魏福堂；夏春林；孟斌；张志明
目的 观察塞来昔布或联合奥沙利铂对人结肠癌裸鼠移植瘤生长的影响并探讨其机制.方法 用人结肠癌HT-29细胞建立移植瘤模型,将裸鼠随机分为对照组、奥沙利铂组、塞来昔布组、联合用药组.给予相应药物35 d后,取移植瘤组织检测COX-2,VEGF mRNA和微血管密度.结果 塞来昔布组、奥沙利铂组和联合用药组抑瘤率分别为34.94%、30.53%和62.87%.奥沙利铂组COX-2,VEGF表达显著高于对照组(分别P＜0.05).奥沙利铂组微血管密度与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).塞来昔布组和联合用药组COX-2,VEGF和MVD与对照组比较均显著下降(分别P＜0.05).结论 塞来昔布可抑制人结肠癌裸鼠移植瘤的生长和肿瘤血管生成.塞来昔布增加了奥沙利铂的抗肿瘤效果.
作者：赵士彭；蔡建辉；许明月；张啸尘；赵发 刊期： 2008年第03期
我们利用RNAi技术达到了特异抑制胰腺癌突变K-rasAsn12的目的,现报道如下.一、材料和方法1.材料:AsPC-1和BxPC-3细胞株购自中科院上海细胞库.pSilenCircle试剂盒购自Allele公司.
作者：孟繁杰；曹斌；蔡建辉 刊期： 2008年第03期
随着手术器械的发展,外科手术不断微创化.胸腔镜心脏手术经股动脉股静脉插管,胸壁打孔,常规血管阻闭钳夹闭主动脉建立完全的心肺转流[1,2].
作者：李杨；俞世强；易定华；徐学增 刊期： 2008年第03期
目的 观察聚磷酸钙纤维(CPPF)磷酸钙骨水泥(CPC)、微小颗粒骨复合物体外降解特性及体内修复骨缺损的能力.方法 将CPPF、CPC、微小颗粒骨按质量比1∶4∶4制成复合人工骨,通过PH值、重量、抗压强度的变化,观察人工骨在pH7.4的37℃磷酸盐缓冲液(PBS)中的降解性能.通过大体、X光片、组织学观察及力学测试来检测复合人工骨的体内修复骨缺损的能力.结果 体外实验证实:CPPF/CPC/颗粒骨复合材料孔隙率为72.1%,CPC/颗粒骨孔隙率为58.2%;扫描电镜显示CPPF/CPC/颗粒骨复合材料的孔径为100～400 μm,CPC/颗粒骨为50～300 μm;两组样品溶液pH值在12周内基本维持恒定;CPPF/CPC/颗粒骨复合材料0～4周重量变化较小,4～8周下降较快,12周为初始重量50%,CPC/颗粒骨复合材料在0～6周变化较小,6周后重量下降较快,12周时为初始重量70%;CPPF/CPC/颗粒骨复合材料初始抗压强度9.28 MPa,CPC/颗粒骨复合材料初始抗压强度6.21 Mpa,两者有统计学意义.CPPF/CPC/颗粒骨强度在0～4周下降较慢,4周后下降较快,12周时为0.1,8 MPa,CPC/颗粒骨强度均匀下降,12周时为0.24 MPa.体内实验:CPPF/CPC/颗粒骨复合材料修复骨缺损效果优于其他各组,且差异有统计学意义(P＜0.05).结论 复合材料以其优良的生物学性能有望成为理想的骨替代材料.
作者：周磊；闰景龙；胡春杰 刊期： 2008年第03期
目的 探讨人结肠癌RKO细胞周期依赖性激酶抑制因子(CKIs)家族启动子区CpG岛甲基化状态及其甲基化可逆性特征.方法 应用特异性DNA甲基转移酶(DNMTs)抑制剂5-Aza-2]-deoxycytidine(5-Aza-CdR)处理肠癌细胞,甲基特异性聚合酶链反应(Methylation-Specific PCR,MSP)、T-A克隆及DNA测序法分析RKO细胞CKIs家族抑癌基因p15ink4b、p16ink4a/CDKN2、p21/cip、p27/kip启动子CpG岛甲基化状态.结果 未经5-Aza-CdR作用的肠癌RKO细胞,其p15ink4b、p16ink4a/CDKN2基因组DNA胞嘧啶(C)保持不变,这提示在其单链DNA中胞嘧啶呈甲基化状态;而经5-Aza-CdR作用的肠癌RKO细胞,其p15ink4b、p16ink4a/CDKN2、p21/cip和p27/kip基因组DNA胞嘧啶均已变为胸腺嘧啶,表明在DNA单链中胞嘧啶已呈去甲基化状态.结论 肠癌RKO细胞周期INK4家族(p15ink4b和p16ink4a/CDKN2)基因的启动子区处于异常的高甲基化状态,而KIP/CIP家族(p21/cip和p27/kip)基因未处于高甲基化状态;5-Aza-CdR能较好地逆转肿瘤细胞INK4家族基因DNA高甲基化状态.
作者：方晓明；姜朝晖；彭佳萍；孙立峰；郑树 刊期： 2008年第03期
目的 观察半乳糖白蛋白磁性阿霉素纳米粒联合交变磁场对肝癌细胞和人肝细胞的影响.方法 将人肝癌细胞HepG2及人肝细胞L-02细胞,随机分成A1、A2组(即RPMI 1640对照组),B1、B2组(游离阿霉素),C1、C2组(半乳糖白蛋白磁性阿霉素纳米粒),D1、D2组(阿霉素纳米粒),E1、E2组(半乳糖白蛋白磁性阿霉素纳米粒),实验组每组含有0.5 mg/L或等量的阿霉素;除C1、C2组外,其他各组置交变磁场(频率为100 kHz、磁场强度为15 kA/m)中,作用30 min.通过细胞计数、Hoechst荧光染色、DNA蛋白电泳、流式细胞仪检测,观察细胞生长曲线、细胞形态、细胞凋亡及细胞周期的变化.结果 (1)E1、E2组,HepG2和L-02细胞增殖抑制作用强,DNA梯形带明显,细胞凋亡率分别达40.12%、45.3%;S期细胞分别为39.53%、53.46%,明显高于其他组(P＜0.01);(2)L-02细胞的形态改变、细胞增殖抑制、细胞凋亡率明显强于HepG2细胞(P＜0.05).结论 半乳糖白蛋白磁性阿霉素纳米粒在交变磁场介导下,对HepG2和L-02细胞产生热化疗协同增效的作用.
作者：贺连香；张阳德；何剪太 刊期： 2008年第03期
本研究旨在观察黄体酮对TBI后小肠黏膜结构和细胞凋亡的影响,同时观察黄体酮对TBI后肠道炎症因子的调控作用[1].
作者：陈罡；杭春华；史继新；王汉东；王沪旭；印红霞 刊期： 2008年第03期
目的 探讨表皮细胞体外去分化模型的建立方法.方法 人表皮角质形成细胞(HEK)体外培养至24代,细胞体积膨大,形态发生明显改变.碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导48 h后,观察细胞贴壁培养4、12、24、48、72 h时的生长及集落形成情况.以同期培养的表皮细胞作为阴性对照,采用免疫组织化学的方法检测实验组及对照组,β1整合素、CK19、CK14、CK10在表皮细胞中的表达差异;流式细胞仪测定细胞周期的改变.结果 bFGF诱导培养48 h后老化的表皮细胞周围分散出现幼稚型细胞,这些细胞体积小,形态均一,折光性强,核浆比大,并呈克隆样生长.免疫组织化学染色结果显示,bFGF诱导培养后,表皮细胞中CK19、CK14表达增强,而CK10表达减弱.流式结果显示:bFGF诱导培养后,细胞周期中G0/G1的细胞为53.08%,S期细胞为32.71%,G2期细胞为14.21%,而对照组中处于G0/G1、S期及G2期的细胞分别为63.9%、18.98%及17.12%.结论 bFGF能够在体外诱导表皮细胞逆转分化形成幼稚型克隆形成细胞,具体机制需要进一步深入研究.
作者：英兰；孙晓艳；付小兵；崔明玉；刘文忠；伊海英；高瑗 刊期： 2008年第03期
目的 通过检测原癌基因Bmi-1在神经母细胞瘤(NB)中的表达以及观察其表达水平对神经母细胞瘤的影响,探讨其在神经母细胞瘤中的作用.方法 用免疫组织化学和免疫印迹法检测方法分别检测人神经母细胞瘤标本和神经母细胞瘤细胞系细胞中Bmi-1的表达情况;采用逆转录病毒转染法将目的基因Bmi-1/si转染至Ⅰ型神经母细胞瘤细胞系BE-2-C细胞,通过Western免疫印迹法监测转染效果,并用软琼脂实验观察转染后的BE-2-C克隆形成能力.结果 在32例人神经母细胞瘤标本中29例有Bmi-1的高表达(90.63%),且Bmi-1的表达程度的高低和NB的临床分期和临床预后密切相关(P＜0.05),Western免疫印迹实验也显示9种不同病理类型的神经母细胞瘤细胞系细胞中均有Bmi-1的高表达,其表达水平和病理类型有密切相关.在软琼脂实验中,与对照组(空白载体转染组)比较,Bmi-1/si转染后的BE-2-C细胞所形成的克隆数目不仅显著减少,克隆也明显变小.结论 Bmi-1在神经母细胞瘤中高表达,其表达水平与肿瘤恶性程度密切相关,它在神经母细胞瘤的形成中起重要作用.
作者：夏远鹏；周昱男；胡波 刊期： 2008年第03期
目的 制备载碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)甲基丙烯酸缩水甘油酯修饰葡聚糖纳米凝胶微球,观察其对新生血管生成的诱导和促进作用.方法 采用改良乳液聚合法制备载bFGF纳米微球(bFGF-Dex-GMA-NPs),对纳米微球的外形、包封率、体外释药特征进行常规检测,建立兔后肢缺血模型后,分为以下几组(每组6只):安慰剂治疗组(注射磷酸盐缓冲液)(A组);bFGF治疗组(B组);载bFGF纳米微球组(C组),分别于治疗后7、21 d用99mTc标记的sestamibi对后肢血流进行分析,并于21 d将动物处死,取局部肌肉组织切片进行免疫组织化学染色,镜下对毛细血管计数.结果 合成的纳米微球外形圆整,无相互粘连,包封率高达80.9%,并能较好地控制bFGF的释放,持续释放时间超过25 d.后肢缺血模型治疗第7天,B组和C组能量计数分别为(130.95±14.59)、(127.60±11.36),明显高于A组(27.65±6.82)(P＜0.05),但B组和C组间差异无统计学意义(P＞0.05),第21天,C组能量计数增加到(450.69±21.06),明显高于A组(39.89±8.45)和B组(165.34±15.88)(P＜0.05).免疫组织化学染色结果显示C组毛细血管密度是(99.00±5.44)/mm2,明显高于其他两组2.00±0.59(A组)、13.00±1.35(B组)(P＜0.05).结论 载bFGF纳米微球可以控制bFGF长时间释放,对缺血组织新生血管形成有优于单纯bFGF的诱导和促进作用.
作者：邬晓臣；顾春虎；王云雅；吴红；魏旭峰；孙国成；汪静；董小超；易定华 刊期： 2008年第03期
我们通过体外细胞实验,探讨LY294002特异性靶向抑制胃癌细胞PI3K活性,抑制增殖、诱导凋亡的作用及可能机制.
作者：黄昌明；石松长 刊期： 2008年第03期
目的 观察胶原蛋白-硫酸肝素生物支架的生物相容性,为其应用提供生物学依据.方法 以冷冻干燥法制备胶原蛋白-硫酸肝素生物支架,将支架埋植入大鼠体内,观察大鼠炎症、肝肾功能、免疫反应及支架体内降解情况.结果 实验组大鼠血清WBC、CRP、肝肾功能、体液免疫反应与对照组比较,差异无统计学意义;伤口愈合良好;支架在大鼠体内有所吸收.结论 胶原蛋白-硫酸肝素生物支架具有良好的生物相容性,可作为神经组织工程支架材料.
作者：唐洲平；陈兴泳；谢雪微；孟祥武；唐荣华；于加省；陈劲草；朱遂强；王伟 刊期： 2008年第03期
目的 观察不同的微环境对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)体外分化成为产胰岛素细胞(IPCs)的影响.方法 采用贴壁法分离纯化大鼠MSCs,用不同的微环境进行诱导,对照组诱导剂为含有角朊细胞生长因子、ITS、尼克酰胺的无血清DMEM/F12培养基、实验组在对照组基础上添加胰腺条件培养液;对诱导后细胞进行光、电镜观察,双硫腙和免疫细胞化学进行鉴定,并进行体外葡萄糖刺激实验,测定细胞分泌胰岛素及C-肽功能.结果 实验组及对照组均可诱导分化为IPCs,但实验组分化而成的IPCs在数量及功能上均高于对照组.结论 大鼠胰腺提取物模拟的微环境能促进大鼠MSCs体外诱导分化为较高质量的IPCs.
作者：黄盛；郑伟；范志勇；张福琴；窦科峰；宋振顺 刊期： 2008年第03期
干细胞治疗1型糖尿病(type 1 diabetes,T1D)是近年来研究的热点领域之一.利用干细胞来产生胰岛素生成细胞可用于移植,通过基因修饰造血干细胞来防治T1D.
作者：吕平；刘芳；闫雷；彭涛；刘涛；姚忠；王春友 刊期： 2008年第03期
本研究旨在探讨GCS在HCC组织中的表达及与多药耐药的关系[1].一、材料与方法1.一般资料:收集2005年1月至2006年3月我院手术切除的HCC组织标本49例.
作者：熊茂明；陆震；李贺；孟翔凌；耿小平 刊期： 2008年第03期
目的 观察脂多糖(LPS)体外作用于大鼠肝星状细胞(HSC)时肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和结缔组织生长因子(CTGF)表达变化,探讨TNF-α对LPS诱导的HSC中CTGF表达的影响.方法 用一步密度梯度离心法分离大鼠HSC,体外培养LPS处理HSC,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测不同LPS浓度处理的HSC CTGF mRNA表达水平,并用ELISA双抗体夹心法测定TNF-α浓度.结果 TNF-α水平随LPS浓度增加而增加,LPS可上调CTGF mRNA的表达,TNF-α浓度及CTGF mRNA表达水平呈一定的平行关系.结论 LPS可上调HSC中CTGF mRNA表达,该过程可能是通过TNF-α介导的.
作者：贾晋斌；谷峰；刘燕；陈尉华；刘梅；王敏；宋华妮；陆伦根 刊期： 2008年第03期
目的 观察中国人肠道产甲酸草酸杆菌(Ox.F)草酰辅酶A脱羧酶基因(oxc)的分离、克隆及其在293细胞中的表达.方法 提取中国人肠道Ox.F的基因组DNA,PCR扩增oxc基因片段并克隆入真核表达载体pEGFP-C1,通过限制性内切酶酶切电泳和测序鉴定基因片段.将重组质粒脂质体转染至293细胞,利用RT-PCR和Western blot分别从mRNA和蛋白水平检测oxc基因在真核细胞中的表达.结果 中国人肠道产甲酸草酸杆菌oxc基因全长1707 bp,与Gene Bank中的序列比较,碱基序列的同源性为93.61%,氨基酸残基序列的同源性为97.18%.重组质粒转染293细胞后24～48 h,可观察到明亮的绿色荧光,从mRNA和蛋白水平上可以检测到oxc基因在真核细胞中的表达.结论 中国人肠道产甲酸草酸杆菌中可以分离出oxc基因;中国人肠道产甲酸草酸杆菌oxc基因存在一定的变异;oxc基因可在真核细胞293细胞中表达.
作者：叶章群；孔德波；陈志强；郭辉；杨为民；姚林方；刘冠琳 刊期： 2008年第03期
目的 探讨肝癌细胞转移潜能与凋亡敏感性之间的关系.方法 观察不同转移潜能的肝癌细胞株在肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及依托泊苷(Etoposide)的作用下的凋亡发生率及Caspase3的活化,Western blot检测bcl-2及IAP家族蛋白在不同转移潜能肝癌细胞株中的表达.结果 TNF-α(10μg/L)作用后48 h,高转移潜能肝癌细胞株HCCLM3及转移能力弱的肝癌细胞株SMMC-7721的凋亡率分别为(91.3±6.5)%及(58.8±2.3)%,MHCC97L细胞的凋亡率则位于两者之间(P≤0.01).Etoposide(250 μmol/L)作用后48 h,HCCLM3、MHCC97L及SMMC-772的凋亡发生率分别为(27.0±4.0)%、(34.6±3.8)%及(84.5±1.1)%(P≤0.01).3种细胞株中Caspase3的活性也有明显差异.bcl-2及IAP家族蛋白表达研究中发现XIAP的表达与肝癌细胞的转移潜能成梯度相关.结论 高转移潜能肝癌细胞株耐受多种凋亡刺激,可能与XIAP的过度表达相关.
作者：史颖弘；樊嘉；周俭；邱双健；汤钊猷 刊期： 2008年第03期
目的 构建galeetin-9基因不同亚型的真核表达载体,观察galectin-9对结肠癌LoVo细胞体外黏附侵袭能力的影响.方法 构建galectin-9基因不同亚型的真核表达载体后,用脂质体法转染结肠癌LoVo细胞,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法验证转染效果.LoVo细胞分别在转染galectin-9、转染galectin-9+抗体(5 mg/L)和转染galectin-9+β-L糖(30 mmol/L)条件下进行体外细胞-基质黏附实验和体外细胞侵袭实验.结果 测序结果证实载体上插入的galectin-9三种剪接体碱基序列正确,同时载体成功转染LoVo细胞.体外细胞-基质黏附实验中,转染空载体,转染galectin-9L,galectin-9M和galectin-9S组平均吸光度分别为:0.74±0.04、1.14±0.12、1.12±0.10和1.15±0.13,表明galectin-9促进LoVo细胞黏附于细胞外基质(P＜0.05).galectin-9抗体和β-乳糖可抑制该作用,但转染galectin-9L和galectin-9S LoVo细胞的黏附作用受β-乳糖抑制更明显(P＜0.05).体外侵袭实验未发现galectin-9对LoVo细胞侵袭力有影响.结论 galectin-9促进LoVo细胞与细胞外基质的黏附,这可能与结肠癌侵袭转移相关,但其三种亚型发挥作用的机制不全相同.
作者：张丰；郑民华；彭远飞；陆爱国；李健文；王明亮 刊期： 2008年第03期
目的 研究人巨细胞病毒(HCMV)感染对人胚肺成纤维(HEL)细胞分泌趋化因子:白细胞介素-8(IL-8)及正常T细胞表达和分泌,受活化调节的蛋白(RANTES)的影响及意义.方法 用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测IL-8 mRNA和RANTES mRNA的表达,用双抗体夹心ELISA法测定IL-8和RANTES蛋白的分泌.结果 HEL细胞感染HCMV后,IL-8无论从mRNA水平或蛋白质水平,均随感染时间的延长,表达逐渐增加,至感染后72 h,IL-8 mRNA约为对照组的12倍,IL-8蛋白约为对照组的9倍.感染后8 h可测出RANTES mRNA,24 h达到高峰,其后虽有所下降,但仍维持较高水平;RANTES蛋白的分泌在感染后24 h达到高峰,随后急剧下降,至72 h基本无表达.结论 HCMV感染HEL细胞后,诱导IL-8基因转录及IL-8蛋白分泌增加,从而趋化中性粒细胞至感染部位,并促进中性粒细胞的移行而传播病毒.HCMV可通过模拟β族趋化因子受体而下调细胞外RANTES蛋白的分泌,逃避感染时的局部免疫应答.
作者：程敏；闻良珍；凌霞珍；张英民 刊期： 2008年第03期
中华实验外科杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中华医学会
