促红细胞生成素在老年肿瘤化疗后合并贫血中的应用

低pH病毒灭活工艺对抗人淋巴细胞免疫球蛋白质量的影响

抗人淋巴细胞免疫球蛋白(ALG)是由多份猪免疫血浆为原料制备的产品,免疫所用的抗原来源于人的淋巴细胞,同时在ALG生产过程中,使用了人血浆、人红细胞以及人胎盘组织吸收杂抗体.尽管对所用的人源性原料中血源性病毒实行了越来越严格的筛选,但由于筛选方法本身的限制和感染窗口期的存在,人源性原料的污染很难避免.

作者：康光明；艾智武；邹莉；陶柳宏；王前喜；俞霖；李萍；吴克 刊期： 2001年第03期

中国流行株HIV-1 Gag蛋白在重组鸡痘病毒的表达及鉴定

目的以鸡痘病毒为载体,表达HIV-1 Gag蛋白,进而研制AIDS疫苗.方法以鸡痘病毒282E4株非必需区TK基因为侧翼,插入VV突变型P7.5串联启动子和牛痘病毒A包涵体晚期启动子与20个串联的突变型早期痘苗病毒P7.5启动子组成复合启动子及LacZ报告基因构建重组表达质粒pUTAL.在AF1-P7.5复合启动子下游,插入编码中国流行株HIV-1 Gag基因(B亚型),构建了重组表达质粒pUTAL-Gag.重组质粒Gag与FPV共转染CEF细胞,进行同源重组.通过BUdR加压筛选,X-gal染色,获得重组鸡痘病毒vUTALG,用于感染BHK细胞并免疫小鼠.结果经Westem blot检测,重组病毒表达了Gag蛋白相对分子质量分别为55000、48000、24000和17000,为Gag蛋白的P55、P48、P24和P17蛋白.重组病毒免疫小鼠可诱导产生特异性抗体.结论所重组的病毒成功地表达了目的蛋白并进行了正确加工.

作者：罗坤；金宁一；郭志儒；方厚华；郭焱；秦云龙；安汝国；邵一鸣；殷震 刊期： 2001年第03期

类胰岛素生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)基因的克隆及融合蛋白的表达

目的扩增类胰岛素生长因子I(IGF-Ⅰ)210bp的DNA片段,将其克隆到PGEX-1 λT质粒,并转化到E.coli NH522中高效表达.方法用改进的RT-PCR法合成人肝脏cDNA,然后从该cDNA文库中扩增出IGF-I基因.将扩增的IGF-I cDNA用BamHI和EcoRI双酶切后,插入到同样双酶切处理的pGEX-1 λT载体中,连接转化E.coli NM522,筛选克隆,酶切鉴定后,进行了核苷酸序列分析及表达.结果将IPTG诱导表达的菌体离心收集,经SDS-PAGE分析,在相对分子质量34000处可见明显高表达带,表达量可占菌体蛋白总量的20%以上.免疫印迹表明重组蛋白具有IGF-I的抗原性.结论重组人IGF-I的成功克隆与表达,将为进一步研究人IGF-I的生物学特性打下基础.

作者：赵大鹏；王晓宇；刘畅；戚凤春；蒙冲；王影；王妍；盛君；杨煜；傅学奇 刊期： 2001年第03期

可生物降解微球甲型肝炎减毒活疫苗口服免疫恒河猴的免疫应答

目的探索用一种新型的甲型肝炎减毒活疫苗及其免疫途径.方法用可生物降解的材料聚乳酸/乙醇酸(PLA/PLG)包裹甲型肝炎减毒活疫苗,制成微球型疫苗,检测微球的大小及在体外病毒释放的状况,和口服免疫恒河猴后病毒在体内繁殖及免疫应答状况.结果微球大小在6～10μm范围,体外病毒抗原释放长达27d左右,体外抗原释放高峰在3～7d,口服免疫恒河猴后,约1w左右开始排毒,以后一直呈间断排毒.抗体应答于第3w出现,高峰期在5～6w,达1261mIU/ml,随后逐渐下降,口服加强免疫后,抗体回升,野毒株攻击后,抗体再度回升达1244mIU/ml.结论微球型甲型肝炎减毒活疫苗口服免疫恒河猴后,能引起一定水平的免疫应答.

作者：侯宗柳；龙润乡；谭顺革；金炜翔；李华；任丽虹；全文琦 刊期： 2001年第03期

人血管生成素基因的克隆与表达

目的为了获得人的血管生成素基因,并在原核表达系统中进行表达.方法利用RT-PCR技术从人的肝脏组织中扩增出Ang基因片段,并将其克隆到pGEM-T载体中进行序列分析,再亚克隆到原核表达到pET28a(+)载体中.结果构建了重组表达载体pETA,转化宿主菌BL21(DE3)后,经IPTG诱导,Ang基因蛋白在BL21(DE3)中表达了相对分子质量约为17 000的重组蛋白.SDS-PAGE和薄层扫描分析表明,外源蛋白的表达量占菌体蛋白总量的10.64%.结论 Ang基因的克隆与表达为进一步研究其生物活性及应用奠定了基础.

作者：岳玉环；姜力；许崇波；朱平；李丽萍；朱冬冬；刘新 刊期： 2001年第03期

结核病疫苗研究进展

据WHO估计,目前全世界约有20亿人隐性感染结核分枝杆菌(MTB),每年有800万新发病人和300万患者死亡.近年来,人口流动的增加,多重耐药菌株的流行,以及MTB和HIV的双重感染,导致TB的发病率和死亡率大幅度上升.因而,TB的预防再次被提上重要日程.BCG虽广泛用于预防TB,但对其效果争议很多.研究认为BCG可预防和减轻儿童严重TB,但对成人肺结核的预防作用从0到80%不等[1].导致此变化的原因在于BCG菌株的变异使保护性抗原丢失,人群间遗传或营养的差异以及环境等因素的影响.另外,BCG接种干扰了利用PPD对MTB感染的诊断,接种免疫缺陷病人可能导致播散性感染等缺陷.鉴于BCG自身的不足,以及当前TB流行的严重性,研究新的疫苗用于TB的预防成为当前国内外研究热点.本文就近年来TB疫苗研究进展作一综述.

作者：范雄林；李元；徐志凯 刊期： 2001年第03期

CNTF工程菌培养及产物纯化

目的建立CNTF生产工艺,获得高产量的CNTF活性蛋白质.方法通过摇瓶和发酵罐培养研究了培养基成分、pH、诱导时间对工程菌pBV220-CNTF/DH5α生成和表达的影响,并对表达产物进行纯化和生物学活性检测.结果应用正交试验确定了培养基成分配比为酵母粉10g/L,葡萄糖8g/L,MgSO40.5g/L,磷酸盐0.05mol/L,pH7.4时有利于工程菌的生长及CNTF的表达.CNTF纯化后纯度达95%以上,并具有较高的生物学活性.结论为CNTF的结构和功能的研究及临床应用打下基础.

作者：马红雨；朱美才；蔡庆；占志 刊期： 2001年第03期

促红细胞生成素在老年肿瘤化疗后合并贫血中的应用

目的观察促红细胞生成素(rHuEPO)治疗老年肿瘤化疗后贫血患者的效果.方法 26例老年肿瘤化疗后合并贫血患者,采用rHuEPO 2000IU皮下注射,每周3次,4周为一疗程.结果 26例患者在Hb、RBC、HCT、RC均较前明显好转,生命体征较前更加稳定,血液粘度、生化、肝肾功能治疗前后无明显变化.结论老年肿瘤化疗后合并贫血的患者应用rHuEPO有一定疗效,并可减少输血的副作用.

作者：鲁向明；许腾 刊期： 2001年第03期

用高压液相色谱法测定静脉注射用人免疫球蛋白(pH4)中麦芽糖含量

目的用高压液相色谱法测定静脉注射用人免疫球蛋白(pH4)中麦芽糖含量.方法采用外标法,将麦芽糖含量与其相应峰面积进行直线回归,建立标准曲线.样品经磺基水杨酸去蛋白处理后,取上清液进样测定.将样品峰面积代入标准曲线,计算出麦芽糖含量.结果标准曲线回归系数r≥0.9990;回收率为99.6%～102.6%;以含9.00%、10.00%和11.00%麦芽糖的制品重复测定6次,CV值分别为1.01%、1.15%和0.59%;对一批制品进行日间重复性测定,CV值为0.6%.本方法相关性和重复性好,回收率高,操作简便.结论可作为静脉注射用人免疫球蛋白(pH4)中麦芽糖含量的常规检测方法.

作者：宋青 刊期： 2001年第03期

国产rhG-CSF不同给药次数对肺癌化疗所致白细胞减少的疗效比较

应用基因重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)治疗肿瘤化疗后外周血白细胞和中性粒细胞减少,其作用已得到肯定,但给药剂量及给药方法一直是临床探讨的问题.自1998年12月至2000年5月,作者应用瑞血新(国产rhG-CSF,深圳市新鹏投资发展有限公司生物制药厂生产)不同给药次数治疗化疗所致白细胞减少的肺癌取得较好疗效,现报道如下.

作者：石建华 刊期： 2001年第03期

治疗用抗HFRS病毒单克隆抗体质量分析

为了对治疗用抗HFRS病毒单克隆抗体3批中试产品进行全面的质量分析,我们参照国家药品监督管理局颁布的<人用鼠源性单克隆抗体制造及检定规程>进行检定.结果所有指标均合格,其中单抗纯度＞95%,单抗IgG单体纯度＞95%,残余骨髓瘤细胞(SP2/0)DNA含量＜100pg/剂量,采用微量细胞培养中和试验检测抗体中和效价＞1:12800～1:25600,无菌试验、异常毒性试验、鼠源性病毒检测、支原体检测、热原质试验均合格.在自检合格的基础上,送中国药品生物制品检定所检定合格.表明所制备的抗HFRS病毒单克隆抗体3批中试产品均符合临床观察的质量要求.

作者：邹昌勇；雷继军；邬义安；杜厚明；喻远祥；杨明；赵良；赵亚杰；孙可芳 刊期： 2001年第03期

抗猪EPEC特异性抗体(IgG)的制备及应用

仔猪黄、白痢病是由致病性大肠杆菌引起的仔猪肠道传染病,该病分布广,发病急,死亡率高,危害大,已成为养猪业的重要障碍.致病性大肠杆菌的抗原构造复杂,血清型极多,不同型之间不能交叉保护.因此,至今国内尚没有广为适用的疫苗.又因该菌易产生抗药性,给药物治疗带来了很大困难.

作者：张媛；刘形；申海清；刘清河 刊期： 2001年第03期

HEV部分ORF2重组蛋白的纯化及其在酶标试剂中的初步应用

目的获得具有生物学活性的重组蛋白,用于制备抗-HEV酶标试剂盒.方法将插入的含HEV部分开放读码框2(ORF2)的重组菌扩大培养,诱导表达,纯化,鉴定,组装酶标试剂盒.结果纯化的重组蛋白经SDS-PAGE鉴定,在相对分子质量56000处有一明显的蛋白带,经CS-930薄层扫描纯度达95%以上,经免疫印迹分析,具有良好的免疫学特异性.此HEV试剂盒,检测阳性病人血清样品阳性率为94.74%,检献血员血清样品阳性率为5.43%.结论该纯化的HEV部分ORF2重组蛋白组装的试剂盒特异性及敏感性均较好.

作者：王玉梅；刘彦彬；李秀芝；刘欣荣；蒙冲；刘畅；郭凤云 刊期： 2001年第03期

心房利钠多肽的规模化制备及活性分析

目的建立一种简便、有效的心房利钠多肽(atrial natriuretic polypeptide,ANP)的规模化制备方法.方法以恒河猴心房为原料,采用匀浆、分级超滤制备m-ANP,用SDS-PAGE测定纯度和相对分子质量,用Wistar大鼠检测生物学活性.结果所制备的m-ANP相对分子质量主要分布在2000～6000,包含了ANP的主要活性成分.具有降低血压,扩展血管和利钠利尿的生物学活性.结论该工艺可用于规模化生产ANP.

作者：戴宗祥；赵石；刘少林；戴长柏；陈必义；程志和 刊期： 2001年第03期

生物制品分装线无瓶不灌装功能的改进

现行的液体制剂分装机械,都具备无瓶不灌装功能.所谓无瓶不灌装是指灌装制品时,某一工位上形成空档,没有容器瓶(管制瓶或安瓿)时,此工位不灌原液.国产与进口分装线这一功能的执行系统大体相同,由三大要素组成:信号检测传感器、可编程控制器、电磁离合器,见图1,图2.

作者：刘金平；于晓达 刊期： 2001年第03期

重组人干扰素-γ的复性方法在不同规模中的应用

目的观察重组人干扰素-γ复性方法在不同规模中应用效果.方法用高压匀浆法破碎工程菌,提取包涵体,经变性剂溶解后快速稀释进行复性.结果在实验研究、中试、扩大试制、试生产和大规模生产中,生物活性恢复良好,纯度也有提高.结论此种复性方法简单、快速,活性提高3.05～5.65倍.

作者：杨春涛；屠宗青；石玮；张一鸣；童葵塘 刊期： 2001年第03期

第六次全国生物制品学术研讨会纪要

作者： 刊期： 2001年第03期

肺炎球菌荚膜多糖的特性鉴定

目的鉴定23个型的肺炎球菌荚膜多糖并研究其特性.方法按1997年版欧洲药典,对未作规定的鉴定项目作了全面鉴定.结果9V和20型的O-乙酰基含量,11A、18C、20和23F型的糖醛酸含量以及7F型的氨基己糖含量均较高,其他型及甲基戊糖含量则较低或未检出.用高压液相分子筛色谱检测各型多糖平均相对分子质量显示出Kd值均较低.结论对肺炎球菌荚膜多糖的特性进行了全面分析,并取得了完整的资料.

作者：栗克喜；袁忠；谈宁芝；冯晓虎；谢姗姗；毛秀珍；蔡勤；刘波；杨耀 刊期： 2001年第03期

检测人血白蛋白中铝含量的石墨炉原子吸收分光光度法的建立

目的建立一种人血白蛋白铝含量的检测方法.方法用石墨炉原子吸收分光光度法检测人血白蛋白(HAS)中的铝含量,并对该方法进行分析.结果检测限度达1nn/ml,检测精确度的CV值为7.62%,均达满意标准.结论该方法可检测出的铝含量符合WTO铝含量应≤200/ng/ml的要求,可作为实验室常规的铝含量检测方法.

作者：肖林；程雅琴 刊期： 2001年第03期

第一批重组人红细胞生成素国家标准品的研制

目的建立符合国家标准品要求,用于重组人红细胞生成素(rHuEPO)质量控制的rHuEPO国家标准品.方法用英国MBSC提供的WHO rHuEPO(87/684),采用经典的多血症小鼠-59Fe体内生物学活性测定法,对我国第一批重组人红细胞生成素国家标准品(980528)进行了标定.用阿根廷INSTITUTO SIDUS S.A.进行了复核标定.结果该批国家标准品效价为82IU/瓶,生物学活性稳定.结论 980528批rHuEPO可作为国家标准品,用于重组红细胞生成素制品体内生物学活性测定.

作者：程雅琴；周勇；王箐舟；刁勇；古卓良 刊期： 2001年第03期