学术投稿

大鼠FXYD5基因的克隆及重组腺病毒载体的构建

李小旺;方飞;施翔翔;黄晓燕;张怀勤;杨德业

关键词:FXYD5, 腺病毒, 基因
摘要:目的:克隆大鼠离子通道相关蛋白(FXYD5)基因全长cDNA,构建携带FXYD5基因的重组腺病毒裁体,为进一步研究其在自发性高血压大鼠(SHR)中的功能作准备.方法:采用cDNA末端快速扩增的方法获得全长cDNA,并插入到载体pGEM-T Easy中测序分析.将FXYD5基因cDNA克隆至穿梭载体pAdTrack-CMV中,随后在BJ5183细茵中与骨架载体AdEasy-1同源重组.筛选阳性克隆,酶切、测序鉴定正确后,重组载体磷酸钙-DNA共沉淀法转染AD293细胞,获得携带FZYD5基因的重组腺病毒.结果:大鼠FXYD5基因全长cDNA被成功地克隆;FXYD5重组腺病毒载体被成功地构建.结论:运用细菌内同源重组的方法可以在大肠杆茵中快速高效地构建腺病毒载体;FXYD5重组腺病毒载体的成功构建为探讨FXYD5的生物学功能奠定了基础.
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    目的:探讨反复高热惊厥(febrile seizure,FS)是否能引起发育期大鼠脑损伤.方法:51只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(NC组,n=14)、高热对照组(HC组,n=19)及高热惊厥组(FS组,n=18).水浴法建立FS模型,每日诱导2次,共10次.采用HE染色观察FS大鼠海马神经元病理形态,TUNEL染色观察神经元凋亡,电镜观察海马CA1区神经元、突触、穗鞘、胶质细胞、缝隙连接、毛细血管等超微结构变化.结果:HE染色可见FS组海马神经元发生变性和坏死.TUNEL染色可见FS组凋亡指数明显增高.电镜观察可见FS组神经元出现胞膜皱缩,细胞体积缩小,胞浆密度增加,核膜内陷,胞核深染;线粒体肿胀、脊断裂甚至空泡化,粗面内质网、游离核糖体肿胀,密度低;突触间隙增宽;髓鞘松解;胶质细胞水肿;毛细血管周围水肿.结论:频繁的FS发作可导致发育期大鼠海马神经元损伤.

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  • 幽门螺旋杆菌对常见治疗药物的敏感性试验

    目的:了解幽门螺旋杆菌(H.pylori)对不同种抗茵药物的耐药情况.方法:采用Kirby-Bauer法(以下简称K-B法)对92例H.pylori菌进行抗茵药物敏感实验.结果:H.pylori对甲硝唑敏感率达91.3%,对克拉霉素达92.3%,对阿莫西林达99.0%,对呋喃唑酮达99.0%,对阿奇霉素达95.6%,对左氧氟沙星达100%.结论:甲硝唑、克拉霉素、阿莫西林仍是治疗H.pylori的首选药物,当以上药物耐药时,可以选用左氧氟沙星、呋喃唑酮、阿奇霉素来代替.

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    作者:徐昌隆;郑君杰;薛战雄;黄智铭 刊期: 2008年第04期

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    目的:探讨胃癌组织感染穿通支原体(Hpe)后其超微病理形态学特征.方法:对53例胃癌患者的血液和肿瘤组织进行Mpe分离培养与鉴定,并取5例Mpe检出阳性胃癌患者的肿瘤组织以及5例Mpe阴性胃癌患者的肿瘤组织在电镜下进行观察比较.结果:53例胃癌患者中17例检出阳性(32.1%,17/53),与非肿瘤对照组(1.6%,1/64)比较,差异有显著性(P<0.01).发现Mpe检出阳性胃癌组织出现不同程度的病理改变,表现为部分癌细胞间连接稀疏,细胞膜溶解缺损,线枉体空泡变性,内质网扩张,少数细胞溶解坏死,而凋亡现象减少;在Mpe检出阴性的胃癌患者的肿瘤组织中未能见到Mpe颗粒,见肿瘤细胞正常凋亡.结论:胃癌患者中穿通支原体检出率显著增高,穿通支原体阳性肿瘤组织电镜下见溶解坏死.

    作者:黄颖鹏;方周溪;黄金伟;周丽萍;蓝升红;温秀姝 刊期: 2008年第04期

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    所谓教考分离,是指对课程的授课环节与考试环节实施分离的教考机制.目前大很多高校还是实行任课教师自己教学、自己命题、自己阅卷的传统模式,这种考试具有比较大的主观性、随意性.必须制定统一的考试标准,使考试模式统一化、标准化,以监控与提高教学质量.

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  • 大鼠FXYD5基因的克隆及重组腺病毒载体的构建

    目的:克隆大鼠离子通道相关蛋白(FXYD5)基因全长cDNA,构建携带FXYD5基因的重组腺病毒裁体,为进一步研究其在自发性高血压大鼠(SHR)中的功能作准备.方法:采用cDNA末端快速扩增的方法获得全长cDNA,并插入到载体pGEM-T Easy中测序分析.将FXYD5基因cDNA克隆至穿梭载体pAdTrack-CMV中,随后在BJ5183细茵中与骨架载体AdEasy-1同源重组.筛选阳性克隆,酶切、测序鉴定正确后,重组载体磷酸钙-DNA共沉淀法转染AD293细胞,获得携带FZYD5基因的重组腺病毒.结果:大鼠FXYD5基因全长cDNA被成功地克隆;FXYD5重组腺病毒载体被成功地构建.结论:运用细菌内同源重组的方法可以在大肠杆茵中快速高效地构建腺病毒载体;FXYD5重组腺病毒载体的成功构建为探讨FXYD5的生物学功能奠定了基础.

    作者:李小旺;方飞;施翔翔;黄晓燕;张怀勤;杨德业 刊期: 2008年第04期

  • 中频电流治疗腕管综合征1例

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    作者:倪佩琦;董海欣;王汛;邵蓓 刊期: 2008年第04期

  • 苦瓜蛋白对H22细胞增殖抑制作用的实验研究

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    作者:叶爱芳;尹丽慧;熊术道;吴建波 刊期: 2008年第04期

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    目的:探讨初筛为Rh(D)阴性样本中弱D、Del的检测及临床意义.方法:采用常规血清学方法初筛Rh(D)血型,用微柱凝胶抗人球蛋白试验检测弱D,用吸收放散试验检测Del,用PCR-SSP法检测样本RhD基因8个外显子结构.结果:常规血清学初筛Rh(D)阴性60例中经微柱凝胶抗人球蛋白试验确认为弱D4例,占6.67%;56例Rh(D)阴性标本经吸收放散试验后确认13例为Del,占21.67%;对其中2例弱D和5例Del标本的D基因8个外显子检测都完整存在,排除了弱D、Del的10例Rh(D)阴性标本其基因检测有完全缺失和部分缺失两种可能.结论:为了临床输血安全,常规血清学检测Rh(D)阴性者,应当再用抗人球蛋白试验或吸收放散试验检测是否为弱D或Del.

    作者:林甲进;朱碎永;白植地 刊期: 2008年第04期

  • 脑Ⅱ级弥漫性星形细胞瘤MR、病理和超微结构

    目的:研究脑Ⅱ级弥漫性星形细胞瘤的病理和MR特点.方法:回顾性分析45例该类肿瘤的影像学和病理资料.结果:Ⅱ级弥漫性星形细胞瘤具有相对特异的MR特点:病变多同时累及多个脑叶,均为弥漫性生长,没有明确肿块形成,T1WI像表现为不均匀或均匀的低、等信号,T2WI表现为均匀或不均匀的高信号,病变一般没有强化,部分病例可见到结节状或斑点状的强化.典型的病理改变是:肿瘤呈弥漫性生长,在疏松基质中由分化好的纤维型或肥胖型星形细胞组成,细胞结构轻度增加,细胞核不具有典型的恶性肿瘤细胞特征,电镜下可见胶质纤维异常和毛细血管超微结构的改变.结论:这类肿瘤的生长方式表现为弥漫性,具备恶性特征,但细胞分化较好,临床预后较好;其MR表现为良性特征;容易误诊.

    作者:陈昆明;李剑敏;方周溪 刊期: 2008年第04期

  • 黄芪地黄汤对小儿过敏性紫癜肾炎的治疗作用

    目的:观察黄芪地黄汤治疗小儿过敏性紫癜肾炎(HSPS)的临床疗效和治疗前后患儿血清对大鼠肾小球系膜细胞(rGMC)增殖的影响及IL-6、TNF-α水平变化.方法:收集HSPN 80例,随机分成两组,西医组40例,中西医结合组40例(西医组用药基础上加用黄芪地黄汤),并建立正常儿童对照组30例.用药组治疗疗程均为3个月.疗程结束后,观察患儿缓解半并测定患儿血清IL-6、TNF-α水平,观察治疗前后患儿血清对rGMC增殖的影响.结果:治疗前,西医组、中西医结合组的IL-6、TNF-α水平与正常儿童对照组比较均明显上升(P<0.05或P<0.01).3个月疗程后,中西医结合组总缓解率为87.5%,西医组疗效总缓解率为60%,二组差异有显著性(P<0.05);中西医结合组IL-6水平基本降至正常,与正常对照组相比差异无显著性(P>0.05),TNF-α水平有下降,西医组IL-6及TNF-α水平仅略有下降,与正常对照组相比差异有显著性(P<0.05及P<0.01).与正常对照组血清体外培养rGMC的OD值相比,治疗前西医组、中西医结合组均有增高(P<0.05),治疗后中西医结合组无差别,而西医组差异有显著性(P<0.05).结论:中西医结合治疗可更有效地下调IL-6、TNF-α水平,减少系膜细胞增殖,黄芪地黄汤的疗效可能与减轻系膜细胞增殖有关.

    作者:林瑞霞;杨青;陈敏广;庄捷秋;陈晓英 刊期: 2008年第04期

  • 不同剂量胶原酶Ⅳ尾壳核内注射建立重度出血性脑卒中大鼠模型

    目的:通过胶原酶Ⅳ尾壳核内注射,探索建立一种稳定的重度出血性脑卒中大鼠模型.方法:45只SD大鼠随机分配到Ⅳ型胶原酶注射0.5 U组(A组,15只)、0.75 U组(B组,15只)及1.0 U组(C组,15只).制作脑出血模型后24 h、72 h,对大鼠进行神经功能学评分,检测肢体功能缺损情况.通过多媒体病理图像分析仪测定脑血肿体积大小,并通过HE染色观察组织病理学变化.结果:除A组1例外其余大鼠均形成明显血肿,C组形成血肿体积大.3组大鼠均出现不同程度的神经功能缺损,以C组脑出血术后72h明显.但C组术后72 h病死率达73.33%,明显高于其他两组.24 h、72 h神经功能评分及血肿体积在A、B、C 3组间作两两比较差异均有显著性(P<0.01).脑血肿区组织病理学观察表现为典型的脑出血改变.结论:0.75 U Ⅳ型胶原酶尾壳核内注射可以诱导建立稳定的重度出血性脑卒中大鼠模型,该模型肢体功能缺损明显,存活率高,能作为促进出血性脑卒中大鼠神经功能恢复研究的可靠应用平台.

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  • 主体性德育理论与高校和谐校园建设

    构建社会主义和谐社会,是我党从全面建设小康社会、开创中国特色社会主义的全局出发提出的一项重大任务,给教育战线提出了新的要求.建设和谐校园是构建社会主义和谐社会的需要,是落实科学发展观在高校中的具体体现,对高校的发展具有重要的指导意义,同时也为高校德育工作提供了新的维度和思路.

    作者:吕一军;张玮 刊期: 2008年第04期

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    作者:陈锡文;吴晓烨;方周溪;陈国荣 刊期: 2008年第04期

温州医科大学学报杂志

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