学术投稿

黄病毒属TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测方法建立

郭金金;孙肖红;燕清丽;方艳辉;杨鹏飞;魏莲;张晓龙;姚李四

关键词:黄病毒属, TaqMan探针荧光定量RT-PCR
摘要:目的 建立用于检测黄病毒属的TaqMan探针荧光定量RT-PCR方法.方法 从GenBank中检索黄病毒属代表株的全基因序列,通过DNAstar进行序列比对和blast进行保守序列搜索和分析,用Beacon Designer 7.0软件进行引物和TaqMan探针设计,以乙脑毒株MB090509 RNA为模板,优化反应条件并应用于现场蚊虫标本检测.结果 确定黄病毒属TaqMan探针荧光定量RT-PCR反应条件为:45℃15 min,95℃10 min,95℃10 s→54℃45s,40次循环,引物和探针终浓度为200 nmol/L.灵敏度为常规RT-PCR方法100倍,检出限2.9×10-3噬斑形成单位(PFU)/mL,与甲病毒属、东南亚十二节段RNA病毒属、布尼亚病毒属均无交叉反应.从161份现场蚊虫标本中检测出11份阳性标本,经病毒分离、测序均被证实为乙脑病毒.结论 本研究建立的黄病毒属TaqMan探针荧光定量RT-PCR方法具有广泛应用价值.
中国公共卫生杂志相关文献
  • 深圳市某企业员工脂肪肝患病情况分析

    目的 探讨广东省深圳市企业员工脂肪肝患病情况及其影响因素.方法 对深圳市某企业1 612名员工的健康体检资料进行t检验x2检验和Logistic回归分析.结果 深圳市某企业员工的脂肪肝患病率为32.5%,脂肪肝组体重指数(27.83±3.53) kg/m2、腰围(92.09±8.64)cm、收缩压(128.99±13.73) mmHg、舒张压(82.49±11.39) mmHg(1 mmHg =0.133kPa)、总胆固醇(5.41±1.00) mmol/L、甘油三酯(2.53±2.20) mmol/L、低密度脂蛋白(3.43±0.81) mmol/L、空腹血糖(5.28±1.31) mmol/L、谷丙转氨酶(45.83±31.07) U/L和尿酸(453.51±89.39)μmol/L等指标高于非脂肪肝组,高密度脂蛋白(1.06±0.21) mmol/L低于非脂肪肝组(P均<0.01).结论 深圳市企业员工脂肪肝患病率较高,影响因素较多,有必要采取一系列综合性防治措施.

    作者:李晓珍;王锋;杨剑;陈青山 刊期: 2012年第04期

  • 黄病毒属TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测方法建立

    目的 建立用于检测黄病毒属的TaqMan探针荧光定量RT-PCR方法.方法 从GenBank中检索黄病毒属代表株的全基因序列,通过DNAstar进行序列比对和blast进行保守序列搜索和分析,用Beacon Designer 7.0软件进行引物和TaqMan探针设计,以乙脑毒株MB090509 RNA为模板,优化反应条件并应用于现场蚊虫标本检测.结果 确定黄病毒属TaqMan探针荧光定量RT-PCR反应条件为:45℃15 min,95℃10 min,95℃10 s→54℃45s,40次循环,引物和探针终浓度为200 nmol/L.灵敏度为常规RT-PCR方法100倍,检出限2.9×10-3噬斑形成单位(PFU)/mL,与甲病毒属、东南亚十二节段RNA病毒属、布尼亚病毒属均无交叉反应.从161份现场蚊虫标本中检测出11份阳性标本,经病毒分离、测序均被证实为乙脑病毒.结论 本研究建立的黄病毒属TaqMan探针荧光定量RT-PCR方法具有广泛应用价值.

    作者:郭金金;孙肖红;燕清丽;方艳辉;杨鹏飞;魏莲;张晓龙;姚李四 刊期: 2012年第04期

  • 中国流动人口肺结核病患者补助措施实施情况调查

    目前,中国有高达1亿4千万的流动人口,约占总人口的10%[1].由于绝大多数流动人口收入低、工作、生活条件和健康意识差,感染结核病的风险高于城市常住人口.由于流动人口的移动,当前出现了结核病高疫情地区向低疫情地区扩散的趋势[2].为提高流动人口肺结核患者治疗的依从性,2006年第五轮全球基金流动人口结核病防治项目尝试探讨向流动人口肺结核病患者提供补助(交通补助和营养补助)对提高患者依从性的效果.本研究于2008年6 - 10月采用定性研究(个人访谈),从肺结核患者、结核病防治领导人员、结核病防治业务人员对向流动人口肺结核病患者提供补助这一举措的认识、实施中存在的问题和影响因素进行调查.结果报告如下.

    作者:张慧;姜世闻;王黎霞 刊期: 2012年第04期

  • 小鼠截短型CDC25B蛋白PKA体外磷酸化分析

    目的 通过体外磷酸化研究和放射自显影技术证实小鼠CDC25B蛋白是蛋白激酶A(PKA)的直接作用底物.方法 构建小鼠截短型pGEx-4T-2-CDC25B201原核表达载体,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,glutathione Sepharose 4B亲和层析纯化CDC25B蛋白,与PKA进行体外磷酸化反应,分别采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、蛋白免疫印迹(western blot)和放射自显影鉴定CDC25B是否为PKA直接磷酸化底物.结果 在E.coli BL21细胞内,采用0.1 mmol/L的IPTG在27℃条件下诱导表达3h即可达到较高表达水平;SDS-PAGE显示在约50kD处有明显GST-CDC25B201融合蛋白特异条带;放射自显影显示GST-CDC25B201融合蛋白的磷酸化条带大约位于55 kD处;Western blot分析,在重组质粒表达的总蛋白、载体表达的GST蛋白、纯化蛋白及磷酸化蛋白的相应位置均出现GST抗体的杂交条带.结论 小鼠CDC25B蛋白是PKA的直接作用底物.

    作者:肖建英;范会瑜;刘超;张哲;宗志红;于秉治 刊期: 2012年第04期

  • 姜黄素对甲醛致A549细胞氧化损伤拮抗作用

    目的 探讨姜黄素对甲醛致细胞氧化损伤的拮抗效应.方法 采用A549细胞株作为实验材料,实验设对照组、0.1 mmol/L甲醛染毒组,姜黄素组(0.1 mmol/L甲醛+2.5~20.0 mg/L姜黄素),检测A549细胞中一氧化氮合酶( NOS),丙二醛(MDA),超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性.结果 甲醛染毒组A549细胞SOD、NOS和GSH-Px活性分别为(21.79±1.13)、(1.88±0.16)与(27.83±0.2)U/mgprot,与对照组比较,SOD、NOS和GSH-Px活性明显下降(P<0.05),MDA含量[(3.87±0.153.87) nmol/mgprot]明显升高(P<0.05).与甲醛染毒组比较,各姜黄素组GSH-Px活性上升、MDA含量下降(P<0.05),与对照组比较,40 mg/L姜黄素组GSH-Px活性、MDA含量差异无统计学意义(P>0.05).结论 姜黄素可提高A549细胞抗氧化酶活性,并存在剂量效应关系.

    作者:陈鑫;江中发;李宁;石玉琴;隋妍;张本延 刊期: 2012年第04期

  • 福建省结核病耐药性监测结果分析

    目的 通过开展福建省结核病耐药监测点监测,了解结核病耐药状况,为制订结核病控制对策提供依据.方法 对福建省9个设区市的9个监测点2008年9月- 2009年8月门诊新登记涂阳患者分离的结核分枝杆菌复合群,采用WHO/IUATLD推荐的比例法进行异烟肼、链霉素、利福平和乙胺丁醇耐药性检测.结果 共1014例病例纳入监测分析,总体耐药率为19.8%,耐多药率为4.6%,其中初始耐药率为17.9%,初始耐多药率为3.4%,获得性耐药率为44.0%,获得性耐多药率为20.0%.结论 福建省结核病耐药监测点耐药率低于全国平均水平,但高于国际平均水平,今后仍要进一步加强耐药结核病的防治工作.

    作者:梁庆福;陈求扬;赵永;魏淑贞;林建;林淑芳;郑金凤 刊期: 2012年第04期

  • 农村居民慢性阻塞性肺疾病及影响因素分析

    目的 了解湖南省农村居民慢性阻塞性肺疾病(COPD)患病情况和相关危险因素,为防治慢性阻塞性肺部疾病提供依据.方法 以单纯整群抽样方法抽取湖南省攸县3个自然村≥15岁居民4 021人,进行问卷调查、体格检查和肺功能普查,对肺功能1秒用力呼气容积(FEV1)和用力肺活量(FVC)的比值(FEV1/FVC)< 70%者进行心电图和x光片检查,对COPD影响因素进行Logistic回归分析.结果 有效调查4 003人,有效率为97%;检出COPD患者213例,患病率为5.32%,其中,男性患病率为8.7%,女性为2.2%,男性高于女性(x2=84.838,P<0.05),随年龄增大患病率逐渐上升(P<0.05),随受教育程度增高患病率逐渐下降;非条件Logistic同归分析结果显示,年龄(OR=1.48)、男性(OR=14.16),吸烟(OR=1.79),被动吸烟(OR=10.73),父系无慢性肺部疾病家族史(OR =0.09),经常下厨(OR =5.73),烹饪或取暖使用煤、柴草燃料(OR =3.44),接触粉尘或有害气体(OR=6.16),受教育程度(OR =0.07);差异均有统计学意义(均P <0.05).结论 湖南省农村COPD患病率较高,影响因素较多,应进行针对性干预.

    作者:洪秀琴;戴爱国;尹培生;罗曼;刘岚;冉丕鑫 刊期: 2012年第04期

  • 早产相关因素研究进展

    早产是当今围产医学研究的重要内容之一.国外报道的早产发生率一直居高不下,发展中国家早产的发生率为5%~25%,发达国家为5%~10%,中国为5%~15%[1].早产儿由于器官功能不成熟和免疫功能不完善,产生多种并发症,致使死亡率升高.据美国疾病预防控制中心统计,2005年美国早产儿死亡率约为18.3%,中国妇幼卫生监测也报道早产是近年来国内新生儿死亡的首要原因[2].尽管目前对早产的直接病因和发病机制已取得很大进展,但近年来早产发生率仍呈上升趋势.现对可能影响早产的相关因素进行综述,为积极预防和避免早产的发生提供科学依据.

    作者:孙蓉;侯晓静 刊期: 2012年第04期

  • 河南省甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶基因进化分析

    目的 分析河南省甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶(NA)基因的变异情况,了解其变异现状及特点.方法 对35株甲型H1N1流感病毒毒株提取病毒总RNA,设计引物运用RT-PCR技术扩增编码NA蛋白的基因序列,测序分析核酸序列并用MEGA4.1软件构建进化树,用BLAST进行比对分析.结果 分离株NA基因316位G/A和742位A/G(N端106位V/I和248位N/D)发生变异,2个突变位点同时存在;同时,通过BLAST分析,发现我国多个省份和亚洲其它多个地区病毒株NA基因存在945位A/G和1338位T/C突变,进化树分析发现,这两个位点的突变可能来自于中国猪-人之间相互感染.结论 甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶(NA)基因在中国内地传播期间个别核酸位点发生了突变,其氨基酸抗原区有一位点发生变异( 106 V/I).

    作者:赵九洲;徐瑾;蒋红丽;僧明华;郭万申;郭永豪;薛长贵 刊期: 2012年第04期

  • RNAi对成牙本质细胞表达TRAF6干涉作用

    目的 采用针对小鼠肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)的siRNA真核表达载体,探讨其对小鼠成牙本质细胞样细胞MDPC-23中表达TRAF6的干涉作用.方法 将构建成功的2个针对TRAF6基因的siRNA真核表达载体( pSUPER-T和pSUPER-2T),通过脂质体介导瞬时转染MDPC-23细胞,RT-RCR和Western blot法检测其对转染后细胞中TRAF6的mRNA和蛋白表达干涉效果.结果 pSUPER-T和pSUPER-2T转染MDPC-23细胞后,RTRCR法显示2组TRAF6 mRNA表达下调、Westem blot结果表明2组TRAF6蛋白表达水平降低,其中pSUPER-2T转染组抑制TRAF6表达作用较强.结论 针对TRAF6的siRNA真核表达载体,在MDPC-23细胞中有效发挥了TRAF6表达干涉作用.

    作者:李霞;肖明振;余擎;李卫星;王翔宇 刊期: 2012年第04期

  • 鳙鱼变应原小清蛋白单克隆抗体制备及鉴定

    目的 制备、纯化及鉴定抗鳙鱼小清蛋白单克隆抗体.方法 以重组鱼主要过敏原小清蛋白( parvalbumin)为抗原免疫BALB/c小鼠,融合免疫鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤NS -1,半固体培养基法结合有限稀释法筛选稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株,杂交瘤细胞株诱生小鼠腹水,采用蛋白A亲和层析法获得纯化抗体,间接ELISA方法和western blot鉴定抗体效价和特异性以及与其他过敏源的交叉反应性;采用Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定该单克隆抗体的Ig亚型.结果 共获得抗parvalbumin细胞株7株,1G1,1B5,1A5,2B9,1H4,1B7,1G3.1G1、1B7、1A5、1H4和1G3效价均高于1:400000,P/N >2.1;1B5效价高于1:200 000,2B9效价较低;Western blot检测表明所有抗体均能识别parvalbumin;抗体亚类为IgG1型,1G1,1A5,2B9,1H4,1B7特异性结合parvalbumin,与其他种类过敏原无交叉反应,1G3和1B5与虾和大豆过敏原有交叉反应性,P/N >2.1.结论 获得高效价抗体5株,发现parvalbumin与虾、大豆过敏原存在交叉反应性,为建立parvalbumin检测体系提供依据.

    作者:张强;赵郭存;邹菊;刘志刚 刊期: 2012年第04期

  • 人肝癌细胞2-DE实验技术条件优化

    双向凝胶电泳(two-dimensional gel eletrophoresis,2-DE)是目前比较蛋白质组学研究中常用蛋白质的技术,通过利用蛋白质的等电点与分子量特性将蛋白质分离,与质谱技术(mass spectrometry,MS)联用,已被广泛应用于分析细胞或组织样品中整体蛋白质表达的差异情况[1-2].然而实验操作过程中,双向凝胶电泳图谱中的蛋白质点的分辨率与重复性常常受到实验技术条件的干扰,因此,对实验条件进行优化以提高2-DE的稳定性与重复性成为了研究和探索的热点.本研究针对人肝癌细胞的实验操作过程,对细胞蛋白的提取、上样量及胶条的水化、第一向的等电聚焦等实验条件进行改良,建立优化双向凝胶电泳图谱的实验条件,提高所分离出蛋白质点的重复性与分辨率,为今后对人肝癌细胞比较蛋白质组学的进一步研究提供依据.

    作者:韦艳;张海英;梁钢 刊期: 2012年第04期

  • 中国居民残疾患病现状及其影响因素分析

    目的 了解中国居民残疾患病现状及其影响因素,为降低残疾患病率提供参考依据.方法 利用2006年第二次全国残疾人抽样调查数据,计算中国居民残疾患病率,分析社会、经济、人口环境的变化对残疾发生的影响以及各类因素作用的方向和强度.结果 中国居民残疾患病率为6.39%,不同性别、年龄、民族、文化程度、婚姻状况、居住地、就业状况、职业、家庭人均年收入、省人均国内生产总值(GDP)居民残疾患病率均不同(P <0.001);多元Logistic回归分析结果表明,年龄(OR=1.043)、女性(OR =0.586)、在城市居住(OR=0.899)、不识字/文盲(OR=4.585)、小学文化程度(OR=2.743)、中学文化程度(OR=1.416)、在婚(OR =0.394)、离婚(OR=1.139)、丧偶(OR =0.412)、有工作(OR =0.304)、第Ⅰ类职业(OR =0.707)、第Ⅱ类职业(OR =1.160)、第Ⅲ类职业(OR=0.800)、第Ⅴ类职业(OR=1.092)、第Ⅶ类职业(OR =0.773)、第ⅧII类职业(OR =0.809)、第Ⅸ类职业(OR =0.562)、第Ⅹ类职业(OR =0.522)、家庭人均年收入(OR=1.000)是中国居民残疾患病的主要影响因素;大似然值变化幅度大的因素依次为年龄、性别、在婚、不识字/文盲、家庭人均年收入、丧偶、有无工作、小学文化程度、第Ⅸ类职业、中学文化程度、第Ⅹ类职业、居住地、第Ⅶ类职业、第Ⅷ类职业、第Ⅱ类职业、第Ⅰ类职业、离婚、第Ⅴ类职业、第Ⅲ类职业.结论 人口年龄结构的老化为残疾发生的主要影响因素,教育水平的普遍提升会降低残疾发生的危险性,职业残疾风险的类别差异提示了工伤致残预防的重要性和优先级,宏微观经济环境对残疾发生具有间接影响作用.

    作者:张蕾;郑晓瑛;陈功 刊期: 2012年第04期

  • 结核分枝杆菌融合蛋白ELISA方法检测

    目的 探讨融合蛋白ESAT6-38kDa-16kDa对结核病的血清学诊断价值,并与脂阿拉伯甘露糖抗原( LAM)及结核蛋白芯片方法的检测结果进行比较,评价其应用价值.方法 表达、纯化重组目的蛋白,分别以此蛋白和LAM为抗原包板,以酶标抗体为二抗,采用ELISA间接法检测肺结核患者血清、肺外结核患者血清及正常人血清,比较敏感性、特异性等,评价其对结核病的诊断价值.结果 融合蛋白ESAT6-38kDa-16kDa、LAM、血清及酶标抗体的佳工作稀释度分别为1、0.5 μg/mL,1∶100、1∶4000;分别用ESAT6-38kDa-16kDa和LAM检测761份结核病人血清,敏感性分别为76.9%、77.4%,特异性为89.2%、89.5%,差异均无统计学意义;ELISA法检测68份肺结核病血清标本融合蛋白,阳性检出率和阴性符合率与芯片检测结果有极高一致性.结论 融合蛋白ESAT6-38kDa-16kDa作为抗原对结核病血清学诊断具有一定应用价值.

    作者:泮结超;石君帆;丁建祖;漏磊君;宋广忠;杨明瑾;范超明 刊期: 2012年第04期

  • 白藜芦醇对大鼠肾氧化损伤保护作用

    目的 探讨白藜芦醇对高糖高脂饮食大鼠肾氧化损伤的保护作用.方法 大鼠分为正常对照组、高糖高脂组、白藜芦醇低、中、高剂量组,13周后处死大鼠,测定血糖血脂、肾组织氧化应激水平、抗氧化酶活性及肾脏过氧化物酶激活受体α (pPARa)、羟甲基戊二酸单酰辅酶A合成酶(HMGCS2) mRNA表达水平.结果 高糖高脂饮食13周后,高糖高脂组大鼠体重为(453.00±19.54)g,明显高于正常对照组(368.75±25.24)g和高剂量白藜芦醇组(400.40 +30.39)g(t =4.545、2.991,P<0.05);高糖高脂组大鼠肾脏总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(T-SOD)分别为(1.22±0.34)、(2.69±0.13)U/(mg·Pro),明显低于正常对照组的(0.27±0.03)、(2.43±0.07) U/(mg·pro)(t =3.491,P=0.003;t =2.793,P=0.011).结论 高糖高脂饮食大鼠肾内处于明显的氧化应激状态,白藜芦醇对高糖高脂饮食引起的氧化性肾损伤有保护作用.

    作者:张嫦慧;彭晓琳;田翀;唐玉涵;丁世彬;郝丽萍;孙秀发;应晨江 刊期: 2012年第04期

  • 宁德市1986-2010年农村食物中毒趋势分析

    近年来,福建省宁德市农村居民食物中毒时有发生,既危害了公众健康和生命安全,又影响了经济社会发展和社会安定稳定.为了解宁德市农村居民食物中毒情况,掌握其中毒发生规律与特点,为有效控制和减少农村居民食物中毒发生,保障公众健康和生命安全提供科学依据,对1986 -2010年宁德市农村居民食物中毒的报告资料进行了统计和分析.现将结果报告如下.

    作者:郭胜利 刊期: 2012年第04期

  • 六黄合剂对胰岛素抵抗大鼠胰岛素敏感性影响

    目的 探讨中药复方六黄合剂对胰岛素抵抗大鼠胰岛素敏感性的影响.方法 应用地塞米松致大鼠胰岛素抵抗模型,观察六黄合剂对大鼠血糖、血清胰岛素水平和胰岛素敏感指数的影响.结果 六黄合剂能够降低胰岛素抵抗大鼠口服葡萄糖耐量试验后2h血糖浓度(2 hBG)和空腹血清胰岛素水平(FINS),提高胰岛素敏感指数(ISI)(P<0.01).结论 中药复方六黄合剂能够增强胰岛素抵抗大鼠胰岛素敏感性.

    作者:何晓明;王玉勤;于晓婷;吴晓岚;张广新;崔培红 刊期: 2012年第04期

  • 志贺菌依赖解旋酶DNA恒温扩增技术建立

    目的 利用依赖解旋酶DNA恒温扩增技术(HDA),建立一种快速检测志贺菌(Shigella)的新方法.方法 根据志贺菌的ipaH基因序列设计特异性引物,优化反应体系和反应条件;并对方法进行特异性和灵敏度评价.结果 对21株实验菌株检测,3株志贺菌均为阳性,其余18株非志贺菌均为阴性,灵敏度为5.1×103 cfu/mL,与普通PCR方法检测结果相当.结论 HDA法检测志贺菌具有特异、灵敏及仪器要求低等特点,具有广阔的应用前景.

    作者:王建广;雷质文;刘云国;张健;姜英辉;祝素珍;房保海;石琰璟 刊期: 2012年第04期

  • 国内外全科医生制度现状及启示

    全科医生面向居民提供着方便、连续、经济有效的医疗保健服务,是家庭和个人健康的保护人和初级卫生保健的主要提供者.随着中国医药卫生体制改革的不断深入,全科医生在转变服务模式,实现人人享有基本医疗卫生服务目标中的作用日益凸显.本研究在回顾欧美全科医学发展历程的基础上,分析了欧美主要国家的全科医生制度的经验,以期对中国全科医生制度的构建提供借鉴.

    作者:任伟;姚岚;冯友梅 刊期: 2012年第04期

  • 肥胖人群生活行为方式对高血压患病风险影响

    目的 探讨不同生活方式对肥胖人群高血压患病风险的影响.方法 通过多级抽样方法,随机抽取天津市18 ~ 80岁社区居民21 951人,调查其生活方式及健康状况.结果 社区居民平均年龄为(47.5±15.8)岁,其中男性10 689人,占48.7%;女性11 262人,占51.3%;吸烟率为29.4%(6 446人),饮酒率为28.3%(6 203人),高血压现患率为22.0% (4 797人),超重与肥胖率分别为34.8%(7642人)、10.0%(2 192人),被调查者高血压患病风险随BMI 水平上升而增高;各种生活方式中吸烟、盐摄入>6 g/d者患病风险较高;超重、肥胖者在吸烟、饮酒、盐摄人>6 g/d、不积极运动的情况下更易患高血压.结论 虽然肥胖人群有较高的患高血压病风险,但如果能采取戒烟、限酒、低盐摄入和积极运动的健康生活方式,患病可能性将会降低.

    作者:王媛;郭剑;芦文丽;李永乐;万征 刊期: 2012年第04期

中国公共卫生杂志

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主管:中华人民共和国卫生和计划生育委员会

主办:中华预防医学会