学术投稿

瑞替普酶在大肠杆菌中的表达与活性测定

孙雄华;徐寒梅;沈子龙

关键词:瑞替普酶, 组氨酸标签, 大肠杆菌, 表达, 纯化
摘要:目的 构建带组氨酸标签(His6·Tag)的瑞替普酶(Reteplase,r-PA)的表达载体,并在大肠杆菌中表达和活性检测.方法 通过引物设计在r-PA基因5'端加上组氨酸标签(His6·Tag),克隆到pET23a原核表达载体中,转化E.coli BL21(DE3),进行IPTG诱导表达.表达产物经亲和层析纯化后,用FAPA法测定其纤溶活性.结果 构建的原核表达载体经PCR、酶切鉴定、测序后正确.表达产物分子质量39kDa,为r-PA特异性条带,纯化产物具有纤溶活性.结论 成功地在大肠杆菌表达了带有标签的r-PA,简化了下游分离纯化和复性步骤.
中国血液流变学杂志相关文献
  • 急性脑梗死OCSP分型与颈动脉斑块的相关性

    目的 探讨急性脑梗死患者英国牛津郡社区脑卒中项目Bamford分型(OCSP)各亚型与颈动脉粥样硬化超声分型间的相关性.方法 收集152例首发急性脑梗死患者早期OCSP分型和颈动脉斑块彩超检查结果.结果 颈动脉斑块彩超检出率69.08%,其中不稳定斑块31.43%,105例颈动脉斑块检出者中脑梗死类型主要为腔隙性梗死(LACI)61.9%.结论 急性脑梗死患者颈动脉斑块发生率高;对颈动脉彩超有斑块检出者应尽早进行干预.

    作者:张志英;王薇;程庆璋 刊期: 2006年第04期

  • 脂多糖对血管平滑肌细胞表达MMP-9的影响及可能机制

    目的 探讨脂多糖(1ipopolysaccharides,LPS)对培养的大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)表达基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的影响及可能的分子机制.方法 贴块法进行血管平滑肌细胞培养,细胞免疫化学检测MMP-9的蛋白表达及核因子NF-κB激活情况,原位分子杂交分析MMP-9mRNA表达.结果 LPS是MMP-9的强诱导物,可在蛋白及mRNA水平诱导MMP-9的表达,LPS对其诱导作用强度与LPS的浓度呈正相关.与正常组比较LPS刺激15min即有NF-κ B p65核转移,30min达高峰,1h后减弱.结论 LPS诱导平滑肌细胞MMP-9表达,其作用呈浓度时间依赖性,MMP-9表达升高可能与LPS激活NF-κB有关.MMP-9表达升高和NF-κB激活提示LPS在动脉粥样硬化发病过程中可能起一定作用.

    作者:路军;阮秋蓉;康苏娅 刊期: 2006年第04期

  • 二期梅毒口腔表现的临床分析

    目的 引起口腔科医生对早期梅毒口腔表现的重视.方法 对2003年2月~2005年5月期间,以口腔黏膜损害为首发症状的患者,经鉴别排除其他口腔黏膜类疾病后,做梅毒血清学检查.结果 快速血浆反应素环状卡片实验和梅毒螺旋体抗原血凝实验均为阳性.结论 口腔梅毒是梅毒的早期表现,应引起高度重视,及早发现治疗,以防止其进一步传播.

    作者:马燕 刊期: 2006年第04期

  • 超声引导下凝血酶注射法治疗股动脉假性动脉瘤对血液流变特性的影响

    目的 评价超声引导下凝血酶注射法治疗股动脉假性动脉瘤(pseudoaneurysm,PSA)的疗效及对血液流变特性的影响.方法 冠状动脉介入诊治术后股动脉PSA患者16例,在超声引导下穿刺PSA瘤腔并注射200IU凝血酶行封闭治疗,所有病例均在治疗后24h和3~5d复查超声,并在注射凝血酶前及注射凝血酶后48h检测有关血液流变参数.结果 11例患者在瘤囊内注入200IU凝血酶后瘤腔即刻闭合,5例患者动脉与瘤腔通道血流明显减弱,在超声引起下压迫5~10 min闭合,治愈率100%,无并发症发生.所有病例24h及3~5 d后复查无复发.注射凝血酶前后血液流变参数无显著差异.结论 该法治疗PSA简便、安全、有效,且对机体血液流变特性无明显影响.

    作者:罗晓丽;杨成明;王旭开;王红勇 刊期: 2006年第04期

  • 磁共振冠状动脉成像技术临床应用分析

    目的 评价导航技术三维对比剂增强磁共振冠状动脉成像对冠心病患者诊断的临床应用价值.方法 应用导航技术三维对比剂增强磁共振冠状动脉成像方法对45例受检者分别进行左、右冠状动脉成像后经处理获得左、右冠状动脉血管图像,根据图像进行冠状动脉主干评价与临床症状,ECG、DCG、UCG、DSA等检查结果相比较判断冠脉MR对冠心病诊断的价值.结果 45例受检者冠脉MR图像中阳性18例、阴性27例;临床拟诊冠心病患者27例中ECG、DCC提示冠心病15例,冠脉MR图像中阳性18例;其中5例拟诊冠心病患者在冠脉MR2周内行常规冠状动脉造影(DSA)检查其结果2例阴性、3例阳性,与冠脉MR检查结果相符.结论 冠脉MR可作为冠心病无创性检查的一种手段,由于图像显示右冠状主干、左主干、左前降支及左同旋支近中段图像清楚,而远段图像欠佳尚不能代替常规冠状动脉造影检查方法,可作为冠心病辅助检查.

    作者:汤振源;李晓兵 刊期: 2006年第04期

  • 乳腺癌的高频超声表现与手术后病理对照分析

    目的 探讨乳腺癌的高频声像图特点及病理基础,以进一步提高超声诊断水平.方法 对经手术后病理证实的48例乳腺癌声像进行回顾性分析.结果 该组大部分病例(除4例误诊外)形态不规则,常呈分叶状,毛刺状,边缘粗糙,境界不清,内部回声不均匀,可见微小砂粒状钙化灶,后方回声衰减,恶性肿块的血流显示率较高,收缩期大血流速度及阻力指数高于良性肿块.结论 1)超声对乳腺肿块的定性诊断具有明确的临床应用价值.2)乳腺恶性肿块的病理基础不同,导致了不同类型的超声表现.

    作者:卞和星 刊期: 2006年第04期

  • COX-2与Fas蛋白在胃癌组织中的表达及意义

    目的 探讨COX-2和Fas蛋白在胃癌组织中的表达相互关系及意义.方法 应用免疫组化方法检测了30例正常胃黏膜及82例胃癌组织中COX-2和Fas的表达情况.结果 COX-2蛋白在胃癌组织中阳性表达率为63.4%,而在正常对照的胃黏膜组织中阳性率为13.3%,胃癌组织中COX-2蛋白阳性率显著高于正常胃黏膜(P<0.001).Fas在胃癌组织中阳性率为39.1%,在30例正常胃黏膜组阳性率为93.3%,正常胃黏膜组中Fas阳性率显著高于胃癌组织(P<0.001).COX-2与Fas的阳性表达在各性别组和各年龄组之间无显著差异,COX-2在有淋巴结转移和无淋巴结转移胃癌组间,低分化和高、中分化胃癌组间、TNM分期之间表达有显著差异.Fas在高、中分化胃癌组阳性表达率显著高于低分化胃癌组(P<0.05).而在TNM分期之间,有淋巴结转移和无淋巴结转移胃癌组间表达无显著性差异(P>0.05).胃癌组织中COX-2与Fas表达具有显著负相关(rs=-0.559,P<0.001).结论 胃癌组织中存在COX-2的高表达与Fas低表达,且两者之间的表达强度具有显著等级负相关.

    作者:胡端敏;冯一中;王少峰 刊期: 2006年第04期

  • 乌司他丁治疗急性胰腺炎的临床研究

    急性胰腺炎是临床常见急腹症,近年来发病率逐渐增高,乌司他丁对急性胰腺炎有良好的疗效,为进一步观察乌司他丁的疗效,对15例急性胰腺炎患者进行了临床观察.

    作者:白云 刊期: 2006年第04期

  • 降钙素基因相关肽对内皮细胞MDA、T-SOD、T-ant-OX、ICAM-1和TIMP-2的影响

    目的 探讨降钙素基因相关肽(CGRP)对内皮细胞(EC)的保护调控作用.方法 用CGRP分别作用于培养的正常内皮细胞和经联胺损伤的内皮细胞后,分别收集上清和细胞,用上清检测丙二醛(MDA)含量、总超氧化物歧化酶(T-SOD)活力以及总抗氧化能力(T-ant-OX)的代谢变化;用一步法提取细胞总RNA,反转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测内皮细胞细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和组织金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)的mRNA含量.结果 CGRP有上调T-SOD、T-ant-OX的代谢和TIMP-2mRNA表达的作用,下调MDA代谢和ICAM-1mRNA表达的作用(P<0.05).结论 CGRP对内皮细胞有一定的保护调控作用,并且在EC的抗损伤方面,尤其是抗早期损伤方面,可能起重要作用.CGRP能下调内皮细胞脂质过氧化损伤和黏附分子ICAM-1的表达,上调TIMP-2的表达,这些可能是其作用机制之一.结果提示CGRP在动脉粥样硬化的防治方面可能发挥重要作用.

    作者:杨亚安;吴开云;王彩英;杨芹;杨刚 刊期: 2006年第04期

  • 股骨粗隆下骨折的治疗体会

    目的 探讨股骨粗隆下骨折的不稳定骨折的治疗方法.方法 自2000年1月~2004年8月采用切开复位股骨近段解剖钢板和重建钉内固定,共25例.结果 根据术前和术后X片及手术后髋关节功能站立、行走等情况评估随访6月~2年,优8例,良12例,差5例.结论 股骨近段解剖钢板治疗股骨粗隆下不稳定骨折在基层医院虽并发症较多,但容易开展,重建钉有一定难度,但较髓外固定效果更佳.另外两者均应重视内侧皮质骨的复位.

    作者:丁伟 刊期: 2006年第04期

  • 老年患者经尿道前列腺汽化电切术的麻醉处理

    经尿道前列腺汽化电切术(简称TUVP)是近几年国内外开展腔内治疗前列腺增生症的新方法,具有手术创伤小、病人痛苦少、恢复时间快、并发症少等优点,深受广大患者欢迎.现将我院近年来收治的36例TUVP病人麻醉处理体会报告如下.

    作者:钱美娟;吴学东;鄂勇;赵建华;方志源 刊期: 2006年第04期

  • 328例住院新生儿呕吐的临床分析

    目的 探讨新生儿呕吐的常见原因.方法 收集328例有呕吐症状的住院患儿病史进行分析.结果 内科性呕吐283例,占86.3%,其中以羊水吞咽综合症为致呕吐的主要疾病;外科性呕吐45例,占13.7%,其中多数为先天性消化道畸形.结论 内科疾病是新生儿呕吐的主要原因,但外科疾病若不及时明确和治疗后果严重,甚至可以危及患儿的生命,故早期诊断和早期治疗是预后好坏的关键.

    作者:姚海娟 刊期: 2006年第04期

  • 急性冠脉综合征患者血清脂联素和C反应蛋白浓度及相互关系

    目的 观察急性冠脉综合征患者血清脂联素和C反应蛋白(CRP)的水平及两者的关系.方法 对稳定性心绞痛、不稳定心绞痛、急性心肌梗死和正常对照各25例病人进行血清脂联素和C反应蛋白的测定.结果 与对照组和稳定性心绞痛组比较,不稳定心绞痛组和急性心肌梗死组血清脂联素明显减低而C反应蛋白水平明显升高,血清脂联素水平与C反应蛋白水平呈负相关.结论 急性冠脉综合征患者血清脂联素水平降低,脂联素为冠心病的一个危险因素.

    作者:罗骏;陈绍良;杜同心;段宝祥;周陵 刊期: 2006年第04期

  • 米非司酮配伍米索前列醇终止疤痕子宫早孕的治疗观察

    目的 减少疤痕子宫早孕行人流术的并发症,减轻育龄妇女官腔操作痛苦.方法 终止疤痕子宫早孕86例.具体方法:①用药第1、2 d晨起空腹服米非司酮50mg,10h后再服25mg.②第3d早上空腹服米素前例醇0.6mg,服药前后1h禁食.结果 服米索前列醇后胚胎排出<6h为69例,6~24 h排出11例,6例因胚胎未排出行清宫术.成功率为93.03%.阴道出血近似于月经量为60例,占67.77%.多于月经量为26例,占32.23%.药流后阴道出血时间为7~23 d,平均为10±2 d.结论 米非司酮配伍米索前列醇终止疤痕子宫早孕效果较好.

    作者:蔡梅兰 刊期: 2006年第04期

  • 老年人原发性胃肠道淋巴瘤8例临床分析

    分析8例老年人原发性胃肠道恶性淋巴瘤的临床特征.腹痛、消化道出血是常见的临床表现.7例为低度恶性,1例中度恶性.7例为B细胞来源,1例为非T非B淋巴瘤.术前误诊率为75%.内镜结合活检病理、X线消化道造影、CT检查为主要的诊断方法.其治疗原则是以手术治疗为主的综合治疗.

    作者:郭健政 刊期: 2006年第04期

  • 老龄患者无痛苦胃肠镜检查的安全性分析

    目的 探讨老龄患者无痛苦胃肠镜检查的安全性.方法 以在2000年4月~2006年4月间与麻醉科合作采用芬太尼和丙泊酚配合浅麻醉下行无痛苦胃肠镜检查治疗术2 600例中580例老龄患者为研究对象,观察麻醉过程用药量、安全性、并发症.结果 所有患者均安全完成操作,麻醉轻度影响呼吸,血压、心率、脉氧轻度下降,未发生一例呼吸暂停等严重并发症.结论 该方法简便易行安全,大部分病人有经济承受能力,值得在有条件的医院和地区开展.

    作者:朱凤兰;赵秀华 刊期: 2006年第04期

  • 妊娠期高血压疾病与其并发症妊娠期肝内胆汁淤积症的关系

    目的 探讨妊娠期高血压疾病与妊娠期肝内胆汁淤积症的关系.方法 分析妊娠期高血压疾病(hypertensive disorders complicating pregnancy,HDCP)患者122例的并发症.结果 18例(14.75%)妊娠期高血压疾病患者并发妊娠期肝内胆汁淤积症(intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP),并且发现随着妊娠期高血压疾病程度的提高妊娠期肝内胆汁淤积症的发生率也越高.结论 妊娠期高血压疾病的严重程度与是否合并有妊娠期肝内胆汁淤积症成正相关,子痫前期患者的新生儿的预后与妊娠期肝内胆汁淤积症亦成正相关.

    作者:黄春燕;王锡梅 刊期: 2006年第04期

  • 股骨颈骨折伴糖尿病患者的围手术期处理

    目的 探讨股骨颈骨折伴糖尿病患者的围手术期治疗要点.方法 对54例股骨颈骨折伴糖尿病患者围手术期血糖控制,并发症防止及手术方式选择作临床回顾分析.结果 绝大多数病人顺利度过围手术期.结论 股骨颈骨折伴糖尿病患者,应根据年龄、骨折类型、身体状况选择适当的手术方式,围手术期严格控制血糖,防止并发症是取得较好疗效的关键因素.

    作者:王快 刊期: 2006年第04期

  • 血小板微颗粒检测在特发性血小板减少性紫癜中的诊断意义

    目的 检测特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者血小板微颗粒(platelet-derived microparticals,PMPs)数量的变化,研究其与P-选择素及血小板数量之间的关系,并探讨其在ITP中的诊断价值.方法 利用流式细胞术(FCM)检测患者外周血中血小板微颗粒、P-选择素.结果 ITP组PMPs显著高于正常对照组.PMPs与P-选择素之间有正相关性,PMPs与血小板数量之间无相关性.结论 血小板微颗粒数量的的变化对ITP的诊断有一定的临床价值,能为ITP的诊断提供一定的帮助.

    作者:陈郁钢;杨凤英 刊期: 2006年第04期

  • 斑点酶联免疫法在伤寒沙门菌外膜蛋白单克隆抗体研制中的应用

    目的 评价斑点酶联免疫法在伤寒沙门菌外膜蛋白单克隆抗体研制中的应用.方法 将伤寒沙门菌62(ST62)抗原提取物以微量加样器点于预处理过的硝酸纤维素膜上,待干后,以含10%小牛血清的0.05M Tris-HCl缓冲液进行封闭,用于筛选阳性杂交瘤细胞株,同时应用免疫印迹法鉴定其所分泌的单克隆抗体的特异性.结果 采用斑点酶联免疫法筛选,获得5株抗伤寒沙门菌外膜蛋白的单克隆抗体(A3、C1、D4、E6、F5),其中A3株经免疫印迹试验证实,仅在52KDa蛋白处出现一条清晰的条带.结论 实验结果证实该法简便、快速、经济,具有较高的敏感性和特异性,可操作性强,适合于在单克隆抗体研制中的应用.

    作者:徐培君;顾冠彬;万海燕 刊期: 2006年第04期

中国血液流变学杂志

中国血液流变学杂志

主管:中国科学技术协会

主办:中国生物医学工程学会,苏州大学