陈文祥
目的 用PCR检测体外诱导的万古霉素耐药金黄色葡萄球菌(VRSA)的耐药基因vanA,探讨体外诱导VRSA对万古霉素耐药机制.方法 用万古霉素体外诱导将1株异质性VRSA逐步诱导为VRSA;检测金黄色葡萄球菌特异性nuc基因和万古霉素耐药基因vanA.结果 基因检测发现VRSA菌株均不含vanA基因.结论 VRSA不含vanA基因,故细胞壁增厚是导致金黄色葡萄球菌对万古霉素耐药的主要机制.
作者：张涛；马筱玲；戴媛媛；鲁怀伟；陈多炎 刊期： 2011年第05期
目的 制备嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(eosinophilia cationic protein,ECP)双抗体夹心ELISA法检测试剂盒.方法 葡萄球菌A蛋白亲和层析法纯化抗ECP单克隆抗体,过碘酸钠法进行抗ECP多克隆抗体HRP标记,制备ELISA试剂盒,进行条件优化和实验效能评价,检测过敏性皮肤病患者ECP水平.结果 通过对各种反应条件的优化,确定了适工作条件:单抗适包被浓度为1:500稀释,酶标多抗适浓度为1:8000稀释,适血清稀释液为稀释液Ⅱ(0.01 mol/L PBS,0.1％ Tween 20,0.1％溴化十六烷基三甲基铵,2.0 g/L小牛血清清蛋白,20 mmol/L乙二胺四乙酸),佳反应时间为60 min,反应温度为37℃；本研究制备的试剂盒线性范围为2.5 ～ 200 ng/mL,灵敏度为2.75 ng/mL,相对偏差为11.5％,批内变异系数(CV)＜10％,批间CV＜ 15％,与美国ADL试剂盒比较相关系数(r)为0.97,本试剂盒天津地区居民的正常参考值为(9.0±3.7)ng/mL.过敏性皮肤病患者ECP水平与健康人差异具统计学意义.结论 该双抗体夹心ELISA检测ECP试剂盒具有灵敏度高、特异性好、操作简便等优点,可在临床上广泛应用,为过敏性疾病的诊治提供依据.
作者：赵俊芳；王学谦；李桂珍；李会强 刊期： 2011年第05期
目的 评价Bactec MGIT 960系统自临床标本分离分枝杆菌的价值.方法 收集临床标本共578份,分别接种于Bactec MGIT 960系统和改良罗氏培养基,分离到的分枝杆菌用荧光PCR进行菌种鉴定.结果 578份临床标本中,共分离出171株分枝杆菌(29.6％).两种方法均阳性有105株,仅Bactec MGIT 960系统阳性有54株,仅罗氏培养基阳性有12株.Bactec MGIT 960系统分离率为27.5％ (159/578),罗氏培养基法为20.2％ (117/578).BactecMGIT960系统法阳性平均报告时间为10.2 d,罗氏培养基法为27.5d.Bactec MGIT 960系统法污染率为7.6％,罗氏培养基法为4.3％.结论 Bactec MGIT 960分枝杆菌检测技术是一种较好的快速分离分枝杆菌的方法,联合改良罗氏培养基可进一步提高分离率.
作者：陈晓；杨青；徐根云；孔海深 刊期： 2011年第05期
目的 建立环介导等温扩增(LAMP)技术快速检测临床标本中金黄色葡萄球菌(SA)的方法.方法 基于金黄色葡萄球菌femA基因部分序列设计一套(共4条)特异性引物,包括特异性识别靶序列上6个不同区域的两条内引物和两条外引物.通过条件优化,建立检测SA的LAMP方法.用该法检测临床分离的40株SA、12种其他革兰阳性球菌和8种革兰阴性杆菌,对方法特异性进行评价.SA标准菌株ATCC 25923进行10n稀释后测定方法的灵敏度.用LAMP方法及普通培养法检测临床60份咽拭子标本,评价方法的准确性.结果 LAMP技术佳反应温度为65℃,临床分离的40株SA检测阳性率达100％；其他菌株均无非特异性反应；低检测限14 CFU/test.以培养法为标准,LAMP试验检测60份咽拭子标本的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值为87.5％、100％、100％和98.1％.结论 LAMP技术操作简便、快速、灵敏度高、特异性强,可于60 min内快速筛查咽拭子标本中SA.
作者：史伟峰；史梅；罗光华；王玉月；张俊 刊期： 2011年第05期
目的 研究膜联蛋白5(annexin 5,A5)对坐骨神经选择性损伤引起的慢性疼痛应激致雄性SD大鼠生殖损伤的保护作用.方法 32只雄性SD大鼠随机分为4组,分别建立对照组、假手术组、手术组和手术+A5组模型.手术+A5组于术后第2天腹腔注射15μg/kg剂量的A5,其他实验组腹腔注射等量的pH 8.0 Tris-HCl,每日1次,连续21 d.分别测各组SD大鼠体重、称重睾丸和附睾,计算其脏器系数,并对附睾尾进行精子计数.HE染色观察睾丸组织结构变化.用化学发光法检测各组大鼠血清中睾酮浓度.结果 手术组大鼠与对照组相比,睾丸系数、附睾系数以及精子相对计数均降低(P＜0.05)；睾酮水平下降显著[(5.10±2.61) vs (22.40±4.30) mmol/L,P＜0.0l)]；病理切片见睾丸生精细胞与腔内精子数量明显减少.假手术组大鼠与对照组比,上述指标均无统计学差异.手术+A5组与手术组比,精子相对计数与睾酮含量[(19.67±2.02)vs(5.10±2.61) mmol/L,P＜0.01]均显著提高,其他参数均有不同程度的恢复,睾丸生精细胞与腔内精子数量减少程度显著恢复.结论 A5对慢性疼痛应激引起的生殖损伤具有一定的保护作用.
作者：林钗英；时姗姗；陶晓倩；柳海燕；靖俊；姚兵 刊期： 2011年第05期
目的 探讨细胞色素P450 2C9基因(CYP2C9)多态性位点1075A＞C与个体间华法林稳定剂量差异的关系.方法 用实时荧光PCR结合熔解曲线分析的方法,对323例已获得华法林稳定剂量患者的CYP2C9 1075A＞C位点进行分型；比较不同基因型患者的华法林稳定剂量的差异.结果 323例患者中,CYP2C9基因型*1/*1(AA)、*1/*3(AC)和*3/*3(CC)分别有294例、28例和1例,各占91.02％、8.67％和0.31％,等位基因*1(1075A)和*3(1075C)的频率分别为95.36％和4.64％.在CYP2C9的3种基因型中,*1/*1基因型组华法林剂量(3.07±1.12)mg/d显著高于*1/*3基因型组(1.71±0.53) mg/d(F22.555,P＜O.01),*3/*3基因型患者的剂量低,仅为0.625 mg/d.结论 CYP2C9基因多态性是影响个体间华法林用量差异的一个主要遗传因素,对患者的CYP2C9 1075A＞C位点进行分型,可作为华法林个体化用药的一个重要依据.
作者：黄盛文；向道康；陈保林；黄凌；安邦权；罗振元 刊期： 2011年第05期
目的 制备有免疫原性的白念珠菌果糖二磷酸醛缩酶(fructose-bisphosphate aldolase,Fba1)重组蛋白.方法 以白念珠菌C1标准株基因组DNA为模板,用PCR法扩增Fba1 DNA序列,与克隆载体pMD18-T连接、测序,再与原核表达载体pET28a(+)连接,构建成重组表达质粒pET28a(+)/Fba1,转化大肠埃希菌BL21( DE3),IPTG诱导重组融合蛋白表达,亲和层析柱纯化重组蛋白.用抗His标签的单克隆抗体鉴定融合蛋白,并用确诊为侵袭性白念珠菌病(ICAI)、且抗白念珠菌烯醇化酶抗体阳性的患者血清进行抗原性鉴定.结果 Fba1 DNA序列与GenBank中的序列一致.在大肠埃希菌中获得白念珠菌Fab1重组蛋白的高效表达,表达产物以可溶性蛋白为主,终蛋白质得率为7.6 mg/g湿菌.经免疫印迹鉴定,重组蛋白与抗His标签的单克隆抗体和确诊ICAI患者血清呈特异性反应,显示出良好的抗原反应性.结论 成功制备了具有良好抗原反应性的重组蛋白,为建立特异性诊断ICAI的新方法打下基础.
作者：陆静芬；李芳秋；史利宁；王颖 刊期： 2011年第05期
目的 了解新疆地区结缔组织病(CTD)患者血清中抗核抗体(ANA)荧光核型、靶抗原与CTD之间的相关性.方法 采用间接免疫荧光法(IIF)检测ANA荧光核型；采用免疫印迹法和酶免疫法检测抗核抗体谱和自身抗体.结果 新疆地区564例ANA阳性CTD患者中,ANA荧光核型有单一及复合核型.单一核型中核颗粒型多见(靶抗原依次为SSA、nRNP、Sm),其次核均质型(靶抗原依次为dsDNA、核小体和组蛋白).复合核型中,双核型以核颗粒型+核均质型,核颗粒型+胞浆颗粒型组合为主.三核型以核颗粒型+核均质型+胞浆颗粒型常见.在荧光核型、靶抗原及疾病关系分析结果中发现:SLE患者单核型以核均质和核颗粒常见,双核型以核颗粒+核均质、核颗粒+胞浆颗粒组合常见,三核型为核颗粒、核均质、胞浆颗粒同时出现.另外抗核糖体P蛋白以往引起胞浆颗粒荧光,而本研究中核颗粒型检出率为27.03％.抗着丝点抗体在SLE、原发性胆汁性肝硬化( PBC)、硬皮病及重叠综合征中均能检出.结论 新疆地区CTD患者血清ANA荧光核型呈现多样性.以核颗粒为优势核型；靶抗原SSA不仅可以引起经典的核颗粒荧光,还可呈现核均质、核仁型、胞浆颗粒型荧光.核糖体p蛋白呈现核颗粒型荧光.抗着丝点抗体具有较宽的疾病谱；SLE患者荧光核型呈现多样性,自身抗体谱广于其他自身免疫性疾病(AID).
作者：王晓东；董潇阳；刘旭；哈地丽亚；哈斯木；邓淑文 刊期： 2011年第05期
系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)是一种慢性自身免疫性疾病,患者体内往往存在多种自身抗体,病因未明.研究表明,遗传因素在SLE发病机制、临床症状及相关自身抗体的产生等方面都起重要作用.疾病分布和临床表现存在种族差异[1],与白种人比,亚洲人SLE发病率(每10万名女性中约有100名患者)高[2].
作者：李萍；李永哲 刊期： 2011年第05期
目的 研究人胚胎骨髓间充质干细胞(fetal mesenchymal stem cells,FMSC)及其突变肿瘤细胞F6死亡相关蛋白激酶(death-associated protein kinase,DAPK)基因的表达及启动子区域甲基化.方法 用RT-PCR和甲基化特异性PCR( methylation-specific PCR,MS-PCR)技术对FMSC及F6细胞系DAPK基因的表达和启动子甲基化状态进行检测,并对甲基化产物测序鉴定.结果 DAPK基因在FMSC中表达而在F6中不表达.通过MS-PCR检测证实F6中DAPK基因发生甲基化,FMSC中DAPK基因发生未完全甲基化.结论 DAPK基因启动子区域发生甲基化可能是促使其基因表达下调的重要机制,在FMSC突变成F6肿瘤细胞过程中发挥重要作用.
作者：徐学静；张葵；顾光煜；钱晖；许文荣 刊期： 2011年第05期
目的 探讨结核分枝杆菌相关γ-干扰素体外释放试验(TB-IGRA)在结核病诊断中的应用价值.方法 用国产TB-IGRA试剂定量检测268例结核病患者和104例体检健康者外周血结核特异性γ-干扰素的含量,同时与澳大利亚QFT-GIT试剂和结核菌素纯化蛋白质衍生物(PPD)皮试进行平行比较分析.结果 国产TB-IGRA试剂、QFT-GIT试剂和PPD皮试3种方法的敏感性分别为90.7％、88.1％和75.4％,特异性分别为76.9％、80.8％和54.8％,阳性预测值分别为91.0％、92.2％和81.1％,阴性预测值分别为76.2％、72.4％和46.3％,准确性分别为86.8％、86.0％和69.6％.三种方法对肺结核与肺外结核的检测效果无显著差异.结论 TB-IGRA法对诊断结核病有较高的敏感性和准确性,在结核病防控中有较好的应用价值.
作者：李晓非；熊俊辉；汪亚玲；朱莉莉；吕松琴；张军 刊期： 2011年第05期
近年来临床实验室认可活动越来越普遍,并规定认可过程必须评定测量不确定度.临床实验室人员也逐渐认识到评定测量不确定度的重要性,但评定方法尚未完全一致.近年来关于不确定度评定的相关指南及研究性论文呈指数级增长,但应该评定“测量程序”还是评定“测量结果”的不确定度存在较大争议.二者在评定方法、报告方式和评定效果三方面都存在显著差异.本文从不确定度评定的理论和实践两方面进行了分析,认为在医学检验中评定“测量结果”的不确定度更为合理,也更有意义.
作者：王惠民；季伙燕 刊期： 2011年第05期
并殖吸虫(Paragonimus)也称为肺吸虫(lung fluke),主要寄生于宿主的肺内,引起肺吸虫病[1].肺吸虫病是一种人兽共患寄生虫病,容易误诊和漏诊.现报告因感染肺吸虫后出现嗜酸性粒细胞增多而被多家医院误诊的1例患者.1病历简介患者,男,27岁,贵州省遵义人.因头痛、胸闷、皮肤瘙痒3个月入广西宜春某院.血常规:白细胞29.5×109/L,嗜酸性粒细胞0.48.X线胸片:双下肺感染.B超:肝脾大,双侧胸腔少量积液.
作者：刘流；晏容；刘晖；贺莉芳 刊期： 2011年第05期
羧基端糖肽( copeptin)是一种与精氨酸血管加压素(arginine vasopressin,AVP)同源且与其等摩尔分泌的稳定糖肽.copeptin的检测简便、快速,可有效地反映内源性AVP的水平.近年来,其对多种疾病预后评估和危险分层的作用成为研究的热点.本文重点阐述其在疾病诊断和预后评估方面的研究进展.
作者：潘萌萌；王辉 刊期： 2011年第05期
全自动血培养仪广泛用于临床,为血液感染提供了方便快速的检测方法.而脑膜炎、关节炎、心包炎等诊断有赖采用传统培养方法(固体培养基如血平板或巧克力平板培养,或使用脑心浸液增菌)作体液培养,病原菌检出率较低.有作者推荐使用血培养仪进行体液的病原菌培养,对此本文作总结和讨论.
作者：鲁炳怀；时琰丽；朱凤霞 刊期： 2011年第05期
目的 探讨用重组苦瓜蛋白MAP30(Momordica anti-HIV protein of 30 ku)诱导人食管癌细胞株EC-1.71细胞凋亡状况.方法 MAP30诱导EC-1.71细胞后,透射电镜观察细胞凋亡的形态特征；JC-1荧光探针检测细胞线粒体膜电位(△Ψm)变化；ELISA法检测细胞培养上清液中细胞色素c(Cytc)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平；免疫细胞化学法检测细胞ERK1/PERK1,AKT/PAKT和NF-κB表达；荧光微板阅读仪检测细胞caspase-12活性.结果 MAP30诱导可以使EC-1.71细胞固缩,核膜扭曲,核染色质聚集成块并靠近核膜,内质网高度膨胀、扩张；△Ψm水平下降；Cytc和TNF-α含量增加；胞质中ERK1、AKT表达增强而胞核中PERK1、PAKT表达降低,NF-κB活性降低,caspase-12活性增强.结论 MAP30可以诱导EC-1.71细胞凋亡.
作者：韩晓红；邵世和；薛延军；陈德玉；黄河；李先茜；许化溪 刊期： 2011年第05期
目的 对1例遗传性多发性外生骨疣(hereditary multiple exostoses,EXT)家系的EXT1和EXT2基因编码序列进行突变检测,寻找引起该病的致病基因突变.方法利用与EXT1、EXT2紧密连锁的短串联重复序列(short tandem repeat,STR)对该家系进行连锁分析,确定候选基因,用PCR-测序法对候选基因的编码区及外显子与内含子交界处进行突变分析.结果 DNA测序分析发现,先证者致病基因EXT2第3外显子有一新的637G＞A无义突变,致使编码第192位的氨基酸的密码子提前出现终止密码,使编码蛋白成为只有191个氨基酸的截断型蛋白,其余外显子未发现突变.家系调查发现,该突变来自于先证者父亲.先证者EXT1基因未发现变异.结论EXT2基因637G＞A突变是导致这个家系发生多发性骨疣的分子机制.
作者：江梅；邹晶晶 刊期： 2011年第05期
血管炎是指原发于血管的一类炎症性疾病,许多抗体参与血管炎的发病机制及病程,其中血管炎和抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)的关联性较高.IL-33是新发现的具有多种效应的前炎症细胞因子,在炎症反应中起着关键性的作用[1].本研究测定90例血管炎患者血清ANCA和IL-33水平,以探讨IL-33与血管炎的相关性.
作者：黄晶；安倍莹；单红丽；张朝冠；白岩 刊期： 2011年第05期
多数临床检验项目是定量检验,用数值和单位表示检验“结果”,属测量范畴.按现代计量学理论,测量结果是“一组”由测量得到的量值,通常用一个测得量值和该量值的测量不确定度表示.不确定度给出该量值的分散性信息,一方面代表测量质量,不确定度越小,测量质量越高;另一方面它是有效利用测量结果以及测量结果之间比较的需要.
作者：陈文祥 刊期： 2011年第05期
目的 探讨载脂蛋白A5(apoA5)c553G/T基因多态性与代谢综合征(MS)的相关性.方法 用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析apoA5 c533G/T位点多态性在203例MS患者和216名体检健康者中的分布,并用酶法检测其血脂和血糖水平.结果 c553T等位基因在高三酰甘油(TG)血症人群中的分布频率明显高于健康对照组(P＜0.05).Logistic回归分析显示,apoA5 c553T等位基因对MS高TG血症(OR=3.380,P＜0.05)具有独立的影响.MS组和健康对照组apoA5 c553TT纯合子及GT杂合子个体比GG纯合子个体具有高TG水平.结论 apoA5 c553G/T基因多态性与血浆TG具有相关性,apoA5 c553T等位基因可能为MS的危险因素.
作者：丁妍；来名安；朱静；卢智勇；袁雅红；王小莉；李东升 刊期： 2011年第05期
临床检验杂志
主管:江苏省卫生厅
主办：江苏省医学会
