测神经元Bcl-2,Bax,Caspase-3及JNK 蛋白表达.结果 与对照组相比,Aβ1-42组海马神经元细胞的凋亡率及释放的细胞色素C含量明显增加(P<0.01),Bax与bcl-2蛋白表达比值,磷酸化的Caspase-3及磷酸化JNK蛋白表达明显增加 (P<0.01).应用SF(50、100、200 μmol·L-1)预处理6 h可明显对抗Aβ1-42引起的海马神经元细胞凋亡、细胞色素C释放量,SF(100 μmol·L-1)能抑制蛋白表达的改变(P<0.01),JNK阻断剂也能抑制Aβ1-42引起的这些改变.结论 SF通过抑制JNK信号传导通路对抗Aβ1-42引起的海马神经元损伤.
作者：闫恩志；范莹；隋海娟；刘婉珠；金英 刊期： 2013年第07期
目的 观察大鼠孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR)激活剂地塞米松(dexamethasone,DEX)对异烟肼(isoniazid,INH)肝毒性的影响,探讨其发生机制,为临床上抗结核药物所致肝损伤的防治策略提供理论依据.方法 SD ♂大鼠随机分成4组(n=6):对照组、INH给药组、DEX给药组和INH-DEX合并给药组,分别给予含DEX 20 mg·kg-1的饲料和含1 000 mg·L-1 INH的水喂养28 d后,测定肝脏指数(liver index))和药物代谢酶CYP3A活性,并制备肝组织切片观察各组大鼠肝毒性的程度,同时分析血清中酶学指标ALT、AST、ALP和血脂水平.结果 使用DEX组的大鼠肝脏指数与对照组相比明显上升(P<0.01),INH合用DEX后肝细胞CYP3A活性与对照组相比增加了近3.0倍(P<0.01),其肝组织损伤程度加剧,肝细胞脂肪变性并伴有大片梗死,血清中ALT、AST、ALP、血脂水平均较单用INH组明显升高.结论 大鼠PXR激活剂DEX能增强INH导致的大鼠肝毒性,其机制可能与DEX上调CYP3A的活性有关.
作者：王来友；陈玲燕；程宝；毕惠嫦；胡因铭 刊期： 2013年第07期
目的 研究淫羊藿苷(Icariin,ICA)促进体外培养大鼠骨髓基质细胞(rat bone marrow stromal cells,rBMSCs)成骨性分化的信号传导机制.方法 贴壁分离法培养rBMSCs,传至第2代后用流式法鉴定细胞纯度并用于机制研究.细胞铺满皿底后分为ICA组(1×10-5 mol·L-1)、LY294002组(5×10-5 mol·L-1)、ICA+LY294002组和空白对照组.不同处理24 h后分别用Real-time PCR法检测ALP、eNOS和iNOS 的基因表达水平,用Western blot法检测p-AKT、eNOS和iNOS蛋白表达量,同时测定TNOS、iNOS活性和NO生成量.结果 基因表达和蛋白质检测结果均显示,10-5 mol·L-1 ICA明显提高rBMSCs的ALP表达水平(P<0.01),PI3K的特异性阻断剂LY294002可抑制ICA对ALP的提高作用,亦明显降低p-AKT的表达水平.ICA可提高rBMSCs的eNOS和iNOS表达水平,但LY294002只能抑制eNOS的增加,对iNOS无影响.TNOS和NO与eNOS和ALP的变化趋势一致,iNOS活性不受LY294002的影响.结论 ICA通过PI3K/AKT-eNOS途径促进rBMSCs的成骨性分化.
作者：郭晓宇；李唯；陈克明；周建；杨柯；鲁金星；郝海婷；高玉海 刊期： 2013年第07期
蛇床子素(Osthole,Ost)是中药蛇床子中的香豆素类化合物,其能够增加去势♂大鼠的血清睾酮水平[1],表现出雄激素样作用;也能改善长期去卵巢导致的♀大鼠骨质疏松[2].为确证蛇床子素的雌激素样作用,初步探讨其雌激素样作用机制,本研究考察蛇床子素与雌二醇(estradiol,E2)对21 d龄♀大鼠子宫系数的影响,并进一步考察蛇床子素对去卵巢大鼠的雌激素样作用.
作者：张夏微；张丹参；薛贵平；赵一洁；金灿 刊期： 2013年第07期
目的 探讨苦参碱(Matrine)对酒精致大鼠慢性肝损伤的作用及其可能的作用机制.方法 以白酒灌胃给药30 d,建立慢性酒精性肝损伤大鼠模型,观察口服不同剂量的苦参碱对慢性酒精性肝损伤大鼠肝脏结构、肝损伤标志酶、血脂、抗氧化酶和脂质过氧化物水平等的影响.结果 苦参碱(25 mg·kg-1)抑制慢性酒精性肝损伤大鼠肝脏重量、肝脏/体重比和血清谷丙转氨酶(ALT)的升高.苦参碱(25、50和100 mg·kg-1)逆转慢性酒精性肝损伤大鼠血清谷草转氨酶(AST)的升高至正常水平;降低血清总胆固醇(TC)和甘油三脂(TG)的升高,此外,苦参碱(50、100 mg·kg-1)还具有升高高密度脂蛋白(HDL)的作用.苦参碱(25、50和100 mg·kg-1)升高慢性酒精性肝损伤大鼠血清和肝脏超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的活力,并降低丙二醛(MDA)含量.病理组织学结果显示,苦参碱(25 mg·kg-1)可减轻肝脏脂肪变性.结论 小剂量苦参碱对大鼠慢性酒精性肝损伤具有保护作用,其作用机制与调节血脂和提高机体抗氧化能力有关.
作者：高艳；郑萍；闫琳；戴贵东 刊期： 2013年第07期
松果菊苷 (echinacoside,ECH)是从新疆特色植物药肉苁蓉中分离的苯乙醇苷类化合物的主要成分,研究表明,ECH具有明显的神经保护作用[1].血管性痴呆(vasculardementia, VD) 是指由各种脑血管病引起的获得性智能损害和认知障碍综合征,其发病率有逐年上升趋势.本文通过考察ECH对VD大鼠行为学、氧自由基以及胆碱能神经递质代谢速率的影响,初步探讨ECH改善VD大鼠学习记忆能力的可能机制.
作者：刘春丽；陈虹；姜勇；屠鹏飞 刊期： 2013年第07期
Wingless (Wnt)信号通路作为一个复杂的蛋白质作用网络,通过自分泌和旁分泌作用调节多种细胞的发生和发育,具有重要的生物学意义.近年来针对神经和血管的整体保护,提出了神经血管单元(neurovascular unit,NVU)的新模型,并发现Wnt信号通路在缺血性脑中风神经血管单元保护中可能发挥重要作用.Wnts家族与卷曲蛋白(Frizzled)/低密度脂蛋白受体相关蛋白5/6(low-density lipoprotein related proteins 5/6,LRP5/6)结合,进入细胞内,经过一系列反应,可激活核内缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α),在基因水平上直接调控血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达(Wnt信号可作为HIF-1α和VEGF的上游信号),继而上调β-catenin信号分子,激活其下游信号分子从而调节血脑屏障(blood brain barrier,BBB)及NVU相关基因和蛋白的水平,即从整体上促进缺血性脑中风损伤后修复.
作者：文丽梅；杨洪军；马超英；陈畅；高健；吴传鸿；朱丽；李韶菁 刊期： 2013年第07期
脑糖原的含量远远小于肝糖原和肌糖原,但却是脑葡萄糖含量的几倍.脑糖原浓度可高达10 μmol·g-1,大大超乎人们以往的认识.目前对于脑糖原的作用还不完全清楚,其含量受到神经递质、激素、神经元活动等因素影响.现阶段的研究表明,脑糖原是非常重要的脑能量储备和脑活动的物质基础.脑糖原主要储存于星形胶质细胞中,是神经元活动的主要能量来源.在睡眠和麻醉时积累脑糖原,清醒时消耗脑糖原,特别是神经元轴突活动激烈时迅速消耗脑糖原.在胰岛素诱发低血糖或脑缺血时,血源性葡萄糖供应不足,星形胶质细胞中糖原源性乳酸为神经元的活动和生存提供能量.糖原异常还可引起抑郁症、糖原贮积病、阿尔采末病、癫痫和拉福拉病等疾病.
作者：张绘宇；赵玉男；王中立；陈琳；戴建国；黄玉芳 刊期： 2013年第07期
目的 探讨碘化N-正丁基氟哌啶醇(F2)对血管紧张素Ⅱ(AngII)诱导心肌细胞肥大的抑制作用及其机制.方法 培养大鼠心肌细胞株(H9C2细胞),测量细胞表面积和BCA法测定细胞蛋白含量作为心肌肥大指标;Western blot检测核转录因子ERK1/2 及CREB蛋白表达.结果 (1) AngII (10-7mol·L-1)处理细胞48 h,心肌细胞表面积增大,蛋白含量明显增加,F2 (10-8、10-7、10-6 mol·L-1)剂量依赖抑制AngII介导心肌细胞表面积的增大以及蛋白含量的增加;(2) AngII (10-7mol·L-1)处理心肌细胞1 min,磷酸化ERK1/2蛋白(p-ERK1/2)和磷酸化CREB蛋白(p-CREB)表达即开始增加,5~10 min 达高峰,可持续活化60 min,ERK1/2和CREB蛋白总量没有变化.以AngII处理心肌细胞5 min,p-ERK1/2和p-CREB表达为标准,预先以F2 (10-8、10-7、10-6 mol·L-1)处理心肌细胞30 min,F2剂量依赖抑制AngII介导心肌细胞 p-ERK1/2和p-CREB表达的增高.结论 F2可以抑制AngII诱导的心肌肥大,其机制可能与抑制磷酸化ERK1/2和CREB表达有关.
作者：黄展勤；李金玉；姜红岩；刘幸平；郑燕珊；石刚刚 刊期： 2013年第07期
ATP敏感钾通道和延迟整流钾通道在心肌缺血预适应及心肌电活动中分别发挥着重要作用,但这两个通道在前列腺素E1(prostaglandin E1,PGE1)预处理抗心肌缺血/再灌注损伤的保护机制中有何作用未见报道,本实验应用全细胞膜片钳技术研究PGE1预处理对缺血/再灌注心肌细胞IK(ATP)和IK的影响,探讨其心肌保护作用机制.
作者：角灿武；付润芳；韩圣娜；张莉蓉；张艳侠 刊期： 2013年第07期
中国药理学通报杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中国药理学会
