学术投稿

瑞替普酶在大肠杆菌中的表达与活性测定

孙雄华;徐寒梅;沈子龙

关键词:瑞替普酶, 组氨酸标签, 大肠杆菌, 表达, 纯化
摘要:目的 构建带组氨酸标签(His6·Tag)的瑞替普酶(Reteplase,r-PA)的表达载体,并在大肠杆菌中表达和活性检测.方法 通过引物设计在r-PA基因5'端加上组氨酸标签(His6·Tag),克隆到pET23a原核表达载体中,转化E.coli BL21(DE3),进行IPTG诱导表达.表达产物经亲和层析纯化后,用FAPA法测定其纤溶活性.结果 构建的原核表达载体经PCR、酶切鉴定、测序后正确.表达产物分子质量39kDa,为r-PA特异性条带,纯化产物具有纤溶活性.结论 成功地在大肠杆菌表达了带有标签的r-PA,简化了下游分离纯化和复性步骤.
中国血液流变学杂志相关文献
  • 阿卡波糖治疗2型糖尿病的临床观察研究

    目的 观察2型糖尿病患者应用阿卡波糖(acarbose,商品名:拜唐苹)对血糖和血浆胰岛素水平的变化.方法 40例新诊断的2型糖尿病患者,单用饮食控制后,空腹血糖仍在8~11 mmol/L,HbAlc为7%~10%,予拜糖苹50mg.tid治疗16周.结果 经16周的治疗,餐后血糖、餐后胰岛素、及胰岛素曲线下面积较治疗前均降低,差异均有显著性.空腹胰岛素、血脂、体重并无明显变化.除极个别患者有腹胀外,单独用药均无低血糖、肝损等不良事件发生.结论 阿卡波糖在不增加胰岛β细胞的负荷的基础上,改善了代谢异常和胰岛素分泌紊乱,且具有良好的安全性和耐受性.

    作者:蒋志华 刊期: 2006年第04期

  • 降钙素基因相关肽对内皮细胞MDA、T-SOD、T-ant-OX、ICAM-1和TIMP-2的影响

    目的 探讨降钙素基因相关肽(CGRP)对内皮细胞(EC)的保护调控作用.方法 用CGRP分别作用于培养的正常内皮细胞和经联胺损伤的内皮细胞后,分别收集上清和细胞,用上清检测丙二醛(MDA)含量、总超氧化物歧化酶(T-SOD)活力以及总抗氧化能力(T-ant-OX)的代谢变化;用一步法提取细胞总RNA,反转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测内皮细胞细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和组织金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)的mRNA含量.结果 CGRP有上调T-SOD、T-ant-OX的代谢和TIMP-2mRNA表达的作用,下调MDA代谢和ICAM-1mRNA表达的作用(P<0.05).结论 CGRP对内皮细胞有一定的保护调控作用,并且在EC的抗损伤方面,尤其是抗早期损伤方面,可能起重要作用.CGRP能下调内皮细胞脂质过氧化损伤和黏附分子ICAM-1的表达,上调TIMP-2的表达,这些可能是其作用机制之一.结果提示CGRP在动脉粥样硬化的防治方面可能发挥重要作用.

    作者:杨亚安;吴开云;王彩英;杨芹;杨刚 刊期: 2006年第04期

  • 慢性髓细胞白血病急变期的免疫表型和细胞遗传学研究

    目的 探讨慢性髓细胞白血病急变期(CML-BC)免疫表型和细胞遗传学异常的关系.方法 对33例成人CML-BC以四色流式细胞仪进行表面抗原检测及R显带技术进行核型分析.结果 典型易位组CD34阳性率高于变异易位组(P<0.05):无附加异常、伴附加异常、伴复杂染色体异常(CCAs)各组中抗原表达阳性率无统计学差异;平衡易位、非平衡易位组中抗原表达阳性率无统计学差异.涉及17号染色体变异的病例中各抗原的阳性率与CML-BC总体阳性率比较未发现统计学差异.7例涉及17号染色体变异的病例均为CML-AML.结论 典型t(9;22)易位CD34阳性率高于变异易位;有无附加染色体异常及是否平衡易位对免疫表型无直接影响.涉及17号染色体变异的CML-BC中急非淋变多见.

    作者:马勤芬;周惠芬;朱明清;刘丹丹;陈子兴;薛永权 刊期: 2006年第04期

  • 尿微量白蛋白/肌酐比值对高血压及糖尿病早期肾损害的诊断价值

    目的 探讨尿微量白蛋白(UmAlb)/尿肌酐(Cr)比值对高血压及糖尿病患者早期肾损害诊治中的意义.方法 测定42例高血压患者和57例2型糖尿病患者随机尿中mAlb及Cr,计算UmAlb/Cr比值,并与40例正常健康者比较.结果 高血压患者UmAll/Cr显著高于正常健康者(P<0.01);糖尿病患者UmAlb/Cr也明显高于正常健康者(P<0.01).结论 UmAlb/Cr比值是诊断高血压、糖尿病早期肾损伤的一项敏感指标.

    作者:蒋新颖;孔宝坤 刊期: 2006年第04期

  • 胆囊切除术致胆管损伤防治

    目的 探讨胆囊切除术致胆管损伤的相关因素和诊治经验.方法 回顾性分析1996年4月至2006年3月9例胆囊切除术致胆管损伤的处理方法(术中处理、二次手术处理、三次手术处理).结果 胆囊切除术致胆管损伤经正确处理后,均痊愈.结论 胆囊切除术致胆管损伤原因较多,经正确处理,是能够痊愈的.

    作者:王浩 刊期: 2006年第04期

  • 高糖血症与妊娠期高血压关系的临床分析

    目的 了解妊娠期糖代谢异常所致高糖血症的发生情况及糖代谢异常患者与妊高征发生的关系.方法 收集1997年1月~2005年12月门诊及分娩的孕产妇中糖耐量异常者与同期糖代谢正常者进行对照比较.结果糖代谢异常者糖负荷后各时期血糖值高于糖代谢正常者(P<0.001),且妊娠晚期高糖血症进一步加重,糖代谢异常组妊高征发生率高于糖代谢正常组.结论 妊娠晚期糖代谢异常程度更为明显,且发生妊高征的机会增加,尽早发现与治疗高糖血症,有利于治疗与控制糖尿病及预防妊娠合并症的发生.

    作者:缪琪蕾 刊期: 2006年第04期

  • COX-2与Fas蛋白在胃癌组织中的表达及意义

    目的 探讨COX-2和Fas蛋白在胃癌组织中的表达相互关系及意义.方法 应用免疫组化方法检测了30例正常胃黏膜及82例胃癌组织中COX-2和Fas的表达情况.结果 COX-2蛋白在胃癌组织中阳性表达率为63.4%,而在正常对照的胃黏膜组织中阳性率为13.3%,胃癌组织中COX-2蛋白阳性率显著高于正常胃黏膜(P<0.001).Fas在胃癌组织中阳性率为39.1%,在30例正常胃黏膜组阳性率为93.3%,正常胃黏膜组中Fas阳性率显著高于胃癌组织(P<0.001).COX-2与Fas的阳性表达在各性别组和各年龄组之间无显著差异,COX-2在有淋巴结转移和无淋巴结转移胃癌组间,低分化和高、中分化胃癌组间、TNM分期之间表达有显著差异.Fas在高、中分化胃癌组阳性表达率显著高于低分化胃癌组(P<0.05).而在TNM分期之间,有淋巴结转移和无淋巴结转移胃癌组间表达无显著性差异(P>0.05).胃癌组织中COX-2与Fas表达具有显著负相关(rs=-0.559,P<0.001).结论 胃癌组织中存在COX-2的高表达与Fas低表达,且两者之间的表达强度具有显著等级负相关.

    作者:胡端敏;冯一中;王少峰 刊期: 2006年第04期

  • 脂多糖对血管平滑肌细胞表达MMP-9的影响及可能机制

    目的 探讨脂多糖(1ipopolysaccharides,LPS)对培养的大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)表达基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的影响及可能的分子机制.方法 贴块法进行血管平滑肌细胞培养,细胞免疫化学检测MMP-9的蛋白表达及核因子NF-κB激活情况,原位分子杂交分析MMP-9mRNA表达.结果 LPS是MMP-9的强诱导物,可在蛋白及mRNA水平诱导MMP-9的表达,LPS对其诱导作用强度与LPS的浓度呈正相关.与正常组比较LPS刺激15min即有NF-κ B p65核转移,30min达高峰,1h后减弱.结论 LPS诱导平滑肌细胞MMP-9表达,其作用呈浓度时间依赖性,MMP-9表达升高可能与LPS激活NF-κB有关.MMP-9表达升高和NF-κB激活提示LPS在动脉粥样硬化发病过程中可能起一定作用.

    作者:路军;阮秋蓉;康苏娅 刊期: 2006年第04期

  • 血清七项肿瘤标志物组合检测对原发性肝癌鉴别诊断的初步评价

    用甲胎蛋白(AFP)、总唾液酸(TSA)、癌胚抗原(CEA)、铁蛋白(Ft)、乳酸脱氢酶(LDH)、γ-谷氨酸转肽酶(GGT)、碱性磷酸酶(ACP)等七项血清标志物作原发性肝癌和肝硬化、肝脓肿、肝血管瘤的鉴别诊断,评价了单指标与多指标分析的临床价值.结果 表明,单指标的灵敏度均低于临床诊断要求,而特异度也仅AFP(>400μg/L)较高,多指标组合分析可使肝癌诊断的灵敏度提高至90%以上,特异度可达96%,同时对于AFP升高范围在25~400 μg/L之间的非肝癌患者可起到很好的排除作用,特异度达96.7%,提示该鉴别诊断模式具有潜在的应用前景.

    作者:荣跃 刊期: 2006年第04期

  • 2型糖尿病患者血清高敏C反应蛋白测定的临床价值

    目的 研究血清高敏C反应蛋白(hs-CRP)对2型糖尿病(T2DM)并发动脉粥样硬化(AS)的预示作用.方法 T2DM组60例,正常对照组40例,测定hs-CRP和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),根据LDL-C的高低将T2DM组分为LDL-C升高组(LDL-C>3.11mmol/L)和LDL-C正常组.结果 T2DM组hs-CRP12.15±5.17mg/L,正常对照组3.15±1.31mg/L,有非常#显著差异(P<0.01); LDL-C升高组hs-CRP15.74±8.69 mg/L,LDL-C正常组8.86±4.87 mg/L,有非常显著差异(P<0.01);LDL-C正常组与正常对照组hs-CRP也有非常显著差异(P<0.01); hs-CRP水平与LDL-C呈正相关(r=0.54,P<0.05).结论 hs-CRP参与T2DM并发AS过程,T2DM时hs-CRP先于LDL-C出现异常,糖尿病性AS预测应采用hs-CRP与LDL-C联合检测.

    作者:马钧;石冬敏 刊期: 2006年第04期

  • 老年人原发性胃肠道淋巴瘤8例临床分析

    分析8例老年人原发性胃肠道恶性淋巴瘤的临床特征.腹痛、消化道出血是常见的临床表现.7例为低度恶性,1例中度恶性.7例为B细胞来源,1例为非T非B淋巴瘤.术前误诊率为75%.内镜结合活检病理、X线消化道造影、CT检查为主要的诊断方法.其治疗原则是以手术治疗为主的综合治疗.

    作者:郭健政 刊期: 2006年第04期

  • 经左、右胸径路食管中上段癌切除术45O例比较分析

    目的 研究食管癌手术的路径.方法 经右胸者,取右胸、上腹正中、左/右颈部三切口,食管胃颈部手工吻合.经左胸者,取左胸/或左胸、颈部两切口,行食管胃主A弓上器械吻合或左颈部手工吻合.结果 经右胸者,手术野易暴露,危险性小,病灶切除率高,淋巴结清扫彻底,远期效果好.结论 食管中上段癌切除术,右胸径路优于左胸径路.

    作者:陈星;何靖康;陶文成;郭树翔;孙德富 刊期: 2006年第04期

  • 29例HELLP综合征临床分析

    目的 探讨妊娠期高血压疾病并发溶血、肝酶升高及血小板减少综合征(HELLP综合征)的发病及各项指标在早期诊断中的作用.方法 对2000年1月~2006年6月确诊的HELLP综合征患者的临床资料进行回顾性分析.结果 HELLP综合征多发生于孕34+周左右,大部分有腹痛、恶心、呕吐等主诉,可出现胎盘早剥、急性肾功能衰竭、急性心功能衰竭、弥散性血管内凝血等并发症.血小板的动态变化可能是早提示疾病发生的指标,而肝酶和乳酸脱氢酶(LDH)是反映病情变化趋势的可靠指标.新生儿的预后主要与终止妊娠时的孕周有关.结论 HELLP综合征病情凶险,成功治疗HELLP综合征的关键在于早期诊断、早期治疗、及时终止妊娠,降低并发症的发生率及母婴的死亡率.

    作者:冯晓;沈宗姬;郭燕 刊期: 2006年第04期

  • 胰腺钝伤的CT诊断(附4例报告)

    目的 探讨胰腺钝伤的CT诊断价值.方法 回顾性分析经手术证实4例胰腺钝伤的CT表现及其特点.结果 2例为胰腺离断CT表现为一条清楚分隔的低密度线,1例位于胰颈,1例位于胰尾,手术可见胰管断裂;弥漫性胰腺肿大1例,增强后强化不均匀;胰头局限性肿大1例;3例合并胰周积液,4例均合并邻近器官损伤.结论 CT评价胰腺钝伤是准确可靠的,应列为首选检查方法.

    作者:沈莉;饶圣祥;徐东风 刊期: 2006年第04期

  • 人胎盘源间充质样干细胞移植治疗大鼠脑出血的初步实验研究

    目的 在分离、培养、鉴定人胎盘源间充质样干细胞(human placenta derived mesenchymal-like stem cells,HPMSCs)的基础上,进行了人胎盘源间充质样干细胞移植治疗大鼠纹状体出血的实验,探讨了其在治疗脑出血中可能的作用.方法 利用自体未肝素化新鲜血回注法建立大鼠尾壳核出血模型;取SD雄性大鼠28只,随机分成5组:(1)假手术组(n=4);(2)自然恢复组(n=6);(3)对侧脑移植组(n=6);(4)同侧脑移植组(n=6);(5)同侧颈总动脉移植组(n=6).将体外荧光标记的HPMSCs移植人大鼠纹状体出血模型,通过提高的躯体摆动实验(elevated body-swingtest,EBST)和悬尾姿势实验(the epostural tail-hang test)进行模型的神经功能评价,观察注射HPMSCs前后大鼠神经功能的变化;并通过病理切片检测及荧光显微镜观察了HPMSCs在大鼠脑内的存活以及迁移状况.结果 HPMSCs跨越血脑屏障,并主要向脑出血组织周围定向迁移.EBST和Bederson评分结果表明,移植后第5d和第14d对侧脑移植组、同侧脑移植组和颈总动脉移植组神经功能修复明显优于自然恢复组.至移植后28d时为止,未发现肿瘤组织形成.结论 人胎盘源间充质样干细胞能跨越血脑屏障并向病灶处定向迁移且未见成瘤现象,移植入脑出血模型结果表明其可促进动物的神经功能缺损的修复,具备临床应用的潜在价值.

    作者:薛群;华军;卢俊;董万利;吴玉明;倪健强;朱一蓓;方琪;王明元;陈永井;方振羊;张学光 刊期: 2006年第04期

  • 影响质粒提取的关键因素及提取方法的选择

    通过对质粒DNA提取过程的分析,探讨质粒DNA提取过程中的影响因素,分析影响质粒DNA纯度和量的关键因素,以利解决质粒提取过程中遇到的问题.

    作者:祁汝峰;黄瑞 刊期: 2006年第04期

  • 复方丹参滴丸治疗口腔扁平苔藓患者血液流变学观察

    目的 观察复方丹参滴丸治疗口腔扁平苔藓(OLP)患者时对其血液流变学的影响并评价该药的治疗效果.方法 选择40例OLP患者给予复方丹参滴丸口服治疗6周,检测患者治疗前后的血液流变学指标并观察临床治疗效果,进行统计学分析.结果 40例患者治疗前后的血液流变学指标均存在显著差异(P<0.05或P<0.01).复方丹参滴丸能改善OLP患者的血液流变状况,对治疗OLP有一定疗效.

    作者:邱峰;惠建华;华立 刊期: 2006年第04期

  • 三种保守治疗异位妊娠的疗效观察

    目的 观察米非司酮(Ru486)、氨甲蝶呤(MTX)及两者联合使用治疗异位妊娠的疗效.方法 回顾分析2000年1月~2005年1月确诊为异位妊娠要求保守治疗的99位患者,将其随机分成3组,分别采用Ru486、MTX以及两者联合使用治疗,观察各组药物治疗的效果.结果 联合用药组在症状消失时间及各种体症消失上与米非司酮组、氨甲蝶呤组均有显著性差异.米非司酮组与氨甲蝶呤组的以上指标比较,无明显差异.三种方法的治疗效果分别为81.8%、78.8%、90.9%.结论 采用米非司酮及氨甲蝶呤联合用药治疗异位妊娠有缩短疗程、提高疗效的作用,优于单用药,值得临床推广.

    作者:周风萍 刊期: 2006年第04期

  • 苏州市临床成分输血情况调查分析

    该文对苏州市2001年~2005年临床成分输血的情况进行了统计,分析了苏州市临床成分输血历年变化情况,探索进一步提高临床成分输血的有效方法.

    作者:张金玉;夏毓伟;李云 刊期: 2006年第04期

  • 一种简单实用的脑脊液细胞学检查染色法及其临床应用

    目的 探讨一种简单实用的脑脊液细胞学检查染色法及其临床应用的价值.方法 应用瑞氏姬姆沙混合染色法对361例脑脊液细胞学进行染色.结果 应用瑞氏姬姆沙混合染色法染出的脑脊液细胞清晰度好,即细胞核染色质、胞浆颗粒、核仁等清晰可见,一目了然.结论 瑞氏姬姆沙混合染色法具有染色效果好、操作方便简单、节省时间、非常容易掌握等优点,因此适合各级医院推广应用.

    作者:戚其学;项永谦;徐万鹏 刊期: 2006年第04期

中国血液流变学杂志

中国血液流变学杂志

主管:中国科学技术协会

主办:中国生物医学工程学会,苏州大学