唐彩云
目的：哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（ mammalian target of rapamycin， mTOR ）可调节细胞的生长、生存和自噬。本研究观察mTOR在人喉癌组织中的表达，明确其对喉癌发生与发展的关系；以mTOR抑制剂AZD8055处理人喉癌细胞系Hep－2，观察其抑瘤作用并探讨其作用机制。方法：免疫组织化学染色方法检测喉癌组织中mTOR的表达；分别以0．8、2．6、8、26和80μg／L的AZD8055处理Hep－2细胞24、48或72 h，MTT方法检测细胞增殖， TUNEL染色检测细胞凋亡，罗丹明123染色检测线粒体膜电位，Western blot和免疫荧光染色检测蛋白表达。结果：人喉癌组织中mTOR表达上调，并且其分化程度越低，mTOR表达水平越高。以AZD8055处理后， Hep－2细胞增殖减少，凋亡增加，线粒体膜电位下降；caspase－3表达上调， Bcl－2表达下调， BH3－only蛋白如Bim、Bid和Bad表达上调。结论：mTOR表达上调可参与喉癌的发生与发展，抑制mTOR活性可抑制喉癌细胞增殖，促进喉癌细胞凋亡，mTOR可作为喉癌治疗的潜在靶标。
作者：滕博；王贺彬；黄迪；李俊玮；赵丽晶 刊期： 2015年第10期
目的：炎症和免疫细胞的活化参与心肌重塑的发生，已表明恒定自然杀伤T细胞（ invariant natural killer T cells， iNKT细胞）产生炎症因子，调节组织的炎症反应。然而，目前iNKT细胞在心肌重塑中的作用还不清楚。方法：血管紧张素II（1000 ng? kg－1? min－1）灌注诱导心肌重塑的发生，植入缓释泵之前，给予自然杀伤T细胞的激动剂α－Galce。结果：血管紧张素II灌注3、7和14 d后，心肌组织中iNKT细胞的数量明显增加，7 d时增加明显。血管紧张素II灌注小鼠明显增加小鼠血压，降低心肌收缩功能，增加心肌肥大、纤维化和炎症；NKT细胞激动剂明显减轻了以上反应。以上保护作用通过增加释放IL－10。而且，我们进一步在iNKT细胞敲除小鼠验证以上结果。结论：iNKT细胞通过增加心肌保护细胞因子如IL－10拮抗血管紧张素II诱导的心肌重塑。
作者：李文君；田翠；鄢雯；刘立新；王红霞；李汇华 刊期： 2015年第10期
目的：自1976年人类间充质干细胞（ mesenchymal stem cells， MSCs）首次被分离，MSCs的增殖与分化、分泌与调节及其免疫原性低的生物学特性逐渐被发现，并被广泛地应用于临床试验研究。2009年第一个MSCs药品prochymal正式上市，用于急性移植物抗宿主病（ GVHD）和Crohn病治疗。本实验室从人不同组织提取MSCs，检测MSCs生物学特性，并探讨其在组织修复中的作用机制。方法：组织贴壁及消化法，从人胎盘、脐带、脐血、脂肪和牙髓组织提取MSCs；应用流式细胞术鉴定MSCs；通过诱导与共培养方法，检测MSCs分化能力；应用Western blot、免疫荧光、ELISA、组织芯片等技术检测MSCs的分泌功能。结果：不同组织来源的MSCs具有分化成内皮细胞、脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞和神经细胞的能力，并分泌VEGF、FGF、IGF－1、laminin 10、fibronectin、TGFβ1等生物活性蛋白，促进损伤血管、皮肤和神经修复。结论：MSCs及其分泌的生物活性蛋白可以作为种子细胞和（或）改善细胞微环境因素，被应用于临床疾病损伤修复、组织工程与再生医学领域。
作者：于艳秋 刊期： 2015年第10期
目的：探讨羟基红花黄色素A（ hydroxysafflor yellow A， HSYA）对心肌梗塞的保护作用及其可能机制。方法：构建左冠状动脉前降支结扎心肌梗死小鼠模型，腹腔注射HSYA后，采用生存率分析、HE染色与CD31染色观察HSYA的心肌保护与促血管新生作用。采用定量PCR检测核仁素和VEGF表达。采用Matrigel和划痕试验在细胞水平观察HSYA的促HUVEC管型形成与细胞迁移作用，采用定量PCR和免疫印迹分析核仁素及VEGF表达。采用干扰RNA观察核仁素敲低后对HSYA促管型形成作用的影响。结果：整体水平：HSYA减轻缺血心肌损伤，表现为增加小鼠存活率［ HSYA （71．6％） vs saline （37．5％）］，减轻心肌纤维化，改善心肌重塑，增加血管新生（ CD31阳性细胞增加），促进心肌组织中核仁素和VEGFA表达。细胞水平：HSYA促进HUVEC管型形成和迁移，增加核仁素和VEGFA表达；核仁素敲低显著抑制HSYA的促管型形成作用，降低VEG－FA表达。结论：HSYA促进核仁素表达，调节VEGFA水平，进而促进血管新生，发挥心肌保护作用。
作者：邹江；王慷慨；刘曼婷；肖献忠 刊期： 2015年第10期
目的：脑卒中发生后5年内卒中再发率较高，寻找再卒中发生的神经保护措施意义重大。抗炎因子IL－10在脑卒中发生中发挥重要的神经保护作用。预先将载IL－10的腺相关病毒（ rAAV1－IL－10）感染脑动脉，研究其在脑卒中发生时的神经保护作用及机制，探讨脑卒中血管介入治疗时，在卒中易感血管中给予保护性基因预防再卒中发生的可行性。方法和结果：经颈动脉插管将rAAV1－IL－10或对照病毒注入大鼠脑动脉内，3周后在病毒注射同侧建立大脑中动脉阻塞模型（ MCAO），阻塞45 min后恢复脑血流再灌注。血流再灌注后24 h进行神经损伤评分并处死大鼠。原位杂交显示病毒成功感染脑动脉，rAAV1－IL－10显著降低脑缺血／再灌注引起的神经损伤评分，缩小梗死体积，降低损伤神经细胞比例。 IL－10降低脑梗死边缘区TNF－α的mRNA水平和血液中TNF－α蛋白水平，同时促进梗死边缘区HO－1的mRNA和蛋白表达。结论：脑动脉内预先感染rAAV1－IL－10能保护脑卒中的神经元，在卒中易感的脑血管中预防性给予保护性基因治疗策略具有可行性。
作者：梁秋娟 刊期： 2015年第10期
15－脂氧合酶（15－LO）是参与肺动脉高压发病的重要因子。然而，15－LO在肺血管外膜成纤维细胞中的表达及作用却不清楚。本研究将探讨15－LO对外膜成纤维细胞活性的调节作用。大鼠低氧培养7 d，或给予15－LO抑制剂NDGA处理。通过WST－1、细胞划痕、流式细胞术及蛋白印迹等检测成纤维细胞增殖、表型、迁移及周期改变。结果显示缺氧刺激15－LO表达， NDGA减轻缺氧大鼠外膜重构。缺氧激活JNK通路，阻断15－LO或JNK抑制成纤维细胞活性改变。应用干扰RNA沉默MMP－2和p27 Kip1的表达后，15－LO诱导的成纤维细胞变化被抑制。阻断JNK或敲除Elk－1抑制缺氧诱导的15－LO表达。 Lucif－erase及ChIP分析揭示15－LO启动子与Elk－1存在结合位点，缺氧促进Elk－1与15－LO结合。上述结果表明：缺氧刺激JNK依赖的Elk－1促进15－LO表达，15－LO调节MMP－2及p27Kip1，促进成纤维细胞增殖、迁移、细胞周期等改变，从而介导血管外膜重构和肺动脉高压的发生。
作者：张莉；陈明刚；王晓燕 刊期： 2015年第10期
作者： 刊期： 2015年第10期
目的：创伤后应激障碍（ PTSD）是心血管疾病的独立危险因素，但PTSD导致心肌损伤的分子机制尚不明确。方法：48只SD大鼠随机分为control组（n＝18）和PTSD组（n＝30），采用单一延长刺激法复制PTSD大鼠模型，通过旷场实验检测行为学改变，TUNEL法检测心肌细胞凋亡率，应用透射电镜观察心肌细胞超微结构，Western blotting方法分析心肌ERS分子的表达及活化。结果：造模后第14天，与control组大鼠比较，PTSD大鼠在旷场中直立次数及穿行格数均显著减少（ P＜0．01）；通过TUNEL染色及透射电镜观察发现PTSD大鼠心肌细胞出现典型凋亡特征；PTSD大鼠心肌组织中Bcl－2／Bax显著下降（ P＜0．01），葡萄糖调节蛋白78（GRP78）及钙网蛋白（CRT）表达上调，CCAAT／增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）表达上调、caspase 12剪切活化增加以及蛋白激酶样内质网激酶（ PERK）磷酸化增加（ P＜0．05）。结论：心肌细胞ERS相关凋亡的PERK／CHOP和caspase 12途径可能介导PTSD大鼠心肌损伤。
作者：刘蜜；徐菲菲；陶天琪；宋丹丹；李冬；李玉珍；郭渝成；刘秀华 刊期： 2015年第10期
目的：本实验旨在观察NF－κB在脑缺血预处理（ CIP）上调GLT－1表达和诱导脑缺血耐受中是否发挥作用。方法：应用Western blot观察GLT－1和NF－κB p50蛋白表达；免疫共沉淀观察NF－κB p50／p65二聚体复合物的表达；电泳迁移率变动分析（ EMSA）观察NF－κB DNA结合活性的变化；硫堇染色进行神经病理学评价。结果：在CIP诱导脑缺血耐受过程中，GLT－1表达上调。同时，NF－κB被激活，表现为NF－κB p50蛋白表达上调；NF－κB发生二聚体化，并由胞浆转位至胞核；NF－κB的DNA结合活性增强。 NF－κB的特异性抑制剂BAY 11－7082通过抑制NF－κB的活化来阻断CIP所诱导的脑缺血耐受及GLT－1表达上调。结论：NF－κB在脑缺血预处理上调GLT－1表达和诱导脑缺血耐受中发挥作用。
作者：孙雅薇；张敏；唐蕊；王红梅；齐杰；张玲燕；庞超；胡玉燕；李文斌 刊期： 2015年第10期
目的：探讨别嘌呤醇对高果糖诱导的胰岛素抵抗性的影响。方法： SD雄性大鼠随机分为正常组（ control组）、高果糖组（ Fr组）和高果糖别嘌呤醇组（ all组），高果糖饲料喂养同时别嘌呤醇或双蒸水灌胃4周。测定各组空腹血糖、胰岛素和血尿酸变化，利用口服糖耐量试验和高胰岛素－正常葡萄糖钳夹试验评价别嘌呤醇对胰岛素敏感性的作用。 Western blot法检测骨骼肌葡萄糖转运体4（GluT4）、蛋白激酶B（Akt）及磷酸化蛋白激酶B（p－Akt）蛋白表达。结果：别嘌呤醇明显降低高果糖负荷引起的空腹胰岛素、血尿酸值的增高。口服糖耐量试验各组之间无明显差异。高胰岛素－正常葡萄糖钳夹试验表示，Fr组胰岛素敏感性指标（ GIR）明显低于正常组，表明出现胰岛素抵抗性；all组GIR值明显高于Fr组。3组GluT4和Akt蛋白表达无明显变化，别嘌呤醇明显增加Akt磷酸化水平。结论：别嘌呤醇提高骨骼肌胰岛素敏感性，改善高果糖诱导的胰岛素抵抗性。
作者：姜海英；李英顺；金清华 刊期： 2015年第10期
本研究探讨CA改善I／R引起的大鼠肝脏微循环障碍和肝损伤的作用及其机理。取体重为180～220 g的SD雄性大鼠，结扎肝脏门管区30 min后再通。部分大鼠经由股静脉连续滴入CA （15 mL? kg－1? d－1）。计算大鼠24 h生存率。观察肝微循环动态。在再灌注120 min时，记录肝脏表面血流量，取肝组织，观察组织学和超微结构变化，分析其分子生物学机理。 CA可以改善大鼠生存率和肝脏微循环障碍，抑制肝过氧化物产生和肝损伤；可与Sirt3结合，改善Sirt3活性、改善Complex I、 II、IV和V的表达，改善SDHA、SDHA、NDUFA9乙酰化、NAD／NADH的变化。 CA还可抑制大鼠肝脏组织的NADPH oxidase亚基p47phox、Rac1和PKC的膜转位，抑制胞膜gp91phox及p22phox的表达。结论：CA能够抑制I／R引起的大鼠肝氧化应激，改善肝脏微循环障碍和肝损伤，该作用与其结合蛋白Sirt3，增加Sirt3活性，提高大鼠线粒体呼吸链活性相关，也与其抑制PKC膜转位，抑制NADPH oxidase亚基p47phox和Rac1的转位相关。
作者：韩晶岩 刊期： 2015年第10期
目的：探讨靶向干扰SIRT2基因表达对急性粒细胞白血病（ AML）多药耐药细胞株HL60A细胞增殖的影响。方法：针对SIRT2基因构建shRNA真核表达载体，制备慢病毒并感染HL60A细胞。沉默SIRT2基因之后，改良MTT法检测对HL60A细胞活力的影响；甲基纤维素集落形成实验观察对HL60A细胞集落形成能力的影响；采用流式细胞术检测分析对HL60A细胞的细胞周期的影响。结果：干扰组SIRT2基因的表达量被有效抑制；干扰SIRT2基因表达量后，HL60A细胞的细胞活力明显下降，集落形成数量减少及集落的形状减小，细胞被明显阻滞于G1／S期。结论：shRNA靶向干扰SIRT2基因的表达可有效抑制急性粒细胞白血病耐药细胞系HL60A细胞的增殖。
作者：许华；王齐；李元叶；李庆华；庞天翔 刊期： 2015年第10期
目的：观察博莱霉素（ BLM）致肺纤维化时肺组织中内源性的气体信号分子二氧化硫（ SO2）生成及催化产生SO2的关键酶是天冬氨酸氨基转移酶（ AAT）－1、－2表达的变化。方法：将36只健康雄性Wistar大鼠（体重170～200 g）随机分为对照组和BLM组。采用一次性气管内滴注BLM－A5（5 mg／kg）的方法复制大鼠肺纤维化动物模型，对照组大鼠气管内滴注等体积无热原生理盐水。两组大鼠分别于气管内滴注后7 d、14 d、28 d处死动物。光镜下观察肺组织纤维化（ Masson染色）的程度；采用生化法测定肺组织中胶原蛋白、SO2含量及AAT活性；Western blot法检测肺组织中AAT蛋白表达的变化。结果：BLM可引起肺组织炎症反应和肺纤维化，肺组织中羟脯氨酸含量呈时间依赖性地增高。与对照组相比，BLM组肺组织中AAT mRNA表达减少、酶的活性降低，同时肺组织中SO2含量下降。结论：AAT／SO2下调可能参与了BLM致肺纤维化的发生。
作者：黄新莉 刊期： 2015年第10期
目的：研究辣椒素对tau蛋白磷酸化的作用及机制。方法：40只小鼠随机分为4组：饲料＋自来水饲养组、饲料＋20％蔗糖水饲养组、含0．01％辣椒素的饲料＋20％蔗糖水饲养组和含0．01％的辣椒素饲料＋自来水饲养组。24周造模成功后，水迷宫实验检测学习记忆能力的改变；电生理技术检测长时程增强（ LTP）的改变；免疫印迹和免疫组化检测GSK－3β、tau蛋白多个AD相关位点的磷酸化水平变化；检测GSK－3β活性。结果：长期高糖饮食造成：（1） tau蛋白的多个AD相关磷酸化位点的磷酸化水平升高；（2）LTP诱导障碍、突触可塑性减弱；（3）GSK－3β活性升高；（4）空间学习记忆障碍。同时长期给予辣椒素饮食，可减轻高糖饮食引起上述AD样变化。结论：长期高糖饮食可通过激活GSK－3β引起tau蛋白多个AD相关位点的磷酸化；长期给予辣椒素缓解AD样病理变化和症状。
作者：王林；周新文 刊期： 2015年第10期
目的：脓毒症时常伴有组织因子（ TF）表达增加，致凝血功能异常。血小板与白细胞相互作用可促进白细胞表达TF，增强凝血活性。以往研究表明热休克因子1（HSF1）能减轻脓毒症时组织器官的损伤并降低死亡率。本研究探讨内毒素血症时小鼠HSF1对血小板激活、血小板与白细胞相互作用和白细胞TF表达的影响。方法：采用HSF1基因敲除（ HSF1－／－）和野生型（ HSF1＋／＋）小鼠复制内毒素血症模型，应用流式细胞术检测外周血血小板与白细胞黏附和白细胞TF表达。结果：（1）与生理盐水组相比，内毒素血症小鼠血小板P－选择素表达、血小板－白细胞黏附和白细胞TF表达显著升高，出血时间明显缩短；（2）内毒素血症时，HSF1－／－小鼠血小板P－选择素表达、血小板－白细胞黏附和白细胞TF表达均显著高于HSF1＋／＋小鼠，出血时间比HSF1＋／＋小鼠显著缩短。结论：HSF1能抑制小鼠内毒素血症时血小板激活、血小板与白细胞相互作用和白细胞组织因子表达。
作者：肖子辉；冯宇鹏；肖献忠 刊期： 2015年第10期
目的：观察过表达人全长tau蛋白对原代海马神经元胞内钙信号和神经元形态的影响及其机制。方法：通过钙成像观察过表达人全长tau蛋白的神经元胞内钙离子浓度的变化。采用免疫荧光染色观察过表达tau蛋白的神经元树突及树突棘的变化。免疫印迹观察过表达tau蛋白的神经元内钙神经素的蛋白变化。结果：过表达人全长tau蛋白的神经元胞内基础钙水平显著高于对照组（P＜0．05），神经元树突棘数量明显较少，树突生长减慢。同时，钙神经素蛋白含量增加，钙神经素酶活性升高。使用钙神经素阻断剂FK506或CsA作用于神经元，可逆转过表达tau蛋白对神经元树突棘的损伤作用。结论：过表达人全长tau蛋白通过增加胞内钙信号而激活钙神经素，导致海马神经元树突棘的丢失。
作者：尹雅玲；高笛；王建枝 刊期： 2015年第10期
创新性人才的培养是当前教育教学改革的重要目标，在中职医学生的培养中也逐渐由知识型人才向创新性人才转变。但是，中职医学教育受到中国传统知识观和应试教育的影响，中职学生的片面发展阻碍着学生创新能力的产生，而采取新型的知识观、教育观，改革教育教学成为医学教育的重要任务。
作者：唐彩云 刊期： 2015年第10期
目的：探讨适应病理生理学大班教学的“案例式教学（CBL）”方法的改革及应用效果探索。方法：（1）使用标准化处理的临床病例，提前一星期将包括了“显性问题”和“隐形问题”的病例给到学生小组；（2）学生针对病例展开课下资料查找、讨论及PPT制作；（3）汇报小组课上自主病例讲解；（4）教师评价、学生自我评价、学生互评；（5）问卷调查。结果：（1）学生对此教学法接受度96．1％，满意度90．3％，参与度85．8％；（2）学生认为该方法提高学习兴趣91．5％、提高学习效率88．3％、提高临床思维92．3％、提高知识理解能力96．2％、提高知识运用能力91．6％；（3）集中问题：诊断知识理解不够、基础教师对临床知识指导不够。结论：基于大班教学的“案例式教学”在“以学生为中心，提高自学能力”的理念下，针对现行大班病理生理学教学现状，可以提高学生学习兴趣、学习效率、临床思维能力，提高知识的理解和运用能力。
作者：石磊；刘巍；徐芳；李钰伶 刊期： 2015年第10期
目的：观察DNA甲基化修饰酶TET2对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）中CSE／H2S体系的影响。方法：用不同浓度（0、25、50、75、100 mg／L） ox－LDL处理HUVEC不同时间（0、12、24、48 h），RT－PCR和Western blot检测细胞TET2和CSE表达变化，改良亚甲基蓝分光光度法检测培养液中H2 S含量；用TET2过表达和TET2干扰质粒分别转染HUVEC，再用75 mg／L ox－LDL处理24 h，RT－PCR和Western blot检测细胞TET2和CSE表达，改良亚甲基蓝分光光度法检测培养液中H2 S含量。结果：ox－LDL呈浓度和时间依赖性下调HUVEC中TET2和CSE mRNA和蛋白表达，减少培养液中H2 S含量，以75 mg／L ox－LDL 处理24 h效果为明显；TET2过表达可逆转ox－LDL引起的HUVEC中TET2和CSE表达下调以及培养液中H2 S含量的降低，TET2干扰则作用相反。结论：DNA甲基化修饰酶TET2可上调HUVEC的CSE／H2 S体系，有望成为CSE／H2 S体系一个新的内源性调控靶点。
作者：彭娟；唐志晗；任重；刘录山；危当恒；姜志胜 刊期： 2015年第10期
目的：本实验通过结扎大鼠冠状动脉左前降支复制心力衰竭模型。探讨心力衰竭发生发展过程中的分子机制。同时，研究三参维心胶囊抗心力衰竭的作用及其机制。方法：通过结扎大鼠冠状动脉左前降支（ LAD）复制心力衰竭模型，将大鼠随机分为sham组、HF组（心力衰竭组）和Sanshen组（三参维心胶囊组），Sanshen组术后3 d给予三参维心胶囊0．8 g／kg治疗4周。（1）超声心动图和血流动力学检测大鼠心功能。（2）HE染色和Masson染色观察大鼠心肌细胞形态及心肌纤维化。（3） Western blot和免疫组化检测检测相关蛋白表达。结果：（1）与HF组比较，Sanshen组FS、EF、LVIs、LVPWs、LVSP和±dp／dtmax增高，LVIDd、LVIDs、LVVs和LVEDP降低（ P＜0．05）。（2）与HF组比较， Sanshen组心肌结构恢复，心肌纤维化程度减轻。（3）与HF组比较，Sanshen组Bim、Bax、cytochrome C、cleaved caspase－3、p－PERK、p－eIF2α、ATF－4、CHOP、Ub、Beclin－1、p62和LC－3蛋白表达降低，而Bcl－2、26S proteasome和p－Akt表达增高，Bcl－2／Bax比值增高（P＜0．05）。结论：（1）三参维心胶囊可改善心肌舒缩功能。（2）三参维心胶囊通过抗心肌细胞凋亡、抑制心肌纤维化起抗心力衰竭的作用。（3）三参维心胶囊通过降低内质网应激和自噬水平，提高泛素－蛋白酶体和Akt的活性，减少心肌细胞凋亡抑制心肌纤维化。
作者：王权 刊期： 2015年第10期
中国病理生理杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中国病理生理学会
