本研究探讨硫化氢（ hydrogen sulfide， H2 S）是否通过调节SIRT1信号拮抗动脉粥样硬化。在ApoE敲除动脉粥样硬化模型，给予H2 S供体，显著减少了斑块面积、斑块中巨噬细胞浸润。在HepG2细胞、HUVECs以及小鼠腹腔巨噬细胞，H2 S供体显著上调SIRT1蛋白表达；腺病毒过表达或siRNA沉默硫化氢生成酶胱硫醚γ－裂解酶也增加或减少SIRT1表达。应用Biotin－switch方法检测到SIRT1存在内源性的硫氢化修饰，NaHS增加了SIRT1硫氢化显著上调了SIRT1活性，而使用GSNO增加SIRT1亚硝基化修饰则抑制SIRT1活性。 HepG2细胞中，NaHS显著抑制了SIRT1靶基因P53和SREBP2蛋白的乙酰化且抑制胆固醇从头合成；HUVECs中，NaHS也抑制了P53和NF－κB乙酰化，抑制炎症；巨噬细胞中，NaHS也抑制了P53和组蛋白H3的乙酰化，抑制了胆固醇的摄取。进一步通过点突变SIRT1的387和390半胱氨酸位点，SIRT1硫氢化减弱，NaHS刺激的SIRT1活性增加也消失。因此，H2 S可通过促进SIRT1硫氢化拮抗动脉粥样硬化。
作者：耿彬 刊期： 2015年第10期
目的：研究FAM3A在小鼠肝脏缺血再灌注（IR）损伤中的作用及机制；探索FAM3A是否介导罗格列酮对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用。方法和结果：在IR小鼠肝脏中，PPARγ和FAM3A表达增加。利用siRNA敲减肝脏FAM3A后，行IR手术，相较于对照组，敲减FAM3A组血浆AST、ALT水平及氧化应激显著升高，肝脏坏死区域增加，炎症因子及促凋亡因子水平上调，抗凋亡因子下调。敲减FAM3A组小鼠肝脏ATP含量下降。进一步研究显示敲减肝脏FAM3A后，罗格列酮对IR损伤肝脏的保护作用丧失。体外培养肝细胞中过表达FAM3A能激活p－Akt并促使FOXO1出核降解，但被ATP受体拮抗剂PPADS和suramin阻断。罗格列酮能诱导Akt激活及FOXO1出核降解，并能被PPADS、suramin及FAM3A敲减阻断。结论：FAM3A通过增加ATP含量，激活P2R－Akt信号通路，促使FOXO1出核降解，从而在肝脏IR中发挥保护作用。 FAM3A介导了罗格列酮类药物对缺血再灌注损伤肝脏的保护作用。利用PPARγ激动剂激活FAM3A有可能成为缺血性肝损伤疾病的新干预策略。
作者：陈真真；崔庆华；杨吉春 刊期： 2015年第10期
目的：研究亚硝胺类致癌物诱导细胞恶性转化过程中抑癌基因FHIT的表达变化，明确其遗传及表观遗传调控机制。方法：建立N－甲基－N’－硝基－N－亚硝基胍（ MNNG）和N－甲基－N－亚硝基脲（ MNU）暴露后胃黏膜上皮细胞GES－1的恶性转化模型。动态分析FHIT表达、基因缺失、DNA甲基化和组蛋白修饰变化。结果：MNNG和MNU暴露早期FHIT即明显下调，且与暴露剂量呈负相关。 FHIT低表达恶性转化单克隆细胞株克隆形成能力明显增强。外显子特异性PCR显示基因无纯合性缺失。甲基化特异性PCR显示FHIT基因甲基化水平增高，亚硫酸氢盐基因组测序证实FHIT启动子区呈明显高甲基化。组蛋白修饰分析发现FHIT低表达细胞株组蛋白H4乙酰化水平降低，组蛋白去乙酰化酶HDACs家族成员参与调控。结论：亚硝胺类致癌物诱导细胞恶性转化过程中FHIT基因在恶性变早期即下调，DNA甲基化和组蛋白修饰参与其表达调控。
作者：张水莲；沈静 刊期： 2015年第10期
目的：动脉外膜所产生的活性氧和新生血管形成，可能导致和促进病理性血管重构的形成。本课题研究NADPH氧化酶在同种异体主动脉移植模型的外膜血管动态表达和新生血管形成。方法：将F344大鼠胸主动脉移植到Lewis腹主动脉造模。于移植后0．5、3、7和14 d收集移植血管，进行形态学分析、免疫组化和定量PCR检测。结果：血管外膜移植后3 d、内膜7 d增厚。移植血管外膜NADPH氧化酶亚基gp91phox和p47phox蛋白和mRNA表达水平3 d开始升高，14 d达高峰。免疫组化显示，巨噬细胞浸润可能是NADPH氧化酶表达的主要来源。而淋巴细胞浸润在各时点无显著差别。移植血管外膜分离、培养的原代成纤维细胞NADPH氧化酶表达也增加。 siRNA－p47phox沉默p47phox基因后，BrdU掺入和Transwell迁移实验显示，移植血管外膜成纤维细胞的增殖和迁移能力显著受抑制。此外，移植14 d，移植血管外膜增厚伴有新生血管形成明显增加，外膜中微血管密度和血管内膜厚度呈正相关。结论：移植损伤可诱导血管外膜NADPH氧化酶表达和新生血管的形成，移植引起的外膜活性提高可能成为预防、治疗血管病变的靶点。
作者：孙梦瑶；郭晓彤；罗坤；刘雪峰；王瑞；王牧川；张恩浩；王建丽 刊期： 2015年第10期
目的：探讨Clock蛋白通过对前脂肪细胞3T3－L1增殖的调节来促进细胞成脂的作用和机制。方法：利用RNAi或Clock的高表达病毒载体，分别在3T3－L1中低表达或高表达Clock基因。 CCK－8检测细胞增殖，利用RT－PCR和Western blot技术检测相关细胞周期蛋白和Clock蛋白的表达情况。利用染色质免疫共沉淀技术检测Clock蛋白对Wnt信号通路关键因子的转录调节作用。结果：Clock蛋白可以促进3T3－L1细胞的增殖；同时在Clock基因低表达的3T3－L1细胞和ClockΔ19小鼠脂肪组织中，促进细胞周期进行的关键调控因子细胞周期蛋白D1、c－Myc和增殖细胞核抗原（ PCNA）的表达受抑制。低表达Clock基因的3T3－L1细胞中，β－连环蛋白（β－catenin）表达量降低；ChIP结果发现Clock蛋白可与β－catenin、Dvl2（dishevelled 2）和c－Myc上游启动子结合，调控其转录激活，Wnt信号通路抑制剂可以抑制Clock蛋白促进细胞增殖的作用。结论：Clock蛋白可以通过调控Wnt信号通路来促进前脂肪细胞增殖，并进一步抑制脂肪分化程序的启动，抑制细胞成脂。
作者：朱珠；袁功盛；许利荣；陆超；李晓波；孙宁；钱睿哲 刊期： 2015年第10期
作者： 刊期： 2015年第10期
目的：观察超声心动图斑点追踪能否早期发现和诊断异丙基肾上腺素（ ISO）引起的心脏功能异常。方法：将成年C57雄性小鼠分为对照、ISO给药后3 d和ISO给药后7 d组。 ISO组为一次性给予ISO 5 mg／kg皮下注射，分别于给药后3 d和7 d应用传统超声心动图及斑点追踪评价小鼠心脏功能。结果：（1）应用传统超声心动图方法测得ISO给药后3 d组FS和E／Em均无明显差异，给药后7 d FS仍无明显差异，而E／Em显著增加（P＜0．05）。超声心动图斑点追踪方法在给药后3 d即观测到心脏径向应变（ radial strain，RS）和纵向应变（ longitudinal strain，LS）均较对照组显著降低（ P＜0．05）；给药后7 d组的RS和LS亦显著低于对照组（ P＜0．05）。结论：相对于传统超声心动图方法，斑点追踪方法能够早期诊断ISO引起的心脏功能异常。
作者：安祥博；张幼怡；宋峣 刊期： 2015年第10期
目的：探讨靶向干扰 CIAPIN1基因表达对慢性粒细胞白血病（ CML）细胞系K562细胞增殖能力的影响。方法：针对CIAPIN1基因构建shRNA真核表达载体并稳定转染K562细胞系。 Real－time PCR及Western blotting技术鉴定干扰效率；CIAP－IN1基因沉默之后，改良MTT法检测细胞活力的变化；甲基纤维素集落形成实验观察细胞集落形成大小和数量的变化；流式细胞术检测细胞周期的改变；将K562细胞接种到裸鼠体内皮下，观察细胞在裸鼠体内成瘤能力的变化。结果：CIAPIN1基因表达下调后，K562细胞的活力下降；集落形成数量减少和集落减小；G1期细胞数量增加；小鼠体内成瘤能力明显降低。结论：下调CIAPIN1基因表达能够抑制K562细胞在体外及体内的增殖能力。
作者：王齐；王建；李庆华；庞天翔 刊期： 2015年第10期
目的：观察Bcl－2－modifying factor （ BMF）在氧化应激致心肌细胞损伤中的作用和机制。方法：在培养的乳鼠心肌细胞氧化应激模型上，采用LDH活性检测和TUNEL法观察细胞损伤，荧光染色技术观察线粒体分裂和BMF在细胞中定位， RT－PCR和Western blot方法观察BMF mRNA和蛋白表达。结果：正常生理状态下，BMF定位在胞浆的细胞骨架，当用过氧化氢处理心肌细胞后，BMF mRNA和蛋白水平增加（P＜0．05），同时BMF从胞浆转位至线粒体，伴随着线粒体分裂增加（P＜0．05），细胞凋亡增多（P＜0．05）。用BMF－siRNA腺病毒感染心肌细胞后进行过氧化氢处理，心肌细胞凋亡率明显下降（P＜0．05），线粒体分裂明显减少（ P＜0．05）。用adBMF感染心肌细胞，发现随着感染时间的延长，心肌细胞培养液中LDH活性和心肌细胞凋亡率明显增加（P＜0．05），线粒体分裂明显增多（P＜0．05）。进一步研究发现BMF可以明显增加细胞色素C在胞浆中的表达。结论：BMF参与氧化应激诱导的心肌细胞损伤，其机制与线粒体分裂和线粒体凋亡途径有关。
作者：李玉珍；宋丹丹；刘秀华 刊期： 2015年第10期
目的：以线粒体保护剂环孢菌素A（ CsA）作为干预因素，观察线粒体功能障碍在失血性休克淋巴管低反应性中的作用。方法：建立失血性休克大鼠模型（40 mmHg，3 h），休克＋CsA组在低血压1 h后注射CsA（6 mg／kg）。观察CsA对胸导管组织淋巴管平滑肌细胞（ LSMCs）线粒体超微结构的影响；制备胸导管组织匀浆，应用高效液相色谱方法检测与线粒体功能相关的能量代谢指标；制备淋巴管环，应用微血管压力－肌动仪观察CsA对离体淋巴管收缩性及其对P物质反应性的影响。结果：休克组LSMCs线粒体出现水肿，有明显的电子透亮区，部分呈空泡状，有特殊包囊物质生成；CsA可减轻失血性休克导致的LSMCs线粒体结构损伤。休克组淋巴管组织ATP、ADP、AMP及总腺苷酸量（ TAN）含量均显著低于、能荷（ EC）高于假手术组；休克＋CsA组淋巴管组织ATP、ADP、AMP及TAN的含量均显著高于休克组。失血性休克大鼠离体淋巴管收缩性及反应性降低，CsA提高了失血性休克后淋巴管的收缩性与反应性。结论：线粒体功能障碍在失血性休克淋巴管低反应性发生中发挥一定的作用。
作者：王淮淮；张立民；张晓丽；白雪梅；赵自刚；牛春雨 刊期： 2015年第10期
目的：明确运动训练能否抑制β－肾上腺素受体激动剂异丙基肾上腺素（ isoprenaline，ISO）诱导的小鼠心脏炎症反应。方法：将成年C57雄性小鼠分为10组（n＝6），分别为安静对照组、安静给ISO 1 h组、24 h组、3 d组和7 d组、跑步训练对照组、跑步训练给ISO 1 h组、24 h组、3 d组和7 d组。 ISO组均为给予ISO 5 mg／kg皮下注射，跑步训练组为应用小鼠跑步机训练6周，速度12 cm／s，时程90 min，每周运动5天。应用超声心动图、心重胫骨长度比、HE染色、天狼星红染色、免疫组织化学染色、ELISA和Western blot等方法，观察心脏中炎症因子表达水平及炎症反应的变化情况。结果：（1）小鼠呼吸代谢系统测得跑步状态下75％大氧耗量对应速度为12 cm／s，ISO对小鼠氧耗量没有影响。（2）跑步训练给ISO 1 h组及24 h组与安静给ISO 1 h组及24 h组相比，IL－18和IL－6蛋白含量均显著降低（ P＜0．05）；跑步训练给ISO 3 d组与安静给ISO 3 d组相比IL－18和IL－16蛋白水平均明显降低的同时，IL－1β蛋白水平亦明显降低（ P＜0．01）；跑步训练给ISO 7 d组与安静给ISO 7 d组相比， IL－18、IL－1β和IL－6蛋白水平均明显降低，而且TNF－α也明显降低（P＜0．05）。（3）在给予ISO 24 h后，跑步训练组与安静组相比心脏TGF－β1蛋白水平即明显降低（ P＜0．01）；跑步训练给ISO 3 d组与安静给ISO 3 d组相比，心脏切片免疫组化Mac－3染色显示巨噬细胞浸润面积明显减少（P＜0．01），同时心脏TGF－β1蛋白水平明显降低（P＜0．05）。（4）跑步训练给ISO 7 d组和安静给ISO 7 d组相比心脏纤维化面积明显减少（P＜0．05），心脏组织中羟脯氨酸含量明显降低（P＜0．01），I型胶原产生明显减少（P＜0．05）。结论：运动训练能够抑制ISO诱导的小鼠心脏炎症反应。
作者：安祥博；宋峣；张幼怡 刊期： 2015年第10期
目的：研究灵芝孢子对非酒精性脂肪性肝病（non－alcoholic fatty liver disease， NAFLD）小鼠肝脏载脂蛋白B100（apolipopro－tein B100， ApoB100）和固醇调节元件结合蛋白1c （sterol－regulatory element binding protein－1c， SREBP－1c）表达的影响，从分子水平探讨灵芝孢子对于NAFLD的预防及治疗效果。方法：应用RT－PCR方法对比正常组、NAFLD模型组、灵芝孢子预防组、灵芝孢子治疗组中肝脏ApoB100及SREBP－1c的mRNA表达。结果：ApoB100及SREBP－1c mRNA在模型组表达增高，而在灵芝孢子预防组和灵芝孢子治疗组表达均降低，差异有统计学意义（P＜0．05）。灵芝孢子预防组和灵芝孢子治疗组组间比较差异无统计学意义（P＞0．05）。结论：NAFLD模型组肝脏中ApoB100及SREBP－1c 的表达明显增高；灵芝孢子预防及治疗小鼠NAFLD过程中对于其肝脏ApoB100及SREBP－1c表达的影响无明显差异。
作者：梁衍锋 刊期： 2015年第10期
目的：本研究拟探讨SENP1、VEGF以及CARD14交互作用在预测移居汉族男性高原红细胞增多症遗传易感性的作用。方法：纳入234例移居汉族男性高原红细胞增多症（ HAPC）患者与250例移居汉族男性正常对照， PCR－高分辨率熔解曲线法判定SENP1基因rs726354、VEGF基因rs3025033及CARD14基因rs8065364等多态性位点的基因型，多因子降维软件分析基因之间的交互作用。结果：rs726354多态性位点以及rs3025033多态性位点基因型与等位基因频率在HAPC组与正常对照组的分布无差异；CARD14基因rs8065364的3种基因型在HAPC组与正常对照组的频率分布存在差异，HAPC组与正常对照组C等位基因与T等位基因频率存在差异。基因交互作用提示上述3个多态性位点的不同组合可影响移居汉族男性HAPC的易感性。结论：CARD14基因rs8065364多态性与移居汉族男性HAPC的发生存在相关性，C等位基因是汉族男性HAPC的危险因素，SENP1基因、VEGF基因以及CARD14基因的交互作用可能参与了移居汉族男性HAPC的发生。
作者：陈郁；蒋春华；罗勇军；刘福玉；高钰琪 刊期： 2015年第10期
作者： 刊期： 2015年第10期
目的：在首次发现转化生长因子III型受体（ TGFBR3）在心肌细胞中存在较高丰度表达的基础上，探讨TGFBR3在心肌肥厚中的作用以及其生理病理学意义。方法：采用分子生物学等实验技术检测体外ISO诱导的心肌肥大模型中TGFBR3的表达水平变化。运用超声和HE染色等方法检测心脏特异性过表达TGFBR3转基因小鼠中心肌肥厚表型，探讨TGFBR3促心肌肥厚的作用机制。结果：TGFBR3在ISO诱导的心肌肥大模型中表达水平升高。且在心脏特异性过表达转基因小鼠中表现为促进心肌肥厚的作用。 TGFBR3与β－arrestin2在心肌细胞中存在复合物，并且通过共同调节下游信号通路中CaMKII的磷酸化促心肌肥厚的发生。结论：TGFBR3在体内外心肌肥厚模型中表达升高，并且TGFBR3高表达可促进心肌肥厚的发生。其机制是通过与β－arrestin2存在复合物，共同调节下游CaMKII的磷酸化引起的。
作者：娄杰；张志仁 刊期： 2015年第10期
目的：研究生物钟基因Clock对干细胞分化成熟过程的影响和机制。方法：我们将携带有Oct4、Sox2、c－Myc和Klf4的TetO－FUW－OSKM慢病毒转染入小鼠胚胎成纤维细胞（ MEF）中，利用PCR、免疫荧光法、碱性磷酸酶染色和拟胚体形成实验鉴定细胞的多能性。通过RNAi技术抑制Clock基因表达，观察Clock基因对iPSCs分化的影响。结果：小鼠MEF在转染后12 d形成典型的小鼠ESC样克隆。 RT－PCR显示iPSCs表达多能性基因Nanog、Sox2、Oct4、Dax1、Esg1、ERas、Zfp296和Klf4；细胞碱性磷酸酶染色阳性；细胞免疫荧光检测结果显示有Oct4和SSEA1的表达；培养可见拟胚体的形成。因此，我们成功将小鼠MEF重编程为iPSCs。细胞非定向分化实验发现，转染48 h后，对照组克隆边缘不光滑，有伪足伸出，提示iPSCs存在分化；Clock－siRNA组的iPSCs克隆仍保持边缘光滑，极少有伪足伸出，RT－PCR提示多能性基因Sox2、Oct4和Klf4表达较对照组升高。结论：生物钟基因Clock可能参与了iPSCs的分化过程。
作者：赵冉；杨羊；徐晨；李二敏；陆超；孙宁；钱睿哲 刊期： 2015年第10期
目的：脑卒中发生后5年内卒中再发率较高，寻找再卒中发生的神经保护措施意义重大。抗炎因子IL－10在脑卒中发生中发挥重要的神经保护作用。预先将载IL－10的腺相关病毒（ rAAV1－IL－10）感染脑动脉，研究其在脑卒中发生时的神经保护作用及机制，探讨脑卒中血管介入治疗时，在卒中易感血管中给予保护性基因预防再卒中发生的可行性。方法和结果：经颈动脉插管将rAAV1－IL－10或对照病毒注入大鼠脑动脉内，3周后在病毒注射同侧建立大脑中动脉阻塞模型（ MCAO），阻塞45 min后恢复脑血流再灌注。血流再灌注后24 h进行神经损伤评分并处死大鼠。原位杂交显示病毒成功感染脑动脉，rAAV1－IL－10显著降低脑缺血／再灌注引起的神经损伤评分，缩小梗死体积，降低损伤神经细胞比例。 IL－10降低脑梗死边缘区TNF－α的mRNA水平和血液中TNF－α蛋白水平，同时促进梗死边缘区HO－1的mRNA和蛋白表达。结论：脑动脉内预先感染rAAV1－IL－10能保护脑卒中的神经元，在卒中易感的脑血管中预防性给予保护性基因治疗策略具有可行性。
作者：梁秋娟 刊期： 2015年第10期
目的：通过分析C57BL／6野生型小鼠和TRPV1基因敲除鼠热性惊厥行为学、脑内炎性因子表达变化，探讨TRPV1对热性惊厥发生及复发的致病机制。方法：高热诱导C57BL／6野生型小鼠和TRPV1基因敲除鼠热性惊厥后：比较两组间热性惊厥行为学、脑电图及核心温度的差异；ELISA检测两组间大脑及经辣椒素和高热处理后BV2细胞中炎性因子的表达差异。结果：（1）行为学评分显示，与野生型小鼠相比：TRPV1基因敲除鼠经高热诱导惊厥后，其潜伏期延长，惊厥持续时间缩短，发作等级降低；TRPV1基因敲除鼠热性惊厥发作时无明显惊厥脑电棘波；TRPV1基因敲除鼠惊厥发作时核心温度升高；（2）野生型小鼠大脑海马和皮质中炎性因子的表达水平较常温对照组明显升高，TRPV1基因敲除鼠中未检测到类似结果；（3）经辣椒素、高热处理后，永生小胶质细胞系BV2分泌炎性因子的水平显著增加。结论：激活TRPV1可刺激炎性因子分泌，促进反复热性惊厥的发生，提示TRPV1通道可能是热性惊厥发生的潜在易感基因。
作者：黄文先；余方；刘玉强；闵加威；胡江建；韩松；刘万红；彭碧文；何小华 刊期： 2015年第10期
目的：研究褪黑素（melatonin，MT）对Toll样受体9（TLR9）配体CpG诱导巨噬细胞产生促炎症因子的影响及其机制。方法：先采用不同浓度MT处理小鼠腹腔巨噬细胞或小鼠巨噬细胞系Raw264．7，然后采用CpG刺激细胞；通过定量PCR检测MT受体MT1和MT2表达，通过ELISA和定量PCR检测细胞因子表达，通过Western blot检测信号转导蛋白的活化。结果：MT可上调巨噬细胞MT1和MT2的表达，MT可呈剂量依赖性抑制CpG刺激的巨噬细胞TNF－α、IL－6和IL－12的蛋白质和mR－NA的表达，采用MT1／2受体抑制剂Luzindole研究发现MT的抑制作用不依赖于MT1／2受体，检测信号转导蛋白发现MT可显著抑制CpG刺激的巨噬细胞ERK和AKT磷酸化，提示MT通过下调巨噬细胞ERK和AKT活化从而抑制CpG诱导的促炎症因子的分泌。结论：MT能抑制TLR9触发的巨噬细胞促炎症因子的分泌，其机制主要通过下调ERK和AKT活化，本研究进一步阐明MT调控固有免疫反应的作用与机制。
作者：王国权；刘凯；王寿棋；许熊飞 刊期： 2015年第10期
作者： 刊期： 2015年第10期
中国病理生理杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中国病理生理学会
