学术投稿

双重PCR鉴别牛、羊肉掺假

杨冬燕;杨永存;李浩;杨小柯;邓平建

关键词:羊肉, 牛肉, 掺假, 双重PCR
摘要:目的 建立可同时检测羊肉中掺入的猪、马、牛、鸭成分中的任意2种,及牛肉中掺入的猪、马、鸭成分中任意2种的双重PCR检测体系.方法 配制掺入猪、马、牛、鸭源性成分的模拟掺假羊肉样品及掺入猪、马、鸭源性成分的模拟掺假牛肉样品,每个成分的掺假比例为10%.筛选特异性强、敏感度高的猪、马、牛、鸭物种特异性基因,优化反应体系,建立了针对猪、牛、马、鸭两两配对的双重PCR检测体系.结果 无论是模拟牛肉掺假样品,还是模拟羊肉掺假样品,所有掺入的低价肉品成分都被准确检出,且无非特异扩增条带.结论 本研究建立的双重PCR检测体系,可以敏感、特异、准确的检出牛羊肉制品中的猪、牛、马、鸭成分.
中国卫生检验杂志相关文献
  • 大便漂浮集卵新法

    目的 建立一个能提高肠道蠕虫卵阳性检出率的漂浮集卵新法.方法 在原有的饱和盐水漂浮法基础上滴加汽油,瓶口上不盖载玻片,用细铁丝环取漂浮油膜置载玻片上,直接镜检寄生虫卵.结果 对282份门诊和住院病人大便标本的检测中,肠道蠕虫卵阳性检出率从0.35%提高到2.48%;对187份幼儿园小孩大便标本的检测中,肠道蠕虫卵阳性检出率从0%提高到3.21%;对216份小学生大便标本的检测中,肠道蠕虫卵阳性检出率从0.46%提高到3.24%.结论 新建立的大便漂浮集卵方法,液面油膜起到了稳定虫卵的作用,从而使肠道蠕虫卵阳性检出率有明显提高,且操作简便.

    作者:吴寒 刊期: 2014年第23期

  • 332例复治肺结核患者一线抗结核药物耐药情况分析

    目的 为了初步了解宁波地区复治肺结核患者对4种一线抗结核药物的耐药状况及相关危险因素,并为完善本地区结核病防控策略提供相应的科学依据.方法 采用WHO/IUATLD推荐的1%药敏比例法,对332株临床分离的复治患者结核分枝杆菌进行异烟肼(INH)、利福平(RFP)、链霉素(SM)及乙胺丁醇(EMB)4种药物的耐药性测定,运用单因素及多因素logistic回归分析复治病例耐药的相关因素.结果 纳入的复治肺结核患者总耐药率、耐多药率分别为57.2%和36.1%.耐药谱以耐异烟肼为高.户籍情况是复治肺结核患者耐药的影响因素.结论 宁波地区复治肺结核患者一线抗结核药物的耐药趋势依然严峻,需进一步加强复治肺结核患者的防控工作.

    作者:车洋;于梅;许国章;平国华 刊期: 2014年第23期

  • 2009年-2013年余姚市中医医院2390例妇女HPV感染情况分析

    目的 调查2 390例妇科门诊就诊人群中妇女人乳头状瘤病毒(HPV)感染情况和核酸分型的分布特征.方法 采用PCR-反向点杂交基因芯片技术,对2009年-2013年来本院门诊就诊的2 390例妇女宫颈脱落细胞进行HPV基因分型检测,并对HPV感染阳性高危型人群进行液基薄层细胞学(TCT)检查.结果 2 390例HPV标本中阳性538例,总阳性检出率为22.51%,在538例HPV阳性标本中,单一感染者为431例,占80.11%,2种亚型感染者92例,占17.10%,3种亚型感染者15例,占2.79%,无4种及以上亚型感染;高危型感染率为22.09% (528/2 390),低危型感染率为5.52%(132/2 390).HPV亚型感染常见依次为HPV52、HPV58、HPV16,该人群未检出HPV39、HPV45、HPV73、HPV83.各年龄段HPV感染率随着年龄的增长呈逐渐上升趋势;感染高危型HPV人群宫颈上皮内瘤变发生率为3.07%,癌变发生率为1.02%.结论 本妇科门诊人群中HPV感染率较高,并以单一高危型为主,常见的是HPV52、HPV58、HPV16;结合TCT检查,可早发现、早预防、早治疗宫颈病变及癌变.

    作者:余小定;陈盈盈;赵莹 刊期: 2014年第23期

  • 2013年张掖市发热呼吸道症候群细菌多重PCR检测结果分析

    目的 了解该地区发热呼吸道症候群细菌病原谱的构成.方法 对张掖市1家哨点医院自2013年1月-2013年12月符合发热呼吸道症候群监测病例定义的患者采集痰液标本,每月5份~6份,用多重聚合酶链反应(PCR)方法对肺炎链球菌(SP)、流感嗜血杆菌(HI)、军团菌(LP)、百日咳杆菌(BP)、肺炎衣原体(CT)、肺炎支原体(MP)6种呼吸道病原菌进行检测.结果 检测痰液标本63份,总阳性率为96.83% (61/63),其中SP为29.51%(18/61)、SB +HI为65.57% (40/61)、SB+ MP为4.92% (3/61),未检出CT、LP及BP;全年均有发病,发病季节变化不明显;<5岁儿童较多,阳性构成比为27.86%(17/61);男性、女性细菌感染阳性率差异无统计学意义(P>0.05).结论 张掖市发热呼吸道症候群细菌类病原主要为肺炎链球菌、流感嗜血杆菌和肺炎支原体.

    作者:王冬玲;于爱红 刊期: 2014年第23期

  • 布鲁杆菌病3种血清学检测方法比较分析

    目的 通过比较虎红平板凝集试验(RBPT)、试管凝集试验(SAT)和胶体金免疫层析法(GICA)检测结果,客观评价3种方法对布鲁杆菌病诊断效率和价值.方法 采用虎红平板凝集试验、试管凝集试验和胶体金免疫层析法3种布鲁杆菌病血清学检测方法,对300位从事养殖、屠宰加工、皮毛贩运等重点职业人群进行检测,检测结果运用卡方检验进行统计分析.结果 运用3种检验方法对300位重点职业人群血清样本进行检测,RBPT法阳性血清25例、阴性血清275例;GICA法阳性血清24例、阴性血清276例;SAT法阳性血清21例、阴性血清279例,3种检验方法的阳性检出率间差异无统计学意义(P>0.05).结论 RBPT法、GICA法敏感性好,SAT法特异性高,在实际检测工作中应该把几种检验方法结合起来应用,并结合流行病学和临床体征来确诊布鲁杆菌病患者.

    作者:董文杰;解英波 刊期: 2014年第23期

  • 超高效液相色谱串联质谱法测定人尿中的8-羟基脱氧鸟苷

    目的 建立一种超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)简单、快速的分析人尿液中8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)含量的检测方法.方法 人尿样品经离心后,通过HLB固相萃取柱进行净化处理,采用5%的甲醇-水(含0.1%甲酸)作为色谱的分离条件,在MRM模式下采集8-OHdG(m/z=284.2> 168.2及m/z=284.2> 140.2)的信号,用外标法定量.结果 本文报道的检测方法具有较高的灵敏度,8-OHdG在线性范围0.1 ng/ml ~ 2.0 ng/ml内线性关系良好,相关系数为0.9995,定量下限为0.02 ng/ml,低、中、高3个加标水平的回收率为90.2%~103.7%,相对标准偏差为1.1% ~6.8%.结论 该方法操作简便,与前人报道的检测结果一致,也可以应用于评价各种氧化因素引起的DNA氧化损伤.

    作者:王丽英;杨立新;路杨;刘印平;秦振顺;常凤启 刊期: 2014年第23期

  • 2种染色方法查找痰中结核杆菌的比较

    目的 评价发光二极管荧光染色法(简称LED法)与萋-尼氏抗酸染色法(简称Z-N法)查找痰中结核杆菌的差异.方法 对1 168份痰标本分别进行萋-尼氏抗酸染色和荧光染色检测,比较2种方法检查结核杆菌的阳性检出率、读片时间、褪色速度等方面的差异.结果 LED法检测结果与Z-N法检测结果的符合率为99.1%,二者差异无统计学意义(P>0.05),另有11份用Z-N法染色检测为阴性的标本其荧光染色检测为阳性,表明荧光染色检测方法具有更高的灵敏度,LED法的读片时间明显短于Z-N法.结论 LED法具有读片时间短、灵敏度较高、操作步骤简单等特点,在基层痰检室对肺结核患者的发现具有一定优势,适合在临床推广.

    作者:曾希鹏;张小芬;陈烨 刊期: 2014年第23期

  • 固相萃取-高效液相色谱法测定食品中2-(4-甲氧基苯氧基)-丙酸钠

    目的 建立固相萃取-高效液相色谱法测定食品中2-(4-甲氧基苯氧基)-丙酸钠的分析方法.方法 样品采用氨水溶液(1∶9,V/V)溶解后固相萃取净化,在Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm×5μm)上,以甲醇/磷酸溶液(1∶1,V/V,pH =3.0)为流动相进行分离,紫外224 nm波长检测,外标法定量.结果 2-(4-甲氧基苯氧基)-丙酸钠在0.50 mg/L~ 50.0 mg/L范围内具有良好的线性关系(相关系数r=0.9995),回收率为87.4% ~ 99.0%,RSD<5.0%,定量检出限为1.0 mg/kg.结论 该方法具有前处理简单、重现性好的优点,能满足实际工作的需要.

    作者:马建明;龚文杰;邬晨阳;徐毅 刊期: 2014年第23期

  • 高效液相色谱法同时检测肉制品中9种合成色素

    目的 建立高效液相色谱法同时检测肉制品中柠檬黄、诱惑红、赤鲜红、亮蓝、靛蓝、胭脂红、红2G、日落黄、苋菜红等9种合成色素的方法.方法 肉样用1%高氯酸提取、离心,提取液经过聚酰胺/C18混合固相萃取柱净化,3ml无水乙醇-氨水溶液-水(7∶2∶1,V/V)溶液洗脱,洗脱液浓缩后进行反相液相色谱测定,甲醇-0.02 mol/L乙酸铵溶液梯度洗脱,二极管阵列检测器检测.结果 9种合成色素在1.0ug/ml~20.0 μg/ml范围内线性关系较好,相关系数r2>0.999,本方法肉制品中9种合成色素的检出限为0.1 mg/kg,定量限为0.4 mg/kg,回收率在86.0%~98.3%之间,相对标准偏差在1.03%~3.9%之间.结论 该方法简单、快速、准确,适用于肉制品中9种合成色素的同时检测.

    作者:王志园;谭莹;王天娇;倪竹南;马冰洁;吴平谷 刊期: 2014年第23期

  • 改良酶抑制法快速检测稻谷中有机磷农药残留

    目的 了解粮食农药速测卡的可靠性及实用性.方法 通过改良酶抑制法,采用速测卡对有机磷农药的低检出限进行试验,以及检测稻谷样品中有机磷农药残留情况,并与气相色谱法进行对比;同时对不同批次的速测卡进行比较试验.结果 速测卡对大部分有机磷农药的检出限比较低,灵敏度在0.01 mg/kg~ 2.0 mg/kg;对敌敌畏灵敏度高,可达到0.01 mg/kg;对乐果灵敏度较低,为2.0 mg/kg.检测样品时,速测卡与气相色谱法阴性符合率为99.5%,阳性符合率为84.6%.5个批次的速测卡显色结果基本一致,批次间重复性较好.结论 速测卡法具有快速、准确、方便、灵敏等特点,适用于粮食生产基地、粮食收购站、粮食仓库和稻米加工厂等单位现场的定性分析.

    作者:谢俊平;陈威;卢新;陈嘉东;王亚军;吴文玲 刊期: 2014年第23期

  • 宁德市部分市售食品重金属污染状况监测分析

    目的 了解宁德市2013年各类食品中重金属污染现状,为宁德市食品安全监管提供科学依据.方法 从宁德市超市和农贸市场有代表性的随机抽取各类食品样品,按照国家标准检测样品中的铅、镉、汞含量.结果 共检测10类样品223份,其中肝脏中的铅合格率仅为29%,大米中的铅合格率为67%,藻类、食用菌、奶粉中的铅合格率在80%~95%之间,其他种类中的铅合格率均为100%;大米、猪肉、藻类和食用菌中的镉合格率在85%~95%之间,其他种类中的镉合格率均为100%;蔬菜、食用菌的汞合格率在80%~ 90%之间,其他种类中的汞合格率均为100%.结论 宁德部分市售食品受到不同程度的重金属污染,相关部门应高度重视大米、肝脏中的铅污染并加强对藻类、蔬菜、食用菌及奶粉的卫生监督管理.

    作者:邱汉泉;刘伟 刊期: 2014年第23期

  • 高效液相色谱法测定保健食品中α-硫辛酸含量的研究

    目的 建立保健食品中α--硫辛酸的测定方法.方法 采用高效液相色谱法(HPLC),样品用流动相超声提取20 min,色谱柱:ODS-2HYPERSIL(4.60 mm×250 mm,5μm);流动相:0.125%(磷酸氢二钾+磷酸二氢钾,用磷酸调pH=3.5)+甲醇=35 +65(V/V);流量:1.0 ml/min,检测波长:215 nm.结果 硫辛酸在40 ng~4 000 ng范围内呈现良好的线性关系,相关系数为0.999997,检出限为2 ng,精密度试验RSD为0.53%(n=6);当样品添加浓度为5.33 g/100 g~22.7 g/100 g时,回收率为98.1% ~ 102%.结论 该方法操作简便、快速、可靠、重现性好,有效排除了杂质的干扰,可作为保健食品中α-硫辛酸的质量控制监测手段.

    作者:甘宾宾;刘培杰;曾永芳 刊期: 2014年第23期

  • 清远市某工业区农村饮用水重金属健康风险评价

    目的 监测清远市某工业区农村饮用水中A1、As、Se、Cd、Sb、Pb 6种重金属含量并评价其健康风险.方法 在清远市某工业区选择104个水井作为监测对象,检测重金属含量;按《生活饮用水卫生标准》GB5749-2006进行评价,并采用美国环境保护署健康风险评价模型评价其致癌风险与非致癌风险.结果 通过饮用水途径所致健康风险中,非致癌物和致癌物所致风险都低于国际辐射防护委员会(ICRP)推荐的,污染物所致健康危害的个人致癌风险可接受大值(5.00×10-5/a),其中致癌物引起的年均风险As(1.42×10-6/a)> Cd(8.24× 10-8/a),非致癌物引起的年均风险A1(1.20×10-8/a)> Pb(5.41×10-9/a)> Se(1.77×10-10/a) >Sb(6.76×10-n/a).结论 清远市某工业区农村饮用水中重金属存在一定健康风险,As为产生健康风险的主要污染物,应优先考虑防治.

    作者:何健飞;王国彬;赖婧 刊期: 2014年第23期

  • 线性免疫印迹法检测抗60kD Ro/SSA IgG抗体的对比分析

    目的 评价5个不同厂家自身抗体谱线性免疫印迹法(UA)试剂中的抗60 kD Ro/SSA IgG抗体项目的一致性及符合率.方法 收集本院54例自身免疫性疾病病人和10份2013年卫生部临检中心室间质评血清及30例健康人血清,同时使用酶联免疫吸附(ELISA)法和5个不同品牌LIA法试剂对血清中的抗60 kD Ro/SSA IgG抗体进行检测,比较5个不同品牌LIA法试剂检测60 kD Ro/SSA IgG抗体的一致性及总体符合率.结果 ELISA法试剂盒检测94例血清中阳性标本37例,阴性标本57例,同时进行的5种不同品牌LIA法抗核抗体谱试剂检测抗60 kD Ro/SSA IgG抗体结果的总体符合率均超过90%,吻合系数均>0.8,说明一致性很好,但5种品牌均出现不相一致的阳性和阴性.结论 LIA法的抗核抗体谱检测试剂盒在检测抗60 kD Ro/SSA IgG抗体项目中一致性很好,但检测结果可疑时应使用天然抗原包被的ELISA法试剂或双向扩散法进行复测.

    作者:劳小斌;何懿;罗宇维;谭礼平;孙尔维 刊期: 2014年第23期

  • 优化原子吸收光谱法测尿锰的方法研讨

    目的 探讨石墨炉原子吸收分光光度法测定尿中锰含量的方法.方法 通过原子吸收光谱仪的原子化和灰化,优化升温程序对基体改进剂的筛选,将佳的基体改进剂加入尿样后,调整石墨炉原子吸收分光光度仪测定的好状态,直接测定.结果 测定浓度在0 μg/L~15 μg/L范围内,方法的线性关系良好,相关系数r=0.9993,样品的加标回收率为85.9% ~90.7%,变异系数<10%,检出限为0.25μg/L~0.39 μg/L.结论 该方法具有操作简单、快速简便、灵敏度和准确度高的优点,适用于尿中锰含量的测定.

    作者:黄文锋;陈创钦;杨桓照 刊期: 2014年第23期

  • BED-CEIA技术在江西省艾滋病监测重点人群HIV-1新发感染率估算中的应用

    目的 应用BED-CEIA技术检测哨点血清,掌握江西省2011年-2013年重点人群人类免疫缺陷病毒Ⅰ型新发感染率.方法 收集全省2011年-2013年HIV哨点监测8个重点人群共131 562份血样,其中252份样本经免疫印迹法确证检测为阳性结果,该免疫印迹阳性血样应用BED-CEIA技术检测样本以区分新发感染与既往感染,利用公式I=[F×(365/W)×R]/[N+F×(365/W) ×R/2] ×100%估算该人群的HIV-1新发感染率.结果 2011年-2013年HIV哨点监测重点人群总体HIV-1感染率分别为:0.21%,0.23%,0.14%.新发感染主要发生在男男性行为人群(MSM),其新发感染率为高,2011年新发感染率为4.77%(1.46% ~ 8.07%),2012年为5.33%(2.63% ~8.03%),2013年为1.87%(0.49%~3.26%),其他人群均较低.结论 江西省男男性行为人群相对于其他人群的HIV-1新发感染率较高,该人群艾滋病流行形势相对严峻,应重新评估目前的干预策略,加大对该人群的干预力度.

    作者:唐翼龙;易志强;廖清华;刘丽萍;靳廷丽;张娜 刊期: 2014年第23期

  • 应用TCT标本检测高危HPV E6/E7mRNA在宫颈病变筛查中的价值

    目的 探讨病毒癌基因HPV E6/E7联合液基薄层细胞(TCT)在宫颈病变诊断中的应用价值.方法 将2 085例患者同时进行HPV E6/E7 mRNA及TCT检测,TCT异常者再进行阴道镜下活检,以病理组织学诊断为金标准,并分析其结果.结果 TCT检测异常者171例,检出率为8.2%,且随着宫颈病变程度增加,HPV E6/E7 mRNA拷贝数也升高,按TBS报告系统分组,每相邻2组间差异有统计学意义(P<0.05).TCT(+)且HPV E6/E7 mRNA(-)组45例,病理阳性31例,符合率为68.9%;TCT(+)且HPV E6/E7 mRNA(+)组126例,病理检查结果阳性115例,阳性符合率为91.3%,2组的病理阳性符合率差异有统计学意义(P<0.01).结论 HPV E6/E7 mRNA联合TCT检测与病理检查的阳性符合率明显高于单纯TCT检测的阳性率,从而大大提高了宫颈癌前病变和宫颈癌的检出率,并更能直观反映病毒癌基因的表达活性.因此,HPV E6/E7 mRNA检测可作为高危型HPV感染的妇女进行风险评估、宫颈癌筛查及宫颈癌术后病情观察,具有重要的临床应用价值.

    作者:应香岚;赵湘婉;吴晨曦;文小凤;王玲玲 刊期: 2014年第23期

  • 主动外排泵系统qacA/B、杀白细胞素与耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性的研究

    目的 研究主动外排泵系统qacA/B和杀白细胞素(PVL)在耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)中的流行现状和对MRSA耐药性的影响.方法 PCR扩增qacA/B基因和PVL基因;运用琼脂稀释法检测消毒剂和抗生素的小抑菌浓度;把MRSA分为4组:在1株MRSA中,qacA/B基因和PVL基因均阳性为第1组(No.1),仅qacA/B阳性为第2组(No.2),仅PVL基因阳性为第3组(No.3),qacA/B基因和PVL基因均阴性为第4组(No.4),采用卡方检验分析数据.结果 qacA/B基因和PVL基因的检出率分别为34.00%(68株)和28.00%(56株),其中No.1、No.2和No.3分别为35株(17.50%)、33株(16.50%)和21株(10.50%);消佳净(1.00 g/L)、碘伏(1.00 g/L)、苯扎溴胺(1.00 g/L)、阿米卡星、环丙沙星、利福平在No.1的耐药率明显高于No.4(P <0.05),这种情况同样存在于No.2与No.4、No.2与No.3、No.1与No.3中.结论 MRSA对消毒剂和阿米卡星等抗生素产生的耐药性与主动外排泵系统qacA/B有关系,而与PVL均无相关性.

    作者:郭震;张燕莲;陈传;徐株锦;谢文熙;刘军 刊期: 2014年第23期

  • 双重PCR鉴别牛、羊肉掺假

    目的 建立可同时检测羊肉中掺入的猪、马、牛、鸭成分中的任意2种,及牛肉中掺入的猪、马、鸭成分中任意2种的双重PCR检测体系.方法 配制掺入猪、马、牛、鸭源性成分的模拟掺假羊肉样品及掺入猪、马、鸭源性成分的模拟掺假牛肉样品,每个成分的掺假比例为10%.筛选特异性强、敏感度高的猪、马、牛、鸭物种特异性基因,优化反应体系,建立了针对猪、牛、马、鸭两两配对的双重PCR检测体系.结果 无论是模拟牛肉掺假样品,还是模拟羊肉掺假样品,所有掺入的低价肉品成分都被准确检出,且无非特异扩增条带.结论 本研究建立的双重PCR检测体系,可以敏感、特异、准确的检出牛羊肉制品中的猪、牛、马、鸭成分.

    作者:杨冬燕;杨永存;李浩;杨小柯;邓平建 刊期: 2014年第23期

  • 浅谈临床微生物检验的实习教学

    临床微生物检验是一门重要的检验专业课程,其内容涵盖广泛,包括细菌、病毒、支原体、衣原体、螺旋体、真菌等;涉及技术繁多,囊括分子生物学技术、免疫学技术、生化技术、光镜及电镜技术等;研究范畴全面,既有微生物的生物学性状,又有微生物的耐药机制,还涉及部分基因工程内容[1].鉴于本学科特点,单纯依靠理论讲授难以保证学习效果.为此,各医学院校均对学生设置了专业实习教学.

    作者:郭小兵;马俊芬;刘红春;张世杰;沈燕;明亮 刊期: 2014年第23期

中国卫生检验杂志

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主管:中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会

主办:中华预防医学会