学术投稿

人LIM矿化蛋白-1重组腺病毒的成骨作用及其分子机制

王秀利;崔福爱;殷力;王义生;蒋林栋;李邓

关键词:LIM-1矿化蛋白, 间充质干细胞, 成骨活性, 基因转染
摘要:目的 利用pAdEasy腺病毒载体系统构建人LIM矿化蛋白-1(LMP-1)重组腺病毒,检测其在体外培养大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)的促成骨作用并分析其分子机制.方法 应用聚合酶链反应(PCR)法扩增出人LMP-1全长基因,插入pShuttle-IRES-hrGFP-1中构建成腺病毒穿梭质粒pS-LMP-1-GFP,转化DH5a大肠杆菌,挑选细菌单克隆进行酶切鉴定和DNA测序;通过pS-LMP-1-GFP与质粒pAdEasy-1在BJ5183细胞中同源重组,得到携带人LMP-1基因的重组腺病毒载体(pAdLMP-1-GFP).经PacⅠ酶切暴露两侧长末端重复序列,脂质体介导线性化质粒转染AD293细胞进行包装得到重组腺病毒Ad-LMP-1-GFP.以腺病毒为载体,将 人LMP-1 基因体外转染于第3代大鼠BMSCs内,检测LMP-1基因在BMSCs的表达,分别观察转染后实验组与对照组碱性磷酸酶活性变化,Western blot检测骨钙素(OCN)和β-连环蛋白(β-catenin)的表达,评价LMP-1 基因的成骨能力及其分子机制.结果 成功获取人LMP-1基因,并包装成重组腺病毒.LMP-1基因能在BMSCs 中高效表达,转染后BMSCs的碱性磷酸酶活性增强,与对照组比较P=0.000,分别为0.096、0.116、0.118、0.119(0.110±0.011)和 0.045、0.057、0.056、0.054(0.053±0.005);骨钙素的表达显著升高,与对照组比较P=0.001,分别为0.661、0.767、0.651(0.693±0.064)和0.177、0.290、0.222(0.229±0.050);β-catenin的表达明显增强,与对照组比较P=0.002,分别为0.841、0.806、0.867(0.838±0.030)和0.185、0.236、0.266(0.229±0.040).结论 成功利用pAdEasy系统构建人LMP-1重组腺病毒载体,包装获得重组腺病毒.Ad-LMP-1-GFP转染BMSCs后,LMP-1基因能促进BMSCs向成骨细胞分化,并且可能通过β-catenin信号分子发挥作用.
中华实验外科杂志相关文献
  • 脾切除联合贲门周围血管离断术对肝硬化门脉高压症模型大鼠免疫功能及肝纤维化指标的影响

    目的 观察脾切除联合贲门周围血管离断术对肝硬化门脉高压症模型大鼠免疫功能及肝纤维化指标的影响.方法 24只健康雄性SD大鼠建立肝硬化门脉高压症(PHT)模型,随机分为假手术组、脾全切术和脾切除联合贲门周围血管离断术组(联合组)各12只,另选取12只健康雄性SD大鼠作为空白对照组.比较3组大鼠肝脏指数、T淋巴细胞亚群、肝纤维化指标.结果 假手术组大鼠体重明显低于空白对照组,肝重、肝脏指数明显高于空白对照组(t=6.185、10.900、16.445,P=0.000,P=0.000),CD4+、CD4/CD8明显低于空白对照组,CD8+含量明显高于空白对照组(t=4.665、5.428、4.608,P=0.000),透明质酸酶(HA)、层黏蛋白(LN)、血清Ⅲ型前胶原(PC-Ⅲ)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)含量均明显高于空白组(t=23.834、12.700、9.832、20.734,P=0.000,P=0.000);联合组体重明显高于假手术组,肝重、肝脏指数明显低于假手术组(t=2.126、3.039、5.442,P=0.000),CD4+、CD4/CD8明显高于假手术组,CD8+明显低于假手术组(t=2.378、4.360、3.460,P=0.000),HA、PC-Ⅲ、Ⅳ-C、LN含量均明显低于假手术组(t=5.420、10.303、5.197、10.903,P=0.000,P=0.000).结论 脾切除联合贲门周围血管离断术有助于改善肝硬化门脉高压症大鼠免疫功能,缓解肝纤维化的严重程度.

    作者:李仁锋;赵龙栓;叶健文;翟文龙;薛建锋 刊期: 2017年第03期

  • 微小RNA-105在脑胶质瘤中的表达及其对肿瘤生物学行为的影响

    目的 观察脑胶质瘤中微小RNA(miRNA,miR)-105的表达,探讨其对肿瘤细胞增殖、迁移等生物学行为的影响.方法 收集不同病理级别的标本,采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测脑胶质瘤及癌旁组织中miR-105的表达.细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测细胞增殖.Transwell实验检测细胞迁移能力.结果 与癌旁组织比较,miR-105在脑胶质瘤和癌旁组织中的表达量分别为6.043±0.427与5.216±0.418,脑胶质瘤组织中miR-105的表达明显下调为癌旁组织中miR-105表达量的56.37%,差异有统计学意义(P=0.000),miR-105在脑胶质瘤组织中的表达水平显著低于正常组织,且与病理分级呈负相关(P=0.001).CCK-8实验中miR-105 mimic 转染后细胞增殖速度较未处理组下降0.365±0.033(50.65%,P=0.002),抑制miR-105后,增殖速度较未处理组升高(2.434±0.030,54.76%,P=0.021),差异有统计学意义.Transwell 实验中,miR-105转染后细胞迁移能力明显降低 (P=0.009).结论 miR-105在脑胶质瘤中呈低水平表达,且与胶质瘤级别的升高呈负相关,还可以抑制脑胶质瘤的增殖、迁移等生物学行为.

    作者:赵培超;冯轲昕;张智峰;刘献志;安吉洋;周金桥 刊期: 2017年第03期

  • 细胞核增殖抗原、角蛋白7和角蛋白20在膀胱癌组织的表达及临床意义

    目的 探讨细胞核增殖抗原(Ki-67)、角蛋白7(CK7)和角蛋白20(CK20)在膀胱癌组织的表达及预后意义.方法 应用免疫组织化学链菌素抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法检测138例膀胱癌组织石蜡切片中Ki-67、CK7和CK20的表达,并结合临床随访资料进行分析.结果 Ki-67、CK7和CK20在膀胱癌组织中均高表达,阳性率分别为82.6%、88.4%和78.3%.Ki-67在膀胱癌中的表达与分级(P=0.001)、分期(P=0.007)、肿瘤复发(P=0.044)和转移(P=0.037)显著相关;CK7在膀胱癌中的表达与分级(P=0.002)、分期(P=0.043)、转移(P=0.012)、组织学分型(P=0.020)显著相关;CK20在膀胱癌中的表达与患者性别(P=0.001)、分级(P=0.012)、分期(P=0.021)、肿瘤大小(P=0.034)及肿瘤复发(P=0.035)显著相关.Spearman等级分析表明Ki-67与CK20之间(P=0.026)及CK20与CK7之间(P=0.010)呈正相关,而Ki-67与CK7之间无明显相关(P=0.319).Ki-67阳性及阴性患者的中位无进展生存期分别为10、21个月,Kaplan-Meier生存分析表明两者差异有统计学意义(P=0.000);CK7阳性及阴性患者的中位无进展生存期分别为13、9个月,Kaplan-Meier生存分析表明两者差异无统计学意义(P=0.074);CK20阳性及阴性患者的中位无进展生存期分别为9、18个月,Kaplan-Meier生存分析表明两者差异有统计学意义(P=0.000).结论 Ki-67及CK20在膀胱癌组织中的表达随着肿瘤分级分期的增高而升高,CK7的表达随肿瘤分级分期的增高而降低,三者共同参与到膀胱癌的发生发展中.

    作者:田向永;顾朝辉;贾占奎;段文静;李松超;王军;金志波;杨锦建 刊期: 2017年第03期

  • 岛状颞浅筋膜瓣移植预构颈部扩张轴型皮瓣修复面部大面积瘢痕畸形

    2013年1月至2016年6月,我们采用岛状颞浅筋膜瓣移植预构颈部扩张轴型血管皮瓣,修复面部烧伤大面积瘢痕切除后的缺损并重建面部轮廓,现报告如下.一、资料与方法1.一般资料:本组16例面部烧伤后瘢痕畸形,男11例,女5例,平均年龄30.8岁.病因包括火焰烧伤10例,化学烧伤2例,热液烫伤2例.其中12例瘢痕位于一侧面部累及2个以上美学分区(左5例,右7例),4例累及全面部.

    作者:王付勇;李华强 刊期: 2017年第03期

  • 前外侧入路侧前方减压在胸腰段爆裂骨折中的临床应用

    目的 探讨前外侧入路行减压植骨融合内固定术治疗胸腰段爆裂骨折伴有神经损伤患者的手术效果.方法 采用前外侧入路减压植骨融合内固定术治疗胸腰段(T11~L2)爆裂骨折伴有神经症状的患者22例.根据影像学资料,比较患者术前、术后及末次随访的Cobb角(°)、椎体前缘高度压缩百分比(%)、椎管占位率(%).根据临床表现,比较患者术前、术后的美国脊髓损伤协会(ASIS)脊髓损伤水平评分,术后及末次随访的日本矫形外科学会(JOA)下腰痛评分改善率.结果 22例均获得(18.0±7.2)个月随访,Cobb角:术前(20.532±4.045)°、术后(5.936±1.081)°、末次随访(6.564±0.984)°,术后与术前比较差异有统计学意义(t=14.822,P=0.000),末次随访与术前比较差异有统计意义(t=16.134,P=0.000),末次随访与术后比较差异无统计学意义(t=-1.834,P=0.081);椎体前缘压缩百分比:术前(51.182±7.670)%、术后(91.773±2.308)%、末次随访(90.545±4.284)%,术后与术前比较差异有统计学意义(t=-21.509,P=0.000),末次随访与术前比较差异有统计学意义(t=-18.990,P=0.000),末次随访与术后比较差异无统计学意义(t=1.528,P=0.141);椎管占位率:术前(34.818±5.142)%、术后(3.155±0.578)%、末次随访(3.300±0.478)%,术后与术前比较差异有统计学意义(t=29.136,P=0.000),末次随访与术前比较差异有统计学意义(t=28.304,P=0.000),末次随访与术后比较差异无统计学意义(t=-1.560,P=0.134).ASIS评分比较上2例完全性损伤患者无提高,12例患者获得1级提高,8例患者获得2级提高.JOA评分改善率上术后优良患者14例,末次随访优良患者19例,末次随访优良率(86.363%)与术后优良率(63.645%)比较明显提高.结论 通过前外侧入路进行侧前方减压植骨融合内固定术治疗伴有神经症状的胸腰段爆裂骨折能有效纠正后凸畸形,恢复并维持椎体前缘高度,椎管减压充分,患者神经功能恢复满意,生活质量提高,可作为胸腰段爆裂骨折伴神经症状的有效手术方式.

    作者:张官锋;侯庆先;杨文玖;刘成;王志杰 刊期: 2017年第03期

  • 罗格列酮抑制胰腺癌细胞侵袭和转移的机制

    目的 观察胰腺癌细胞是否存在过氧化物酶体增殖剂激活受体γ(PPARγ)/第10 号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因(PTEN)/基质金属蛋白-9(MMP-9)信号通路,以及基因PTEN和MMP-9 的变化,探讨罗格列酮对胰腺癌细胞侵袭和转移的机制.方法 培养人胰腺导管上皮癌细胞(PANC-1),经40μmol/L PPARγ配体罗格列酮和10μmol/L抑制剂GW9662 处理24h后,用细胞的活力测定[四唑氮化合物(MTS)法]测胰腺癌细胞活力,用伤口愈合实验和基质胶(Matrigel)体外侵袭实验检测细胞的迁移能力,用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞PTEN 和MMP-9 mRNA的相对表达.结果 罗格列酮对PANC-1胰腺癌细胞的增殖具有抑制作用,且呈剂量依赖性,明显抑制胰腺癌细胞侵袭和转移,增加(2.51±0.05)倍PTEN mRNA,减少(0.39±0.02)倍MMP-9 mRNA;而GW9662无此作用.结论 胰腺癌细胞可能存在PPARγ/PTEN/MMP-9信号通路,通过上调PTEN和下调MMP-9的表达,来抑制胰腺癌细胞的侵袭和转移.

    作者:王闯;周晓华;曾宪成;黄延年;薛平 刊期: 2017年第03期

  • 吡格列酮对大鼠骨髓内皮祖细胞血管新生能力的促进作用及其机制

    目的 探讨选择性过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂吡格列酮(PIO)对大鼠骨髓内皮祖细胞(EPCs)血管新生能力的影响及其机制.方法 采用密度梯度离心法和差速贴壁法培养大鼠骨髓EPCs,并使用双荧光染色的方法进行鉴定.将大鼠骨髓EPCs置于含0、1、10、50、100、200μmol/L PIO的培养基中培养,检测EPCs的血管新生.将培养 7d 的EPCs随机分5组:对照组加含二甲基亚砜的培养液;PIO组加入 50μmol/L PIO;PPARγ拮抗剂组加入 50μmol/L PIO及 10μmol/L PPARγ拮抗剂GW9662;磷酸肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)阻滞剂组加入 50μmol/L PIO及 50μmol/L PI3K/Akt通道阻滞剂Wortmannin;细胞外信号调节激酶(ERK)阻滞剂组加入50μmol/L PIO及20μmol/L ERK通道阻滞剂 PD98059,检测EPCs的血管新生.结果 倒置显微镜下见培养前4d细胞增殖不明显,第5~10天迅速增殖,并可见细胞集落及线状结构形成,第10天可达 80%融合.培养第7天的EPCs具有吞噬Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白和异硫氰酸荧光素(FITC)标记的荆豆凝集素1的功能.10~200μmol/L的PIO均可明显促进EPCs的血管新生,以50μmol/L PIO的作用明显.进一步阻断相关信号通路发现,Wortmannin和GW9662可明显拮抗PIO的促细胞血管新生作用,而PD98059对PIO的作用无影响.说明PIO促进大鼠骨髓EPCs血管新生的作用是通过PI3K/Akt信号通路介导的.结论 PIO可促进EPCs的血管形成能力,这种作用可能是通过PI3K/Akt信号通路介导.

    作者:范磊;李庆峰;刘涛;杨俊朋;吕丽芳;任琢琢;虎子颖;张会峰;刘鸿志 刊期: 2017年第03期

  • 核因子相关因子-2信号通路在血红素氧合酶-1抗乙醇诱导成骨细胞损伤中的作用

    目的 观察血红素氧合酶-1(HO-1)抑制乙醇对成骨细胞损伤的作用,探讨核因子相关因子-2(Nrf-2)/抗氧化反应元件(ARE)信号通路在其保护作用中的意义.方法 提取并培养人成骨细胞,Lipofectamine 2000质粒转染HO-1,乙醇作用24h,Western bolt检测细胞中Nrf-2和HO-1蛋白的表达量,同时应用酶标仪检测成骨细胞中髓过氧化物酶(MPO)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性.结果 阳性对照组中MPO和GSH-Px酶的活性分别为(54.17±20.61)mU/mg 蛋白和(7.94±2.42)U/mg蛋白,明显低于阴性对照组和HO-1组细胞中MPO和GSH-Px酶的活性(P=0.023、0.012);HO-1组细胞中MPO和GSH-Px酶的活性分别为(286.54±13.82)mU/mg蛋白和(38.59±5.30)U/mg蛋白,均明显高于阳性对照组和阴性对照组细胞中MPO和GSH-Px酶的活性(P=0.000、0.000).Western blot 结果显示,阳性对照组细胞中Nrf-2和HO-1蛋白表达量(分别为0.27±0.08和0.81±0.05)明显低于阴性对照组(分别为0.62±0.11和1.26±0.20,P=0.016、0.003);HO-1组细胞中Nrf-2和HO-1蛋白表达量明显升高(分别为0.94±0.10和2.43±0.13,P=0.000、0.000).结论 转染HO-1抑制乙醇诱导成骨细胞损伤的保护机制与其对细胞中Nrf-2/ARE信号通路的保护有关,其能通过Nrf-2/ARE信号通路激活并增强成骨细胞的抗氧化能力,从而减轻乙醇对成骨细胞的损伤.

    作者:李杰;张丰泉;陈光;于博凡;杜振宁;蔡腾 刊期: 2017年第03期

  • 不同麻醉方法建立大鼠重症急性胰腺炎模型的比较

    目的 探讨不同麻醉方式对建立大鼠重症急性胰腺炎(SAP)模型的影响.方法 健康雄性SD大鼠60只,采用随机数字表法分为两组,分别采用腹腔注射水合氯醛及气管插管吸入乙醚的方式进行麻醉,采用胰胆管逆行注射5%牛黄胆酸钠的方法建立大鼠SAP模型,观察两组大鼠的麻醉诱导时间、维持时间及苏醒时间的差异,比较两组大鼠麻醉过程中相关生理指标的差异.结果 腹腔注射组与乙醚吸入组比较,麻醉诱导时间、维持时间及苏醒时间均较长[(170±9)s,(164±7)min,(143±8)min;(9±2)s,(24±4)min,(2±1)min];血液pH值、氧分压(PO2)、呼吸频率均较低,而二氧化碳分压(PCO2)较高[pH:(7.29±0.04),PO2:(129.9±7.2)mmHg(1mmHg=0.133kPa),呼吸频率:(68±4)次/分,PCO2:(59.4±3.1)mmHg;pH:(7.52±0.04),PO2:(231.3±8.3)mmHg,呼吸频率:(81±3)次/分,PCO2:(34.3±2.5)mmHg].结论 建立大鼠SAP模型时,采用吸入麻醉的方法对大鼠相关生理指标的影响较小,可优先选择.

    作者:朱洁芳;王智勇;王恒 刊期: 2017年第03期

  • 转录因子T-bet在射频消融激活的抗肿瘤免疫应答中的作用

    目的 观察转录因子T-bet在射频消融(RFA) 激发的抗肿瘤免疫应答中的作用.方法 建立C57BL/6小鼠B16黑色素瘤双侧背部移植瘤模型,当肿瘤体积达500mm3时对右侧肿瘤进行RFA治疗,3d后流式细胞术分析左侧肿瘤浸润淋巴细胞亚群数量以及T-bet 在T细胞与自然杀伤(NK)细胞中的表达;实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测细胞因子的信使核糖核苷酸(mRNA)表达水平;建立敲T-bet基因(T-bet-/-)小鼠RFA治疗模型,分析左侧肿瘤浸润淋巴细胞亚群数量,记录小鼠左侧肿瘤生长曲线与小鼠生存时间.结果 RFA治疗能抑制对侧肿瘤生长,延长小鼠生存时间,两组的生存时间分别为[(29.0±1.4)d]与[(21.0±0.7)d],差异有统计学意义(P=0.000);对照组小鼠左侧肿瘤浸润CD45+、CD3+、CD4+叉状头/翅膀状螺旋转录因子(FoxP3)-、CD8+、NK(NK1.1+)细胞计数(106个/g肿瘤)分别为1.40±0.32、0.46±0.08、0.14±0.11、0.20±0.03与0.05±0.02,消融组分别6.22±0.80、2.06±0.11、0.53±0.20、0.68±0.10与0.17±0.03,差异有统计学意义(P=0.000),两组调节性T细胞(Treg:CD4+FoxP3+)计数分别0.06±0.01与0.07±0.02、差异无统计学意义(P=0.978);消融组Th1型细胞因子IFN-γ、TNF-α和IL-2的mRNA表达水平相对于对照组分别为6.50±0.51、5.02±0.48与4.12±0.31倍,差异有统计学意义(P=0.000);对照组左侧肿瘤浸润CD4+T、CD8+T、NK细胞中T-bet表达率分别为(22.30±0.60)%、(28.40±2.20)%与(9.10±0.20)%,消融组分别(42.60±3.10)%、(48.30±2.50)%与(19.10±1.30)%,差异有统计学意义(P=0.000);T-bet-/-小鼠模型中,RFA治疗组与对照组小鼠生存时间分别(21.00±1.20)d与(21.00±0.56)d,差异无统计学意义(P=0.981).对照组左侧肿瘤CD45+、CD3+、CD4+FoxP3-、CD4+FoxP3+、CD8+与NK1.1+细胞计数(106个/g肿瘤)分别为1.46±0.59、0.43±0.04、0.20±0.03、0.09±0.01、0.15±0.03与0.04±0.02,消融组分别1.55±0.21、0.45±0.10、0.22±0.04、0.11±0.01、0.13±0.09与0.04±0.01,差异均无统计学意义(P值分别为0.454、0.982、0.800、0.987、0.462、0.278).结论 转录因子T-bet在RFA治疗激发的Th1型抗肿瘤免疫应答中发挥重要作用.

    作者:孙明芬;石亮荣;戴夕超;陈陆俊;徐斌;朱一蓓;蒋敬庭;吴昌平 刊期: 2017年第03期

  • 血管内皮生长因子在萎缩性胃炎伴低级别上皮内瘤变和胃癌组织的表达及意义

    目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)在正常胃黏膜、慢性萎缩性胃炎伴低级别上皮内瘤变及胃癌中的表达与意义.方法 采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法检测65例胃癌组织和35例癌旁胃组织(距癌灶5cm以上)及50例慢性萎缩性胃炎伴低级别上皮内瘤变标本中VEGF的表达,分析其过度表达与临床病理特征之间的关系.结果 正常胃黏膜、萎缩性胃炎伴低级别上皮内瘤变及胃癌中,VEGF主要为胞质染色,过度表达率分别为5.7%、36.0%、55.4%;与正常胃黏膜组织比较,VEGF在萎缩性胃炎伴低级别上皮内瘤变及胃癌组织中过度表达率明显增加(P=0.001);胃癌组织与慢性萎缩性胃炎伴低级别上皮内瘤变过度表达率差异无统计学意义;在胃癌组织中VEGF的表达程度与胃癌的侵犯深度、TNM分期明显相关(P=0.017).结论 VEGF可能参与了胃黏膜由慢性炎症、慢性萎缩性胃炎伴低级别上皮内瘤变向胃癌发展进程.

    作者:朱志坚;马志杰;曹伟;张东娇;李元平;万灵燕;王爱民 刊期: 2017年第03期

  • 创面薄化联合异种脱细胞真皮基质治疗成人深Ⅱ度烧伤

    2008年6月至2016年1月,我们采用创面薄化联合异种脱细胞真皮基质(ADM)采用较深不愈合创面补植术治疗成人深Ⅱ度烧伤创面26例,报告如下.一、临床资料1.一般资料:本组26例,男20例,女6例,平均年龄38岁.致伤原因包括火焰烧伤18例,热液烫伤6例,电弧烧伤2例.

    作者:王端祥;李华强;张青;曹建伟;王付勇;韩冬 刊期: 2017年第03期

  • 胰腺星状细胞在胰腺癌化疗耐药中的作用

    目的 探讨胰腺星状细胞(PSCs)在胰腺癌化疗耐药现象中的作用.方法 应用人胰腺癌细胞株与PSCs共培养,将抑制率和半数抑制剂量(IC50)的变化作为评价化疗耐药的指标.在共培养前后,通过反转录-聚合酶链反应(PT-PCR)和Western blot测定Hes 1蛋白的表达,以及加用Notch信号通路阻断剂前后进行对比.结果 PANC-1和 BxPC-3细胞以吉西他滨治疗(100ng/ml)后的生长抑制率分别是(52.3±12.1)%和(65.1±16.8)%.与PSCs共培养后,两种胰腺癌细胞的生长抑制率降低至(38.5±11.6)%(PANC-1)和(51.2±10.9)%(BxPC-3).与PSCs共培养后,胰腺癌细胞的IC50值明显升高,PANC-1:(78.2±4.8)ng/ml升至(206.5±8.2)ng/ml;BxPC-3:(65.4±6.5)ng/ml升至(189.6±8.1)ng/ml.胰腺癌细胞中Hes 1的表达均明显升高.在使用Notch信号通路阻断剂(L1790)和Hes 1 siRNA转染后,胰腺癌细胞的IC50值分别降为:(89.5±16.4)ng/ml(PANC-1,L1790)和(61.6±12.9)ng/ml(BxPC-3,L1790),(94.5±20.4)ng/ml(PANC-1,L1790)和(67.5±11.3)ng/ml(BxPC-3,L1790).结论 PSCs能够导致胰腺癌细胞对吉西他滨化疗的耐药,Notch信号通路在其中起重要作用.

    作者:李嘉;泽多;曹锋;刘爽;孙海晨;崔叶青;李非 刊期: 2017年第03期

  • 斑点型锌指结构蛋白在前列腺癌组织的表达

    目的 探讨在不同前列腺组织中斑点型锌指结构蛋白(SPOP)的表达,及其表达与前列腺癌分期、分级的关系.方法 收集我院正常前列腺组织(NP)12例、前列腺增生组织(BPH)12例、前列腺癌旁组织(PC)12例以及前列腺癌组织(PCa)46例.经常规处理后,应用免疫组织化学法检测SPOP表达.结果 PCa组中SPOP表达28例(28/46), NP、PC组表达均为阳性;BPH组11例表达阳性(11/12);PCa组与NP组(P=0.009)、BPH组(P=0.043)及PC组(P=0.009) 比较,差异均有统计学意义.Gleason评分≥8分组(2/11)与2~4分组(9/12, P=0.006)、5~7分组(17/23, P=0.002)比较,SPOP表达阳性率差异有统计学意义. T3(4/11)与T1(6/7)期(P=0.040)、T3(4/11)与T2(14/16)期(P=0.006)、T4(4/12)与T1(6/7)期(P=0.027)、 T4(4/12)与T2(14/16)期(P=0.003)、T3+T4(8/23)与 T1+T2(20/23)期(P=0.000)组间比较差异均有统计学意义.SPOP表达阳性率在转移组(3/12)与非转移组(25/34)比较差异有统计学意义(P=0.003).结论 PCa组织中SPOP表达明显低于其他类型前列腺组织,并与PCa评分、分期明显相关.

    作者:刘辉;侯俊清;赵振华;李铁强;杜信毅;赵小磊;徐卫波;常俊锴 刊期: 2017年第03期

  • 冠状动脉周围应用西罗莫司抑制兔冠脉搭桥术后冠状动脉内膜过度增殖的研究

    目的 观察冠状动脉周围局部应用西罗莫司对兔冠脉搭桥术后冠状动脉内膜过度增殖的抑制作用.方法 大耳白兔30只,采用自身对照设计建模.任取一侧冠状动脉搭桥为干预组,外涂含0.3mg西罗莫司的Pluronic凝胶;另一侧为对照组,外涂空凝胶.4周后测冠状动脉内膜厚度、细胞的增殖指数及p27kip1免疫组织化学阳性细胞数.结果 干预组冠状动脉内膜厚度为(64.9±15.2)μm,明显低于对照组的(79.2±15.4)μm(t=1.639,P=0.007).干预组增殖指数为30.8±7.5,明显高于对照组的21.2±10.3(t=0.731,P=0.044).p27kip1免疫组织化学染色在西罗莫司干预组见冠状动脉平滑肌细胞及内皮细胞阳性着色,单个观察视野中的p27kip1阳性细胞数为(3.9±2.4)个.但正常组及对照组冠状动脉均未见阳性表达细胞(t=1.157,P=0.025).结论冠状动脉周围局部应用西罗莫司具有抑制兔移植冠状动脉内膜过度增殖的作用;这种作用与p27kip1的上调表达有关.

    作者:王保才;葛振伟;程兆云;赵子牛 刊期: 2017年第03期

  • 双锥面螺旋臼全髋关节置换治疗髋关节发育不良

    髋关节发育不良(DDH)患者晚期需要全髋关节置换(THA)来恢复髋关节功能,Crowe Ⅱ、Ⅲ及Ⅳ型存在不同程度的髋臼缺损及肢体缩短等特点,治疗上存在诸多难点.一、资料与方法1.一般资料:本组29例患者,男13例,女16例,Crowe Ⅰ型8例,Ⅱ型12例,Ⅲ型9例.2.方法:患者取侧卧位,切一长10~12cm皮肤切口,暴露股骨颈并截骨,清理磨挫髋臼及股骨端扩髓,安装合适假体,髋臼缺损处植骨.

    作者:赵良军;劳山;赵劲民;薄占东;花奇凯;罗高斌 刊期: 2017年第03期

  • 肠内生态免疫营养对创伤后大鼠肠道免疫功能及损伤修复信号通路Hedgehog蛋白表达的影响

    目的 观察肠内生态免疫营养制剂对创伤后大鼠肠道免疫功能及损伤修复信号通路Hedgehog蛋白的影响.方法 雄性清洁级Wistar大鼠40只采用小肠损伤法制作肠道损伤模型,并采用随机数字表法分为普通营养组(对照组,20只)和肠内生态营养组(实验组,20只).对照组大鼠给予普通饲料灌胃,实验组大鼠给予瑞能+金双歧灌胃(每只每天金双歧1×10CFU).造模成功后12h开始给予752.76kJ/(kg·d)的标准等氮热量灌胃4次/日.灌胃1周后处死大鼠并切取两组大鼠小肠,进行苏木素-伊红(HE)染色观察小肠黏膜形态学改变:包括绒毛高度、肠腺隐窝深度;应用免疫组织化学技术检测小肠组织中CD3+、CD4+、CD8+表达水平有无差异,采用Western blot法检测两组大鼠小肠黏膜Hedgehog蛋白表达的差异.结果 两组大鼠体重先降低后升高,从术后第5、6、7天实验组大鼠体重分别为(127.1±5.0)、(130.2±4.6)、(132.5±4.1)g,显著高于对照组的(123.2±4.2)、(125.8±3.9)、(128.4±5.2)g,差异有统计学意义(t5d=2.313,P5d=0.028;t6d=2.826,P6d=0.009;t7d=2.335,P7d=0.027);镜下实验组大鼠小肠绒毛高度为(230.2±21.4)μm,小肠腺隐窝深度为(104.3±10.2)μm,黏膜厚度为(354.1±40.63)μm,均显著高于对照组 (P=0.000);实验组大鼠小肠CD3+、CD4+及CD8+阳性淋巴细胞数百分比分别为(34.2±4.9)%、(26.8±4.0)%和(22.3±3.4)%,实验组显著高于对照组;实验组大鼠小肠黏膜组织中Hedgehog蛋白相对表达量为0.14±0.03,显著高于对照组(0.05±0.02),差异有统计学意义(t=11.160,P=0.000).结论 肠内生态免疫营养可增强Wistar大鼠肠道免疫功能,促进大鼠小肠黏膜损伤修复,提高小肠中Hedgehog蛋白表达水平.

    作者:李诗杰;栗芳军 刊期: 2017年第03期

  • 人LIM矿化蛋白-1重组腺病毒的成骨作用及其分子机制

    目的 利用pAdEasy腺病毒载体系统构建人LIM矿化蛋白-1(LMP-1)重组腺病毒,检测其在体外培养大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)的促成骨作用并分析其分子机制.方法 应用聚合酶链反应(PCR)法扩增出人LMP-1全长基因,插入pShuttle-IRES-hrGFP-1中构建成腺病毒穿梭质粒pS-LMP-1-GFP,转化DH5a大肠杆菌,挑选细菌单克隆进行酶切鉴定和DNA测序;通过pS-LMP-1-GFP与质粒pAdEasy-1在BJ5183细胞中同源重组,得到携带人LMP-1基因的重组腺病毒载体(pAdLMP-1-GFP).经PacⅠ酶切暴露两侧长末端重复序列,脂质体介导线性化质粒转染AD293细胞进行包装得到重组腺病毒Ad-LMP-1-GFP.以腺病毒为载体,将 人LMP-1 基因体外转染于第3代大鼠BMSCs内,检测LMP-1基因在BMSCs的表达,分别观察转染后实验组与对照组碱性磷酸酶活性变化,Western blot检测骨钙素(OCN)和β-连环蛋白(β-catenin)的表达,评价LMP-1 基因的成骨能力及其分子机制.结果 成功获取人LMP-1基因,并包装成重组腺病毒.LMP-1基因能在BMSCs 中高效表达,转染后BMSCs的碱性磷酸酶活性增强,与对照组比较P=0.000,分别为0.096、0.116、0.118、0.119(0.110±0.011)和 0.045、0.057、0.056、0.054(0.053±0.005);骨钙素的表达显著升高,与对照组比较P=0.001,分别为0.661、0.767、0.651(0.693±0.064)和0.177、0.290、0.222(0.229±0.050);β-catenin的表达明显增强,与对照组比较P=0.002,分别为0.841、0.806、0.867(0.838±0.030)和0.185、0.236、0.266(0.229±0.040).结论 成功利用pAdEasy系统构建人LMP-1重组腺病毒载体,包装获得重组腺病毒.Ad-LMP-1-GFP转染BMSCs后,LMP-1基因能促进BMSCs向成骨细胞分化,并且可能通过β-catenin信号分子发挥作用.

    作者:王秀利;崔福爱;殷力;王义生;蒋林栋;李邓 刊期: 2017年第03期

  • SIGIRR过表达抑制树突状细胞成熟并诱导同种移植免疫耐受的研究

    目的 观察过表达SIGIRR基因抑制树突状细胞(DCs)成熟活化、诱导移植免疫耐受的效果.方法 体外培养扩增骨髓来源DCs,并借助带绿色荧光蛋白(GFP)荧光的腺病毒载体将SIGIRR基因转入DCs,分别应用流式细胞术和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测SIGIRR基因修饰的未成熟DCs(imDCs)在脂多糖刺激前后细胞表型及功能变化;建立小鼠同种异体胰岛移植模型,术前连续3d受体分别给予尾静脉注射磷酸盐缓冲液(PBS)、imDCs、DC-GFP及DC-SIGIRR,观察各组小鼠胰岛移植物活性及其生存时间,同时在术后第7天取移植物做苏木素-伊红(HE)及免疫荧光检查,比较各组移植物排斥反应强度.结果 过表达SIGIRR的DCs经脂多糖刺激后仍稳定在未成熟状态:低表达人类主要组织相容性复合体(MHC)-Ⅱ、CD40、CD80、CD86,分泌低水平白细胞介素(IL)-12[(547.80±84.67)pg/ml,P=0.026]及高水平IL-10[(410.40±36.11)pg/ml,P=0.031],与其他两组差异有统计学意义.术后糖耐量试验提示比较其他对照组,SIGIRR组血糖峰值更小[(19.0±1.0)mmol/L,P=0.041],胰岛移植物生存时间显著优于其他各组[(14.3±3.6)d,P=0.036].术后免疫组织化学提示SIGIRR组胰岛移植物活性优于其他对照组.结论 SIGIRR基因有效抑制未成熟DCs在脂多糖等外源刺激因子作用下的成熟和活化,抑制抗原提呈功能,在一定程度上延长移植物存活时间,诱导移植免疫耐受形成.

    作者:薛志诚;卢新军;章旭之;邓荣海;马毅 刊期: 2017年第03期

  • 去势抵抗性前列腺癌患者血清差异蛋白的研究

    目的 探讨去势抵抗性前列腺癌患者血清蛋白的异常表达并构建其诊断模型.方法利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术联合弱阳离子磁珠技术对48例前列腺癌患者(含去势敏感组、去势抵抗组)及21例正常对照组的血清多肽组份进行比较分析.结果应用化学计量学方法共筛选出28个具有明显差异的多肽组份,以此构建前列腺癌患者临床干预后的多肽指纹图谱,其中小二乘-支持向量机模型的预报准确率高(训练集预报率-100%,预报集预报率-100%).结论 以28个多肽组份构建前列腺癌患者的血清多肽指纹图谱,有助于诊断该疾病的临床转归.

    作者:王道元;李宝辉;邹永强;闫书贤;高燕华;刘珂;董兴宝;陈永红;杨铁军 刊期: 2017年第03期

中华实验外科杂志

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