董关木；徐程林
目的 构建H.pylori细胞空泡毒素VacA与黏附素HpaA融合基因的原核表达载体,诱导其表达融合蛋白,并检测表达产物的抗原性与免疫原性.方法 用PCR从pQE30-VacA质粒扩增出VacA基因,克隆至pTrc99A-HpaA载体中,与HpaA基因融合后,插入原核表达载体pQE30中,再将pQE30-VacA-HpaA转化入大肠杆菌DH5α,诱导表达并提纯融合蛋白,SDS-PAGE检测融合蛋白的表达,Bradford法检测融合蛋白含量,Western blot鉴定特异性.将融合蛋白免疫家兔,得到多克隆抗血清,用双向免疫扩散和ELISA检测免疫原性.结果 SDS-PAGE显示融合蛋白相对分子质量约为65 000,表达量在35%以上,主要以包涵体形式表达,蛋白含量为0.72 mg/ml,具有良好的VacA和HpaA抗原性与免疫原性.结论 VacA-HpaA融合蛋白已成功表达,且具有良好的免疫原性,为进一步研究制备H.pylori疫苗创造了条件.
作者：叶翠莲；杨致邦；黄进；邓颖；刘淼；吴利先 刊期： 2006年第05期
目的 分离纯化癌细胞中热休克蛋白70(HSP70)-多肽复合物.方法 以食管癌组织为材料,通过一系列的层析柱(ConA-Sepharose、ADP-Agarose、MonoQ及HSP70抗体亲和层析柱)进行分离及纯化.结果 所分离纯化的HSP70-多肽复合物相对分子质量与预期相符.结论 为提取肿瘤HSP70-多肽复合物提供了具体方法,并为研制多肽疫苗奠定了基础.
作者：陈兰英；高富荣；张玉焕；谢素嫩 刊期： 2006年第05期
本文应用放射性示踪技术对大鼠口服3H-RNA药代动力学参数和吸收规律进行了分析,现报道如下.
作者：李恕；刘庆莹；李怀芬；牛惠生 刊期： 2006年第05期
2006年6月1至2日,在瑞士日内瓦WHO总部召开了非正式乙型脑炎灭活疫苗质量控制与规程修订研讨会.
作者：董关木；徐程林 刊期： 2006年第05期
目的 研究黄芪多糖对狂犬病疫苗免疫应答的影响.方法 将BALB/c小鼠和昆明小鼠各自随机分为2组,即试验组与对照组,分别于0、7 d接种冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞).对照组疫苗用灭菌注射用水稀释,试验组疫苗用10%黄芪多糖(APS)溶液稀释,每只腹腔免疫0.5 ml.BALB/c小鼠于15 d无菌取脾,进行淋巴细胞转化实验;昆明小鼠在免疫前和第1针免疫后4、7、14、30、45和60d眶静脉采血,分别进行外周血淋巴细胞CTL试验和小鼠中和抗体水平测定.结果 试验组疫苗诱导小鼠产生的中和抗体和细胞免疫水平均高于对照组疫苗,二者差异有显著意义.结论 黄芪多糖能提高狂犬病疫苗的免疫原性.
作者：崔颖杰；吴晓娟；郭岩；袁延宝；代长海；鲁文艳；于洪涛 刊期： 2006年第05期
目的 研究重组人血白蛋白与小分子药物的结合功能.方法 在366 nm下检测地西泮与人血白蛋白结合前后吸收值的变化,计算二者的结合常数;华法令与人血白蛋白结合后,用SephadexG-25 HPLC柱进行分离,对游离华法令和二者结合产物分别积分,得到华法令与人血白蛋白的结合率.结果 重组人血白蛋白与地西泮的结合常数为14.68 mol Diazepam/mol rHSA,天然人血白蛋白与地西泮结合常数为12.82 mol Diazepam/mol HAS.重组人血白蛋白中华法令的结合率为8.69%,而天然人血白蛋白中华法令的结合率为6.73%.结论 重组人血白蛋白与天然人血白蛋白小分子药物结合功能基本一致.
作者：陶苒；李梅彦；王慧欣；董爱华；贾茜 刊期： 2006年第05期
预防接种乙型肝炎疫苗是控制乙肝发生科学、经济和有效的手段.为了解人群乙肝疫苗接种状况,找出影响疫苗接种的因素,我们于2003～2005年,在新乡铁路社区进行了乙型肝炎疫苗接种情况调查,现将调查结果报道如下.
作者：王增朝；车淑丽 刊期： 2006年第05期
目的 制备酶联免疫乙型脑炎病毒抗原定量检测试剂,用于乙型脑炎灭活疫苗中抗原定量检测.方法 分别用2株杂交瘤细胞分泌的抗乙型脑炎病毒单克隆抗体作为包被和标记物,配以辅助试剂,建立酶联免疫检测系统,用经标化的乙型脑炎疫苗参考品绘制定量标准曲线,对试剂各项技术指标进行验证.结果 试剂对乙型脑炎病毒抗原的佳定量范围是0.131～0.666 ELISA单位(EU/ml),标准曲线相关系数r=0.996,平均变异系数CV小于10%.与NIH法测定结果相比较,相关有非常显著意义(P＜0.01).对2批乙型脑炎疫苗9次测定,变异系数分别为2.7%和4.4%.结论 试剂的精密性和准确度高,特异性和稳定性可靠,可用于乙型脑炎疫苗中的抗原定量检测.
作者：张国强；冯素英；沈淑芹；王晋；施彤；张月兰；张影 刊期： 2006年第05期
目的 探讨红系细胞分化中细胞生长及相关转录因子表达的变化.方法 利用红白血病细胞株HB60-5的生长特性,通过改变培养条件,促使细胞向成熟细胞分化.绘制细胞生长曲线,应用Northern blot方法检测诱导分化过程中红系造血相关基因表达变化.结果 HB60-5细胞随着诱导分化时间的延长,生长减慢,红系分化标记α-珠蛋白表达逐渐升高,同时伴有GATA-1、p45NF-E2、EDRF等基因表达上调,Fli-1基因表达下调.结论 红系分化过程中,细胞增殖受到抑制,红系细胞分化的基因表达上调,红系细胞增殖的基因表达下调.
作者：谭业辉；王畅；王冠军 刊期： 2006年第05期
目的 获得高纯度的Vif-△N28和Cullin5-N138蛋白.方法 以Vif/VR1o12质粒为模板,PCR扩增出Vif-△N28基因并插入pRSETB质粒.将构建的原核表达载体Vif-△N28/pRSETB以及已有的Cullin5-N138/pRSETB质粒分别转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,产物经Ni-NTA离子纯化柱纯化、复性.结果 所表达的Vif-△N28和Cullin5-N138蛋白约占各自菌体总蛋白的20%,纯化后蛋白纯度均可达90%以上.结论 已成功构建了Vif-△N28原核表达质粒,并在大肠杆菌中高效表达,获得了可溶性的纯化的Vif-△N28和Cullin5-N138蛋白.
作者：张文艳；楼朝平；朱可彤；张帆；姜春来；吴永革；于湘晖；孔维 刊期： 2006年第05期
目的 考察蓉生静注人免疫球蛋白(pH4)存放于不同温度、不同时期的质量稳定性,以及内包装材料对制品质量稳定性的影响.方法 将静注人免疫球蛋白(pH4)分别放置于2～8℃和20～25℃的条件下,定期取样.依照<中国生物制品规程>(2000年版)的相应标准进行检测,并比较进口与国产模制瓶灌装对产品质量的影响.结果 静注人免疫球蛋白(pH4)在2～8℃条件下存放2年后,与出厂时的检验结果比较,质量指标无显著变化;在20～25℃条件下存放2年后,分子大小分布、抗-HBs效价、浊度等质量指标变化显著.静注人免疫球蛋白(pH4)灌装于进口模制瓶的质量稳定性优于国产模制瓶.结论 蓉生静注人免疫球蛋白(pH4)保存在2～8℃在有效期内质量稳定.
作者：江砚芳；贺娟；苏志芬；王黔川；张月星；刘素芳；杨汇川；曲蓬 刊期： 2006年第05期
目的 建立在大肠杆菌中高效表达SARS-CoV蛋白的表达系统.方法 PCR扩增BCG分子伴侣10基因,并将其连接到pET28a载体上,构建成分子伴侣10融合蛋白表达载体.在该载体Chaperonin 10基因的3'端克隆SARS-N、SARS～E、SARS-S和SARS-M基因,在BL2.1(DE3)中进行诱导表达.结果 SARS-E、SARS-N在与分子伴侣10融合后能获得高效表达.结论 该表达系统可使部分在大肠杆菌中难于表达的SARS-CoV蛋白获得高表达.
作者：张秀霞；向泽敏；李娟；王宣军；盛军 刊期： 2006年第05期
目的 构建稳定表达HIV-1 Gag-Pol蛋白的DNA疫苗,提高目的基因的表达效率.方法 对HIV-1野生型Gag-Pol基因序列进行优化,使用本室构建的表达载体VR,构建重组质粒VR-GPCINS.将构建的重组质粒VR-GPCINS转染HEK293细胞,Western blot鉴定表达产物.用构建的DNA疫苗免疫BALB/c小鼠,Western blot检测体液免疫反应.结果 成功构建能稳定高效表达HIV-1 Gag-Pol蛋白的VR-GPCINS质粒,Western blot在免疫小鼠的血清中检测到抗p24的特异性抗体.结论 含优化Gag-Pol基因序列的质粒DNA疫苗VR-GPCINS在细胞表达和体液免疫方面均明显优于含野生型Gag-Pol基因序列的质粒DNA疫苗VR-GP.
作者：滕红刚；姜春来；于湘晖；孔维 刊期： 2006年第05期
目的 比较体外软琼脂克隆法与裸鼠体内接种法检测细胞致瘤性的敏感性及相关性.方法 用软琼脂克隆法检测不同种类、不同来源的细胞的致瘤性,并与裸鼠体内接种法的结果进行比较.结果 不同的细胞在体外软琼脂中形成细胞集落的能力及集落形态明显不同.肿瘤细胞在体外可形成肉眼可见的细胞集落,而人二倍体细胞及组织工程用细胞在体外不形成或仅形成极少的细胞集落克隆,其集落形成率与细胞代次没有相关性,在裸鼠体内亦不形成瘤.重组CHO细胞经过遗传改造后,有的在裸鼠体内的致瘤性减弱,但体外软琼脂克隆行为没有发生明显改变.从128至169代次的Vero细胞均可在体外软琼脂中形成不同的细胞集落克隆,高代次细胞的集落形成率明显高于低代次细胞,但所有检测代次的细胞在裸鼠体内均未形成瘤.结论 用软琼脂克隆法检测细胞的致瘤性与裸鼠体内接种法不仅具有良好的相关性,而且敏感性高于裸鼠体内接种法.
作者：孟淑芳；林林；李修兰；冯建平；王佑春；李德富 刊期： 2006年第05期
细菌生物膜是细菌自身分泌的胞外多糖与菌体粘连而成的结构群体.生物膜赋予了细菌许多新的生物学性状,它通过黏附、定量、抗吞噬和对环境的高耐受性而突现其在医学中的重要意义,且对常用抗菌素都不敏感.
作者：胡晓梅；贾鸣；孙卫忠；胡福泉 刊期： 2006年第05期
目的 建立大规模制备天花疫苗的方法.方法 用SPF鸡胚细胞培养痘苗病毒,经细胞破碎、膜过滤提取痘苗病毒,加保护剂制得天花疫苗.结果 疫苗经检测,动物免疫效果和疫苗稳定性良好.结论 此方法可以用于大规模制备天花疫苗,疫苗质量符合1979版<中国生物制品规程>要求.
作者：安焕宇；范淑兰；安丽颖；韩亚儒；过琴媛 刊期： 2006年第05期
目的 建立碘化钾快速提取外周血基因组DNA的方法.方法 采用碘化钾法和酚/氯仿提取法,直接从人外周血中提取基因组DNA,并以此为模板,进行人类生长激素(HGH)基因片段的扩增及鉴定.结果 此方法提取的DNA量大,DNA体外扩增结果稳定.结论 该方法较传统酚/氯仿提取基因组DNA法快速、简便、经济,可用于PCR模板DNA的制备.
作者：鞠海英；刘亚珍；刘永茂；李勇 刊期： 2006年第05期
钩端螺旋体外膜蛋白在钩端螺旋体的致病与免疫应答过程中起着十分重要的作用,它在疾病感染时既可以作为一种外膜毒性物质,又可以作为一种特异性抗原而诱导免疫应答.本文作者对钩端螺旋体外膜蛋白的生物学特性、致病机理和免疫原性作了全面的综述,为有效地筛选特异的钩体候选疫苗提供可靠的依据,也为特异地诊断和预防钩体病奠定基础.
作者：林玮；谭立志；郭晓奎 刊期： 2006年第05期
本文就乙型肝炎免疫球蛋白应用效果、作用机理及应用中存在的问题等作了全面综述.
作者：周海云；曾鸣 刊期： 2006年第05期
体外诊断试剂质量研究工作是产品研发的重要内容之一,也是技术审评中的重点内容.质量研究的结果是制定产品标准的重要依据.同时,其中的部分内容也将收录入使用说明书中,有助于正确使用产品和准确判断检验结果.
作者：张丽 刊期： 2006年第05期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
