学术投稿

EBV-LMP1 cDNA的克隆测序与原核表达质粒构建

林勇平;吴淑华;杨英;汤郡;马桂璋

关键词:LMP1, cDNA, 克隆, 测序, 原核表达
摘要:目的克隆EBV-LMP1 cDNA,构建EBV-LMP1基因的原核表达重组质粒.方法通过RT-PCR技术从B95-8细胞中扩增EBV-LMP1 cDNA,克隆至pGEM-T easy载体上并测序;利用引物上的BamHⅠ与HindⅢ酶切位点将LMP1基因插入载体pET-32a,转化JM109菌.提取质粒,限制性内切酶消化,琼脂糖凝胶电泳鉴定.结果扩增的LMP1 cDNA长度为1158bp,测序结果与已知序列吻合,重组原核表达质粒经酶切鉴定表明获得正确重组子.结论成功克隆了EBV-LMP1 cDNA,并构建了pET-32a-LMP1原核表达载体,为研究LMP1在EBV致瘤中的作用及肿瘤疫苗奠定了基础.
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    作者:汤凌全;张小岚 刊期: 2002年第04期

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  • 广东鲂鱼苗体内华支睾吸虫囊蚴的感染

    目的检查广东鲂鱼华支睾吸虫囊蚴的感染情况.方法以常规消化沉淀法分离鱼体内囊蚴,镜检记数.结果 1条15g重的广东鲂鱼鱼苗体内检出华支睾吸虫囊蚴168个;每g鱼含囊蚴11.2个;鱼体内囊蚴大多数处于未成熟囊蚴状态.结论广东鲂鱼是华支睾吸虫的易感鱼类.

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    作者:秦睿玲;张西臣;田宗成;李建华 刊期: 2002年第04期

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    目的用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)方法准确地定量检测血清中的HBV-DNA数量和免疫指标,以指导临床.方法用FQ-PCR方法和酶联免疫吸附试验(ELISA)方法分别检测184份临床血清标本的HBV DNA和免疫指标.结果用(ELISA)作对照,经FQ-PCR检测,HBeAg(+)组(82份)的阳性率为100%,HBV-DNA阳性拷贝数范围在105~1010/ml;HBeAb(+)组(52份)的阳性率为55.8%,HBV-DNA阳性拷贝数范围在104~107/ml;HBsAb(+)组(20份)的阳性率为15%,HBV-DNA阳性拷贝数范围在104~105/ml;对照组(30份)的阳性率为0.HBeAg(+)组血清中HBV-DNA含量(107.2±1.13)显著高于HBeAb(+)组(105.8±1.4)和HBsAb(+)组(104.67±0.58).结论 FQ-PCR检测HBV-DNA具有较高的灵敏度和特异性,且能准确定量,FQ-PCR可以检测HBV的真实感染和复制情况,对乙型肝炎临床诊断,治疗及疗后观察有重要意义.

    作者:黄光秀;于兹德 刊期: 2002年第04期

  • 思美泰治疗老年性戊型肝炎临床疗效观察

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    目的测定铜绿假单胞菌对倍能等16种抗菌药物的耐药性.方法采用VITEK-32微生物自动分析仪测定236株铜绿假单胞菌的药敏,并对其中52株菌测定了对9种抗菌药物的低抑菌浓度(MIC). 结果铜绿假单胞菌对头孢曲松、头孢噻肟、庆大霉素和哌拉西林的耐药率均超过50%,对倍能和泰能的耐药率分别为7.7%和13.5%.结论倍能和泰能对铜绿假单胞菌的抗菌作用强,应作为治疗重症铜绿假单胞菌的首选用药.

    作者:苏林光;何远学;符健;贾杰;莫成锦;符慧群 刊期: 2002年第04期

  • 梅县1990~2001年甲型肝炎流行特征

    目的分析梅县1990~2001年甲型肝炎的流行规律,为制订预防控制甲肝的对策提供科学依据.方法对1990~2001年梅县发生的甲肝病例作回顾性分析.结果甲型肝炎的发病率自1993年以来呈逐年下降趋势,从1999年至现在更控制在3/10万以下;1990~1992年甲肝发病呈春夏季节性高峰,而1993~2001年季节分布不明显;男性发病高于女性(1.96∶1);1992年以10~15岁年龄段发病高,1995~2001年以30~40岁年龄段发病高;1992年以学生、农民、散居儿童发病为主,1995~2001年以农民、学生、工人发病为主.结论甲型肝炎发病分布特征的变化是以接种甲肝疫苗为主导的综合性防治措施的结果.提示今后应重点做好食源性及水源性甲肝暴发流行的预防控制及开展成年人接种甲肝疫苗.

    作者:邓友华;谢小强;黄建平 刊期: 2002年第04期

  • 弓形虫SAG1成熟蛋白编码区基因在甲醇酵母中的初步表达

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    作者:胡旭初;余新炳;徐劲;吴忠道;陈守义 刊期: 2002年第04期

  • 己烯雌酚对感染弓形虫孕鼠脾脏T细胞亚群的影响

    目的研究BALB/c妊娠小鼠感染弓形虫后脾脏T淋巴细胞亚群的变化及己烯雌酚(DES)对感染弓形虫孕鼠脾脏T细胞亚群的作用.方法使用一定剂量的DES处理感染弓形虫孕鼠,于不同妊娠时期将孕鼠处死,用放免法测定孕鼠血清雌二醇(E2)水平,流式细胞术检测脾脏T淋巴细胞亚群水平.结果与空白对照组相比,感染对照组的脾脏CD4+与CD8+T细胞水平于14、16、18d增高(P<0.05);CD4+/CD8+比值降低,16、18d有显著性(P<0.05).与感染对照组相比,DES处理组脾脏CD4+、CD8+T细胞降低(P<0.05),CD4+/CD8+比值明显增高(P<0.05).结论 DES对脾脏CD4+和CD8+T细胞亚群有抑制作用,尤其是对CD8+T细胞的抑制作用更大;提示脾脏CD4+和CD8+T细胞都有抗弓形虫感染的作用,且CD8+T细胞占主导.

    作者:殷国荣;杨亚波;单联喆;刘红丽;张杰;申金雁 刊期: 2002年第04期

  • 猪链球菌引起人猪共患病22例临床分析

    目的通过分析猪链球菌引起人猪共患病的临床特征,进一步预防和控制该病的发生.方法对22例猪链球菌引起的人猪共患病进行回顾性分析.结果 22例猪链球菌引起人猪共患病临床分为普通型5例,治愈5例;脑膜炎型10例,治愈8例,好转2例;中毒性休克综合征(TSS)型7例,全部死亡.总病死率31.8%.结论本次由猪链球菌血清Ⅱ型引起的人猪共同感染,流行广,发展快,人猪患病数量多,应在预防和治疗上采取更有效的措施.

    作者:章祥友;丁俊琪;秦海蓓 刊期: 2002年第04期

  • DNA改组及其应用

    DNA改组是一种改造基因和蛋白的有效实验进化技术.DNA改组技术在医药、疫苗、农业、生物治疗、兽药研究、营养、人类基因治疗、生物武器的研究等重要领域都具有广阔的应用开发前景.本文综述了DNA改组的技术及其在疫苗方面的应用展望.

    作者:陈守义;余新炳 刊期: 2002年第04期

  • 以HBc颗粒为呈现载体的HBV多表位复合基因真核表达载体的构建

    目的构建以HBV HBc颗粒为呈现载体的HBV多表位复合基因真核表达质粒,以探讨HBV基因免疫的新途径.方法 PCR扩增HBc第1~72aa及93~183aa编码序列并定向克隆至pcDNA3.1的NheⅠ/XhoⅠ位点,构建真核表达载体pHBcdM.合成HBV多表位基因并插入HBc原脊区基因位点,构建HBc-Mep融合基因真核表达质粒.经PCR、酶切及序列测定等方法筛选阳性质粒.结果双酶切及测序结果证实阳性质粒正确克隆了约885bp、编码HBc与HBV多表位的复合基因.结论成功构建了以HBc颗粒为呈现载体的HBV多表位复合基因真核表达载体pHBc-Mep,为研究pHBc-Mep作为DNA疫苗的免疫活性奠定基础.

    作者:田泽维;董文其;李明;王萍;黄建生 刊期: 2002年第04期

  • 拉米呋啶联合IFN-α治疗慢性乙型肝炎近期疗效观察

    目的探讨拉米呋啶联合α-干扰素(IFN-α)治疗慢性乙型肝炎(CHB)抗病毒的协同作用.方法 68例HBVDNA及HBeAg阳性的CHB患者随机分成甲、乙两组.甲组采用拉米呋啶和IFN-α联合治疗,乙组单用拉米呋啶.治疗24w和48w时观察两组肝功能和乙型肝炎病毒标志(HBVM及HBVDNA)的变化情况.结果治疗24w时,甲、乙两组ALT复常率分别为85%和83%,HBVDNA转阴率分别为90%和89%,抗-HBe阳性率分别为15%和6.2%,以上指标两组相比无显著性差异(P>0.05),HBeAg阴转率分别为50%和20%,两组相比差异显著(P<0.05).治疗48w时甲乙两组相比ALT复常率分别为95%和94%,HBVDNA阴转率分别为95%和93%,两组无显著性差异(P>0.05),HBeAg阴转率分别为60%和25%,两组相比差异非常显著(P<0.01),抗-HBe阳转率分别为35%及8.3%,两组差异显著(P<0.05).结论拉米呋啶联合IFN-α治疗CHB具有明显的协同作用,对于HBeAg阴转及HBeAg/抗-HBe血清转换联合治疗组明显优于单用拉米呋啶组.

    作者:张全荣;邹莉萍 刊期: 2002年第04期

  • β地中海贫血合并G6PD缺乏症患儿珠蛋白基因突变类型分析

    目的了解β地中海贫血合并G6PD缺乏症患儿的异常β珠蛋白基因突变情况.方法采用血液学及反向点杂交技术对患儿进行β珠蛋白基因突变类型分析.结果 29例患儿共查出10种不同的基因突变,突变频率为3.4%~37.9%,其中以CD41-42(-CTTT)、IVS-2nt654(C→T)、TATA box-28nt(A→G)出现的频率高,1例患者未能分型.结论婚前与产前检查对减少β地贫/G6PD缺乏症患儿的出生具有十分重要的意义.

    作者:王添章;张利红;庞艳;陈汝雪;余宙耀 刊期: 2002年第04期

  • 阴道超声盆腔炎诊疗中的意义

    盆腔炎是一种较常见的妇科疾病,传统诊断主要依据病史、体征,结合将在宫颈口、后穹隆穿刺或腹腔镜检查所取得的分泌物作细菌涂片及培养(包括厌氧菌培养),经腹超声了解盆腔内有无包块等,而对疗效的判断及治疗手段的选择上则缺乏比较可靠的客观指标[1].本文探讨经阴道超声在盆腔炎诊断及治疗中的监测意义.

    作者:程蔚;贾娟;章正广 刊期: 2002年第04期

  • 90例志贺氏菌属感染者病原菌分类及药敏分析

    目的探讨志贺氏菌属菌群分类及耐药性之变迁.方法回顾性分析1992~1999年8年间经粪便培养分离出的90株志贺氏菌属的菌群分类及药敏情况.结果 90株细菌中,福氏76株(84.4%),宋内氏12株(13.3%),志贺氏2株(2.2%).对头孢哌酮、头孢唑啉、阿米卡星、庆大霉素、氟哌酸、痢特灵、复方新诺明、氨苄西林8种抗菌药物的耐药率分别5.8%、25.6%、28.4%、38.0%、21.3%、25.0%、82.5%、89.7%.结论福氏菌仍为志贺氏菌属的优势菌株.其耐药现象日趋严重,对氟喹诺酮类的耐药性产生快而迅猛,已出现耐第三代头孢菌素的菌株.

    作者:侯冬青 刊期: 2002年第04期

  • 弓形虫SAG1 ROP1基因及其复合抗原基因的核酸免疫研究

    1 前言刚地弓形虫是一种机会性致病原虫,寄生于宿主的细胞内,在机体免疫力下降的情况下,弓形虫大量增殖,可导致组织器官的损伤,引起弓形虫病.该病呈世界性分布,是严重危害人畜健康的寄生虫病之一.

    作者:陈观今;郑焕钦;周永安;郭虹;陈海峰 刊期: 2002年第04期

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