作者： 刊期： 2015年第10期
目的：从代谢调节角度探讨高原环境对人体血浆代谢的影响及可能机制。方法：分别采集60名健康成年男性在平原和进入高原（海拔5300 m）第4天的血浆样本，高效液相色谱－质谱联用和气相色谱－质谱联用结合多变量统计分析筛选进入高原前后的差异代谢物，Metabo Analyst 3．0数据库进行代谢通路富集分析，ELISA测定代谢通路中关键调节酶。结果：进入高原后受试者血浆中50个代谢物、8条代谢通路和5种关键酶发生了显著的变化。8条代谢通路涉及炎症反应相关代谢、能量代谢、胆酸代谢和血红素代谢。 ELISA结果显示调节以上代谢通路的5种关键酶进入高原后发生显著变化。结论：人类习服高原早期血浆中代谢物组、相关代谢通路和关键调节酶发生了重要变化，研究结果对寻找促进高原习服措施具有重要意义，通过阻断或修饰相关代谢通路将有望减轻急性高原反应症状、促进高原习服。
作者：廖文婷；刘宝；陈建；崔建华；高伊星；刘福玉；徐刚；孙滨达；张二龙；袁志兵；张钢；高钰琪 刊期： 2015年第10期
目的：自1976年人类间充质干细胞（ mesenchymal stem cells， MSCs）首次被分离，MSCs的增殖与分化、分泌与调节及其免疫原性低的生物学特性逐渐被发现，并被广泛地应用于临床试验研究。2009年第一个MSCs药品prochymal正式上市，用于急性移植物抗宿主病（ GVHD）和Crohn病治疗。本实验室从人不同组织提取MSCs，检测MSCs生物学特性，并探讨其在组织修复中的作用机制。方法：组织贴壁及消化法，从人胎盘、脐带、脐血、脂肪和牙髓组织提取MSCs；应用流式细胞术鉴定MSCs；通过诱导与共培养方法，检测MSCs分化能力；应用Western blot、免疫荧光、ELISA、组织芯片等技术检测MSCs的分泌功能。结果：不同组织来源的MSCs具有分化成内皮细胞、脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞和神经细胞的能力，并分泌VEGF、FGF、IGF－1、laminin 10、fibronectin、TGFβ1等生物活性蛋白，促进损伤血管、皮肤和神经修复。结论：MSCs及其分泌的生物活性蛋白可以作为种子细胞和（或）改善细胞微环境因素，被应用于临床疾病损伤修复、组织工程与再生医学领域。
作者：于艳秋 刊期： 2015年第10期
目的：哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（ mammalian target of rapamycin， mTOR ）可调节细胞的生长、生存和自噬。本研究观察mTOR在人喉癌组织中的表达，明确其对喉癌发生与发展的关系；以mTOR抑制剂AZD8055处理人喉癌细胞系Hep－2，观察其抑瘤作用并探讨其作用机制。方法：免疫组织化学染色方法检测喉癌组织中mTOR的表达；分别以0．8、2．6、8、26和80μg／L的AZD8055处理Hep－2细胞24、48或72 h，MTT方法检测细胞增殖， TUNEL染色检测细胞凋亡，罗丹明123染色检测线粒体膜电位，Western blot和免疫荧光染色检测蛋白表达。结果：人喉癌组织中mTOR表达上调，并且其分化程度越低，mTOR表达水平越高。以AZD8055处理后， Hep－2细胞增殖减少，凋亡增加，线粒体膜电位下降；caspase－3表达上调， Bcl－2表达下调， BH3－only蛋白如Bim、Bid和Bad表达上调。结论：mTOR表达上调可参与喉癌的发生与发展，抑制mTOR活性可抑制喉癌细胞增殖，促进喉癌细胞凋亡，mTOR可作为喉癌治疗的潜在靶标。
作者：滕博；王贺彬；黄迪；李俊玮；赵丽晶 刊期： 2015年第10期
目的：再灌注初期活性氧的大量释放被认为是造成这一损伤的主要因素之一。然而，ROS也作为启动者介导了缺血预处理和后处理等措施对I／R损伤心肌的保护作用。如何界定ROS起损伤或保护作用的浓度界限目前尚无明确的研究结论。因此，本实验旨探讨ROS 这种相互矛盾的双重作用及其潜在机制。方法：利用大鼠离体心脏全心缺血／复灌模型来探讨不同浓度过氧化氢（ H2 O2）预处理和后处理模型验证ROS 诱导心肌保护作用的浓度依赖关系。进一步利用Western blot 方法研究ROS在心肌缺血／再灌注损伤及其保护中对保护性信号通路及内质网应激通路不同的浓度依赖的调控模式。结果：研究发现证明了浓度是决定ROS不同作用的重要因素之一，揭示了ROS导致心肌I／R损伤和保护作用的浓度阈值和其内在机制，其终表现是不同浓度ROS启动／激活的损伤与保护通路博弈的结果。研究发现还为解释ROS矛盾作用的机理提供了新的视角，并为开发基于ROS的缺血性心脏病的治疗措施提供了新的实验证据。
作者：刘金龙；王志华；顾珊珊；谭吉良；杨黄恬 刊期： 2015年第10期
目的：探讨靶向干扰SIRT2基因表达对急性粒细胞白血病（ AML）多药耐药细胞株HL60A细胞增殖的影响。方法：针对SIRT2基因构建shRNA真核表达载体，制备慢病毒并感染HL60A细胞。沉默SIRT2基因之后，改良MTT法检测对HL60A细胞活力的影响；甲基纤维素集落形成实验观察对HL60A细胞集落形成能力的影响；采用流式细胞术检测分析对HL60A细胞的细胞周期的影响。结果：干扰组SIRT2基因的表达量被有效抑制；干扰SIRT2基因表达量后，HL60A细胞的细胞活力明显下降，集落形成数量减少及集落的形状减小，细胞被明显阻滞于G1／S期。结论：shRNA靶向干扰SIRT2基因的表达可有效抑制急性粒细胞白血病耐药细胞系HL60A细胞的增殖。
作者：许华；王齐；李元叶；李庆华；庞天翔 刊期： 2015年第10期
目的：通过RNA－Seq技术探讨人体急进高原早期的转录特征。方法：对从平原快速进入高原（5300 m）的19名青年健康男性志愿者，于进入高原前后采集静脉血。提取总RNA进行测序，获取原始序列数据，对原始序列数据进行质量控制处理后，将其比对到人类参考基因组（ hg19）。统计相关读段数计算不同转录本的表达量。对急进高原前后转录本表达谱进行转录本差异表达分析，针对差异表达转录本，对其进行基因本体及通路分析。结果：从37908个转录本中筛选出836个差异转录本，其中274个转录本表达上调，562个转录本表达下调。人体急进高原早期多个生物学过程及信号通路参与了人体对高原低氧环境的反应。结论：面对高原低氧环境，人体在基因整体水平表现出了特有的差异表达谱特征，参与其中的生物学过程及信号通路对理解人体对高原低氧环境反应的分子机制具有重要的参考价值。
作者：陈建；刘宝；崔建华；张龙；徐刚；梁颜；梁羽；汪健；高钰琪 刊期： 2015年第10期
目的：探讨胰岛素样生长因子1（insulin－like growth factor－1，IGF－1）对糖尿病大鼠肝纤维化的作用。方法：腹腔注射链脲佐菌素（ STZ）制备糖尿病大鼠模型，实验分为正常对照组、模型组和IGF－1治疗组。造模第10周行腹腔注射IGF－1（1500 ng／kg）治疗2周，第12周后测定血糖、血清AST、ALT、透明质酸等；采用HE、Masson和天狼星红染色观察肝损伤和纤维化程度，免疫组织化学和Western bolt法分别检测肝组织中α－SMA和GRP78的表达。结果：IGF－1治疗组与糖尿病组相比肝功能明显改善，且透明质酸和胶原纤维表达显著减少；糖尿病组肝组织α－SMA高表达，但是IGF－1治疗组α－SMA和GRP78的表达量较糖尿病组明显降低。结论：IGF－1对糖尿病大鼠纤维化肝脏具有保护作用，其机制与抑制肝星状细胞的活化和肝细胞内质网应激有关。
作者：聂钱；李香丹；许东元；金海燕 刊期： 2015年第10期
目的：研究3R－tau和4R－tau对学习记忆的影响及其机制。方法：将0N3R、1N3R和2N3R 等体积混合为3R－tau病毒；将0N4R、1N4R和2N4R等体积混合为4R－tau病毒。采用脑立体定位技术在小鼠海马CA3区注射混合的3R／4R病毒，水迷宫实验检测小鼠学习记忆能力，LTP检测CA3到CA1的突触传递，免疫化学检测学习记忆相关蛋白及DNA损伤标志分子γH2A．X的表达。结果：过表达3R－tau小鼠学习记忆能力降低，突触传递减弱。4R－tau组PSD95、NR2A和NR2B含量增高，3R－tau组γH2A．X含量增高。结论：过表达3R－tau明显损伤小鼠学习记忆能力，其机制可能与DNA双链损伤有关。
作者：徐诚 刊期： 2015年第10期
低氧是肿瘤的重要微环境，它主要通过低氧诱导因子实现对肿瘤发生发展的调控。近，我们报道多梳蛋白CBX4通过SUMO化修饰低氧诱导因子HIF－1，进而增加其转录活性，促进肿瘤新生血管生成和肿瘤转移（ Cancer Cell，2014，25：118－131）。我们随后的研究发现，经CBX4进行SUMO化修饰的HIF－1α不能结合Sirt6。后者是去乙酰化酶sirtuin家族中的一员，也可能是HIF－1转录活性的共遏制因子。有趣的是，我们发现低氧能够下调Sirt6蛋白而非mRNA的表达。通过siRNA技术分别将低氧下发挥重要作用的两个转录因子HIF－1α／HIF－2α进行knockdown后发现，HIF－2α而不是HIF－1α介导了低氧对于Sirt6的调控。在常氧下转染HIF－2α能够剂量依赖地减少Sirt6的表达。低氧和过表达HIF－2α都能够缩短Sirt6蛋白的半衰期。同时，在分别加入蛋白酶体抑制剂MG132、PS－341或溶酶体抑制剂CQ，发现Sirt6是通过蛋白酶体途径而非溶酶体途径发生降解。在此基础上，我们进一步通过双荧光蛋白检测系统寻找低氧下加速Sirt6降解的泛素E3连接酶。
作者：徐颖；刘亚利；陈国强 刊期： 2015年第10期
目的：探讨PCSK9在高脂血症apoE－／－小鼠海马神经元凋亡中的作用及机制。方法：18只6周龄apoE－／－小鼠，分为正常和高脂饮食组。喂养12周后取出海马进行冰冻切片，用HE染色、油红O染色、Hoechst 33258染色、免疫组化染色和改良Bielschowsky染色观察海马改变。结果：与正常饮食组相比，高脂饮食组apoE－／－小鼠海马锥体细胞排列稀疏紊乱，细胞间隙增大，胞体肿胀，细胞核体积变小及浓染，呈核固缩，尤以CA3区明显；神经细胞荷脂及凋亡增加，Aβ沉积略有增多；PCSK9、BACE1、caspase－3和Bax表达增加显著，Bcl－2表达增加。结论：高脂血症诱导apoE－／－小鼠海马神经元凋亡增加，其机制可能与脑组织PCSK9表达上调激活Bcl－2／Bax－caspase－3、增加BACE1表达和Aβ含量有关。
作者：唐志晗；吴琪；彭娟；任重；赵雪珊；何妮娅；高亚；姜志胜；刘录山 刊期： 2015年第10期
目的：探究H2 S对HepG2细胞apo（ a）表达的影响及其机制研究。方法：培养HepG2细胞至70％密度，以NaHS（0、25、50、100、200μmol／L）培养24 h及用200μmol／L NaHS处理0、6、12、24 h；RT－PCR和免疫印迹分别检测apo（ a） mRNA和蛋白， ELISA测定apo（a）分泌水平。结果：外源性H2S剂量和时间依赖性下调apo（a）表达水平及apo（a）分泌水平，以100μmol／L和24 h的下降作用为显著。 H2 S显著上调FXR、M－PKCα及p－AKT表达，而下调HNF4α表达；抑制PKC α及AKT激活可以反转H2 S对HepG2细胞中apo（ a）蛋白表达的抑制作用；干扰FXR也可起到相同的效果；而干扰HNF4α后，由于HNF4α干扰后其上游的因子可能通过调节其它因子或是其竞争性抑制物FXR反应性增加，从而使apo（ a）增加不明显。结论：H2 S时间及剂量依赖性抑制apo（ a）表达，与其通过PKCα上调FXR和AKT下调HNF4α有关。
作者：何兴兰；张海；瞿凯；王佐；姜志胜 刊期： 2015年第10期
目的：探讨益母草水苏碱对心力衰竭大鼠心肌自噬的影响及作用机制。方法：采用胸主动脉结扎法（ TAC）诱导心衰模型。采用血流动力学检测心功能，免疫印迹法检测自噬相关蛋白、Nox2亚基、磷酸化AMPK及mTOR的表达，免疫荧光法双标记检测Nox2的活化状态，H2DCF检测胞浆ROS产生变化，GFP－RFP－LC3慢病毒转染检测自噬体及自噬溶酶体数量变化。结果：整体水平上，与假手术组相比，模型组心功能下降，自噬相关蛋白表达增加（ P＜0．05）；与模型组相比，益母草水苏碱组心功能得到改善，自噬相关蛋白表达下降（ P＜0．05）。细胞水平上，与正常组相比，模型组自噬体及自噬溶酶体数量明显增多，自噬相关蛋白、Nox2亚基表达、胞浆ROS产生、磷酸化AMPK及mTOR明显减少（ P＜0．05）；与模型组相比，益母草水苏碱组的自噬体及自噬溶酶体数量明显减少，自噬相关蛋白、Nox2亚基表达、胞浆ROS产生、磷酸化AMPK及mTOR增加（ P＜0．05）。结论：益母草水苏碱通过抑制Nox2活化和其亚基的表达，使ROS产生减少，并且经磷酸化AMPK－mTOR途径抑制自噬的过度激活，从而改善心功能。
作者：曹童童；陈会花；章忱；郭炜；卫洪昌；吕嵘 刊期： 2015年第10期
目的：探讨缺血－再灌注操作诱导大鼠肝纤维化模型建立的方法。方法：20只SD雄性大鼠随机分成2组：正常对照组及模型组。正常对照组仅给予肝蒂骚扰，不夹闭；模型组行肝门阻断，阻断入肝70％的血流，单纯缺血90 min后开夹。9周后处死动物，采集血清，放射免疫法测定血清层黏蛋白（ LN）及透明质酸（ HA）、生化检测丙氨酸氨基转移酶（ ALT）及天门冬氨酸氨基转移酶（ AST）；取部分肝组织制备匀浆，测定肝组织中超氧化物歧化酶（ SOD）和丙二醛（ MDA）水平，HE染色观察肝纤维化的程度。结果：与正常对照组相比，模型组血清LN、HA、AST及ALT水平明显升高（ P＜0．05），肝组织中SOD活性降低（P＜0．01），MDA含量明显升高（P＜0．01）。光镜下模型组肝小叶结构紊乱，肝细胞变性和坏死的程度较正常对照组明显，可见纤维增生。结论：肝缺血再灌注损伤可以诱导大鼠的肝纤维化模型。
作者：秦燕；苏娟；刘俊萍；刘仁贵；崔学斌 刊期： 2015年第10期
核糖体S6激酶（ribosomal S6 kinase，RSK）2属于Ras－MAPK下游通路的90 kD的RSK家族，该家族包含4个成员（ RSK1～4）及2个结构同系物MSK1／2。 RSK家族的成员具有高度的序列同源性（75％～80％的氨基酸序列是一致的），只有2个激酶功能域不同。尽管结构相似，它们在组织内的分布及功能却不尽相同［1］，而本文主要介绍 RSK2。RSK2的发现起始于它的基因缺陷会导致科－勒二氏综合征（ Coffin－Lowry syndrome，CLS），一种罕见的神经退行性疾病［1］。后来深入的研究发现， RSK2是ERK1／2直接的下游底物，RSK2一旦被激活就会转入到核中磷酸化多种核蛋白，从而调控细胞的多项生命活动包括细胞的增殖、周期、转化等。近几年有不少研究证实RSK2的蛋白水平在恶性肿瘤及组织中较正常细胞及组织明显偏高［2］，而研究者们一直致力于寻找高效低毒的靶向RSK2的抑制剂。由此可见，RSK2是一个很有潜力的抗癌靶标。本文主要就RSK2的结构功能、与肿瘤的关系及现有抑制剂展开介绍。
作者：陈康杏；王籽又；黄燕霞；钟承志；李凯恒；黄遵楠 刊期： 2015年第10期
合成了两亲性壳聚糖衍生物（ Chit－DC）和偶联小肠靶向因子VB12的两亲性壳聚糖衍生物（ Chit－DC－VB12），检测其生物相容性、负载灯盏花乙素（ Scu）后的缓释效果、对Scu生物利用度及对糖尿病视网膜病变疗效的影响。通过FTIR分析和H－NMR谱图分析，证实了Chit－DC和Chit－DC－VB12的合成。 CCK－8分析显示Chit－DC和Chit－DC－VB12的毒性较小。发现两种纳米载药胶束在各种模拟胃肠液中经过10 h累计释放基本达到平衡。通过Transwell模型发现，Chit－DC－Scu和Chit－DC－VB12－Scu在Caco－2细胞的转运效率要高于Scu；发现Caco－2细胞对Chit－DC和Chit－DC－VB12的胞吞量增加；检测不同时点Scu的血药浓度发现，Chit－DC－Scu和Chit－DC－VB12－Scu的Scu峰值出现时间往后推移，Scu的生物利用度有所提高；建立II型糖尿病大鼠模型并给药后发现，Scu的应用提高了视网膜血管血流的流速，减弱了视网膜组织VEGF，VEGFR2，vWF蛋白的表达，而Chit－DC负载Scu后增强了Scu的药效。
作者：邓宇斌；王竟男 刊期： 2015年第10期
作者： 刊期： 2015年第10期
目的：探讨Sam68蛋白对白血病细胞Jurkat凋亡的影响。方法：针对Sam68靶点构建pLKO－Tet－On条件性真核表达干扰载体，制备慢病毒并感染Jurkat细胞，诱导干扰载体表达，筛选稳定表达shRNA细胞；采用实时荧光定量和免疫印迹技术检测干扰效率；应用流式细胞术检测细胞凋亡，采用免疫印迹技术检测凋亡相关蛋白表达水平变化情况。结果：Sam68基因表达下调的细胞凋亡数量增多，伴随caspase－3活化水平增加和PARP活化水平下降，Akt磷酸化水平下降，Erk和Bcl－xL表达水平无明显变化。结论：Sam68基因表达下调可通过影响Akt信号通路影响caspase－3和PARP蛋白表达，从而促进Jurkat细胞凋亡。
作者：王齐；李元叶；许华；李庆华；庞天翔 刊期： 2015年第10期
目的：炎症和免疫细胞的活化参与心肌重塑的发生，已表明恒定自然杀伤T细胞（ invariant natural killer T cells， iNKT细胞）产生炎症因子，调节组织的炎症反应。然而，目前iNKT细胞在心肌重塑中的作用还不清楚。方法：血管紧张素II（1000 ng? kg－1? min－1）灌注诱导心肌重塑的发生，植入缓释泵之前，给予自然杀伤T细胞的激动剂α－Galce。结果：血管紧张素II灌注3、7和14 d后，心肌组织中iNKT细胞的数量明显增加，7 d时增加明显。血管紧张素II灌注小鼠明显增加小鼠血压，降低心肌收缩功能，增加心肌肥大、纤维化和炎症；NKT细胞激动剂明显减轻了以上反应。以上保护作用通过增加释放IL－10。而且，我们进一步在iNKT细胞敲除小鼠验证以上结果。结论：iNKT细胞通过增加心肌保护细胞因子如IL－10拮抗血管紧张素II诱导的心肌重塑。
作者：李文君；田翠；鄢雯；刘立新；王红霞；李汇华 刊期： 2015年第10期
目的：探究成体大鼠骨髓中神经嵴源细胞的获取，及对受损周围神经的修复作用。方法：富集骨髓神经嵴源细胞间充质球，分离单克隆球，检测长期增殖能力和神经嵴标志的表达，检测向施旺细胞定向分化的能力和体外成髓鞘潜能。体外构建骨髓神经嵴源细胞为支持细胞的组织工程化神经移植物，桥接大鼠10 mm坐骨神经缺损，12周后进行行为学分析、电生理检测、荧光金逆行示踪试验、肌肉和神经的组织学观察。体外收集骨髓神经嵴源细胞的条件培养基，处理氧糖剥夺损伤的大鼠背根节神经元，检测神经元突起的生长变化和细胞活力改变。结果：骨髓神经嵴源细胞组织工程化神经移植物具有良好的神经修复作用，其条件培养基可改善受损背根节神经元的活力和突起生长。结论：神经嵴源细胞可从骨髓获取并应用于修复周围神经损伤，是潜在的自体细胞来源。
作者：施海燕；李晓丽；易剑锋；郭可盈；高小东；李人杰；顾晓松；丁斐 刊期： 2015年第10期
中国病理生理杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中国病理生理学会
