学术投稿

紫外线照射日本血吸虫尾蚴疫苗保护性抗原的筛选

侯红斌;李雍龙

关键词:日本血吸虫, 紫外线, SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳, 免疫印渍
摘要:目的分析经紫外线照射处理后日本血吸虫尾蚴蛋白的差异性表达,并从中筛选出有效的保护性抗原组分.方法收集尾蚴,制备抗原,进行SDS-PAGE电泳后,转印至硝酸纤维素膜上,与照射尾蚴免疫血清和正常感染血清分别进行免疫印渍(Western blot)试验,比较两者反应条带的差异性,筛选出惟有免疫血清所能识别的特有的抗原组分,并测定其分子量.结果在童虫抗原中发现一条能被免疫血清所识别的特异性抗原条带,并测得其分子量为75kDa.结论紫外线照射致弱尾蚴可诱导宿主产生特异性抗体,被该抗体所识别的抗原分子量为75kDa.
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    作者:高宪成 刊期: 2003年第02期

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    作者:陈银石 刊期: 2003年第02期

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    目的了解贯众(Dryopteris crossirhizomz)不同提取液对革兰氏阳性球菌的抑菌作用.方法分别用水以及3种不同pH值的70%乙醇为溶媒提取贯众干品以制备贯众提取液,利用打孔法和试管稀释法测定提取液对13种微生物的抑制效果.结果每1ml含生药1g的贯众醇提液、水提液对革兰氏阳性菌有较强的抑制作用,尤其是革兰氏阳性球菌如金黄色葡萄球菌和甲型溶血性链球菌等.对革兰氏阴性菌和真菌的抑制作用较弱,但对普通变形杆菌则有较强的抑制作用.不同pH值的抽提溶剂对药物的有效抑菌成份的提出效果不同,抽提溶剂pH越小,有效成份的提出效果越好.结论贯众醇提液、水提液对革兰氏阳性菌有较强的抑制作用,尤其是对革兰氏阳性球菌,而对革兰氏阴性菌和真菌的抑制作用则较弱.贯众的抗菌成份易溶于水,抽提效果随pH减小而增加.

    作者:罗海华;潘实清;刘长秀;周红;龙启才;周金美 刊期: 2003年第02期

  • 恶性疟原虫海南株线粒体复合体Ⅱ辅基铁-硫蛋白基因克隆及序列分析

    目的构建恶性疟原虫海南株线粒体复合体Ⅱ琥珀酸-泛醌还原酶辅基铁-硫蛋白(iron-sulfur protein,Ip)基因原核表达质粒pET28α-Ip,测定Ip基因序列,为研究铁-硫蛋白基因功能奠定基础.方法采用PCR技术从恶性疟原虫海南株基因组DNA中扩增出Ip基因,扩增产物经纯化后,用BamHI+XhoI双酶切,定向克隆人pET28α质粒,转化大肠杆菌DH5α,再用BamHI+XhoI酶切及PCR扩增对重组子进行鉴定.用Sanger双脱氧链终止法进行DNA序列测定,并进行同源性比较.结果筛选出编码海南株Ip基因的原核表达质粒pET28α-Ip,海南株Ip基因序列与K1、3D7株高度同源.结论pET28α-Ip重组质粒的构建,为进一步研究铁-硫蛋白基因奠定基础.

    作者:马长玲;余新炳;单志新;吴忠道;徐劲 刊期: 2003年第02期

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  • 抗腮腺炎病毒抗体Fab段基因的克隆及重组表达载体的构建

    目的构建抗腮腺炎病毒抗体Fab段基因重组表达载体.方法从腮腺炎患者和腮腺炎抗体IgG阳性正常人群的淋巴细胞中提取总RNA,逆转录成cDNA.用相应的引物进行PCR,扩增出轻链和重链Fd段基因,经酶切后分别和噬粒载体pComb3连接,再经电穿孔转化大肠杆菌XL1-blue菌株,将轻链和重链Fd基因先后克隆入pComb3中.结果从分离出的淋巴细胞中共提取高质量RNA约110μg,经逆转录、PCR,分别扩增出约700bD大小的κ、λ和Fd基因.PCR产物和载体经纯化、双酶切后进行连接,在2.5kv,200Ω,25μF的条件下电转化,终转化率为:2.48×107.随机挑取电转化后的10个菌落,经PCR鉴定,共有5个克隆同时含有轻链和重链Fd基因,抗体Fab的重组率为50%.结论获得的抗体Fab重组表达载体是高效、实用的,为下一步构建抗腮腺炎病毒噬菌体抗体库打下基础.

    作者:俞慕华;黄文繁;姜立民;黄锐敏;温群文;戴传文;叶友松 刊期: 2003年第02期

  • 布地奈德混悬液雾化吸入治疗肺炎型哮喘的临床分析

    目的探索布地奈德混悬液雾化吸入治疗儿童肺炎型哮喘的临床疗效.方法随机将60例肺炎型哮喘患儿分为两组,在综合治疗的基础上,观察组30例,给予布地奈德混悬液,加用沙丁胺醇、溴化异丙托品雾化液吸入治疗;对照组30例,给予口服强的松片,加用沙丁胺醇、溴化异丙托品雾化液吸入治疗.观察用药后患儿症状体征(呼吸困难、咳嗽、喘息、肺部喘鸣音及湿哕音)改善情况、消失天数及全身激素(静脉和口服)应用天数.结果用药后观察组患儿临床症状体征改善分数明显优于对照组(P<0.05);观察组临床症状消失天数及全身激素应用天数明显短于对照组(P<0.05).结论布地奈德混悬液雾化吸入治疗儿童肺炎型哮喘临床疗效肯定,可缩短病程,减少全身激素用量.

    作者:滕丽珍;鞠忠玲;许志红 刊期: 2003年第02期

  • Epstein-Barr病毒LMP1蛋白羧基端的克隆与原核表达

    目的构建PGEX-6P-3-CCT原核表达载体,获得大量纯化的LMP1羧基端蛋白.方法通过RT-PCR技术从B95-8细胞中扩增EBVLMP1 CCT cDNA,克隆至PGEM-T easy载体上并测序.利用引物上的BamH I与EcoRI酶切位点将CCT基因插入PGEX-6P-3,转化大肠杆菌BL21,限制性内切酶消化鉴定.IPTG诱导重组菌株表达,用SDS-PAGE与Western blot对表达产物进行鉴定,并用Sepharose 4B亲和层析柱对表达产物进行纯化,PreScissionProteas酶对融合蛋白进行解离.结果扩增的LMP1 CCT长度为597bp,测序结果与已知序列吻合.重组子经酶切鉴定,获得PGEX-6P-3-CCT原核表达菌株,Western blot表明重组蛋白能被LMP1单克隆抗体特异结合.获得约51kDa的PGEX-6P-3-CCT融合蛋白,分离纯化出约21kDa的LMP1 CCT蛋白.结论成功获得EBV LM1 CCT蛋白,为研究LMP1致瘤机制,研制生物抗癌药物奠定基础.

    作者:张雪雁;汤郡;杨英;马桂璋 刊期: 2003年第02期

  • 大鼠寡霉素敏感相关蛋白(OSCP)基因的体外扩增及克隆

    目的构建大鼠寡霉素敏感相关蛋白(OSCP)基因重组质粒.方法从雌性SD大鼠脑组织中提取总RNA,根据OSCP基因已知序列,设计合成1对引物,用PCR方法扩增编码0SCP的基因片段,插入pGEM-T easy质粒,转化大肠杆菌JM109感受态细胞,经酶切鉴定,而后进行测序.结果OSCP基因体外扩增产物大小为700bp,重组质粒经酶切鉴定表明获得正确重组子,测序结果与已知序列基本吻合.结论在国内初次克隆了大鼠0SCP基因,为下一步OSCP的表达及功能研究奠定了基础.

    作者:王海龙;庞敏;殷国荣;乔中东 刊期: 2003年第02期

  • 氧化苦参碱治疗肝病的研究进展

    氧化苦参碱具有抗病毒、免疫调节、保肝、抗炎、抗肝纤维化和抗肿瘤作用,本文对其治疗肝病的作用机理和临床应用作一概述.

    作者:李常青;李小翚 刊期: 2003年第02期

  • 逆转录病毒载体介导HBV前C/C反义RNA的体外抗HBV作用

    目的了解反义乙型肝炎病毒(HBV)基因转移、表达的抗HBV作用.方法BamHI酶切HBV质粒获取1504bp前C/C基因片段,将其正、反向插入逆转录病毒载体pDOR构建了正、反义前C/C重组体.将重组体转染逆转录病毒包装细胞PA317,G418筛选获取抗性细胞及假逆转录病毒.RT-PCR检测了反义HBV基因表达的反义RNA.将重组假逆转录病毒感染2.2.15细胞,ELISA及斑点杂交法分别检测被感染细胞培养上清中HBsAg、HBeAg及HBV DNA.结果反义前C/C重组逆转录病毒载体在细胞内能转录HBV反义RNA.反义前C/C重组假病毒感染的2.2.15细胞HBsAg、HBeAg的合成分别降低了55.5%、78%;HBV DNA水平也明显低于空白对照组.该抑制具有一定特异性.增加假病毒感染次数在一定范围内能提高抑制作用.正义假逆转录病毒感染对2.2.15细胞HBV DNA水平及抗原合成无影响.结论逆转录病毒载体介导反义HBV基因转移表达的反义RNA能抑制HBV复制及抗原合成,具有潜在应用价值.

    作者:杨林;姚集鲁;林丙亮;李刚;卢建溪;刘淑芳 刊期: 2003年第02期

  • 大力开展浙江省结核病控制项目的体会

    目的了解瑞安市大力开展浙江省结核病控制项目,切实有效地预防与控制结核病的传播与流行.方法根据<浙江省结核病控制项目实施方案>的精神,特制订<瑞安市结核病控制项目实施细则>.结果(1)明确项目组织与分工,具体实施市疾控中心对本市贫困肺结核病人抗结核药品及辅助检查费的减、免审核批准,负责全市结核病防治业务的归口管理,落实肺结核病的诊断、治疗、管理及有关技术规范.(2)通过项目宣传及培训,促使医疗单位对病员报告及转诊管理,提高了结防督导员的业务水平和归口管理能力.(3)通过项目督导和督查,提高了肺结核病人的管理率、规则治疗率,且使门诊肺结核病人诊治数大大增加,2001年门诊初诊数为654例,菌阳数124例;2002年同期达到1200例,菌阳数238例.结论结防工作中也反映出我市基层防保队伍力量和人员素质低下,多数医疗单位不重视归口管理工作,痰检阳性率低,为此,完善督导机制,加强随访,努力提高菌阳检出率是非常迫切和必要的.

    作者:郑玉明 刊期: 2003年第02期

  • 门脉高压症术后围手术期死亡原因分析

    目的探讨门脉高压症术后围手术期死亡原因,探讨防治措施.方法回顾分析160例肝炎肝硬化门脉高压症手术病人围手术期资料.结果围手术期死亡10例均为术后发生肝肾综合征所致.结论肝肾综合征的发生与手术前、后肝功能状况有关,尤其受到术后肝功能状况恶化的直接影响.术后肝肾综合征涉及手术创伤、术后腹水、发热、感染合并症,既往除肝硬化之外的其他疾病等因素.术前进行积极、有效的护肝和支持治疗后,在肝功能处于Child's A级水平时进行手术,可以预防和减少术后肝肾综合征.

    作者:邝伟明;张辉;胡石奇 刊期: 2003年第02期

  • 多发性硬化19例临床分析

    目的通过分析19例多发性硬化的临床表现及诊断,加深本地区对多发性硬化知识的提高,减少误篌诊、提出诊断该病的几个值得注意的问题.方法对19例多发性硬化病例临床表现及诊断进行回顾分析.结果多发性硬化临床表现复杂、发病快慢不一,病程长短不一,单靠临床表现诊断较为困难,结合脑脊液、免疫学、CT、MRI检查可提高该病的确诊率.结论多发性硬化临床表现复杂,易误诊,结合脑脊液、免疫学、CT、MRI等影像学检查可提高该病的确诊率.

    作者:梁可珍;黄燕 刊期: 2003年第02期

  • 幼儿接种国产酵母重组乙肝疫苗免疫效果观察

    目的观察幼儿接种国产酵母重组乙肝疫苗的免疫持久性效果.方法应用国产酵母重组乙肝疫苗按0、1、6免疫程序对幼儿进行5年免疫效果观察.HBsAg、抗-HBs和抗-HBc的检测用RIA法.结果接种的幼儿中未发现严重副反应者;免后7个月抗体阳转率达94.64%,抗体GMT231miu/ml,5年抗体阳转率达78.16%,抗体GMT54 miu/ml.结论国产酵母重组乙肝疫苗安全性好,抗体峰值高,维持时间长.

    作者:陈瑄;符感申 刊期: 2003年第02期

  • 浅谈医学院校寄生虫学教学改革

    对医学院校寄生虫学教学的改革,认为要从以下四方面入手:更新教育观念;改革教学内容;改革教学方法与手段,加强教学信息的沟通;重视动手能力和创新能力的培养.

    作者:翁培兰 刊期: 2003年第02期

  • L-精氨酸对热应激小鼠胸腺T细胞亚群的影响

    目的探导补充L-精氨酸对高温应激小鼠胸腺T淋巴细胞亚群及免疫器官重量的影响.方法将NIH小鼠随机分组,灌胃给予精氨酸14d后,将热应激组动物放入(41±0.5)℃高温仓中热暴露120min后间隔2h处死,测量各组小鼠胸腺、脾脏指数,应用流式细胞术分析CD3、CD4、CD8亚群的变化.结果补充L-精氨酸的各组小鼠胸腺指数、脾脏指数和CD3、CD4细胞百分比、CD4/CD8细胞比值均高于常温对照组及热应激对照组.结论热应激后小鼠免疫功能受抑制,补充适量L-精氨酸可减轻热应激小鼠胸腺和脾脏的急性萎缩,增加热应激小鼠T细胞亚群数量及辅助性和抑制性T细胞的比例.

    作者:曾静;罗海吉;张勇;卢晓翠 刊期: 2003年第02期

  • 热区抗洪抢险部队发病规律研究

    目的分析热区抗洪抢险官兵常见疾病种类和发病时间分布规律,为未来抗洪卫勤保障和疾病防治提供依据.方法回顾调查了1061名抗洪官兵发病情况,结合相关历史资料进行分析.结果热区抗洪抢险常见疾病种类包括:皮肤病、上呼吸道感染、腹泻、中暑、外伤和红眼病;疾病发生随洪峰的出现、险情的增加成波状起伏;发病率陡升缓降,于第7~10天达到高峰,第12~15天后下降明显;各种疾病均有50%以上的病例出现在头10d.结论抗洪抢险发病趋势和洪峰、险情关系密切;抗洪早期尤其是头10d,是疾病预防和治疗的重点和难点时期,此阶段卫勤保障工作的成效决定整个抗洪抢险卫勤保障的成败.

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  • HCV核心蛋白片段的表达、纯化及免疫原性检测

    目的探讨HCV核心蛋白N端119aa片段表达产物的抗原性及用于抗-HCV抗体检测的可能性.方法把HCV C119-pET32a/BL21重组菌进行发酵表达,提取包涵体,并用阳离子柱进一步纯化目的蛋白.用Western blot及ELISA分析该融合蛋白的免疫特异性及敏感性.结果所表达的目的蛋白约占菌体总蛋白的20%,SDS-PAGE结果表明所纯化的目的蛋白纯度大于95%.Western blot及ELISA结果显示该融合蛋白具有良好的免疫特异性,所检测的47份临床HCV感染血清的阳性率为91.5%,而阴性对照及HBV感染血清则未见阳性结果.结论该HCV C119融合蛋白检测HCV感染患者血清具有良好的特异性和敏感性,可望用于HCV抗体检测试剂盒的研制.

    作者:吴娴波;陈白虹;卢建溪;吴英松;张彦明;王萍;董文其;李明 刊期: 2003年第02期

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