王存；周总光
目的 探讨肿瘤转移相关基因-1(MTAl)和血管内皮生长因子C(VEGF-C)蛋白在胃癌发生发展中的相关性.方法 应用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法检测48例胃癌组织、癌旁组织以及20例胃组织中两种基因蛋白的表达,对其相关性进行分析.结果 胃癌组织中的MTA1表达阳性率明显高于癌旁组织和正常组织(68.75％、52.08％和35.00％),VEGF-C表达阳性率明显高于癌旁的组织和正常组织(85.42％、64.58％和45.00％),并且两者的表达均与肿瘤浸润深度、淋巴结转移密切相关,两者的表达呈正相关(P＜0.05).结论 MTA1可能通过VEGF-C信号途径参与胃癌的发生发展.
作者：张国建；秦晓宁；阎庆辉；王凤安；吴爱须；南新华 刊期： 2014年第03期
目的 观察波生坦对肺纤维化(PF)的疗效.方法 48只雄性Wistar大鼠随机均分为6组:对照2、4周组(C2、C4)、模型2、4周组(F2、F4)和治疗组(D1、D2);予以博来霉素建模;DI、D2组分别于2、15d予以波生坦灌胃.2、4周末测定各组大鼠血浆内皮素-1(ET-1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)水平,光镜下观察肺组织肺泡炎、纤维化的程度.结果 (1)造模后ET-1随时间延长升高[(0.10±0.05)、(0.11 ±0.04)、(0.28±0.08)、(0.41±0.13)μg/L],D1组较F4组下降,D2组与F4组差异无统计学意义(P＞0.05).(2)病理形态观察:模型组肺泡架构破坏,早期炎性细胞聚集,后期成纤维细胞、胶原纤维增生;早期波生坦治疗病变减轻.(3)ET-1与肺泡炎、纤维化评分呈正相关,MMP-9/TIMP-1与肺泡炎、纤维化评分呈负相关.结论 波生坦可延缓PF进展,早期治疗对肺泡炎、纤维化改善更明显.
作者：左万里；赵洁敏；黄积雄；周伟；黄炎明；黄艳芬 刊期： 2014年第03期
CXC趋化因子配体14(CXCL14)作为趋化因子CXC子家族的一员,普遍存在于人体正常组织,有提供维持机体稳态的作用,但在各类实体肿瘤中表达高低不一[1-2].本研究旨在观察CXCL14在胃癌中的表达,并探讨其机制.一、材料与方法1.材料:Trizol试剂(Invitrogen公司);逆转录酶、SYBR Green试剂(Toyobo 公司);CXCL14多克隆抗体(Abcam公司);二步法免疫组织化学检测试剂、二氨基联苯胺(DAB)试剂(北京中杉金桥公司);DNA Methylation-Gold试剂盒(ZYMO公司);引物、测序(上海生工公司).
作者：胡畅远；沈贤；薛向阳；庞文洋；陈文静；张丽芳；朱冠保 刊期： 2014年第03期
目的 观察幼龄大鼠门静脉海绵样变(CTPV)模型左肾上静脉直径的变化,以及经左肾上静脉行门体分流术后,左肾上腺静脉血栓对左肾上腺功能的影响.方法 将80只幼龄Wistar大鼠随机分为4组.采用门静脉部分缩窄法建立CTPV模型,结扎左肾上腺静脉法复制术后左肾上腺静脉血栓的模型.结果 (1)术后6周形成CTPV和左肾上腺静脉血栓的大鼠模型;(2)CTPV组术后6周与对照组比较,门静脉压力升高[(15.05±1.55) cmH2O,P＜0.05]及左肾上腺静脉直径增粗[(0.21±0.02) mm,P＜0.05];(3)左肾上腺静脉血栓组肾上腺功能与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 (1) CTPV模型大鼠左肾上腺静脉均增粗,提供了经左肾上腺静脉行门体分流术的条件.(2)左肾上腺静脉血栓不会影响左肾上腺功能,且左肾上腺病理未见明显变化,该术式合理、可行.
作者：王琪；戈小虎；马志刚；朱兵；卢军 刊期： 2014年第03期
目的 构建p110β基因高表达质粒,转染胃癌MKN28细胞,观察其对胃癌MKN28细胞增殖的影响.方法 以基因组cDNA为模板,聚合酶链反应(PCR)扩增目的片段,构建pCMV-Flag-p110β质粒,通过酶切鉴定及测序确定无误后,转染MKN28细胞,通过实时定量PCR(Real-timePCR)和Western blot检测p110β高表达,以及通过噻唑蓝(MTT)法检测其对MKN28细胞增殖的影响.结果 成功构建了Flag-p110β质粒,在胃癌MKN28细胞中高表达p110β能促进蛋白激酶B(AKT)的磷酸化,48 h后噻唑蓝(MTT)法检测空白组、阴性对照组和高表达p110PIK组490 nm波长处的吸光度值分别为:0.791 6±0.0425、0.828 1 ±0.015 6、1.031 2±0.1094,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 成功构建Flag-p110β质粒,高表达p110β能够促进MKN28细胞增殖.
作者：刘鹭；曹小年；王桂华；胡俊波；唐锦辉 刊期： 2014年第03期
目的 探讨在胰腺导管癌中丛生蛋白和抑凋亡蛋白及细胞增殖标志物间的关系.方法 用双重荧光染色法对17例胰腺导管腺癌中丛生蛋白和生存素(Survivin)进行染色并计数阳性细胞进行统计;同法对丛生蛋白和增殖细胞核抗原(PCNA)及Ki-67的表达进行检测.结果 在胰腺导管癌中丛生蛋白阳性细胞数为420个,Survivin阳性细胞数为72个,其中丛生蛋白和Survivin均阳性的细胞数为59个.丛生蛋白、PCNA及Ki-67共同表达的癌细胞数为0个.结论 丛生蛋白在胰腺导管癌中的抗凋亡范围比Survivin更广泛,并且其表达和细胞增殖无相关.
作者：金俊硕；高英兰；董玉玺；任志远；李星；陆文浩；李德旭 刊期： 2014年第03期
目的 分离培养前列腺癌相关成纤维细胞(CAF)及正常成纤维细胞(NPF),探讨两者生物学差异.方法 用Percoll技术分离培养CAF及NPF细胞,用免疫荧光法检测上皮细胞标志物(Pan-CK),成纤维细胞标志物波形蛋白(Vimentin)和平滑肌细胞标志物平滑肌肌动蛋白(SMA);用噻唑蓝(MTT)法检测细胞生长能力;用软琼脂糖实验检测两种细胞诱导良性细胞BPH-1恶变.结果 CAF与NPF细胞形态相似,均高表达Vimentin,不表达Pan-CK,CAF细胞高表达SMA.CAF细胞生长速度快于NPF细胞,第4天吸光度值分别为0.98 ±0.07、0.74±0.04,P＜0.05;第6天吸光度值分别为2.06±0.13、1.59±0.14(P ＜0.05),且能诱导BPH-1恶性变.结论 CAF细胞高表达SMA,增殖能力强,能促进前列腺良性细胞恶性变.
作者：于胜强；王科；杨典东；王健涛；李光磊；高振利 刊期： 2014年第03期
传统组织工程骨种子细胞存在各种不足,严重限制了骨组织工程技术的研究和发展[1].2003年Romanov等[2]首次发现脐带间充质干细胞(UC-MSCs),其增殖活性高、来源广泛、含量丰富、培养简单,避免了伦理争议,是近年来组织工程领域的研究热点[3-4].我们从人脐带沃顿胶中分离出UC-MSCs,并进行成骨诱导,证实UC-MSCs是潜在的组织工程骨种子细胞.
作者：郭艳萍；李强；张爱君；陶常波；李雪阳；李政道；金培生 刊期： 2014年第03期
尽管目前对于腰椎滑脱是否应当解剖复位还存在争议,但多数脊柱外科医师都认同腰椎滑脱的解剖复位对患者远期疗效更佳这一观点[1].我们在腰椎滑脱模型上通过设定唯一可变量方式手术模观察内固定使用对腰椎滑脱复位的影响.
作者：黄志海；徐跃根；胡安全；陆永强；杨亚东 刊期： 2014年第03期
骨肉瘤(OS)的转移需要新生血管的形成[1].恶性黑色素瘤细胞黏附分子(CD146、Mel-CAM、MUC18)、血管内皮生长因子(VEGF)是近年来研究比较多的肿瘤血管相关因子.我们采用免疫组织化学方法检测43例骨肉瘤患者CD146、VEGF的表达以及CD34标记的微血管密度(MVD),探讨它们与骨肉瘤血管生成间的关系.
作者：刘宇雷；郭中帅；杨力；胡彤宇；齐典文；扈文海；张国川 刊期： 2014年第03期
目的 观察阿曼托双黄酮(AF)对匹罗卡品点燃小鼠癫痫发作、海马神经元的影响,并探讨其机制.方法 建立匹罗卡品小鼠点燃模型,并给予AF进行干预.综合应用神经电生理、病理学、分子生物学等技术,观察AF对点燃小鼠癫痫发作以及海马神经元的影响.结果 与癫痫组比较,AF组小鼠行为学和局部场电位信号(LFP)表现均相对稳定,海马CA1区存活神经元数目显著增加[(121.40 ±8.72)个,P＜0.05],原位末端转移酶标记(TUNEL)染色结果显示凋亡神经元数目减少[(1.70±0.98)个,P＜0.01],免疫组织化学(4 894.25±771.18)和Western blot结果(0.49±0.13)显示核因子-κB(NF-κB) p65表达明显降低(P＜0.01).结论 AF对小鼠癫痫模型具有明显的预防惊厥发生和神经保护作用,其作用机制与AF抑制癫痫发生时的脑内炎性反应有关.
作者：张震；孙涛；杨武；高攀；李子标；李杨；夏令宝；刘阳；王峰 刊期： 2014年第03期
目的 将不同浓度曲拉通(Triton X-100)联合核酸酶对同种异体气管实施脱细胞处理,观察其形态结构与生物力学性能.方法 健康新西兰兔30只,随机分为5组(n=6).以新鲜未处理的气管作为对照组(A组),按1％、2％、3％、4％ Triton X-100处理的气管作为实验组(B、C、D、E组),对照组和实验组处理后行组织学观察,电镜扫描气管内外腔的超微结构,并测量气管长度、厚度、横截面的横径和纵径、弹性模量、大应力等力学性能指标.并将2％riton X-100处理的脱细胞气管和新鲜气管埋入SD大鼠背下,并于1、4、8周后取出进行组织学观察.结果 A组气管可见大量的气管上皮细胞和软骨细胞,C、D、E组的软骨细胞较A、B组减少,电镜扫描结果显示A组气管内表面有大量的气管上皮细胞纤毛,B、C组气管内表面上皮细胞消失,基底膜完整,D、E组气管基底膜破裂.随着浓度的增加,气管大应力、弹性模量逐渐降低,只有E组与A组比较差异有统计学意义(P＜0.05).植入大鼠背下的2％ Triton X-100处理的脱细胞气管生物相容性良好.结论 2％ Triton X-100处理的脱细胞兔气管基质在形态学及力学方面具有明显优势.
作者：章方彪；史宏灿；张卫东；叶钢；刘星辰；潘枢；孙飞；李广宇 刊期： 2014年第03期
手术切除气管成人若超过全长50％(即超过6 cm)、儿童超过全长30％时,端端吻合困难,须植入气管替代物才能重建气道[1].由于供应气管的血管纤细且呈节段性分布,使得气管无法通过显微外科技术直接进行血管吻合.气管移植亦多因血供问题而终导致失败,严重制约了气管外科的发展[2].干细胞定位到靶组织后,在体内微环境的特异信号作用下,能定向分化成组织所需的细胞类型[3];或者通过模拟体内环境,在体外实现干细胞的定向诱导分化,这为干细胞治疗疾病提供了理论基础[4].骨髓单个核细胞(BM-MNCs)包括造血干细胞、间充质干细胞(MSCs)、内皮祖细胞(EPCs)、中胚层来源细胞等多种分化潜能的细胞群,且具有容易采集、操作简单和低免疫排斥反应等优点,因而目前干细胞临床应用较多的仍以自体骨髓和外周血单个核细胞为主[3-4].
作者：潘枢；孙飞；史宏灿 刊期： 2014年第03期
本研究旨在观察不同手术时间对骨折愈合过程中骨形态发生蛋白(BMP)-2表达的影响.一、材料和方法1.实验动物:Wistar大鼠192只,体质量为220 g.2.实验方法:(1)大鼠麻醉后采用Einhorn动物骨折造模法制造右侧股骨中段闭合骨折模型[1-2].完全随机法分为A、B、C、D、E、F、G共7组.B、C、D、E、F、G组分别在骨折后第1、3、5、7、11、14天行骨折端切开复位克氏针内固定术[3].A组不行手术,A、B组在骨折后第1、3、5、7、11、14、21、35、49天各时间点处死4只大鼠并取材(以骨折端为中心,完整保留外骨膜及骨痂的骨组织1 cm).
作者：董黎强；尹航；王昌兴；胡伟锋 刊期： 2014年第03期
目的 构建乏氧/辐射双敏感启动子(HRE/Egrl)介导Smac的表达载体,观察其在人肺腺癌A549细胞中常氧和乏氧条件下的表达特点和在乏氧条件下的增殖抑制作用.方法 成功构建表达质粒pcDNA3.l-Egrl-Smac和pcDNA3.1-HRE/Egrl-Smac后转染A549细胞,分别采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot检测Smac mRNA和蛋白表达;应用噻唑蓝(MTT)实验检测细胞的增殖变化.结果 常氧条件下,与对照组比较,2 Gy照射和转染质粒后进行2 Gy照射能显著增加A549细胞中Smac mRNA表达(P＜0.05),且乏氧能显著增加这种效应(P＜0.05);同时,Smac蛋白表达规律与mRNA表达规律相似.常氧和乏氧条件下,2 Gy照射和转染质粒后进行2 Gy照射细胞均较相同时间点对照组细胞增殖水平显著降低(P＜0.05);而且乏氧各组较常氧各组细胞增殖水平显著降低(P＜0.05).结论 乏氧和辐射均能诱导A549细胞中Smac表达增加,且联合2 Gy照射能显著抑制乏氧条件下A549细胞的增殖能力.
作者：李长锋；金景鹏；刘大海；张斌 刊期： 2014年第03期
目的 观察左旋棉酚(LG)联合多西紫杉醇(DOC)对肺癌治疗的体内体外影响,探讨两者是否具有协同作用及其机制.方法 LG(3、5μmol/L)联合DOC(0.1、1.0 nmoL/L)作用于A549、A549/DDP和A549/T肺癌细胞,采用噻唑蓝(MTT)法和流式细胞仪法分别检测细胞增殖抑制和凋亡诱导作用;建立C57 BL/6J小鼠肺癌Lewis细胞皮下移植瘤模型,将移植瘤小鼠随机分成7组,每组15只,分别为DOC治疗组(1、2 mg/kg)、LG治疗组(3、5 mg/kg)、联合治疗组(3 mg/kg LG+1 mg/kg DOC、5 mg/kg LG +2 mg/kg DOC)和阴性对照组,进行疗效分析.结果 低剂量联合组对A549、A549/DDP和A549/T的增殖抑制率分别为(67.3±3.1)％、(64.8±2.8)％、(54.1±3.3)％,细胞凋亡率分别为(50.2±1.8)％、(52.3±1.5)％、(42.8±2.4)％;高剂量联合组的增殖抑制率分别为(71.8±1.9)％、(72.4±2.1)％、(60.7±2.6)％,细胞凋亡率分别为(53.2±1.8)％、(55.1±1.9)％、(46.7±2.6)％;高低剂量联合组对肺癌细胞的增殖抑制率和细胞凋亡率均比单独使用DOC显著增加(P＜0.05),且联合指数(CI)均小于0.5,表现出强大的协同作用.低高剂量联合组小鼠肺癌Lewis细胞移植瘤的肿瘤抑制率分别为49.23％和66.87％,明显高于DOC治疗组.结论 LG与DOC的联用对肺癌细胞的增殖抑制及诱导凋亡具有协同作用,对克服肿瘤细胞耐药性有良好的效果,对小鼠肺癌Lewis细胞移植瘤有明显的抑制作用,且比单独用药效果显著.
作者：吴小进；杨辉；米燕燕；殷咏梅 刊期： 2014年第03期
目的 观察自噬在乙醇诱导胃黏膜上皮GES-1细胞凋亡中的作用.方法 体外使用100～1 600 mmol/L浓度乙醇诱导胃黏膜上皮GES-1细胞发生凋亡,并分为4组:空白对照组、乙醇组、乙醇+雷帕霉素(RAPA)组和乙醇+氯喹(CQ)组.流式细胞仪检测各组细胞凋亡水平,噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖程度,免疫荧光显微镜观察自噬小体,Western blot检测各组中微管相关蛋白1轻链32β(LC3)的表达水平.结果 细胞凋亡随着乙醇浓度增加而升高,自噬能有效降低这种凋亡.乙醇组细胞凋亡率[(17.78±7.86)％]明显高于空白对照组[(12.64±6.82)％]和乙醇+RAPA组[(14.88±7.12)％],同时又显著低于乙醇+CQ组[(21.44±8.69)％,P＜0.05].在乙醇干预下,诱导细胞自噬可以增加细胞的相对增殖活性.结论 乙醇可以诱导胃黏膜上皮GES-1细胞凋亡.促进细胞自噬可以有效降低乙醇诱导的细胞凋亡,抑制自噬可以有效增高乙醇诱导的细胞凋亡.
作者：常伟龙；帅晓明；张鹏；马牧原；李伟；尹玉平；陶凯雄 刊期： 2014年第03期
近年来,随着实验研究的进展,结直肠外科医生对大肠癌、炎性肠病(IBD)、结直肠息肉、微创外科等专业领域的认识提升到一个新的阶段.目前,结直肠癌发生的遗传证据逐渐被揭示,遗传不稳定机制得以阐释,表观遗传学研究不断进展,肠癌干细胞的实验依据不断积累;IBD发病相关的遗传及屏障机制逐渐完善,炎症相关大肠癌的认识逐步深入;结直肠息肉的恶变风险及机制日渐得到认识,防治手段得以进步;微创外科技术不断得以推广,在保证治疗效果的同时减少了创伤,提高了患者生活质量.现对相关实验研究进展做一简要回顾与展望.
作者：王存；周总光 刊期： 2014年第03期
目的 探讨膜联蛋白A2在结直肠癌中的磷酸化水平及其与临床病理特征及肿瘤预后的相关性.方法 分析2006年8月至2007年7月在第二军医大学附属长海医院肛肠外科进行治疗的183例散发性结直肠癌患者的临床及随访资料.建立患者肿瘤标本组织芯片,对磷酸化膜联蛋白A2的水平进行免疫组织化学检测并对结果进行统计分析.结果 肿瘤组织中磷酸化膜联蛋白A2的水平高于非恶性的对照组织(P＜0.01).患者肿瘤组织中较高的磷酸化膜联蛋白A2水平与T分期(P＜0.01)、N分期(P＜0.05)、肝转移(P＜0.01)、TNM分期(P＜0.01)、Duke分期(P＜0.01)、复发(P＜0.01)、肿瘤致死(P＜0.05)密切相关.生存曲线分析显示肿瘤组织中磷酸化膜联蛋白A2水平较低的患者其未复发率(P＜0.01)和总体生存率(P＜0.05)均高于磷酸化膜联蛋白A2水平较高的患者.多因素分析显示肿瘤组织中磷酸化膜联蛋白A2的水平可以作为衡量患者未复发率(P＜0.05)和总体生存率(P＜0.05)的独立因素.结论 结直肠癌患者肿瘤组织中磷酸化膜联蛋白A2的水平与肿瘤分期和临床特征密切相关.
作者：郝立强；傅传刚；薛赓；洪永刚；张艳 刊期： 2014年第03期
目的 观察热CO2处理后树突状细胞(DC)来源外泌体(DEXs)对胃癌AGS细胞凋亡的影响,探讨腹腔镜胃癌根治术时引入热CO2处理的可行性.方法 建立热CO2气腹体外实验模型,分组处理DC2.4细胞后,提取DEXs并通过透射电镜和Western blot鉴定.将各组DEXs干预AGS细胞后,以细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测AGS细胞增殖,膜联蛋白V(Annexin V)/碘化丙锭(PI)双染流式细胞术检测细胞凋亡率,Hoechst 33258染色荧光显微镜检测细胞核形态,比色法检测半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3的活性.结果 成功提取DEXs,热CO2气腹组DEXs可显著抑制胃癌AGS细胞的增殖,l、2、3、4d后抑制率分别为31.13％、43.28％、51.34％和50.32％.细胞出现核固缩、核碎裂和凋亡小体形成等凋亡形态,流式细胞检测表明各组DEXs干预AGS细胞后凋亡率分别为2.3％、5.6％、15.7％和36.8％.与对照组比较,热CO2气腹组Caspase-3相对活性为171.37％.结论 热CO2处理DC后,DEXs能够显著抑制胃癌AGS细胞的增殖并诱导其凋亡,其原因可能与Caspase-3分子活化有关.
作者：魏培；王金林；王志勇；李涛；庞泓；杨峰 刊期： 2014年第03期
中华实验外科杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中华医学会
