吴刚；刘宝；邹利光；张静娜；孙滨达；邱明国；高钰琪
目的：观察CMKLR1过表达在大鼠非酒精性脂肪性肝炎脂肪组织中的作用及意义。方法：制备携带大鼠CMKLR1基因的慢病毒载体。12周龄雄性SD大鼠随机分4组：对照12只；模型12只；转染12只，空转染6只。对照普通饮食；余高脂饮食；第1天转染组尾静脉注射病毒液100μL，空转染组注射空病毒液100μL，余注射PBS 100μL。分批处死空转染组评价转染效率。第8、12周，分批处死大鼠，留肝、脂肪组织。结果：（1）肝HE示：对照大鼠肝细胞条索清晰；模型组8周出现单纯性脂肪肝；12周出现非酒精性脂肪性肝炎；转染组肝病理程度比同期模型组轻。（2）模型组与同期对照组相比脂肪组织中CMKLR1 mRNA和蛋白表达增加，但差异无统计学意义，转染组比同期模型组显著增高（ P＜0．05）；模型组大鼠与同期对照组相比脂肪组织中脂联素基因和蛋白表达降低，转染组比同期模型组显著增高（P＜0．05）。结论：（1）高脂饮食12周成功建立了大鼠非酒精性脂肪性肝炎模型；（2）脂肪组织中CMKLR1过表达可显著改善大鼠非酒精性脂肪性肝炎时肝组织病理学改变。
作者：刘近春 刊期： 2015年第10期
核糖体S6激酶（ribosomal S6 kinase，RSK）2属于Ras－MAPK下游通路的90 kD的RSK家族，该家族包含4个成员（ RSK1～4）及2个结构同系物MSK1／2。 RSK家族的成员具有高度的序列同源性（75％～80％的氨基酸序列是一致的），只有2个激酶功能域不同。尽管结构相似，它们在组织内的分布及功能却不尽相同［1］，而本文主要介绍 RSK2。RSK2的发现起始于它的基因缺陷会导致科－勒二氏综合征（ Coffin－Lowry syndrome，CLS），一种罕见的神经退行性疾病［1］。后来深入的研究发现， RSK2是ERK1／2直接的下游底物，RSK2一旦被激活就会转入到核中磷酸化多种核蛋白，从而调控细胞的多项生命活动包括细胞的增殖、周期、转化等。近几年有不少研究证实RSK2的蛋白水平在恶性肿瘤及组织中较正常细胞及组织明显偏高［2］，而研究者们一直致力于寻找高效低毒的靶向RSK2的抑制剂。由此可见，RSK2是一个很有潜力的抗癌靶标。本文主要就RSK2的结构功能、与肿瘤的关系及现有抑制剂展开介绍。
作者：陈康杏；王籽又；黄燕霞；钟承志；李凯恒；黄遵楠 刊期： 2015年第10期
目的：研究蛋白激酶C（ PKC）抑制剂对人胃肠道间质瘤GIST细胞株生长抑制与诱导凋亡作用，并对其细胞凋亡机制进行研究。方法：体外培养人胃肠道间质瘤GIST细胞。采用MTT法测定了不同浓度PKC抑制剂在不同时间下对GIST细胞生长的抑制率。流式细胞术检测细胞凋亡率，分析细胞周期分布。采用倒置显微镜及荧光染色法下观察不同浓度药物作用下GIST细胞形态学变化。 Western blot法检测内质网应激相关蛋白GRP78与GADD153的表达。结果： PKC抑制剂对GIST细胞有明显的抑制增殖及促进凋亡的作用，并与时间和剂量呈正相关。倒置显微镜及荧光显微镜下可见胞浆内出现空泡，细胞核固缩等现象。经PKC抑制剂作用后，GIST细胞的GRP78与GADD153蛋白表达上调。结论： PKC抑制剂能显著抑制人胃肠道间质瘤GIST细胞的增殖，并在内质网应激参与下促进其细胞的凋亡。
作者：方学森；李香丹；杨莎莎；金头峰 刊期： 2015年第10期
目的：探讨Neuro－2a细胞株用于A型肉毒毒素重链（ botulinum neurotoxin serotype A heavy chain， BoNT／A HC）体外细胞模型的可行性。方法：体外培养Neuro－2a细胞检测HC相关受体，确定是否可用于HC作用的体外模型；后于Neuro－2a细胞培养液内加入一定浓度的HC，于不同时点在相差显微镜下摄取图片观察HC对细胞突起生长状况的影响，包括有突起细胞的百分比、细胞突起的长度以及突起总数。结果：（1）培养一定时间的Neuro－2a细胞表达HC的高亲和力（synaptic vesicle 2，SV2）和低亲和力（trisialoganglioside 1b，GT1b）受体。（2）培养液内加入一定剂量的HC可促进Neuro－2a细胞突起再生及增长。在HC影响下，有突起的Neuro－2a细胞百分比、神经突起的总数量以及平均突起的长度皆较对照组明显增加，且差异具有统计学意义（ P＜0．05）。结论：Neuro－2a细胞可用于HC体外研究的细胞模型；Neuro－2a对HC比较敏感；一定剂量的HC能够促进神经突起的生长。
作者：王红；李夏青 刊期： 2015年第10期
暖场在以问题为基础的学习（ problem－based learning，PBL）教学中具有非常重要的作用，关系到后续案例讨论能否顺利开展，同学是否积极参与，老师能否把握引导作用，带领同学进行案例学习的同时帮助他们提高专业素养、沟通技巧和社会责任感。好的暖场主要取决于带教老师，老师应尽可能采取开放的态度，不拘泥于简单的自我介绍，灵活掌握，不拘一格：（1）简单常用的是让学生介绍一下自己姓名的来历或者家乡的特色，一般他们都会很乐意介绍，这样气氛很快就能活跃起来，有助于培养师生之间自然融洽的关系；（2）如果恰逢某个假期，可以让学生介绍一下自己这个假期的活动安排，通过谈论一些有趣的见闻自然而然地拉近大家的距离；如果近期社会有某件热点事件发生，可以让大家自由发表观点，老师借此机会帮助学生树立正确的世界观、人生观和价值观；（3）对于已经有过多次PBL经验的学生，还可以设计几个面试场景，让他们以应聘者的角色进行自我推销，通过老师和同学的点评，为他们以后应对各种面试积累宝贵的经验。
作者：王瑾瑜；徐海；李丽；向若兰；吴立玲 刊期： 2015年第10期
作者： 刊期： 2015年第10期
目的：从血管内皮细胞（ VEC）通透性角度探讨肺炎衣原体（ C．pn）感染促进单核细胞跨内皮迁移的机制。方法及结果：单核细胞跨内皮迁移实验和TEER结果表明，C．pn感染可促进单核细胞跨内皮迁移，且这种作用可能与C．pn感染增加VEC通透性有关；免疫荧光结果显示，C．pn感染后，细胞膜上的VE－钙黏素向胞浆转移，并使细胞间连接处出现缝隙；Western blot实验结果进一步证实C．pn感染可促使VE－钙黏素（Y658）发生酪氨酸磷酸化。液闪计数仪检测结果显示，C．pn感染可使Src激酶的活性明显增强。 Src激酶选择性抑制剂PP2可抑制C．pn感染诱导的VE－钙黏素（ Y658）酪氨酸磷酸化，减少感染引起的VE－钙黏素由胞膜向胞浆转移，并使细胞间连接处的缝隙减小，进而降低C．pn感染增加VEC通透性的作用，终削弱感染对单核细胞跨内皮迁移的促进作用。结论：C．pn感染可能通过激活Src激酶促使VE－钙黏素（ Y658）发生酪氨酸磷酸化以增加VEC通透性，进而诱导单核细胞跨内皮迁移。
作者：马路；张利军 刊期： 2015年第10期
目的：对信号转导及转录激活因子3（signal transducer and activators of transcription，STAT3）高表达转基因小鼠进行鉴定和初步检测，为银屑病病理机制和药效研究提供可靠的动物模型。方法：显微注射技术构建STAT3高表达小鼠并进行繁殖， PCR法鉴定小鼠基因。将STAT3＋／－小鼠与野生小鼠（C57BL／6J）进行对比，HE染色法观察皮肤病理；免疫组织化学法观察皮肤STAT3、p－STAT3和PCNA的表达；real－time PCR检测皮肤炎症因子IL－6和IL－23。结果：STAT3＋／－小鼠阳性率为50％。与野生小鼠相比，STAT3＋／－小鼠皮肤表皮厚度明显增加，颗粒增多，棘层增厚；皮肤中STAT3表达差异不明显，但STAT3＋／－小鼠的胞浆中p－STAT3棕褐色颗粒明显增多；PCNA染色可见多个细胞核内呈现棕褐色颗粒，有丝分裂特征显著。 STAT3＋／－小鼠皮肤炎症因子IL－6和IL－23 mRNA表达分别为野生小鼠的16．40和14．19倍。结论：STAT3＋／－小鼠具备银屑病样皮损的典型特征，可作为研究银屑病病理机制和药效的动物模型。目的：对信号转导及转录激活因子3（signal transducer and activators of transcription，STAT3）高表达转基因小鼠进行鉴定和初步检测，为银屑病病理机制和药效研究提供可靠的动物模型。方法：显微注射技术构建STAT3高表达小鼠并进行繁殖， PCR法鉴定小鼠基因。将STAT3＋／－小鼠与野生小鼠（C57BL／6J）进行对比，HE染色法观察皮肤病理；免疫组织化学法观察皮肤STAT3、p－STAT3和PCNA的表达；real－time PCR检测皮肤炎症因子IL－6和IL－23。结果：STAT3＋／－小鼠阳性率为50％。与野生小鼠相比，STAT3＋／－小鼠皮肤表皮厚度明显增加，颗粒增多，棘层增厚；皮肤中STAT3表达差异不明显，但STAT3＋／－小鼠的胞浆中p－STAT3棕褐色颗粒明显增多；PCNA染色可见多个细胞核内呈现棕褐色颗粒，有丝分裂特征显著。 STAT3＋／－小鼠皮肤炎症因子IL－6和IL－23 mRNA表达分别为野生小鼠的16．40和14．19倍。结论：STAT3＋／－小鼠具备银屑病样皮损的典型特征，可作为研究银屑病病理机制和药效的动物模型。
作者：解欣然；张蕾；王宁；李萍 刊期： 2015年第10期
本研究动态比较诱导性多能干细胞（iPSC）静脉移植和局部滴注方式对皮肤全层创伤愈合的影响及活性氧（ROS）的作用。用H2 O2或N－乙酰－L－半胱氨酸（ NAC）预处理调节iPSC内ROS含量。连续12 d拍照测量创口面积并计算创口愈合百分率。于术后第3、5、12天分批处死动物并取材，应用Masson三色染色检测创口组织内的胶原蛋白相对含量以及上皮厚度，免疫组化检测肉芽组织内的新生血管数，实时荧光定量PCR和Western blot技术检测创伤组织内细胞因子和HO－1含量，用荧光共定位的方法探讨iPSC分化为血管内皮细胞的能力。发现局部滴注iPSC促进皮肤创伤愈合的疗效明显优于静脉移植。 iP－SC促进创口愈合，显著提高创缘上皮厚度、皮肤创伤组织的胶原蛋白、TGF－β、IL－1β、MCP－1、HO－1和VEGF水平以及创口肉芽组织内新生血管数，适度H2 O2的预处理增强iPSC的上述作用，NAC的预处理阻断iPSC的作用。 H2 O2的预处理促进iPSC在创伤组织中着床并分化为血管内皮细胞。本研究表明iPSC可促进皮肤伤口愈合，iPSC的正常功能需要适度ROS代谢。
作者：陆鹏；李宁；康雪玲；全晶；陈思锋 刊期： 2015年第10期
目的：富含n－3多不饱和脂肪酸（ n－3PUFA）的鱼油可有效降低动脉粥样硬化、心肌梗死等心血管疾病的发生率和死亡率，但其机制尚未明确。本研究利用脂质代谢组学研究心肌梗死小鼠模型中n－3PUFA代谢谱及具体产物在冠心病防治中的价值与意义。方法：运用富含EPA／DHA的鱼油饲料喂养C57BL／6小鼠3周，普食喂养作为对照组。造心梗模型，利用高通量PUFA靶向代谢组学平台，检测血浆、组织等n－3PUFA代谢产物、心肌梗死面积、心脏功能等。同时利用Fat－1转基因小鼠作为阳性对照。结果：代谢组学分析得到70余种PUFA代谢产物。发现鱼油喂食与Fat－1转基因组的体内n－3PUFA及其代谢产物明显增高，而n－6PUFA代谢产物含量明显降低。不同处理组心肌梗死7 d后，发现转基因组和鱼油喂食组心梗面积较对照组小，心功能较好。细胞实验证明EPA对心肌细胞缺氧具有保护作用。进一步将要验证不同代谢通路产物对心肌细胞功能的影响及代谢酶活性变化。结论：n－3PUFA具有保护心梗后心肌损伤作用，通过代谢组学可以发现具有保护作用的代谢通路及产物。
作者：房煊；张栩；朱毅 刊期： 2015年第10期
目的：探索指导性预习在实验教学中的合理应用方法。方法：五年制本科中施行教师指导性预习、学生普通预习两种方法，在教学中期及结束后，进行问卷调查。指导性预习由教师设计预习方案，学生以组为单位进行预习。内容由易到难，后阶段，学生能够在方案指导下，完成全部预习，自主完成实验。结果：学生对指导性预习满意度98％，提高学习积极性100％，教学效果满意度95％。结论：指导性预习可提高课堂教学效率和效果，提高学生的自主学习能力。需要设计合理方案，循序渐进，逐步训练学生预习的能力，才能达到预期目的。
作者：胡海 刊期： 2015年第10期
目的：探讨N－乙酰半胱氨酸（ NAC）是否通过影响心肌细胞内抗氧化通路蛋白的氧化还原状态从而在心肌细胞氧化应激中发挥保护作用。方法：用H2 O2刺激H9c2心肌细胞导致氧化应激损伤。采用CM－H2 DCFDA荧光染料检测细胞内ROS变化情况；谷胱甘肽试剂盒检测细胞内GSH和GSSG的水平；非还原Western blot技术检测Trx1、GR、Prx1和PTEN的氧化还原状态；还原Western blot检测ASK1和AKT的磷酸化。结果：NAC预处理组明显增加心肌细胞氧化应激时的细胞活力和GSH／GSSG比值，并且降低细胞内ROS水平。非还原Western blot显示H2 O2刺激使还原型Trx1明显减少，氧化型GR、Prx1和PTEN显著增多，NAC预处理可以增加还原型Trx1，减少氧化型GR、Prx1和PTEN。还原Western blot发现，NAC预处理之后， H2 O2诱导的ASK1磷酸化明显减少，而H2 O2诱导的AKT磷酸化明显增加。结论：NAC通过减少胞浆内抗氧化蛋白的氧化从而保护心肌细胞氧化应激损伤。
作者：刘协红；蔡姣迪；肖献忠；张华莉 刊期： 2015年第10期
目的：检测SLC14a1基因在小鼠脑组织的表达定位；探讨SLC14a1基因缺失小鼠给予高盐饮食后脑脊液钠离子浓度的变化。方法：（1）以野生型小鼠为研究对象，检测SLC14a1 mRNA和蛋白在小鼠脑组织中表达及定位。（2）以SLC14a1基因缺失小鼠为研究对象，以野生型小鼠为对照，分别给予普通饮食（0．4％NaCl）和高盐饮食（8％ NaCl）2周；观察各组动物血压的变化；（3）对比观察2组动物脑脊液钠离子浓度。结果：（1）RT－PCR方法显示SLC14a1 mRNA在小鼠脑组织；免疫组织化学染色方法及Western blot方法检测SLC14a1蛋白表达于小鼠脑组织脉络丛；（2）给予高盐饮食2周后，SLC14a1基因缺失小鼠组小鼠血压显著增高（P＜0．05 vs普通饮食）；（3）给予高盐饮食后，SLC14a1基因缺失小鼠脑脊液钠离子浓度显著高于野生型小鼠（P＜0．05）。结论：SLC14a1基因表达于小鼠脑组织脉络丛，SLC14a1基因的缺失能增加高盐饮食小鼠脑脊液钠离子浓度。
作者：王松；林子琦；林海雪；李金燕；郭丽荣 刊期： 2015年第10期
阿尔茨海默病（ Alzheimer’ s disease ，AD）是一种常见的进行性神经退行性病，迄今为止，临床尚无理想的治疗药物。我们从真菌土曲霉中分离得到一个新的碳骨架--萜类化合物A（ Terreterpenoid A），这也是首次从长江底淤泥中分离得到一个新的碳骨架的类单萜蛋白。通过能量共振转移技术（FRET）发现Terreterpenoid A可以显著降低β－分泌酶（BACE1）的活性，且IC50值为80 nmol／L。在3×TgAPP／PS1／P301L小鼠侧脑室注射Terreterpenoid A后，发现BACE1的活性和Aβ42的水平显著下降。形态学和免疫印迹结果显示，Terreterpenoid A可以显著提高树突棘密度和突触后相关蛋白PSD95、PSD93的表达水平。另外，我们也观察到注射Terreterpenoid A后，3×Tg模型鼠的学习和记忆能力有明显提高。结果分析显示Terreterpenoid A可能是治疗AD的一种天然化合物。
作者：包建；齐昌兴；黄芳；薛永波；张勇慧；王小川 刊期： 2015年第10期
目的：我们的前期研究发现，敲除FKBP12．6基因可导致成年雄性小鼠心肌肥大。本研究旨在探讨FKBP12．6缺失导致性别差异性心肌肥大的分子机制。方法：手术摘除FKBP12．6基因敲除小鼠睾丸以观察对心肌肥大的影响；放射性免疫检测法（RIA）和ELISA法检测FKBP12．6敲除小鼠17β－estradiol （E2）、testosterone （T）、LHβ和FSHβ分泌变化情况；建立垂体神经元LβT2 FKBP12．6shRNA载体稳定干扰细胞系，采用Fluo3－AM荧光探针检测［ Ca2＋］ i；real－time PCR检测LHβ、FSHβ、calci－neurin（CaN）等mRNA表达变化；分离胞浆胞核蛋白，Western blot法检测CaN、MCIP1．4、NFAT3、Nur77、Pin1等蛋白表达和核浆分布情况。结果：摘除雄性FKBP12．6基因敲除鼠的睾丸可显著抑制心肌肥大的发生；FKBP12．6敲除小鼠心脏中可能促进心肌肥大的通路CaN和CaMKⅡ的表达和活性并未发生明显变化；血清E2、T、LHβ及FSHβ水平与WT相比显著上调，表明敲除小鼠性腺轴调控增强；LβT2 FKBP12．6干扰后［ Ca2＋］ i 显著上升；性腺轴相关基因LHβ、SF－1、Nur77和钙离子相关基因CaN、MCIP1．4、SERCA2的mRNA表达显著上调；胞浆中CaN和MCIP1．4蛋白水平上调；NFAT3、Nur77和Pin1核转位明显增加。结论：FKBP12．6缺失后垂体细胞内钙离子水平上调，激活CaN／NFAT3通路，进而促进LHβ和FSHβ转录，导致下丘脑－垂体－性腺轴激活，从而诱发性别差异性心肌肥大。
作者：肖云飞；邓柯玉；王婵娟；曾智雄；管小卉；汪玲芳；姬广聚；寿伟年；辛洪波 刊期： 2015年第10期
目的：探讨促红细胞生成素（ EPO）对压力超负荷大鼠心肌NADPH氧化酶的影响。方法：SD雄性大鼠，腹主动脉结扎复制高血压模型。随机分成3组：模型组（ model）；假手术组（ sham）：除不缩窄腹主动脉外，其余操作同腹主动脉缩窄组；重组人促红细胞生成素治疗组（ rhEPO，腹腔注射4000 U／kg，每周2次）。8周后，心动超声和血流动力学评价心功能； Masson染色观察心肌纤维化程度；实时荧光定量PCR检测Nox2和Nox4 mRNA 表达， Western blot 观察心肌Nox2、Nox4和炎性因子CD45、F4／80、TGF－β蛋白表达。结果：与模型组比较，EPO治疗组LVEF、LVFS、LVESP及±dp／dtmax升高， LVESD、LVEDD及LVEDP下降；同时，EPO可降低压力超负荷所致的心肌纤维化，降低心室肌中NADPH氧化酶活性及心肌炎性反应。结论：EPO通过降低NADPH氧化酶活性，抑制心肌氧化应激水平，减少心肌炎性反应，抑制压力超负荷所致大鼠心肌重构，改善心功能。
作者：王丽萍 刊期： 2015年第10期
目的：探讨靶向干扰SIRT2基因表达对急性粒细胞白血病（ AML）多药耐药细胞株HL60A细胞增殖的影响。方法：针对SIRT2基因构建shRNA真核表达载体，制备慢病毒并感染HL60A细胞。沉默SIRT2基因之后，改良MTT法检测对HL60A细胞活力的影响；甲基纤维素集落形成实验观察对HL60A细胞集落形成能力的影响；采用流式细胞术检测分析对HL60A细胞的细胞周期的影响。结果：干扰组SIRT2基因的表达量被有效抑制；干扰SIRT2基因表达量后，HL60A细胞的细胞活力明显下降，集落形成数量减少及集落的形状减小，细胞被明显阻滞于G1／S期。结论：shRNA靶向干扰SIRT2基因的表达可有效抑制急性粒细胞白血病耐药细胞系HL60A细胞的增殖。
作者：许华；王齐；李元叶；李庆华；庞天翔 刊期： 2015年第10期
目的：炎症和免疫细胞的活化参与心肌重塑的发生，已表明恒定自然杀伤T细胞（ invariant natural killer T cells， iNKT细胞）产生炎症因子，调节组织的炎症反应。然而，目前iNKT细胞在心肌重塑中的作用还不清楚。方法：血管紧张素II（1000 ng? kg－1? min－1）灌注诱导心肌重塑的发生，植入缓释泵之前，给予自然杀伤T细胞的激动剂α－Galce。结果：血管紧张素II灌注3、7和14 d后，心肌组织中iNKT细胞的数量明显增加，7 d时增加明显。血管紧张素II灌注小鼠明显增加小鼠血压，降低心肌收缩功能，增加心肌肥大、纤维化和炎症；NKT细胞激动剂明显减轻了以上反应。以上保护作用通过增加释放IL－10。而且，我们进一步在iNKT细胞敲除小鼠验证以上结果。结论：iNKT细胞通过增加心肌保护细胞因子如IL－10拮抗血管紧张素II诱导的心肌重塑。
作者：李文君；田翠；鄢雯；刘立新；王红霞；李汇华 刊期： 2015年第10期
作者： 刊期： 2015年第10期
目的：了解中国9个中心城市10家教学医院ICU内耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（ MRSA）的耐药性、同源性及分子流行病学特点。方法：收集鉴定出2010年10月至2011年12月间全国10家ICU内的MRSA菌株149株。检测其对18种抗菌药物的耐药性，利用脉冲场凝胶电泳（PFGE）技术进行同源性分析，并应用多位点序列分析（MLST）技术进一步进行序列型（ST）分型。结果：药敏试验结果显示万古霉素及利奈唑胺仍对MRSA敏感，氯霉素、利福平、复方新诺明及庆大霉素对MRSA的敏感性相对较高，而其它药物对MRSA的敏感性均较低；PFGE主要型别为J、C、G、F四型（ J、C、G集中在北方地区，F集中在南方地区）；全国MLST分型以ST－239为主，东北亚地区ST－5占比较高。结论：目前ICU内可选的对MRSA敏感的抗菌药物种类已经十分有限；ICU内MRSA的区域性同源性较高，可能存在同源性播散性感染，需要继续加强监测并采取有效的院感控制措施避免MRSA同源暴发流行。
作者：秦永新；李青栋；万献尧；毕丽岩；王晶 刊期： 2015年第10期
中国病理生理杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中国病理生理学会
