黄林静；赵美平；张聪聪；郑梦晓；应磊；王万铁
作者： 刊期： 2015年第10期
目的：探讨omega－3多不饱和脂肪酸（ polyunsaturated fatty acid， PUFA）对动脉粥样硬化斑块稳定性的作用及可能机制。方法：采用低密度脂蛋白受体敲除（Ldlr－／－）小鼠喂养西方饮食（western diet， WD）6周诱导动脉粥样硬化，并在饮食中添加或不添加3％omega－3 PUFA进行干预。使用液相质谱联用检测血浆中PUFA及其代谢产物浓度。油红O染色分析测定动脉树斑块面积及主动脉根部斑块脂质含量，HE染色分析主动脉根部斑块大小，天狼星红染色分析主动脉根部斑块胶原纤维含量，免疫荧光检测主动脉根部斑块巨噬细胞和平滑肌细胞含量。结果：（1）与WD组相比，omega－3组小鼠动脉树斑块面积比例显著降低。（2）Omega－3处理组与对照组相比，主动脉根部斑块面积、脂质含量和巨噬细胞含量显著降低；同时胶原纤维和平滑肌细胞含量显著上升，斑块不稳定指数下降（P＜0．05）。（3）Omega－3处理组血清中omega－3 PUFA显著增加，分析代谢产物发现EEQ和18－HEPE水平显著增加。结论：Omega－3处理减少动脉粥样硬化斑块面积、增加斑块稳定性，其机制可能与其代谢产物水平变化相关。
作者：刘亚晋；李丹；张栩；艾玎；朱毅 刊期： 2015年第10期
目的：通过佛波酯诱导内皮细胞增生体外模拟银屑病新生的病理状态，比较养血活血解毒方及其组分药物血清对人皮肤微血管内皮细胞及相关信号转导通路的干预效应。方法：佛波酯诱导内皮细胞24 h造模，10％中药含药血清作用细胞24 h。采用CCK－8比色法检测全方及拆方药物血清对内皮细胞增殖的影响；Transwell小室法检测药物血清对细胞迁移的影响；Ma－tril胶法用于检测药物血清对内皮细胞管腔形成的影响；采用real－time PCR和Western blot法分别观察药物血清对血管新生相关信号转导通路及产物的影响。结果：养血活血解毒方及其养血活血、解毒组分含药血清均可显著抑制PMA诱导的HDMEC细胞增殖及迁移，其中全方作用强，拆方组均具有一定的抑制作用，但不及全方。仅全方组药物血清可显著抑制细胞的管腔形成，拆方组均无作用。全方可明显降低血管新生相关的VEGF／VEGFR及Ang／Tie2通路蛋白及mRNA表达；而拆方组效果不一，总体趋势不如全方。结论：临床优化组方养血活血解毒方可通过干预银屑病血管新生的病理环节发挥其治疗作用，且中药组方药效作用优于单个拆方组分，为临床科学组方用药提供实验依据。
作者：刘欣 刊期： 2015年第10期
目的：明确二甲双胍是否通过腺苷酸活化蛋白激酶（ AMPK）依赖的方式抑制单侧输尿管梗阻（ UUO）诱导的肾间质纤维化。方法：采用WT及AMPKα2－／－小鼠， UUO手术制备肾间质纤维化模型。手术组术前3 d及术后7 d皮下注射二甲双胍0．2 g? kg－1? d－1。利用组化染色、肾功能检测、Western blot、ELISA等方法评价模型。结果：（1）WT小鼠，二甲双胍能够抑制UUO诱导的肾间质纤维化（P＜0．01），其机制是通过抑制TGF－β1－Smad3信号通路。（2）AMPKα2－／－小鼠，二甲双胍仍有部分抑制UUO诱导的肾间质纤维化的作用，但差异不显著。（3）二甲双胍不能抑制AMPKα2－／－小鼠肾脏组织中TGF－β1的产生。（4）二甲双胍有抑制UUO诱导的TGF－β1下游Smad3磷酸化的趋势。结论：二甲双胍通过AMPK依赖及非依赖的途径抑制UUO诱导的肾脏纤维化。
作者：冯晔囡；张幼怡；肖晗 刊期： 2015年第10期
目的：TRPV4（ transient receptor potential vanilloid subtype 4）是配体门控非选择阳离子通道，在肺泡和肾小管上皮中参与对渗透压的调节，但其在下颌下腺的生理功能尚不清楚。本研究旨在探讨TRPV4在M3R介导的唾液分泌中的作用。方法：离体小鼠下颌下腺灌流研究TRPV4抑制后对卡巴胆碱所诱导分泌的影响；Fura－2AM法测定TRPV4抑制后细胞内钙信号变化；在体唾液收集观察TRPV4抑制后对匹罗卡品诱导腺体分泌的影响。免疫荧光研究TRPV4抑制后水通道蛋白5（aquaporin 5， AQP5）在细胞内的位置变化。结果：离体灌流结果显示，TRPV4抑制剂RN1734和HC067047会抑制卡巴胆碱所诱导的腺体分泌。在腺泡细胞上，TRPV4抑制剂也可以明显地抑制卡巴胆碱所诱导的细胞内钙离子［ Ca2＋］ i 升高。 TRPV4抑制剂均可以抑制匹罗卡品诱导的腺体分泌。结论：TRPV4在M3 R介导的唾液分泌中不可或缺，其发挥作用的方式是通过介导细胞外钙离子进入细胞，影响细胞内的钙信号及下游AQP5细胞内定位。
作者：张艳；张菁；丛馨；吴立玲 刊期： 2015年第10期
目的：通过观察小鼠肢体缺血再灌注（ LIR）后，肾组织中AT1和Mas受体的表达与肾损伤程度的改变，探讨局部组织肾素血管紧张素系统（ RAS）稳态失衡在LIR后肾损伤中的作用。方法：止血带套扎双后肢阻断血流，2 h后解套扎进行再灌注复制小鼠LIR模型。将雄性8周龄ICR小鼠48只，随机分为8组，每组6只，一组作为对照，其余7组为再灌注10 min、0．5、1、2、4、6、12 h模型组。 HE染色肾组织病理切片观察肾组织形态变化并进行病理损伤评分；化学比色法测定血清肌酐和尿素的含量；蛋白免疫印迹法（ Western blot，WB）检测肾组织AT1和Mas蛋白的表达。结果：病理结果显示，LIR后不同时点小鼠肾组织有充血、水肿、炎细胞浸润和上皮细胞变性等不同程度损伤，且随灌注时间的延长，损伤评分逐渐升高；生化测定结果显示，肌酐和尿素的含量随灌注时间的延长而增加，再灌注4 h达高；WB结果显示，随灌注时间的延长AT1蛋白的表达降低，Mas蛋白的表达增加。结论：LIR后肾组织损伤逐渐加重，AT1／Mas表达失衡可能参与小鼠LIR后肾损伤的发生。
作者：王建辉 刊期： 2015年第10期
目的：探究成体大鼠骨髓中神经嵴源细胞的获取，及对受损周围神经的修复作用。方法：富集骨髓神经嵴源细胞间充质球，分离单克隆球，检测长期增殖能力和神经嵴标志的表达，检测向施旺细胞定向分化的能力和体外成髓鞘潜能。体外构建骨髓神经嵴源细胞为支持细胞的组织工程化神经移植物，桥接大鼠10 mm坐骨神经缺损，12周后进行行为学分析、电生理检测、荧光金逆行示踪试验、肌肉和神经的组织学观察。体外收集骨髓神经嵴源细胞的条件培养基，处理氧糖剥夺损伤的大鼠背根节神经元，检测神经元突起的生长变化和细胞活力改变。结果：骨髓神经嵴源细胞组织工程化神经移植物具有良好的神经修复作用，其条件培养基可改善受损背根节神经元的活力和突起生长。结论：神经嵴源细胞可从骨髓获取并应用于修复周围神经损伤，是潜在的自体细胞来源。
作者：施海燕；李晓丽；易剑锋；郭可盈；高小东；李人杰；顾晓松；丁斐 刊期： 2015年第10期
目的：研究铁超载对大鼠肝星状细胞增殖和凋亡的影响以初步证实铁超载对肝纤维化的促进作用。方法：大鼠肝星状细胞HSC－T6给予硫酸亚铁2μmol／L负载24 h，正常对照组给予DMSO 2μmol／L。免疫荧光染色法观察铁在HSC－T6中的分布面积，流式细胞术检测HSC－T6增殖， TUNEL法检测HSC－T6凋亡，Western blot检测HSC－T6基质金属蛋白酶1（MMP－1）和金属蛋白酶组织抑制剂1（TIMP－1）蛋白表达水平。结果：与正常对照组相比，铁超载组HSC－T6内铁染色阳性的平均面积为39．02％±2．03％，平均增殖率为61．02％±2．21％，平均凋亡率为13．01％±0．95％，MMP－1和TIMP－1的蛋白平均表达水平分别增加了38．82％±7．62％和179．88％±17．52％。结论：铁超载导致肝星状细胞的增殖率大于其凋亡率，并且肝星状细胞基质金属蛋白酶抑制剂的表达水平高于其基质金属蛋白酶的水平，因此推断铁超载促进了肝星状细胞的活性，从而促进了肝纤维化的进程。
作者：张颖 刊期： 2015年第10期
目的：研究心房钠尿肽（ atrial natriuretic peptide， ANP）对缺血再灌注损伤心肌的保护作用及其作用机制。方法：SD大鼠随机分为正常组、对照组及ANP组；通过Langendorff灌流装置建立大鼠离体心脏缺血再灌注模型，计算出各组缺血心脏的梗死面积，并利用化学比色法测定各组心脏组织中乳酸（ LD）、超氧化物歧化酶（ SOD）活性以及丙二醛（ MDA）含量。结果：ANP组（0．03μmol／L）的大鼠心脏心肌梗死面积明显小于对照组（P＜0．01）；对照组大鼠心脏组织的MDA含量及LD含量明显高于ANP组和正常组（P＜0．01），而SOD活性则明显低于ANP组和正常组（P＜0．01）。结论：ANP对心肌缺血再灌注损伤具有保护作用，其机制可能与提高缺血再灌时抗氧化作用有关。
作者：李英；洪英姬；洪兰 刊期： 2015年第10期
目的：检测SLC14a1基因在小鼠脑组织的表达定位；探讨SLC14a1基因缺失小鼠给予高盐饮食后脑脊液钠离子浓度的变化。方法：（1）以野生型小鼠为研究对象，检测SLC14a1 mRNA和蛋白在小鼠脑组织中表达及定位。（2）以SLC14a1基因缺失小鼠为研究对象，以野生型小鼠为对照，分别给予普通饮食（0．4％NaCl）和高盐饮食（8％ NaCl）2周；观察各组动物血压的变化；（3）对比观察2组动物脑脊液钠离子浓度。结果：（1）RT－PCR方法显示SLC14a1 mRNA在小鼠脑组织；免疫组织化学染色方法及Western blot方法检测SLC14a1蛋白表达于小鼠脑组织脉络丛；（2）给予高盐饮食2周后，SLC14a1基因缺失小鼠组小鼠血压显著增高（P＜0．05 vs普通饮食）；（3）给予高盐饮食后，SLC14a1基因缺失小鼠脑脊液钠离子浓度显著高于野生型小鼠（P＜0．05）。结论：SLC14a1基因表达于小鼠脑组织脉络丛，SLC14a1基因的缺失能增加高盐饮食小鼠脑脊液钠离子浓度。
作者：王松；林子琦；林海雪；李金燕；郭丽荣 刊期： 2015年第10期
目的：研究核糖核苷酸还原酶（ RR）作为抗HBV及其相关肝癌药物靶点的可能性以及其抑制剂抗HBV的作用和机制。方法：免疫印迹检测RR表达，RR assay检测其活性；虚拟筛选得到老药柳胺酚，并检测其对RR活性的抑制；PCR检测柳胺酚单独或与拉米夫定（3TC）联合用药对野生型及3TC耐药型HBV DNA和cccDNA的抑制，并进行体内评价；评价柳胺酚衍生物 YZ51药效。结果：RR是HBV DNA复制所必需；柳胺酚能够抑制RR活性，从而抑制HBV DNA复制及cccDNA的合成，并与3TC联合有协同作用且能克服3TC耐药性；衍生物YZ51具有更高的药效；柳胺酚在小鼠体内抗HBV效果明显并且体内毒性低。结论：发现了一种与现有抗HBV药物不同的新机制。证明了新型RR酶抑制剂具有抑制RR和HBV复制活性，为进一步研发具有抗HBV及其相关肝癌的药物奠定了基础。
作者：刘霞；邵吉民 刊期： 2015年第10期
目的：研究蛋白激酶C（ PKC）抑制剂对人胃肠道间质瘤GIST细胞株生长抑制与诱导凋亡作用，并对其细胞凋亡机制进行研究。方法：体外培养人胃肠道间质瘤GIST细胞。采用MTT法测定了不同浓度PKC抑制剂在不同时间下对GIST细胞生长的抑制率。流式细胞术检测细胞凋亡率，分析细胞周期分布。采用倒置显微镜及荧光染色法下观察不同浓度药物作用下GIST细胞形态学变化。 Western blot法检测内质网应激相关蛋白GRP78与GADD153的表达。结果： PKC抑制剂对GIST细胞有明显的抑制增殖及促进凋亡的作用，并与时间和剂量呈正相关。倒置显微镜及荧光显微镜下可见胞浆内出现空泡，细胞核固缩等现象。经PKC抑制剂作用后，GIST细胞的GRP78与GADD153蛋白表达上调。结论： PKC抑制剂能显著抑制人胃肠道间质瘤GIST细胞的增殖，并在内质网应激参与下促进其细胞的凋亡。
作者：方学森；李香丹；杨莎莎；金头峰 刊期： 2015年第10期
目的：探讨右美托咪定（DEX）能否通过抑制未折叠蛋白反应（UPR）凋亡通路减轻小鼠缺血－再灌注（I／R）性肺损伤。方法：取雄性8～10周C57BL／6J小鼠40只，18～22 g，复制在体左肺I／R损伤模型。随机分为4组：假手术组（sham组）、I／R模型组（ I／R组）、生理盐水对照组（ NS组）和DEX干预组（ DEX组）。 DEX组在小鼠缺血前30 min腹腔注射DEX 25μg／kg，NS组予DEX等体积生理盐水。术毕取左肺组织。测定组织干湿比及总肺含水量，行组织损伤评估，光、电镜观察组织形态学及超微结构改变。原位末端标记法检测细胞凋亡指数，Western blot和逆转录PCR分别检测CCAAT／增强子结合蛋白同源蛋白、c－Jun氨基末端激酶、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶12、葡萄糖调节蛋白78的蛋白和mRNA表达量。结果：较sham组，IR及NS组各检测指标表达量增加，镜下结构破坏显著；其组内无明显差异。较IR组，DEX组上述指标表达量均下降，镜下结构异常改变减轻。结论：DEX可有效减轻小鼠缺血／再灌注性肺损伤，其机制可能与抑制过度ERS中UPR通路引发的细胞凋亡有关。
作者：宋冬；罗梓垠；项冰倩；陈丹；何金波；应磊；王万铁 刊期： 2015年第10期
目的：为适应信息时代的发展，更好地引导学生自主学习，加强微课程的建设与应用。方法：选取我校2013级两个班共137人为研究对象，选择呼吸功能不全为翻转课堂教学内容。学生在教师的指导下以小组学习方式，课前利用网络课程平台微课视频自主学习知识点，结合教材与提供的病例，查阅资料，进行小组讨论并记录学习过程，完成课件制作与试讲。课堂上各小组随机抽取知识点，进行小组汇报和病例讨论，教师对各小组学习汇报情况进行总结评价，所有学生对本次教学效果进行了书面反馈。结果：89％的同学认为自主学习重要，喜欢合作学习，共同解决问题。86％的同学对翻转课堂教学给予了积极的评价，翻转课堂提高了学生的参与积极性，学生的自主学习能力、沟通协作能力、分析解决问题以及表达能力得到了提升。同时，翻转课堂也促进了微课程的建设与应用，促进了教师的成长。
作者：李霞；陈静；张颖；龚敏；刘跃；李树清 刊期： 2015年第10期
目的：探讨钙激活性氯离子通道2（ calcium－activated chloride channel 2， CLCA2）在大鼠低氧性肺动脉平滑肌细胞（ pulmo－nary artery smooth muscle cells，PASMCs）中mRNA和蛋白表达的变化及其与ERK1／2信号通路的关系。方法：取14只雄性SD大鼠，使用酶消化法进行PASMCs原代培养，应用小鼠抗大鼠SM α－actin免疫荧光细胞化学法进行细胞鉴定；经培养鉴定PASMCs随机分为常氧组（N组，n＝6）、低氧组（H组，n＝6）、DMSO对照组（D组，n＝6）、U0126干预组（U组，n＝6）和stau－rosporine aglycone干预组（ SA组，n＝6）；采用免疫印迹法检测CLCA2蛋白的表达，选用RT－PCR技术测定CLCA2 mRNA水平的表达。结果：与N组比较，H组PASMCs中CLCA2 mRNA和蛋白的表达量均显著上调（均P＜0．01）；与D组比较， U组CLCA2 mRNA和蛋白的表达均明显上调（均P＜0．01），SA组mRNA的表达显著下调（P＜0．01），蛋白的表达轻微下调（但P＞0．05）。结论：低氧可上调大鼠PASMCs中CLCA2 mRNA和蛋白的表达；ERK1／2通路抑制剂U0126能上调PASMCs中CLCA2 mRNA和蛋白的表达；ERK1／2通路激活剂staurosporine aglycone可下调PASMCs中CLCA2 mRNA和蛋白的表达。
作者：黄林静；赵美平；张聪聪；郑梦晓；应磊；王万铁 刊期： 2015年第10期
目的：建立小鼠流感性肺炎模型，明确呼吸道流感病毒感染过程中是否存在特异性的肠道病理损伤，并探讨了其在“肺与大肠相表里”研究中的应用。方法：BALB／c小鼠48只随机分为正常组、模型组。模型组给予25μL 50LD50病毒液滴鼻建立流感病毒感染的小鼠肺炎模型，感染后0、3、5、6 d分别取材，HE染色检测肺脏和大肠、小肠、心脏、肾脏和肝脏组织病理结果，血生化检测血清尿素氮（ BUN）、谷丙转氨酶（ ALT）和谷草转氨酶（ AST）水平。结果：流感病毒感染后，模型组小鼠肺组织出现明显的炎性病变外，随时间延长肺组织充血水肿出血加重；小肠黏膜腺体排列紊乱，绒毛粗大、部分脱落，黏膜固有层淋巴细胞大量浸润；大肠黏膜固有层、肌层大量淋巴细胞浸润，腺体结构消失、脱落；而心脏、肝脏和肾脏无明显病变；模型组小鼠血清BUN、ALT和AST较正常组相比，无显著差异。结论：小鼠流感病毒性肺炎模型中存在小肠、大肠特异性免疫病理损伤，是研究中医“肺与大肠相表里”理论及相关临床治法的理想模型。
作者：张淑静；吴莹；齐晓宇；葛东宇；李根茂；玄子男；王谦；李姝玉 刊期： 2015年第10期
目的：探究银杏叶提取物EGb761对人结肠癌细胞的增殖抑制、诱导凋亡及其作用机制。方法：体外培养12株人结肠癌细胞，给予不同浓度EGb761（0～600 mg／L）作用24 h，采用MTT、集落生成实验以及流式细胞术检测给药处理后结肠癌细胞的增殖和凋亡情况。通过Western blot技术检测RIP－1分子表达水平和凋亡标志物PARP的表达水平变化。利用ELISA技术检测NF－κB信号通路的活性。结果：EGb761在较低浓度（400 mg／L）可以抑制结肠癌细胞的增殖，并诱导肿瘤细胞发生凋亡。随着药物浓度的增加，EGb761诱导结直肠癌细胞凋亡率也随之增加。 EGb761作用于结肠癌细胞后可导致凋亡相关蛋白RIP－1的降解。同时 EGb761通过抑制 I－κB 磷酸化而抑制 NF－κB 信号通路促细胞增殖的作用。结论：银杏叶提取物（ EGb761）能广泛抑制人结肠癌细胞的增殖，并诱导人结肠癌细胞发生凋亡，研究结果提示凋亡发生的机制与细胞内RIP－1的降解以及NF－κB信号通路的活性降低有关。
作者：杜吉佩；承尧；姬光瑜；郑焱江；廖诗平；张霁；王玉芳 刊期： 2015年第10期
目的：病理生理学是基础医学和临床医学的“桥梁”，但其内容抽象难懂。如何把抽象的理论形象化，把复杂的问题简单化，把枯燥的内容趣味化，是亟需解决的问题。方法：为解决这一问题，我们尝试联合生理学、生化及人体机能学、生化、诊断实验室共同举办了基础医学综合技能大赛。主要选取“肝性脑病发生及临床特点”为切入点，通过3个阶段，即疾病模型复制、诊断和分析阶段；主、客观2种指标检测；基于3个考察科目（机能实验操作技能、诊断检测技能和科技论文写作技能）来考察学生理论、实践技能、综合分析及科研思维能力。结论：统计表明该方法不仅增强学习效果，也有利于激发主动学习性，增进相互协作能力及团队合作精神，同时培养了医学生科研辩证思维能力。总之，以医学综合性实验竞赛为依托，对于提高教学质量和学生实践创新能力都有很好的推进作用。
作者：崔晓栋；郭军堂；刘江月；张代娟；高伟 刊期： 2015年第10期
作者： 刊期： 2015年第10期
目的：探讨tau蛋白对蛋白磷酸酯酶2A（PP2A）的调节作用以及对细胞外信号调节激酶1／2（ERK1／2）的影响。方法：用Western blotting分别检测野生型和tau基因敲除型小鼠海马组织ERK1／2的蛋白表达及磷酸化水平；用纯化的磷酸化ERK分别与野生型和tau基因敲除型小鼠海马组织匀浆液共孵育，通过免疫共沉淀实验以及丝／苏氨酸磷酸酯酶活性实验检测与ERK结合的PP2A活性。结果：与野生型小鼠相比，tau基因敲除型小鼠海马组织内ERK1／2磷酸化水平明显增高。体外实验显示：纯化的磷酸化ERK与tau基因敲除型小鼠海马组织匀浆液共孵育后，其去磷酸化过程受到明显抑制，这一过程在加入重组的tau蛋白后得到逆转。免疫共沉淀实验以及丝／苏氨酸磷酸酯酶活性实验显示：与野生型小鼠相比，tau基因敲除型小鼠海马组织内与ERK结合的PP2A明显减少，活性显著下降。结论：Tau蛋白通过募集PP2A加速ERK1／2的去磷酸化。
作者：庹清章；孙旭莹；刘杨震宇；王建枝；刘蓉 刊期： 2015年第10期
中国病理生理杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中国病理生理学会
