张水莲；沈静
目的：低氧会引起神经元产生内质网应激（ ERS），进而引起凋亡，非折叠蛋白反应（ UPR）可以缓冲ERS，减轻凋亡。本研究拟探明低氧时脑miR－199a－5p的变化对UPR的调控作用。方法：小鼠在6000 m低压舱中暴露0、3、10 d，或同时给予miR－199a－5p mimic模拟物干预，检测皮层和海马miR－199a－5p表达，及其靶蛋白ATF6和GRP78的mRNA和蛋白水平。利用电镜和TUNEL法检测ERS和凋亡，以及ERS凋亡通路caspase－12表达。结果：低氧增加了海马和皮层ERS和凋亡，3 d组较10 d组显著。 miR－199a－5p的表达随着低氧时间的延长逐渐降低，同时，ATF6和GRP78的表达逐渐增高，以10 d时为显著。在miR－199a－5p mimic的干预下，低氧时ATF6和GRP78的表达被显著抑制，神经元的ERS和凋亡水平，以及caspase－12的表达增高。结论：低氧时脑miR－199a－5p下调导致其靶蛋白ATF6和GRP78表达增加，促进UPR反应，对于保护神经细胞具有重要意义。
作者：李鹏；周思敏；郑善军 刊期： 2015年第10期
目的：高盐膳食是高血压等心血管疾病的主要危险因子。咖啡因是咖啡中的主要成分，具有急性利尿、利钠的作用，而长期使用咖啡因后对血压和尿钠排泄的影响还不清楚。本研究的目的是观察慢性咖啡因干预对血压和尿钠排泄的作用，并探讨其机制。方法：通过手术在盐敏感大鼠体内植入血压传感器，8％高盐饲料（对照组）或8％高盐饲料＋0．1％咖啡因饮用水（咖啡因组）干预大鼠15 d。检测大鼠血压变化，血管功能，心脏结构和功能，尿电解质。健康志愿者喝含咖啡因的咖啡（含300 mg咖啡因）或去咖啡因的咖啡，测量24 h尿钠排出和动态血压。结果：（1）慢性咖啡因干预减轻高盐膳食导致的盐敏感大鼠血压升高而不影响其交感神经活性。（2）慢性咖啡因干预增加大鼠尿钠排泄总量而不影响排尿量，该作用与激活皮质集合管AMPK从而抑制上皮钠通道（α－ENaC）重吸收钠离子有关。（3）摄入咖啡增加健康志愿者尿钠排泄56 mmol，相当于3．27 g NaCl，而对心率和血压没有显著影响。结论：（1）慢性咖啡因干预通过促进尿钠排泄拮抗盐敏感性高血压。（2）饮用含咖啡因的咖啡对盐敏感性人群来说可能是值得提倡的生活方式。
作者：杨涛；于浩；高鹏；魏星；张和轩；熊诗强；路宗师；黎黎；韦晓；陈静；刘道燕；祝之明 刊期： 2015年第10期
目的：检测黄芩素对B16细胞Ezrin蛋白表达的影响，探讨黄芩素抑制B16细胞增殖和迁移的可能机制。方法：MTT法检测黄芩素对B16细胞增殖的影响；划痕实验检测黄芩素对B16细胞迁移的影响；PCR法检测黄芩素对B16细胞p12－LOX和Ezrin mRNA的表达的影响；蛋白印迹法检测了黄芩素对B16细胞p12－LOX蛋白表达的影响；细胞荧光染色法检测黄芩素对B16细胞Ezrin蛋白的影响。结果：黄芩素素浓度和时间依赖性地显著抑制B16细胞的增殖和划痕修复；黄芩素明显抑制B16细胞的p12－LOX和Ezrin mRNA及蛋白的表达。结论：黄芩素抑制p12－LOX和Ezrin蛋白表达是黄芩素显著抑制B16细胞的增殖和迁移的可能机制。
作者：李娟；崔宇勃；叶晶；孙沛林；朴英实；林贞花；金京春 刊期： 2015年第10期
先天性心脏病是导致新生儿死亡的主要疾病之一，由于心脏发育过程是个复杂的级联调控网络，引起胚胎心脏畸形的原因非常复杂，包括大量的转录因子及其相关的信号通路的相互作用。抑制和干扰这些转录因子的表达能诱导心肌异常发育，造成心功能受损。本研究选择常见的环境危险因素--吸烟（尼古丁）为研究对象，分别从体内胚胎心脏的动物模型和体外干细胞心肌细胞分化模型探讨尼古丁如何影响心脏早期发育和心肌分化，并探讨其表观遗传学的调控机制，结果显示：长期、持续的尼古丁暴露能明显抑制胚胎心脏的发育和拟胚体向心肌分化；妊娠期持续给予尼古丁与母体被动吸烟具有相同的抑制左心功能的效应，包括降低LV mass、LVESV、LVEDV和LVPWTH等；持续给予尼古丁处理可选择性抑制心肌转录因子（ Tbx5和GATA4）的mRNA和蛋白水平，并降低GATA4阳性的心肌祖细胞数量，从而抑制拟胚体向心肌细胞的分化，该抑制效应能被尼古丁乙酰胆碱受体的抑制剂所阻滞；尼古丁促进干细胞DNA整体甲基化水平，影响心肌的发育。因此，环境因素吸烟（尼古丁）通过改变干细胞的表观甲基化修饰，进而调控心肌特异转录因子表达，诱发心脏的发育异常。
作者：余细勇 刊期： 2015年第10期
目的：探讨平原人进入高原早期脑形态结构、功能的变化及其与急性高原病的关系。方法：健康青年男性志愿者（22～27岁），分别在平原（300 m）和乘火车进入高原（3658 m）后第3天，进行脑部MRI检查。同时，观察记录志愿者的血氧饱和度、血常规及血液检测指标、急性高原反应症状评分等。结果：与平原相比，8名志愿者进入高原后第3天，脑部均呈现不同程度的结构变化，这些改变主要集中在胼胝体辐射线额部、额枕下束、前丘脑辐射（内囊）、胼胝体压部等脑区。其中，与平原相比， FA值在右侧胼胝体辐射线额部和额枕下束显著减小（ P＜0．01）；AD在左侧胼胝体辐射线额部和额枕下束及内囊显著减小（P＜0．01）；AD在胼胝体双压部显著增加（P＜0．01）；RD在右侧胼胝体辐射线额部和额枕下束显著增加（P＜0．01）；MD在右侧胼胝体压部和内囊显著增加（P＜0．05）；8名自愿者在通过量表问卷调查诊断仅有1名出现轻型急性高原病。 BOLD观察静息态下脑部的部分脑区有功能的变化。结论：平原人快速进入海拔3658 m高原早期（3 d），有不同程度的脑组织结构、功能的改变。
作者：吴刚；刘宝；邹利光；张静娜；孙滨达；邱明国；高钰琪 刊期： 2015年第10期
目的：观察氢饱和盐水对脂多糖（LPS）刺激的大鼠肺间质巨噬细胞（PIMs）分泌促炎细胞因子的影响。方法：应用胶原酶消化法结合肺泡耗竭灌洗和肺循环灌洗技术分离纯化SD大鼠PIMs，在用常规RPMI－1640培养基或含氢RPMI－1640培养基的情况下，用LPS（1 mg／L）刺激细胞一定时间，ELISA法检测细胞培养上清中TNF－α和IL－1β的含量，用RT－PCR技术分析细胞中TNF－α和IL－1βmRNA的表达。结果：各细胞因子的浓度随着LPS刺激时间的延长而升高，培养上清中TNF－α和IL－1β的浓度分别于LPS刺激后3和6 h达到高峰；选取各细胞因子表达高峰的时点观察含氢培养基对其表达的影响，发现含氢培养基可抑制LPS诱导的TNF－α和IL－1β。 LPS刺激PIMs后，TNF－α和IL－1βmRNA的表达也增高，分别于LPS刺激后2和3 h达到高峰，含氢培养基对TNF－α和IL－1βmRNA的表达也具有负向调节作用。结论：在体外培养的大鼠PIMs，含氢培养基可抑制LPS诱导的TNF－α和IL－1βmRNA表达及其蛋白合成释放。
作者：黄新莉 刊期： 2015年第10期
目的：探讨黄芪多糖（ APS）对L6成肌细胞葡萄糖摄取的刺激作用及其机制。方法：培养L6成肌细胞，采用2－脱氧－［3 H］－D－葡萄糖法检测细胞的葡萄糖摄取，高效液相色谱法检测细胞内的AMP含量， Western blotting法检测腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）和160 kD的Akt底物（AS160）的磷酸化水平；脂质体法瞬时转染4P突变型AS160（AS160－4P）质粒。结果：APS呈时间和浓度依赖性地刺激L6成肌细胞葡萄糖摄取，但可被AMPK抑制剂Compound C或转染AS160－4P质粒所抑制；APS可以提高细胞内的AMP含量；APS可以提高AS160的磷酸化水平，且这一作用可被Compound C抑制。结论：APS可以刺激L6成肌细胞的葡萄糖摄取，其机制可能与活化AMP－AMPK－AS160信号通路有关。
作者：鲍芳；吴胜英；欧阳静萍；刘坚 刊期： 2015年第10期
目的：探讨大蒜总皂苷对小鼠常压密闭缺氧存活时间的影响。方法：BALB／c小鼠30只，体重（20±2） g，随机分为3组（n＝10）：对照组、大蒜总皂苷低剂量组（50 mg／L）和高剂量组（200 mg／L），腹腔注射给药1次，给药体积0．1 mL／10 g，对照组给予相同体积的蒸馏水，给药后1 h将小鼠放入盛有5 g钠石灰的150 mL广口瓶中，用凡士林涂抹瓶口密封，记录小鼠存活时间。按公式计算小鼠标准耐受时间（min）＝存活时间／［瓶体积（mL）－体重（g）／0．94］×100。结果：与对照组比较，高剂量组显著延长了小鼠标准耐受时间；与低剂量组相比，高剂量组显著延长了小鼠标准耐受时间；低剂量组与对照组间没有显著差异。结论：大蒜总皂苷具有耐缺氧作用。
作者：周思敏；郑善军；张钢 刊期： 2015年第10期
目的：探讨急性低血压兴奋清醒大鼠前庭内侧核（ MVN）的5－羟色胺（5－HT）及其受体机制。方法：利用脑部微量透析法和免疫组织化学法观察了MVN区5－HT含量及其受体表达。结果：静脉注射硝普钠诱发急性低血压时，对照组和单侧前庭器官破坏对侧MVN区5－HT含量明显增加（P＜0．05），而单侧前庭器官破坏同侧MVN区5－HT含量无明显变化。在前庭器官完整大鼠诱发急性低血压后双侧MVN区5－HT及5－HT1A受体表达均明显增多，但是在对照组无明显表达，组间比较均具有显著差异（ P＜0．05）。破坏单侧外周前庭器官2周后，诱发急性低血压时双侧MVN区5－HT及5－HT1A受体均不对称表达，损伤侧表达均明显少于损伤对侧（ P＜0．01）。结论：清醒动物诱发急性低血压影响MVN功能活动过程中可能有5－HT及其受体的参与。
作者：江艺鑫；李香兰 刊期： 2015年第10期
目的：探讨成纤维细胞生长因子2（FGF－2）抗缺氧（H／R）／复氧诱导心肌细胞凋亡的新机制。方法：对各实验组分别检测心肌细胞活力与凋亡，p－Akt、p－GSK－3β、Bcl－2、Bax、caspase－3前体（32 kD）和活性体（17 kD）蛋白表达变化。结果：与control相比，H／R能明显抑制心肌细胞活力，诱导心肌细胞凋亡，下调p－Akt、p－GSK－3β、Bcl－2和caspase－3前体蛋白表达，上调Bax和caspase－3活性体蛋白表达；FGF－2可显著改善H／R对心肌细胞的损伤及对相关蛋白表达的影响，其作用能被PI3K特异性抑制剂LY294002和PKB／Akt特异性抑制剂SH－5拮抗。结论：FGF－2抗缺氧／复氧诱导心肌细胞凋亡，其机制与激活PI3K－PKB／Akt－GSK－3β信号通路有关。
作者：李国华；姜志胜 刊期： 2015年第10期
目的：探讨omega－3多不饱和脂肪酸（ polyunsaturated fatty acid， PUFA）对动脉粥样硬化斑块稳定性的作用及可能机制。方法：采用低密度脂蛋白受体敲除（Ldlr－／－）小鼠喂养西方饮食（western diet， WD）6周诱导动脉粥样硬化，并在饮食中添加或不添加3％omega－3 PUFA进行干预。使用液相质谱联用检测血浆中PUFA及其代谢产物浓度。油红O染色分析测定动脉树斑块面积及主动脉根部斑块脂质含量，HE染色分析主动脉根部斑块大小，天狼星红染色分析主动脉根部斑块胶原纤维含量，免疫荧光检测主动脉根部斑块巨噬细胞和平滑肌细胞含量。结果：（1）与WD组相比，omega－3组小鼠动脉树斑块面积比例显著降低。（2）Omega－3处理组与对照组相比，主动脉根部斑块面积、脂质含量和巨噬细胞含量显著降低；同时胶原纤维和平滑肌细胞含量显著上升，斑块不稳定指数下降（P＜0．05）。（3）Omega－3处理组血清中omega－3 PUFA显著增加，分析代谢产物发现EEQ和18－HEPE水平显著增加。结论：Omega－3处理减少动脉粥样硬化斑块面积、增加斑块稳定性，其机制可能与其代谢产物水平变化相关。
作者：刘亚晋；李丹；张栩；艾玎；朱毅 刊期： 2015年第10期
目的：观察蝎毒多肽提取物（ PESV）对H22肝脏原位移植瘤模型小鼠肝脏NK细胞表达及功能的影响。方法：C57BL／6小鼠肝脏接种H22肝癌细胞株悬液构建原位移植瘤模型，术后给予PESV大、小剂量及生理盐水灌胃，14 d后检测肝脏及浸润癌组织中NK细胞及穿孔素、颗粒酶B的表达变化并观察小鼠生存期。结果：PESV大、小剂量组肝脏移植瘤的生长受到抑制，肿瘤体积和瘤重均低于荷瘤对照组，肿瘤抑制率分别为30．77％和15．38％，生存期观察显示PESV大剂量组与荷瘤对照组相比差异显著；荷瘤对照组肿瘤细胞排列紧密，异型性显著，呈浸润性生长，PESV大、小剂量组出现明显坏死区，细胞异型性减轻；与荷瘤对照组相比，PESV大、小剂量组小鼠肝脏NK1．1＋细胞分别占肝脏总淋巴细胞的（4．13±0．43）％和（5．91±0．49）％，显著高于荷瘤对照组（ P＜0．05）；PESV大剂量组瘤组织中穿孔素和颗粒酶的mRNA表达量分别是荷瘤对照组的3．62倍和5．82倍（P＜0．05）。结论：PESV可通过提高H22肝脏原位移植瘤小鼠肝脏中NK细胞的表达，诱导穿孔素和颗粒酶B的产生，促进NK细胞杀伤活性的恢复，增强对肿瘤细胞的清除。
作者：韩琛；王朝霞；王恒孝 刊期： 2015年第10期
G蛋白偶联受体（ GPCR）与心血管疾病病、肿瘤、免疫和感染性疾病等重要疾病的发生、发展密切相关。同时，约50％药物都是以受体为靶点。但目前对受体精密调控机制尚不清楚。利用蛋白质组学、活细胞单分子荧光成像等方法，我们研究发现多种G蛋白偶联受体新调控机制。发现了肾上腺素受体新的调控子HIP－55（ hematopoietic progenitor kinase 1［ HPK1］－in－teracting protein of 55 kD）。 HIP－55通过蛋白质相互作用调控肾上腺素诱导转位激活、双相激活等受体激活方式。 HIP－55通过cAMP非依赖途径调控肾上腺素受体介导的p38、ERK1／2等重要信号通路。 HIP－55通过调控受体Clathrin内吞途径介导受体内吞、减敏及下游信号。此外，我们还发现另外一个生长分化因子15（growth differentiation factor－15，GDF－15）。 GDF－15通过抑制MMP途径，负调控肾上腺素诱导EGFR转位激活信号通路。基于G蛋白偶联受体信号调控机制的研究，我们也探索新的受体功能选择性药物研究开发，获得了一些候选化合物。
作者：李子健 刊期： 2015年第10期
目的：探讨靶向干扰 CIAPIN1基因表达对慢性粒细胞白血病（ CML）细胞系K562细胞增殖能力的影响。方法：针对CIAPIN1基因构建shRNA真核表达载体并稳定转染K562细胞系。 Real－time PCR及Western blotting技术鉴定干扰效率；CIAP－IN1基因沉默之后，改良MTT法检测细胞活力的变化；甲基纤维素集落形成实验观察细胞集落形成大小和数量的变化；流式细胞术检测细胞周期的改变；将K562细胞接种到裸鼠体内皮下，观察细胞在裸鼠体内成瘤能力的变化。结果：CIAPIN1基因表达下调后，K562细胞的活力下降；集落形成数量减少和集落减小；G1期细胞数量增加；小鼠体内成瘤能力明显降低。结论：下调CIAPIN1基因表达能够抑制K562细胞在体外及体内的增殖能力。
作者：王齐；王建；李庆华；庞天翔 刊期： 2015年第10期
目的：哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（ mammalian target of rapamycin， mTOR ）可调节细胞的生长、生存和自噬。本研究观察mTOR在人喉癌组织中的表达，明确其对喉癌发生与发展的关系；以mTOR抑制剂AZD8055处理人喉癌细胞系Hep－2，观察其抑瘤作用并探讨其作用机制。方法：免疫组织化学染色方法检测喉癌组织中mTOR的表达；分别以0．8、2．6、8、26和80μg／L的AZD8055处理Hep－2细胞24、48或72 h，MTT方法检测细胞增殖， TUNEL染色检测细胞凋亡，罗丹明123染色检测线粒体膜电位，Western blot和免疫荧光染色检测蛋白表达。结果：人喉癌组织中mTOR表达上调，并且其分化程度越低，mTOR表达水平越高。以AZD8055处理后， Hep－2细胞增殖减少，凋亡增加，线粒体膜电位下降；caspase－3表达上调， Bcl－2表达下调， BH3－only蛋白如Bim、Bid和Bad表达上调。结论：mTOR表达上调可参与喉癌的发生与发展，抑制mTOR活性可抑制喉癌细胞增殖，促进喉癌细胞凋亡，mTOR可作为喉癌治疗的潜在靶标。
作者：滕博；王贺彬；黄迪；李俊玮；赵丽晶 刊期： 2015年第10期
目的：探讨急性低血压兴奋清醒大鼠前庭内侧核（ MVN）的5－羟色胺（5－HT）及其受体机制。方法：利用脑部微量透析法和免疫组织化学法观察了MVN区5－HT含量及其受体表达。结果：静脉注射硝普钠诱发急性低血压时，对照组和单侧前庭器官破坏对侧MVN区5－HT含量明显增加（P＜0．05），而单侧前庭器官破坏同侧MVN区5－HT含量无明显变化。在前庭器官完整大鼠诱发急性低血压后双侧MVN区5－HT及5－HT1A受体表达均明显增多，但是在对照组无明显表达，组间比较均具有显著差异（P＜0．05）。破坏单侧外周前庭器官2周后，诱发急性低血压时双侧MVN区5－HT及5－HT1A受体均不对称表达，损伤侧表达均明显少于损伤对侧（ P＜0．01）。结论：清醒动物诱发急性低血压影响MVN功能活动过程中可能有5－HT及其受体的参与。
作者：江艺鑫；李香兰 刊期： 2015年第10期
目的：探讨沉默CIAPIN1基因对慢性粒细胞白血病K562细胞向粒系分化的影响。方法：针对CIAPIN1基因构建短shRNA真核表达载体并转染细胞。瑞氏染色观察细胞形态学变化；电镜观测细胞超微结构的改变；real－time PCR方法检测粒系分化标志基因mRNA水平的改变；Western blotting检测ERK1／2、JNK、p38 MAPK及Akt磷酸化水平的改变。结果：CIAPIN1基因沉默后，K562细胞的形态和超微结构趋向成熟粒细胞，表面分化抗原CD11b、NCF1、ORM1、C／EBPα和HIF1α的mRNA表达水平升高，ERK1／2磷酸化水平升高。结论：抑制CIAPIN1基因表达能促进K562细胞分化，ERK1／2磷酸化水平的升高可能参与了该分化过程。
作者：王齐；王建；李庆华；庞天翔 刊期： 2015年第10期
目的：建立高原肺水肿（ HAPE）动物模型，研究其基因表达谱改变，探讨HAPE的发生机制。方法：雄性SD大鼠随机分为常氧组（N）、常氧LPS组（LPS）、低氧组（H）和低氧LPS组（HL），建立HAPE动物模型。收集肺组织和支气管肺泡灌洗液（ BALF）细胞，采用Affymetrix表达谱芯片分析基因表达谱。结果：通过检测肺组织形态学、湿干比和BALF总蛋白，表明HAPE动物模型复制成功。在肺组织， H组119个基因表达上调，80个下调；LPS组659个基因表达上调，1137个下调；HL组1027个基因表达上调，2016个下调。 BALF细胞中，H组135个基因表达上调，86个下调；LPS组158个基因表达上调，135个下调；HL组1171个基因表达上调，318个下调。这些差异表达基因主要具有免疫反应、炎症反应、氧化还原反应、趋化作用等生物功能，参与细胞因子－细胞因子受体相互作用、造血细胞系、细胞黏附分子等代谢通路。结论：低氧可促进LPS诱导的炎症、免疫反应，相关信号通路可能在HAPE发生中具有重要作用。
作者：高文祥；徐刚；陈德伟；高钰琪 刊期： 2015年第10期
目的：研究A类清道夫受体（ SR－A1）介导的巨噬细胞活性改变在炎症性心肌病发展中的作用，揭示该心肌炎症中巨噬细胞调控的关键，探寻不同巨噬细胞在心肌炎症中发挥的不同作用。方法：取6～8周SR－A1＋／＋与SR－A1－／－雄性小鼠，经腹腔注射盐酸阿霉素构建扩张型心肌病模型。采用超声监测小鼠心功能，4周后收取小鼠心脏组织进行HE、Masson及猩红染色，测定心脏纤维化程度。由RT－PCR和ELISA检测小鼠组织和血清内炎症因子表达水平，流式细胞术和免疫组化检测小鼠心肌组织中巨噬细胞激活及浸润。通过免疫印迹法检测两组小鼠心肌组织中炎症信号通路和凋亡的改变。异体共生的方法检测不同巨噬细胞在心肌炎症中发挥的不同作用。结果：心超显示两组小鼠造模后均出现心功能降低，提示造模成功， SR－A1－／－组小鼠心功损伤更严重，且其炎症因子表达水平明显增高。同时，SR－A1－／－组小鼠心肌组织的纤维化水平，心肌细胞凋亡，炎症性巨噬细胞动员均高于SR－A1＋／＋组。异体共生表明，心肌炎症中组织巨噬细胞激活数量明显高于循环巨噬细胞。
作者：孙璇 刊期： 2015年第10期
目的：观察紫杉醇化疗时为缓解过敏反应而常规联用的组胺H1受体拮抗剂是否影响其疗效。方法：构建荷人卵巢癌裸鼠模型，随机分为对照、单用紫杉醇、单用异丙嗪、异丙嗪＋紫杉醇4组，6．5 mg／kg异丙嗪或生理盐水腹腔注射给药0．5 h后，再予腹腔注射10 mg／kg紫杉醇或生理盐水（每3 d 1次，共4次），测量肿瘤体积和瘤重。免疫组化检测肿瘤血管标志物CD31的表达；MTT法检测卵巢癌细胞株SKOV3和CAOV3的增殖情况；Annexin V／PI流式分析细胞的凋亡情况；荧光定量PCR检测VEGF mRNA的表达。结果：上述4组瘤体体积增加量和瘤重分别为461．52 mm3（0．451 g）、314．66 mm3（0．320 g）、571．81 mm3（0．503 g）和462．47 mm3（0．454 g）。单用异丙嗪组瘤体CD31的表达量高，异丙嗪＋紫杉醇联用组者亦明显多于单用紫杉醇组。异丙嗪对卵巢癌细胞的增殖、VEGF的表达和紫杉醇诱导的凋亡没有影响。结论：卵巢癌化疗时使用H1受体拮抗剂异丙嗪会降低化疗药的效果，机制可能与异丙嗪促进肿瘤血管生成有关。
作者：李于鑫；杜安通；范梦迪；朱晓彤；陈玉霞 刊期： 2015年第10期
中国病理生理杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中国病理生理学会
