李于鑫；杜安通；范梦迪；朱晓彤；陈玉霞
目的：持续缺氧可通过激活PI3K／Akt／Rho激酶信号通路引发冠状动脉痉挛，同型半胱氨酸（ Hcy）的血浆浓度升高是心血管疾病的一个重要危险因素，本研究旨在探讨Hcy对缺氧诱导猪冠状动脉痉挛的影响及其可能机制。方法：离体血管环灌流实验测定猪离体冠状动脉的张力变化；免疫印迹检测磷酸化与总的MLC、Akt和MYPT1蛋白表达水平。结果：持续缺氧15 min以上可引起猪冠状动脉的持续收缩，预孵育Hcy（0．1～1 mmol／L）30 min，可以浓度依赖性地抑制缺氧诱导的冠脉收缩；而预孵育相同浓度的Hcy对该收缩无影响。缺氧15 min时冠状动脉p－MLC （ Ser19）蛋白水平显著降低，持续缺氧60 min时p－MLC （Ser19）水平较缺氧15 min时升高。预孵育Hcy（1 mmol／L）30 min，对缺氧15 min引起的p－MLC（Ser19）蛋白水平降低无影响，但抑制了缺氧60 min时p－MLC（Ser19）的升高。预孵育Hcy（1 mmol／L）30 min对持续缺氧引起p－Akt（Ser473）的变化影响不大。结论：Hcy可能通过激活Rho激酶改善缺氧诱导猪冠状动脉非内皮依赖的收缩。
作者：安苑铭；吴立玲；窦豆 刊期： 2015年第10期
目的：低氧会引起神经元产生内质网应激（ ERS），进而引起凋亡，非折叠蛋白反应（ UPR）可以缓冲ERS，减轻凋亡。本研究拟探明低氧时脑miR－199a－5p的变化对UPR的调控作用。方法：小鼠在6000 m低压舱中暴露0、3、10 d，或同时给予miR－199a－5p mimic模拟物干预，检测皮层和海马miR－199a－5p表达，及其靶蛋白ATF6和GRP78的mRNA和蛋白水平。利用电镜和TUNEL法检测ERS和凋亡，以及ERS凋亡通路caspase－12表达。结果：低氧增加了海马和皮层ERS和凋亡，3 d组较10 d组显著。 miR－199a－5p的表达随着低氧时间的延长逐渐降低，同时，ATF6和GRP78的表达逐渐增高，以10 d时为显著。在miR－199a－5p mimic的干预下，低氧时ATF6和GRP78的表达被显著抑制，神经元的ERS和凋亡水平，以及caspase－12的表达增高。结论：低氧时脑miR－199a－5p下调导致其靶蛋白ATF6和GRP78表达增加，促进UPR反应，对于保护神经细胞具有重要意义。
作者：李鹏；周思敏；郑善军 刊期： 2015年第10期
目的：研究动脉粥样硬化（ As）小鼠斑块稳定期和易损期主动脉基因启动子区DNA甲基化及基因表达差异。方法：以高脂喂养的ApoE－／－小鼠为As模型，喂养3个月和6个月，复制斑块稳定期和易损期的As模型，用正常喂养的C57小鼠对照，采用小鼠启动子区DNA甲基化芯片联合表达谱芯片筛选。结果：与正常C57小鼠相比，高脂喂养3个月组（简称3月组）小鼠DNA甲基化启动子区芯片筛选出差异基因4739个，高脂喂养6个月组（简称6月组）小鼠芯片筛选12568个。3月组小鼠基因芯片筛选出差异基因2615个，6月组2450个。其中3月组负相关表达基因44个，6月组166个。通过生物信息学软件分析，验证得到3月组DNA甲基化差异基因2个，6月组4个。结论：在小鼠主动脉As斑块易损期 DNA甲基化的调控作用表现得更为显著。 IRS－1等6个候选基因可能是As斑块从稳定期到易损期转变过程中关键的靶基因， PI3K－AKT通路和HIF－1通路可能是As斑块从稳定期到易损期转变过程中调控甲基化差异基因的重要信号通路。
作者：周明学；康群甫；刘卫红；刘红旭 刊期： 2015年第10期
目的：探讨白藜芦醇（ resveratrol，Res）对异丙肾上腺素（ isoproterenol，ISO）诱导的大鼠肥大心肌细胞的保护作用及机制。方法：ISO建立乳鼠心肌肥大细胞模型，分为control组、ISO组、Res干预组和Res对照组。检测心肌细胞表面积和ANP基因表达；流式细胞仪检测细胞凋亡率；电镜观察心肌细胞超微结构；检测培养液中乳酸脱氢酶（ LDH）和丙二醛（ MDA）含量；RT－PCR和Western blot分析GRP78、CHOP、Bcl－2和Bax的mRNA和蛋白表达。结果：Res有效抑制ISO诱导的心肌细胞表面积和ANP基因表达，心肌细胞凋亡率减少，同时下调GRP78、CHOP和Bax的mRNA和蛋白表达，上调Bcl－2 mRNA和蛋白表达，降低培养液中LDH和MDA含量。结论：Res明显减轻ISO诱导的心肌细胞肥大和凋亡，其机制可能通过抑制内质网应激因子GRP78和CHOP表达，逆转凋亡因子Bcl－2和Bax蛋白表达有关。
作者：林岩；王国忠；金莉；肖薇；李波；王珺 刊期： 2015年第10期
暖场在以问题为基础的学习（ problem－based learning，PBL）教学中具有非常重要的作用，关系到后续案例讨论能否顺利开展，同学是否积极参与，老师能否把握引导作用，带领同学进行案例学习的同时帮助他们提高专业素养、沟通技巧和社会责任感。好的暖场主要取决于带教老师，老师应尽可能采取开放的态度，不拘泥于简单的自我介绍，灵活掌握，不拘一格：（1）简单常用的是让学生介绍一下自己姓名的来历或者家乡的特色，一般他们都会很乐意介绍，这样气氛很快就能活跃起来，有助于培养师生之间自然融洽的关系；（2）如果恰逢某个假期，可以让学生介绍一下自己这个假期的活动安排，通过谈论一些有趣的见闻自然而然地拉近大家的距离；如果近期社会有某件热点事件发生，可以让大家自由发表观点，老师借此机会帮助学生树立正确的世界观、人生观和价值观；（3）对于已经有过多次PBL经验的学生，还可以设计几个面试场景，让他们以应聘者的角色进行自我推销，通过老师和同学的点评，为他们以后应对各种面试积累宝贵的经验。
作者：王瑾瑜；徐海；李丽；向若兰；吴立玲 刊期： 2015年第10期
机体局部或全身失控性炎症反应是急性肺损伤（ acute lung injury， ALI）的重要病理生理特征。脂氧素（ lipoxin， LX）是机体重要的促炎症缓解物质。气道上皮细胞是组成气道屏障和气道环境刺激首先受累的细胞，外界刺激和肺组织内异常的活性氧引起气道上皮损伤在ALI中扮演重要角色。本研究发现，LX稳定气道上皮细胞钙黏蛋白（ E－cadherin）的表达保护其完整性，改善气道通透性，有效缓解脂多糖（ lipopolysaccharide， LPS）吸入引起的小鼠ALI。低温成像结果表明LX逆转LPS吸入引起的小鼠肺组织线粒体氧化还原状态失衡，并抑制LPS引起人气道上皮细胞16HBE中活性氧的产生。采用荧光共振能量转移技术监测16HBE细胞中调节抗氧化基因的重要转录因子Nrf2和其胞浆负性调节伴侣分子Keap1的解离，证实LX通过促进Nrf2蛋白ser40位点的磷酸化使其解离活化发挥其保护效应。转入显性负性突变的质粒pDN－Nrf2后，LX对16HBE钙黏蛋白表达的稳定作用几乎消失。综上所述，我们认为LX通过Nrf2调节气道上皮细胞E－cadherin的表达而保护LPS引起的ALI。
作者：程雪；苗烁；吴萍 刊期： 2015年第10期
癌细胞中葡萄糖代谢的方式为细胞的快速增殖提供了物质和能量基础。去乙酰化酶SIRT3在癌细胞葡萄糖代谢重排和凋亡调控的过程中发挥着重要的作用，有可能成为一个有效的癌症治疗靶点。在本研究中，我们发现BH3－only模拟物S1能够抑制卵巢癌SKOV3裸鼠移植瘤的生长，同时能够上调SIRT3的表达。为了探讨S1对卵巢癌细胞糖代谢的影响及其分子机制，通过检测SKOV3细胞在S1作用下线粒体氧耗率（ OCR）、胞外泌酸率（ ECAR）以及葡萄糖摄入能力的改变，我们发现S1能够损伤线粒体呼吸链和抑制葡萄糖摄取。通过siRNA干扰SIRT3的表达，能够逆转S1对葡萄糖摄入的抑制作用，同时还能缓解S1对SKOV3细胞增殖的抑制效应。合用糖酵解抑制剂2－DG能够加剧SIRT3的活化，同时进一步促进S1对SKOV3细胞增殖的抑制作用和细胞凋亡的发生。综上所述，S1在卵巢癌细胞中抑制细胞增殖作用，可能是通过活化SIRT3以及扰乱葡萄糖代谢来实现的。
作者：项喜艳；孙连坤 刊期： 2015年第10期
目的：研究核糖核苷酸还原酶（ RR）作为抗HBV及其相关肝癌药物靶点的可能性以及其抑制剂抗HBV的作用和机制。方法：免疫印迹检测RR表达，RR assay检测其活性；虚拟筛选得到老药柳胺酚，并检测其对RR活性的抑制；PCR检测柳胺酚单独或与拉米夫定（3TC）联合用药对野生型及3TC耐药型HBV DNA和cccDNA的抑制，并进行体内评价；评价柳胺酚衍生物 YZ51药效。结果：RR是HBV DNA复制所必需；柳胺酚能够抑制RR活性，从而抑制HBV DNA复制及cccDNA的合成，并与3TC联合有协同作用且能克服3TC耐药性；衍生物YZ51具有更高的药效；柳胺酚在小鼠体内抗HBV效果明显并且体内毒性低。结论：发现了一种与现有抗HBV药物不同的新机制。证明了新型RR酶抑制剂具有抑制RR和HBV复制活性，为进一步研发具有抗HBV及其相关肝癌的药物奠定了基础。
作者：刘霞；邵吉民 刊期： 2015年第10期
目的：探讨急性低血压兴奋清醒大鼠前庭内侧核（ MVN）的5－羟色胺（5－HT）及其受体机制。方法：利用脑部微量透析法和免疫组织化学法观察了MVN区5－HT含量及其受体表达。结果：静脉注射硝普钠诱发急性低血压时，对照组和单侧前庭器官破坏对侧MVN区5－HT含量明显增加（P＜0．05），而单侧前庭器官破坏同侧MVN区5－HT含量无明显变化。在前庭器官完整大鼠诱发急性低血压后双侧MVN区5－HT及5－HT1A受体表达均明显增多，但是在对照组无明显表达，组间比较均具有显著差异（P＜0．05）。破坏单侧外周前庭器官2周后，诱发急性低血压时双侧MVN区5－HT及5－HT1A受体均不对称表达，损伤侧表达均明显少于损伤对侧（ P＜0．01）。结论：清醒动物诱发急性低血压影响MVN功能活动过程中可能有5－HT及其受体的参与。
作者：江艺鑫；李香兰 刊期： 2015年第10期
目的：观察蝎毒多肽提取物（ PESV）对H22肝脏原位移植瘤模型小鼠肝脏NK细胞表达及功能的影响。方法：C57BL／6小鼠肝脏接种H22肝癌细胞株悬液构建原位移植瘤模型，术后给予PESV大、小剂量及生理盐水灌胃，14 d后检测肝脏及浸润癌组织中NK细胞及穿孔素、颗粒酶B的表达变化并观察小鼠生存期。结果：PESV大、小剂量组肝脏移植瘤的生长受到抑制，肿瘤体积和瘤重均低于荷瘤对照组，肿瘤抑制率分别为30．77％和15．38％，生存期观察显示PESV大剂量组与荷瘤对照组相比差异显著；荷瘤对照组肿瘤细胞排列紧密，异型性显著，呈浸润性生长，PESV大、小剂量组出现明显坏死区，细胞异型性减轻；与荷瘤对照组相比，PESV大、小剂量组小鼠肝脏NK1．1＋细胞分别占肝脏总淋巴细胞的（4．13±0．43）％和（5．91±0．49）％，显著高于荷瘤对照组（ P＜0．05）；PESV大剂量组瘤组织中穿孔素和颗粒酶的mRNA表达量分别是荷瘤对照组的3．62倍和5．82倍（P＜0．05）。结论：PESV可通过提高H22肝脏原位移植瘤小鼠肝脏中NK细胞的表达，诱导穿孔素和颗粒酶B的产生，促进NK细胞杀伤活性的恢复，增强对肿瘤细胞的清除。
作者：韩琛；王朝霞；王恒孝 刊期： 2015年第10期
高同型半胱氨酸血症（ HHcy）是心脑血管疾病的独立危险因素，已有报道Hcy可以升高AT1受体的mRNA和蛋白表达水平。本研究主要运用了Ca2＋成像、双萤光素酶报告基因、激光共聚焦显微镜等方法。我们首先发现Hcy体外刺激小鼠血管环可引起白细胞介素6（IL－6）及单核细胞趋化蛋白1（MCP－1）的释放增加，在AT1受体敲除小鼠的血管环中被明显抑制。 Hcy可激活AT1受体经典的Gq信号通路及β－arrestin－2信号通路，并引起AT1受体内化。本文找出了Hcy在心血管系统内的受体，并发现Hcy可通过AT1受体加重血管炎症损害。
作者：李拓圯；孙金鹏；孔炜 刊期： 2015年第10期
教育部提出，临床医学专业本科教学要“早临床、多临床、反复临床”。病理生理学研究患病机体的机能代谢变化，与临床密切相关。在病理生理学教学中，加入多层次的临床内容，对学生临床思维的形成和临床能力的培养具有良好的促进作用。（1）开展早期临床病例采集。学生在课余时间，联系高血压、冠心病等常见病患者，跟踪病程的全程，分析病因、机制，完成病例报告，以论文的形式上交，作为课程成绩之一。（2）在教学内容中加入典型病例。精选适合于教学的临床病例，编写案例讲义，将病例分析与课堂讨论、课后作业等教学活动有机地结合。（3）引进临床内容的新进展例。如在讲解缺氧时，引入高压氧治疗缺氧的新进展；讲解应激时，让学生查阅抑郁症等应激相关性疾病的新进展，开拓学生的视野，提高学习兴趣。
作者：张坤；韩丽莎；胡海；王艳国；张圆；刘佳 刊期： 2015年第10期
目的：检测肝细胞肝癌组织中Ebp1与P53蛋白的表达情况，并探讨肝细胞肝癌组织中P53与Ebp1的表达与临床病理特征之间的关系，为肝细胞肝癌的靶向基因治疗提供有利的客观实验依据。方法：应用免疫组织化学方法（ SP法）检测66例肝细胞肝癌组织及其癌旁正常组织中P53蛋白与Ebp1蛋白的表达。结果：肝细胞肝癌组织中P53和Ebp1蛋白的阳性率（48．5％和42．4％）与癌旁正常组织中P53和Ebp1蛋白的阳性率（4．5％和7．6％）比较差异具有统计学意义（P＜0．05）。肝细胞肝癌组织中P53和Ebp1蛋白的表达与患者的年龄、肿瘤大小、性别、家族史无关，但与肿瘤的临床分期以及淋巴结转移密切相关。结论：P53与Ebp1蛋白在肝细胞肝癌组织中表达明显高于癌旁正常组织；P53与Ebp1蛋白的高表达与肝细胞肝癌的临床分期及淋巴结转移呈正相关。
作者：陈海月；朴水莲；杨莎莎；李香丹；刘兰 刊期： 2015年第10期
目的：研究环境致癌物甲基硝基亚硝基胍（ MNNG）转录激活人核糖核苷酸还原酶小亚基M2（ RRM2）参与DNA损伤修复的分子机制。方法和结果：MNNG刺激显著激活RRM2基因的表达。γ－H2AX、细胞周期分布及凋亡的改变显示表达上调的RRM2转位入核参与DNA损伤修复。通过RRM2启动子探针介导的DNA pulldown、LC－MS／MS 及 ChIP－PCR分析发现MNNG刺激后，E2F3直接结合到RRM2启动子上，激活其表达。另外，转录因子NFY与E2F3相互作用，增强MNNG诱导的RRM2转录激活。 MNNG处理上调E2F3蛋白水平依赖于ATR－CHK1信号通路介导的其S124位磷酸化。结论：MNNG通过激活ATR／CHK1磷酸化E2F3 S124，增加其蛋白稳定性。上调的E2F3与NFY转录共调控RRM2基因的表达，参与DNA损伤修复过程。
作者：宫朝举；邵吉民 刊期： 2015年第10期
目的：探讨RAS稳态失衡在止血带休克后主动脉血管低反应性及损伤中的作用。方法：C57BL／6小鼠，分为对照组及再灌注10min、1h、2h、4h、6h、12h模型组，每组6只。模型组止血带阻断双后肢血流2h，达再灌注时间后处死；多普勒法测肢体血流，颈动脉插管法测平均动脉压（ MAP），离体血管张力测定仪测主动脉血管收缩反应性，HE染色结合透射电镜评价血管损伤；Western blot检测血管AT1受体、Mas受体、血管紧张素转换酶（ ACE）和ACE2表达。 ELISA检测血清血管紧张素II（ Ang II）、血管紧张素（1－7）［Ang（1－7）］含量。结果：模型组变化为：（1）随再灌注时间延长血流量逐渐减少；MAP在再灌注10 min明显升高，随后逐渐降低；血管对去甲肾上腺素的反应性在再灌注10 min升高随后下降、再灌注4 h血管反应性低；损伤评分随再灌注时间延长逐渐增高。（2）主动脉血管AT1受体与ACE2表达逐渐下降，Mas受体与ACE表达逐渐升高。（3）血清中AngⅡ整体呈升高趋势，Ang（1－7）整体呈降低趋势。结论：主动脉血管收缩反应性在休克初期暂时升高随后降低，其机制可能与血管损伤及RAS失衡有关。
作者：王丽君；杨秀红 刊期： 2015年第10期
目的：观察氢饱和盐水对脂多糖（LPS）刺激的大鼠肺间质巨噬细胞（PIMs）分泌促炎细胞因子的影响。方法：应用胶原酶消化法结合肺泡耗竭灌洗和肺循环灌洗技术分离纯化SD大鼠PIMs，在用常规RPMI－1640培养基或含氢RPMI－1640培养基的情况下，用LPS（1 mg／L）刺激细胞一定时间，ELISA法检测细胞培养上清中TNF－α和IL－1β的含量，用RT－PCR技术分析细胞中TNF－α和IL－1βmRNA的表达。结果：各细胞因子的浓度随着LPS刺激时间的延长而升高，培养上清中TNF－α和IL－1β的浓度分别于LPS刺激后3和6 h达到高峰；选取各细胞因子表达高峰的时点观察含氢培养基对其表达的影响，发现含氢培养基可抑制LPS诱导的TNF－α和IL－1β。 LPS刺激PIMs后，TNF－α和IL－1βmRNA的表达也增高，分别于LPS刺激后2和3 h达到高峰，含氢培养基对TNF－α和IL－1βmRNA的表达也具有负向调节作用。结论：在体外培养的大鼠PIMs，含氢培养基可抑制LPS诱导的TNF－α和IL－1βmRNA表达及其蛋白合成释放。
作者：黄新莉 刊期： 2015年第10期
目的：探究成体大鼠骨髓中神经嵴源细胞的获取，及对受损周围神经的修复作用。方法：富集骨髓神经嵴源细胞间充质球，分离单克隆球，检测长期增殖能力和神经嵴标志的表达，检测向施旺细胞定向分化的能力和体外成髓鞘潜能。体外构建骨髓神经嵴源细胞为支持细胞的组织工程化神经移植物，桥接大鼠10 mm坐骨神经缺损，12周后进行行为学分析、电生理检测、荧光金逆行示踪试验、肌肉和神经的组织学观察。体外收集骨髓神经嵴源细胞的条件培养基，处理氧糖剥夺损伤的大鼠背根节神经元，检测神经元突起的生长变化和细胞活力改变。结果：骨髓神经嵴源细胞组织工程化神经移植物具有良好的神经修复作用，其条件培养基可改善受损背根节神经元的活力和突起生长。结论：神经嵴源细胞可从骨髓获取并应用于修复周围神经损伤，是潜在的自体细胞来源。
作者：施海燕；李晓丽；易剑锋；郭可盈；高小东；李人杰；顾晓松；丁斐 刊期： 2015年第10期
目的：探讨激活毒蕈碱乙酰胆碱受体（ mAChR ）能否经调控紧密连接而促进下颌下腺的分泌。方法：跨上皮细胞电阻（ TER）和旁细胞通透性实验评价紧密连接的功能；Western blot和免疫荧光检测紧密连接的表达和分布；转染claudin－4 shRNA或cDNA观察claudin－4对紧密连接功能的影响。免疫共沉淀检测相关信号通路。结果：mAChR激动剂卡巴胆碱可降低下颌下腺细胞TER值，并增加旁细胞途径通透性。卡巴胆碱可下调claudin－4的表达和分布，但不影响其它紧密连接分子。敲低claudin－4可使卡巴胆碱降低TER值的作用消失；而在过表达claudin－4细胞中，卡巴胆碱仍能降低TER值和claudin－4表达。卡巴胆碱可经细胞外信号调节激酶1／2（ERK1／2）促进claudin－4丝氨酸磷酸化。磷酸化的claudin－4可与β－arrestin2结合，招募clathrin引起claudin－4发生内化，并进一步在胞浆中被泛素化降解。结论：激活mAChR通过ERK1／2／β－arrestin2／clathrin／泛素化途径下调claudin－4的表达，进而增加旁细胞途径的通透性。
作者：丛馨；张艳；吴立玲；俞光岩 刊期： 2015年第10期
目前，PTGES2在脓毒症中的作用尚不清楚。本研究首次发现在LPS刺激后C57BL／6小鼠肾组织中PTGES2的表达较正常对照组明显增高。采用免疫组织化学方法检测发现，PTGES2主要定位于近曲小管上皮细胞的细胞浆中，在肾小球和肾髓质未见明显表达。为了探讨PTGES2与自噬的关系，本研究对LPS刺激时小鼠肾组织中自噬接头蛋白p62的表达进行检测，结果发现在LPS刺激后C57BL／6小鼠肾组织中p62的表达较正常对照组明显降低，与PTGES2的表达呈负相关关系；采用免疫组织化学方法检测发现，p62蛋白在PTGES2无明显表达的肾髓质特别是外髓部高表达，而在PTGES2高表达的肾皮质尤其是深皮质仅弱表达，进一步证明PTGES2与p62表达的负相关关系。随后，细胞水平的实验发现，LPS刺激时PTGES2过表达能够显著抑制肾小管上皮细胞中p62的表达；相反，PTGES2 siRNA则能够阻断PTGES2对p62表达的抑制作用。上述研究表明，PTGES2在LPS所致急性肾损伤中对自噬接头蛋白p62具有抑制作用，这也可能是PTGES2调控自噬的一个重要机制。
作者：刘瑛；李婷；肖献忠 刊期： 2015年第10期
作者： 刊期： 2015年第10期
中国病理生理杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中国病理生理学会
