李涛；陈义雄；陈存飞；戴维；陈娇；黄杰
目的 探讨沉默多嘧啶束结合蛋白相关剪切因子(PSF)后对结肠癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制.方法 对人结肠癌DLD-1细胞构建针对PSF的小干扰RNA (siRNA-PSF),转染48 h后,观察PSF基因沉默前后对结肠癌细胞增殖、凋亡的影响,同时应用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和Western blot检测PSF基因沉默前后结肠癌细胞中自噬蛋白微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)的表达变化.结果 与未转染组和转染siRNA-vector组比较,转染siRNA-PSF后,结肠癌DLD-1细胞PSF表达明显下降(P＜0.05),同时其增殖明显抑制,DNA增殖荧光值为25.05±3.94比132.88±8.73、127.61±8.02(P ＜0.05),而凋亡明显增加,凋亡率为(54.6±5.5)％比(8.5±1.3)％、(10.1±2.0)％(P＜0.05).FQ-PCR和Western blot检测显示沉默PSF后,结肠癌DLD-1细胞的LC3B表达也明显减少(P＜0.05).结论 沉默PSF后通过抑制自噬蛋白LC3B表达诱导结肠癌细胞增殖抑制和凋亡.
作者：郭瑜；龚明敏；王建军；丁汉军；廖月；蔺兵虎 刊期： 2014年第09期
目的 观察人端粒酶逆转录酶(hTERT)对胶质瘤U87细胞增殖及凋亡的影响.方法 构建靶向hTERT的小干扰RNA(siRNA)表达质粒转染U87细胞,通过Western blot检测hTERT蛋白的表达水平,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测hTERT mRNA表达水平,采用噻唑蓝(MTT)法及流式细胞仪分别检测转染后U87细胞的增殖活性及凋亡率.结果 与空白对照组及阴性对照组比较,各siRNA-hTERT干扰组hTERT蛋白表达水平明显降低;各siRNA-hTERT干扰组hTERT mRNA相对表达量分别为0.79 ±0.11、0.58±0.15、0.39±0.16,与阴性对照组比较明显降低,其差异有统计学意义(P＜0.05);与空白对照组及阴性对照组比较,转染siRNA-hTERT后U87细胞的增殖受到明显抑制且在第3天时明显;转染48 h后各siRNA-hTERT干扰组U87细胞凋亡率分别为(14.31±0.93)％、(17.57±0.61)％、(22.68±1.04)％,与空白对照组及阴性对照组比较明显增加,其差异有统计学意义(P＜0.05).结论 靶向hTERT基因的siRNA转染U87细胞后可以显著抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡的发生.
作者：陈健；陈谦学 刊期： 2014年第09期
目的 观察微纳米拓扑结构在体外模拟的人体环境下对细胞倾向性生长的影响.方法 制备宽度分别为12.5、25.0、50.0、75.0 μm的拓扑聚二甲基硅氧烷(PDMS)以及光滑的PDMS,分为实验组及对照组(E组),实验组分A组(12.5μm)、B组(25.0 μm)、C组(50.0 μm)及D组(75.0μm)4个亚组.按4种实验方式分别将成纤维细胞和神经胶质瘤细胞培养于各组PDMS上,观察细胞的形态、生长和分布,选择PDMS上、PDMS上方0～ 30μm范围内以及PDMS上方200～300 μm各5个视野,测量细胞长轴与水平线夹角α角度值,分为0～ 30°、31°～ 60°以及61°～ 90°3个等级,统计并分析测量结果.结果 各组细胞均沿PDMS沟槽结构生长,细胞α角大多数分布于0 ～30°;4个亚组中,A组和B组这一倾向性较C组及D组更明显.PDMS上方0～ 30 μm,只有B组细胞呈现0 ～ 30°的倾向性生长,以上差异均有统计学意义(P＜0.05).PDMS上方200 ～ 300μm,各组均无明显生长倾向性,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 模拟人体的环境下,拓扑结构仍能影响细胞出现倾向性生长.宽度为12.5μm和25.0 μm的拓扑结构对细胞倾向性影响明显,随着沟槽宽度的增加,对细胞倾向性的影响也减弱.
作者：马昌科；沈忆新；孙涛；韩国霞；毛锦宁 刊期： 2014年第09期
颅脑损伤是军人和平民平时和战时致死、致残的主要原因之一,尤其是在发展中国家,现代犯罪伤害案例中有约40％是由火器造成的伤害[1].本研究旨在建立既符合临床颅脑爆炸伤实际,又能持续观察伤情,并给予治疗的简易标准化动物模型,是提高认识其发生发展机制及临床诊治水平的主要手段.
作者：周龙；林进皇；郁毅刚；魁国菊；林俊明；张建华；江秀文 刊期： 2014年第09期
作者：李华强；张中原；张青 刊期： 2014年第09期
目的 利用γ-氨基丁酸B型受体(GABAB)受体激动剂(巴氯芬)和拮抗剂(CGP55845),观察作用GABAB受体对糖尿病神经痛合并抑郁大鼠海马脑源性神经生长因子(BDNF)表达的影响.方法 将100只雄性SD大鼠随机分为两组,正常对照组(C组)20只和糖尿病神经痛合并抑郁模型组(D组)80只,分别腹腔注射生理盐水或链脲佐菌素(STZ,60 mg/kg).结合强迫游泳实验,3周后,D组大鼠模型制备成功.两组大鼠均行鞘内置管.根据鞘内给药不同将D组大鼠随机分为4组(n=20):D1组:生理盐水10 μl+生理盐水10μl;D2组:巴氯芬0.5 μg+生理盐水10 μl; D3组:CGP55845 10 μg+生理盐水10 μl; D4组:CGP55845 10 μg+巴氯芬0.5 μg.C组:生理盐水10μl+生理盐水10μl.5组大鼠2次鞘内注药间隔15 min,连续4d,分别于第4天给药完成后2 h(T1)、给药完成后2周(T2)测定50％缩足阈值(PWT)和强迫游泳实验不动时间(IMFST),并在T1、T2时间点每组大鼠取海马组织,采用免疫组织化学法和分子生物学方法测定BDNF表达变化.结果 与C组比较,D组各时间点PWT明显降低[(13.02±1.68)g比(3.46±0.84)g,P＜0.05],IMFST明显延长[(47.14 ±3.65)s比(178.12±12.49)s,P＜0.05],BDNF阳性细胞数减少[(34.10±3.37)个比(16.50±2.41)个,P＜0.05],其mRNA(0.93 ±0.04比0.52±0.09,P＜0.05)及蛋白(1.09±0.06比0.56 ±0.09,P＜0.05)表达显著下降.与D1组比较,D2、D3组大鼠各时间点IMFST明显缩短(P＜0.05)、BDNF表达明显增多(P＜0.05),D2组大鼠各时间点PWT显著升高(P＜0.05),而D3组PWT无明显变化(P ＞0.05);D4组与D1组比较,各项指标无显著变化(P＞0.05).上述指标各组T1与T2时间点比较均无明显变化(P＞0.05).结论 激活或阻断GABAB受体均可通过上调海马组织BDNF表达,改善糖尿病神经痛大鼠的抑郁状态.
作者：白惠萍；刘朋；杨淑红；吴川；任伟；郭跃先；王秀丽 刊期： 2014年第09期
目的 从人脑胶质瘤新鲜标本中分离相关间充质干细胞完成鉴定并对其生物特性进行初步研究.方法 将肿瘤组织经过机械法和胰酶消化后经梯度离心法所得的单个细胞悬液使用磁珠分离法筛选CD133阴性细胞进行培养.使用流式细胞术分析表面标志物,使用细胞计数法分析细胞亚群的生长曲线和促肿瘤细胞增殖作用.结果 脑胶质瘤相关间充质干细胞呈贴壁生长,该细胞阳性表达CD73、CD90、CD105,而阴性表达CD14、CD45、CD31,体外诱导条件下可向脂肪细胞和成骨细胞分化,且其条件培养液可促进脑胶质瘤细胞的增殖.结论 胶质瘤相关间充质干细胞存在于脑胶质瘤微环境中,并可能对脑胶质瘤的发展起促进作用.
作者：付朋；黄琴；姜晓兵；王旋；张方成；赵洪洋；项炜 刊期： 2014年第09期
为探讨一期PCNL的可操作性,我们2009年6月至2013年6月应用F24通道经皮肾镜超声弹道碎石清石术治疗结石性肾积脓33例,现报道如下.一、资料与方法1.一般资料:本组33例单侧上尿路结石梗阻性肾积脓,男16例,女17例,年龄(52±4)岁.病程3 d～3个月,平均26d.结石位于右侧20例,左侧13例.
作者：任选义；张雪培；刘建华；黄随富；李华强 刊期： 2014年第09期
目的 观察替莫唑胺(TMZ)诱导人脑胶质瘤U251耐药细胞株(U251/TR)经放射线照射后细胞周期及P-糖蛋白(P-gp)表达的改变.方法 逐步递增剂量诱导方法建立U251/TR细胞株,细胞计数试剂盒(CCK-8)法测定其药物敏感性;倒置显微镜观察亲本U251细胞及U251/TR两种细胞结晶紫染液染色后形态差异;医用直线加速器6 Gy剂量放射线照射两种细胞后观察细胞周期的变化;Western blot分析耐药蛋白细胞膜P-gp表达变化.结果 成功诱导建立人脑恶性胶质瘤U251耐药细胞株后,结晶紫染液染色显示显微镜下两种细胞存在形态学差异.CCK-8法检测显示U251/TR对TMZ、阿霉素、环磷酰胺、依托泊苷、硫酸长春新碱化疗药物的耐受指数分别为2.63、2.76、2.15、10.58、3.54.流式细胞术检测发现在同步化之后,经6Gy X线照射后6、24、48、72 h细胞周期各时比较,提示U251/TR细胞株较亲本细胞G2/M期明显减少,G0/G1期和S期明显增多.Western blot结果显示6 Gy放射线照射U251/TR和U251细胞后,P-gp的蛋白表达均下降(相对蛋白表达量分别为0.535±0.002、0.349±0.004),说明6 Gy放射线对两种细胞均有杀伤作用.结论 经小剂量6Gy X线辐射照射可抑制甚至杀伤胶质瘤U251细胞及耐TMZ细胞U251/TR,一定剂量放疗后两种细胞放射敏感性均增高.
作者：黄从刚；郭振涛；陈谦学；卞红强；段栩飞；李正伟；周利华；马钊 刊期： 2014年第09期
目的 观察胶质瘤细胞中异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)基因突变对肿瘤细胞的生长抑制作用并探讨其机制.方法 构建表达IDH1 R132H突变体的慢病毒载体,转染U87胶质瘤细胞,通过免疫荧光染色观察细胞增殖,原位缺口末端标记法(TUNEL)法检测细胞凋亡,水溶性四唑盐(WST)法绘制细胞生长曲线,比色法检测细胞内还原性烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)、还原性谷胱甘肽(GSH)含量,荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)含量;构建裸鼠动物模型,绘制肿瘤生长体积曲线与重量柱形图.结果 表达IDH1 R132H突变体的胶质瘤细胞生长明显抑制,免疫荧光染色以及TUNEL法证实细胞增殖减少、凋亡增多;细胞内NADPH水平降低伴随GSH含量降低和ROS蓄积,H2O2(1 mmol/L)可明显增加胶质瘤细胞的生长抑制作用,GSH(1 mmol/L)则可减弱抑制作用.结论IDH1基因R132H突变可显著抑制胶质瘤细胞生长,细胞内GSH含量降低和ROS蓄积可能是其重要机制.
作者：左浩；施金龙；施炜；倪兰春；陈建 刊期： 2014年第09期
目的 探讨BRIT1基因在乳腺癌细胞中的功能,并研究其可能通过调控p53蛋白的活性发挥肿瘤抑制作用.方法 构建BRIT1真核表达载体p3×FLAG-CMV-BRIT1,实现BRIT1基因的过表达,检测p53蛋白的表达;以及利用小干扰RNA(siRNA)技术敲低了MCF10A细胞中BRIT1基因的表达,建立DNA损伤模型后检测p53蛋白在DNA损伤时的反应.利用体外细胞增殖实验观察BRIT1的肿瘤抑制功能是否依赖p53蛋白的活性.结果 BRIT1过表达可以上调p53蛋白的活性,敲低BRIT1的功能使p53蛋白的表达下降;当面临DNA损伤时,BRIT1的功能缺陷能够阻碍p53的表达水平.当细胞具备正常p53功能时,BRIT1基因的过表达可以显著抑制细胞的增殖(10.55±0.12比15.83±0.11,P＜0.05);而当p53蛋白表达被降低时,BRIT1基因的肿瘤抑制功能降低(13.84 ±0.09比10.55±0.12,P＜0.05).结论 BRIT1基因不仅调控p53蛋白的活性,而且依赖野生型p53基因的功能来发挥肿瘤抑制作用.
作者：卢建华；罗琨；冯梦宇；杨娟；张波 刊期： 2014年第09期
多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白(LRIG)基因家族含有3个成员:LRIG1、LRIG2及LRIG3[1].目前对该家族成员LRIG1的研究较多,对LRIG2、3的研究也逐渐受到关注.LRIG1被认为是一个抑癌基因,LRIG3也可能具有抑癌基因的功能,LRIG2作用则相反,可能是一种促癌基因.现就LRIG基因家族的发现,功能,其与人类肿瘤关系及作用机制的研究进展综述如下.
作者：郭东生；王宝峰；毛峰 刊期： 2014年第09期
目的 观察卵巢切除对硫酸鱼精蛋白介导的间质性膀胱炎(IC)大鼠模型中膀胱肥大细胞的影响,探讨雌激素、孕激素在IC发病中的作用.方法 将30只雌性成年SD大鼠随机分为3组:卵巢切除+硫酸鱼精蛋白(OVX+ PS)组、假手术+PS(Sham+ PS)组和正常对照组.OVX+ PS组和Sham+ PS组膀胱内灌注PS建立IC膀胱黏膜损伤机制大鼠模型,正常对照组膀胱内灌注生理盐水.60 d后处死大鼠并切取膀胱,苏木素-伊红(HE)染色观察膀胱黏膜变化及炎性细胞浸润,甲苯胺蓝染色标记并计数肥大细胞,分析肥大细胞活性.结果 PS灌注组可见膀胱黏膜损伤,黏膜下可见炎性细胞浸润.OVX+ PS组膀胱黏膜固有层和逼尿肌肥大细胞计数分别为(2.770±1.112)、(1.180±0.598)个/高倍镜视野,Sham+ PS组肥大细胞计数分别为(2.640±1.022)、(0.990±0.630)个/高倍镜视野,与正常对照组[(1.160±0.523)、(0.330±0.177)个/高倍镜视野]比较均明显增多(P＜0.01);OVX+ PS组与Sham+ PS组比较肥大细胞计数差异无统计学意义(P＞0.05).OVX+ PS组膀胱黏膜固有层和逼尿肌脱颗粒肥大细胞百分比分别为(27.46±15.69)％和(36.93±19.64)％,与Sham+ PS组[(90.94±8.46)％、(80.58±24.18)％]比较明显降低(P＜0.01);与正常对照组[(22.92±9.52)％、(24.95±18.81)％]比较,OVX+ PS组膀胱黏膜固有层和逼尿肌的脱颗粒肥大细胞百分比差异均无统计学意义(P＞0.05),而Sham+ PS组脱颗粒肥大细胞百分比均明显增加(P＜0.01).结论 PS大鼠膀胱灌注可构建较为典型的IC动物模型;卵巢切除可显著抑制IC模型中膀胱肥大细胞的活化及脱颗粒.
作者：胡海龙；谢林国；韩瑞发；张卫；王旭；吴长利；李艳奎 刊期： 2014年第09期
目的 观察微小RNA-10b(miR-10b)在不同分化程度的胃癌细胞株中的表达水平.方法 选择5种胃癌细胞株,根据其不同分化程度分为3组,即高分化组(AGS)、中分化组(N87、SGC-7901)、低分化组(MKN-45、BGC-823),以胃黏膜上皮永生化细胞GES-1为第4组,即正常组,通过实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和荧光素酶报告基因定量检测,观察miR-10b在6种不同分化水平的细胞株中的表达.结果 miR-10b在正常组及高分化组中几乎不存在表达,设定其在GES-1中的表达量为1.0,高分化组相对表达量为2.5,中分化组弱表达,相对表达量为7.5、7.0,在包括BGC-823、MKN45这种具有高度转移倾向的低分化组中明显高表达,相对表达量为10.5、12.5.结论 miR-10b在低分化胃癌细胞株中过表达,同时其表达水平与胃癌细胞侵袭转移能力呈正相关.
作者：任辉；史莹；林巍；姜涛 刊期： 2014年第09期
目的 观察胃旁路术(GBP)后2型糖尿病大鼠(GK大鼠)胰高血糖素样肽-1(GLP-1)及其受体在胰腺组织中的表达变化,探讨GBP治疗2型糖尿病机制.方法 将30只8周龄雄性GK大鼠随机分为手术组(10只)、假手术组(10只)、饮食配对组(10只),另8周龄雄性SD作为空白对照组(10只).检测和比较术前及术后1、2、4周各组大鼠空腹血糖(FPG)、GLP-1水平.术后4周处死大鼠,取胰腺组织行苏木素-伊红(HE)染色,光镜下观察各组胰岛大体形态学改变,免疫组织化学法检测胰高血糖素样肽-1受体(GLP-1 R)的变化.结果 手术组术后各时间点FPG水平[(11.06±0.52)、(7.49±0.34)、(5.20 ±0.08) mmol/L]均低于术前(P＜0.05);GLP-1[(12.11±0.40)、(13.64 ±0.23)、(26.40±0.39) pmol/L]明显升高(P＜0.01);HE染色胰岛逐渐饱满,胰腺组织中GLP-1R表达明显增多.结论 GBP降糖效果确切,GLP-1及其受体的上调是血糖调控的重要机制之一.
作者：徐键；林杉；尹家俊；尹敏；王伟；聂哲群；王亚东；韩玉龙；赵会庚 刊期： 2014年第09期
目的 探讨合并糖尿病的急性冠脉综合征(ACS)患者血清白细胞介素-6(IL-6)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)与颈动脉斑块稳定性的关系.方法 随机选择合并糖尿病的ACS患者104例,对双侧颈动脉行B超检查,分成4组:内膜-中层厚度(IMT)正常组(20例)、IMT增厚组(36例),稳定斑块组(30例)及不稳定斑块组(18例),另选取同期单纯糖尿病患者(40例)作为对照组;采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)测定患者血清IL-6、MMP-9水平.结果 IMT正常组、IMT增厚组、稳定斑块组及不稳定斑块组患者血清IL-6、MMP-9水平均明显高于对照组[(295.3±43.8)、(369.5±46.2) 、(446.2±44.7)、(533.6 ±48.1)ng/L比(216.7 ±39.8) ng/L和(172.3 ±24.6)、(228.6±26.2)、(287.4±30.1)、(372.8±31.5) μg/L比(98.7±20.7)μg/L],差异有统计学意义(P＜0.05),且在IMT正常组、IMT增厚组、稳定斑块组及不稳定斑块组中,血清IL-6和MMP-9水平逐渐升高,各组间的差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 合并糖尿病的ACS患者血清IL-6、MMP-9水平与颈动脉斑块稳定性明显相关,可提示ACS患者血管病变的发生发展.
作者：阳运强；钟文；廖强；赵强；孙静 刊期： 2014年第09期
目的 探讨免疫激活磁珠分选(MACS) CD45去除方法富集后,以细胞角蛋白(CK)为标记联合苏木素-伊红(HE)染色检测肝癌患者外周血肿瘤细胞(CTC)的价值.方法 应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测18种上皮肿瘤细胞株的CK(CK8、CK18、CK19)表达;采集健康志愿者、肝癌患者外周血,以MACS技术CD45去除方法对外周血单个核细胞(PBMC)进行富集,以CK为标记,采用免疫组织化学染色联合HE染色检测肿瘤细胞.结果 在18种上皮性肿瘤细胞株中CK8、CK18、CK19表达率分别为72.22％、83.33％和66.67％;9种肝癌细胞株中CK阳性表达占绝对多数;在MACS技术CD45去除富集肿瘤细胞基础上,应用免疫细胞化学和HE染色结果显示,肝癌患者外周血存在完整肿瘤细胞,检出率为63.15％ (12/19),健康志愿者未检测到肿瘤细胞.结论 CK可作为检测外周血肝癌细胞标志物;MACS技术CD45去除方法富集后,CK免疫细胞化学和HE染色同步检测方法有助于检测肝癌患者外周血肿瘤细胞.
作者：郭立民；鲁岩；彭吉润；蒋力 刊期： 2014年第09期
目的 观察CD13在骨瘤及骨肉瘤中的表达及意义.方法 免疫组织化学法检测20例良性骨瘤及56例骨肉瘤组织中CD13蛋白的表达,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测CD13mRNA在20例骨肉瘤及相应肉瘤旁组织中的表达,分析CD13表达与临床病理参数的关系.结果 免疫组织化学结果显示CD13蛋白在良性骨瘤及骨肉瘤组织中的阳性表达率分别为64.3％、10.0％,差异有统计学意义(P＜0.05).CD13蛋白在Ⅲ期及Ⅰ～Ⅱ期骨肉瘤组织中的阳性表达率分别为90.0％、58.9％,差异有统计学意义(P＜0.05),而与患者的年龄、性别、肿瘤发生部位、肿瘤大小无明显相关(P＞0.05).RT-PCR结果显示CD13 mRNA在肉瘤中的表达明显高于肉瘤旁组织(P＜0.05).结论 CD13的表达与骨肉瘤发生及进展明显相关.
作者：陈文革；杨朝晖；刘清高；鄢含坤 刊期： 2014年第09期
随着功能基因组学的迅速发展,非编码核糖核酸(ncRNA)家族中的长链非编码核糖核酸(lncRNA)逐渐受到了人们的关注.研究表明,lncRNA在表观遗传水平、转录及转录后等水平通过影响信使核糖核酸(mRNA)的转录、拼接、转运和翻译等过程,从而调节蛋白编码基因的表达[1].lncRNA在胶质瘤的发生发展中发挥一定作用[2-3].现就lncRNA在胶质瘤发生发展过程中的作用机制进展作一综述.
作者：亓旭晨；万英锋；李新伟；王坤；王义荣；杨树旭 刊期： 2014年第09期
目的 观察天然基质金属蛋白酶(MMPs)在大鼠脑动脉瘤模型的作用.方法 健康成年雄性大鼠32只,随机分为高血压组和MMPs干预组(各16只),前者手术造成肾性高血压,后者应用天然性MMP-2、MMP-9干预,分别于术后1、3、5周采集标本,观察脑动脉瘤形成,并检测MMPs血浆浓度及其基因表达水平变化.结果 病理学观察见高血压组有5只大鼠的脑底动脉环有明显动脉瘤形成,干预组结构基本正常.缸浆MMP-2、MMP-9浓度变化:高血压组在术后MMP-2、MMP-9水平逐渐升高,术后3周分别为(105.89±8.24)、(130.79±14.18) mg/L,术后5周分别为(124.34±11.33)、(151.85±16.54) mg/L;MMPs干预组在术后3周分别为(78.97±6.25)、(79.54±7.06) mg/L,术后5周分别为(84.30±7.03)、(86.29±9.27) mg/L,两组MMP-2、MMP-9浓度差异均有统计学意义(P＜0.05).免疫组织化学及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测见高血压组在术后3周MMP-2和MMP-9表达明显增加,持续至第5周,干预组仅呈弱阳性表达.结论 血压持续升高并激活MMPs可能是导致脑动脉瘤形成的重要因素.
作者：左右；袁先厚；李雪松；杜娟；赵庆锁；朱平安 刊期： 2014年第09期
中华实验外科杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中华医学会
