姜海英；李英顺；金清华
目的：探讨促红细胞生成素（ EPO）对压力超负荷大鼠心肌NADPH氧化酶的影响。方法：SD雄性大鼠，腹主动脉结扎复制高血压模型。随机分成3组：模型组（ model）；假手术组（ sham）：除不缩窄腹主动脉外，其余操作同腹主动脉缩窄组；重组人促红细胞生成素治疗组（ rhEPO，腹腔注射4000 U／kg，每周2次）。8周后，心动超声和血流动力学评价心功能； Masson染色观察心肌纤维化程度；实时荧光定量PCR检测Nox2和Nox4 mRNA 表达， Western blot 观察心肌Nox2、Nox4和炎性因子CD45、F4／80、TGF－β蛋白表达。结果：与模型组比较，EPO治疗组LVEF、LVFS、LVESP及±dp／dtmax升高， LVESD、LVEDD及LVEDP下降；同时，EPO可降低压力超负荷所致的心肌纤维化，降低心室肌中NADPH氧化酶活性及心肌炎性反应。结论：EPO通过降低NADPH氧化酶活性，抑制心肌氧化应激水平，减少心肌炎性反应，抑制压力超负荷所致大鼠心肌重构，改善心功能。
作者：王丽萍 刊期： 2015年第10期
目的：以彩超多普勒M型检测法，探讨不同剂量法舒地尔对大鼠心梗后心室重构保护作用疗效。方法：用结扎LAD法制备AMI大鼠模型40只，随机分为AMI组、法舒地尔低、中、高剂量组（2．5、5、10 mg? kg－1? d－1）、卡维地洛对照组（20 mg?kg－1? d－1），另设假手术组。给药4周后，M－model超声测心功能指标。结果：（1）与假手术组比较，AMI组的EF、FS、LVAWd、LVAWs和LVSV显著降低。（2）与AMI组比较，法舒地尔各治疗组均有改善心室重构作用，以中剂量组效果佳：EF、FS等明显增加（ P＜0．01）。（3）与卡维地洛组比较，低、高剂量治疗组EF、FS等明显减少（ P＜0．05）。而中剂量组EF、FS等略有降低。结论：中剂量法舒地尔能改善AMI后大鼠心功能，对AMI后心室重构具有明显抑制作用。
作者：符永恒；李桃；张梦珍；林秋雄；朱杰宁；单志新；杨敏 刊期： 2015年第10期
目的：禽致病性大肠杆菌（ APEC）是严重危害养殖业和人类健康的重要病原菌，PhoP／Q二元调控系统是存在于APEC的信号调控系统。探讨PhoP／Q对APEC致病性的调控作用。方法：筛选出含有phoP／Q基因并对氯霉素和氨苄青霉素敏感的菌株AE17，采用Red同源重组法对AE17的phoP和phoQ基因进行敲除并同步回复，比较构建的缺失株、回复株及原始株毒力基因转录水平、生物学特性、对鸡胚成纤维细胞黏附入侵力、LD50和病理组织学变化等指标。结果：phoP／Q基因缺失显著降低APEC的运动力，对其13个毒力基因转录水平呈现上调或下调；能明显下调APEC致病性。结论：phoP／Q基因对APEC生物学特性及致病性有一定的调控作用。
作者：涂健；黄博言；祁克宗 刊期： 2015年第10期
低氧是肿瘤的重要微环境，它主要通过低氧诱导因子实现对肿瘤发生发展的调控。近，我们报道多梳蛋白CBX4通过SUMO化修饰低氧诱导因子HIF－1，进而增加其转录活性，促进肿瘤新生血管生成和肿瘤转移（ Cancer Cell，2014，25：118－131）。我们随后的研究发现，经CBX4进行SUMO化修饰的HIF－1α不能结合Sirt6。后者是去乙酰化酶sirtuin家族中的一员，也可能是HIF－1转录活性的共遏制因子。有趣的是，我们发现低氧能够下调Sirt6蛋白而非mRNA的表达。通过siRNA技术分别将低氧下发挥重要作用的两个转录因子HIF－1α／HIF－2α进行knockdown后发现，HIF－2α而不是HIF－1α介导了低氧对于Sirt6的调控。在常氧下转染HIF－2α能够剂量依赖地减少Sirt6的表达。低氧和过表达HIF－2α都能够缩短Sirt6蛋白的半衰期。同时，在分别加入蛋白酶体抑制剂MG132、PS－341或溶酶体抑制剂CQ，发现Sirt6是通过蛋白酶体途径而非溶酶体途径发生降解。在此基础上，我们进一步通过双荧光蛋白检测系统寻找低氧下加速Sirt6降解的泛素E3连接酶。
作者：徐颖；刘亚利；陈国强 刊期： 2015年第10期
目的：检测miR－7在野生型、胃炎模型和胃癌模型小鼠胃组织及人胃癌组织和细胞株中的表达，探讨了其对胃癌发展中的作用及可能的机制。方法：实时荧光定量PCR法检测胃癌组织和胃炎组织中依赖性表达变化的miR－7的表达，并转染高表达miR－7的质粒制备高表达miR－7的AGS／miR－7细胞，检测其对胃癌细胞增殖和软琼脂克隆形成的影响。结果：胃炎组织中和胃癌组织中的miR－7的表达明显低于野生型小鼠胃组织，胃癌组织中的miR－7表达明显低于胃炎组织；幽门螺旋杆菌感染的小鼠胃组织miR－7的表达明显受抑制；高表达miR－7的AGS／miR－7细胞可明显抑制细胞的增殖和软琼脂克隆形成。结论：炎症可抑制miR－7的表达，下调的miR－7促进细胞增殖和软琼脂克隆形成是炎症促进胃癌发生可能的新机制。
作者：叶晶；孙沛林；朴英实 刊期： 2015年第10期
目的：为实现我校培养“重医德、强技能、为基层”的应用型医学人才的目标。方法：结合我院实际情况，将以往“以学科为中心”的教学模式转变为“以器官系统为中心”的各学科交叉融合的课程整合教学模式。病理生理学作为联系基础与临床间的桥梁学科，在整合课中发挥着承上启下的积极作用。要求教师不但要医学基础理论深厚，扎实掌握交叉学科知识，同时教学中要熟练应用PBL（ problem－based learning）、案例式、网络辅助等教学方式。结果：实践证明，课程整合下的病理生理学教学模式的转变，进一步提高了学生学习的积极性，提高了低年级学生逻辑分析、表达沟通、综合运用理论知识解决实际问题的能力。结论：实现了在教学主体上以学生为中心，学生自主学习，自我管理的教学目标。
作者：杨旭芳；王莞；陈培；冯华；赵洪涛；刘星 刊期： 2015年第10期
目的：研究一氧化氮介导的巯基亚硝基化（S－nitrosylation）对磷酸二酯酶5（PDE5）蛋白稳定性的影响，阐明衰竭心脏中PDE5表达增加的分子机制。方法：采用质谱分析和点突变的手段，检测PDE5发生S－nitrosylation的位点。采用Western blot的方法检测一氧化氮和过氧化氢对细胞PDE5表达的变化。结果：在细胞和动物模型中均可以检测到PDE5发生S－nitrosyla－tion，这种修饰发生在第220位的半胱氨酸残基上。发生S－nitrosylation修饰后，PDE5的活力降低20％左右，并很快被泛素－蛋白酶体系降解，引起细胞内PDE5的表达上调。突变第220位半胱氨酸残基、过氧化氢预处理以及抑制sGC和PKG活力均可以抑制一氧化氮引起的PDE5表达下调。突变PDE5的磷酸化位点也有类似效果。反过来，在心肌细胞中抑制一氧化氮合酶（ NOS）活力或敲除NOS3均可以提高PDE5的表达。结论：S－nitrosylation能够引起PDE5的降解，而衰竭心脏中一氧化氮生物利用率的降低可能是导致PDE5表达增加的主要原因。
作者：王月；张萍；徐知遇；陈英杰；陆忠兵 刊期： 2015年第10期
目的：观察DNA甲基化修饰酶TET2对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）中CSE／H2S体系的影响。方法：用不同浓度（0、25、50、75、100 mg／L） ox－LDL处理HUVEC不同时间（0、12、24、48 h），RT－PCR和Western blot检测细胞TET2和CSE表达变化，改良亚甲基蓝分光光度法检测培养液中H2 S含量；用TET2过表达和TET2干扰质粒分别转染HUVEC，再用75 mg／L ox－LDL处理24 h，RT－PCR和Western blot检测细胞TET2和CSE表达，改良亚甲基蓝分光光度法检测培养液中H2 S含量。结果：ox－LDL呈浓度和时间依赖性下调HUVEC中TET2和CSE mRNA和蛋白表达，减少培养液中H2 S含量，以75 mg／L ox－LDL 处理24 h效果为明显；TET2过表达可逆转ox－LDL引起的HUVEC中TET2和CSE表达下调以及培养液中H2 S含量的降低，TET2干扰则作用相反。结论：DNA甲基化修饰酶TET2可上调HUVEC的CSE／H2 S体系，有望成为CSE／H2 S体系一个新的内源性调控靶点。
作者：彭娟；唐志晗；任重；刘录山；危当恒；姜志胜 刊期： 2015年第10期
合成了两亲性壳聚糖衍生物（ Chit－DC）和偶联小肠靶向因子VB12的两亲性壳聚糖衍生物（ Chit－DC－VB12），检测其生物相容性、负载灯盏花乙素（ Scu）后的缓释效果、对Scu生物利用度及对糖尿病视网膜病变疗效的影响。通过FTIR分析和H－NMR谱图分析，证实了Chit－DC和Chit－DC－VB12的合成。 CCK－8分析显示Chit－DC和Chit－DC－VB12的毒性较小。发现两种纳米载药胶束在各种模拟胃肠液中经过10 h累计释放基本达到平衡。通过Transwell模型发现，Chit－DC－Scu和Chit－DC－VB12－Scu在Caco－2细胞的转运效率要高于Scu；发现Caco－2细胞对Chit－DC和Chit－DC－VB12的胞吞量增加；检测不同时点Scu的血药浓度发现，Chit－DC－Scu和Chit－DC－VB12－Scu的Scu峰值出现时间往后推移，Scu的生物利用度有所提高；建立II型糖尿病大鼠模型并给药后发现，Scu的应用提高了视网膜血管血流的流速，减弱了视网膜组织VEGF，VEGFR2，vWF蛋白的表达，而Chit－DC负载Scu后增强了Scu的药效。
作者：邓宇斌；王竟男 刊期： 2015年第10期
目的：探讨平原人进入高原早期脑形态结构、功能的变化及其与急性高原病的关系。方法：健康青年男性志愿者（22～27岁），分别在平原（300 m）和乘火车进入高原（3658 m）后第3天，进行脑部MRI检查。同时，观察记录志愿者的血氧饱和度、血常规及血液检测指标、急性高原反应症状评分等。结果：与平原相比，8名志愿者进入高原后第3天，脑部均呈现不同程度的结构变化，这些改变主要集中在胼胝体辐射线额部、额枕下束、前丘脑辐射（内囊）、胼胝体压部等脑区。其中，与平原相比， FA值在右侧胼胝体辐射线额部和额枕下束显著减小（ P＜0．01）；AD在左侧胼胝体辐射线额部和额枕下束及内囊显著减小（P＜0．01）；AD在胼胝体双压部显著增加（P＜0．01）；RD在右侧胼胝体辐射线额部和额枕下束显著增加（P＜0．01）；MD在右侧胼胝体压部和内囊显著增加（P＜0．05）；8名自愿者在通过量表问卷调查诊断仅有1名出现轻型急性高原病。 BOLD观察静息态下脑部的部分脑区有功能的变化。结论：平原人快速进入海拔3658 m高原早期（3 d），有不同程度的脑组织结构、功能的改变。
作者：吴刚；刘宝；邹利光；张静娜；孙滨达；邱明国；高钰琪 刊期： 2015年第10期
作者： 刊期： 2015年第10期
目的：探讨中药清血消脂片含药血清（QXXZ）对游离脂肪酸诱导的3T3－L1前脂肪细胞炎症干预作用。方法：采用3－异丁基－1－甲基黄嘌呤异丁基－3－甲基黄嘌呤、地塞米松和胰岛素诱导3 T3－L1前脂肪细胞的分化。用油酸诱导细胞代谢性炎症；采用CBA法和RT－PCR法分别观察QXXZ对细胞炎症因子和NF－κB mRNA的影响；用3－甲基腺嘌呤（3－MA）抑制细胞自噬，免疫荧光观察药物对炎症的调节作用。结果：与同浓度的正常血清比较， QXXZ组IL－6、 MCP－1及NF－κB mRNA表达显著降低（P＜0．05）；加入3－MA抑制细胞自噬后，IL－6 mRNA的表达水平比阻断自噬前明显上升（P＜0．01），而QXXZ依然能降低其IL－6 mRNA及NF－κB mRNA表达（ P＜0．05）。结论：清血消脂片可明显降低3T3－L1前脂肪细胞炎症模型炎症因子的表达；抑制自噬活性促进了细胞炎症因子表达，而QXXZ仍可通过调节NF－κB mRNA表达水平来抑制炎症。
作者：张蕾；贾丽超；解欣然；康群甫；刘卫红 刊期： 2015年第10期
作者： 刊期： 2015年第10期
目的：探讨葛根素（puerarin， Pue）在心肌细胞氧化应激损伤中的保护作用。方法：利用H2O2处理心肌H9c2细胞，建立氧化应激损伤模型。采用激光扫描共聚焦显微镜成像法测定线粒体膜电位。用MTT法观察Pue对细胞增殖的影响。利用Western blotting法检测Pue对GSK－3β和Akt活性的影响。结果：Pue明显减轻H2 O2诱发的心肌细胞线粒体损伤，但是PI3K抑制剂渥曼青霉素对此作用没有影响；Pue能够增加GSK－3β（ Ser9）蛋白的表达，而对Akt （ Ser473）蛋白表达没有明显影响。结论：Pue通过使GSK－3β失活，抑制mPTP的开放，从而减轻氧化应激诱发的心肌细胞损伤，而PI3K／Akt信号转导通路并未参与此过程。
作者：徐菁蔓 刊期： 2015年第10期
目的：我们的前期研究发现，敲除FKBP12．6基因可导致成年雄性小鼠心肌肥大。本研究旨在探讨FKBP12．6缺失导致性别差异性心肌肥大的分子机制。方法：手术摘除FKBP12．6基因敲除小鼠睾丸以观察对心肌肥大的影响；放射性免疫检测法（RIA）和ELISA法检测FKBP12．6敲除小鼠17β－estradiol （E2）、testosterone （T）、LHβ和FSHβ分泌变化情况；建立垂体神经元LβT2 FKBP12．6shRNA载体稳定干扰细胞系，采用Fluo3－AM荧光探针检测［ Ca2＋］ i；real－time PCR检测LHβ、FSHβ、calci－neurin（CaN）等mRNA表达变化；分离胞浆胞核蛋白，Western blot法检测CaN、MCIP1．4、NFAT3、Nur77、Pin1等蛋白表达和核浆分布情况。结果：摘除雄性FKBP12．6基因敲除鼠的睾丸可显著抑制心肌肥大的发生；FKBP12．6敲除小鼠心脏中可能促进心肌肥大的通路CaN和CaMKⅡ的表达和活性并未发生明显变化；血清E2、T、LHβ及FSHβ水平与WT相比显著上调，表明敲除小鼠性腺轴调控增强；LβT2 FKBP12．6干扰后［ Ca2＋］ i 显著上升；性腺轴相关基因LHβ、SF－1、Nur77和钙离子相关基因CaN、MCIP1．4、SERCA2的mRNA表达显著上调；胞浆中CaN和MCIP1．4蛋白水平上调；NFAT3、Nur77和Pin1核转位明显增加。结论：FKBP12．6缺失后垂体细胞内钙离子水平上调，激活CaN／NFAT3通路，进而促进LHβ和FSHβ转录，导致下丘脑－垂体－性腺轴激活，从而诱发性别差异性心肌肥大。
作者：肖云飞；邓柯玉；王婵娟；曾智雄；管小卉；汪玲芳；姬广聚；寿伟年；辛洪波 刊期： 2015年第10期
目的：近年来研究发现一线降糖药二甲双胍（ metformin）可通过激活AMPK发挥心血管保护作用。本研究旨在探讨met－formin能否通过激活AMPK抑制Ang II引起的心脏成纤维细胞TGF－β1产生及其相关机制。方法：10周龄野生型C57BL／6和AMPKα2－／－小鼠，皮下植入微渗泵给予Ang II （3 mg? kg－1? d－1）7 d，同时皮下注射metformin（200 mg? kg－1? d－1）。原代分离培养成年小鼠心脏成纤维细胞（ AMCF）。采用real－time PCR、Western blot、双萤光素酶报告基因实验、染色质免疫沉淀技术（ ChIP）等方法进行研究。结果：在野生型C57BL／6小鼠，metformin可抑制Ang II引起的心脏纤维化及TGF－β1的产生，而在AMPKα2－／－小鼠中，metformin则不能抑制Ang II引起的纤维化和TGF－β1产生。在野生型AMCF，metformin抑制Ang II引起的TGF－β1的产生，Compound C（ AMPK抑制剂）能够逆转metformin的抑制作用。进一步研究发现，Ang II上调肝细胞核因子4α（ HNF4α）蛋白表达，增加HNF4α与TGF－β1基因启动子区的结合，双萤光素酶报告基因实验证实HNF4α作用于TGF－β1基因启动子区，并介导其转录。 HNF4α腺病毒过表达可增加AMCF中TGF－β1的产生；相反，通过慢病毒转染HNF4αsiRNA后，Ang II引起的TGF－β1生成增加被抑制。这些结果提示HNF4α介导Ang II引起的TGF－β1转录表达。 Metformin可抑制Ang II引起的HNF4α蛋白上调，Compound C可以逆转此作用，同时ChIP结果也表明metformin能够抑制Ang II引起的HNF4α与TGF－β1的结合。结论：Metformin通过激活AMPK抑制HNF4α蛋白表达及其与TGF－β1转录区的结合，进而抑制Ang II引起的TGF－β1转录表达增加。
作者：陈瑞飞；肖晗；张幼怡 刊期： 2015年第10期
心脏干细胞移植在心肌梗死治疗中具有广泛应用，外泌体（ exosome）被认为是细胞旁分泌的重要介质。本研究拟建立心脏固有干细胞（ CPCs）的成熟分离方法，并初步探索CPCs分泌的exosome在体外保护氧化应激状态下心肌细胞的凋亡。原代分离培养鉴定Sca－1＋CPCs，离心加试剂盒分离出CPCs分泌的exosome，并进行表型鉴定和粒径分析；将心肌细胞分成对照组与CPC－exo预处理组，用H2 O2处理心肌细胞诱导其凋亡，Western blot （ WB）检测cleaved caspase－3蛋白水平。结果显示：磁珠分选出的细胞用免疫荧光检测发现Sca－1呈现阳性表达，流式细胞术提示分选前和分选后Sca－1阳性细胞的比例差异具有统计学意义（n＝3， P＜0．01）；CPCs来源的exosome， WB结果提示其CD63表达阳性；体外凋亡保护的WB结果显示，加了CPC－exo的细胞凋亡状态明显改善，且相关蛋白表达显著降低（ P＜0．05）。因此，心脏干细胞可以分泌出携带有重要信息物质的exosome，能在体外保护心肌细胞，避免其发生凋亡，为临床心梗等疾病提供全新的治疗策略。
作者：肖静；潘宇；李晓红；吴岳恒；姜霖；杨翔宇；余细勇 刊期： 2015年第10期
目的：观察低氧对大鼠肺动脉压及肺组织骨桥蛋白（ OPN）表达的变化，探讨OPN在肺动脉高压发病中的作用。方法：将30只SD大鼠随机分成5组：常氧组以及低氧（低压氧舱，5000 m海拔）1 d组、7 d组、14 d组和21 d组，测定平均肺动脉压（ mPAP）和右心室肥厚指数［ RV／（ LV＋S）］；Western blot法检测肺组织中OPN表达。结果：低氧各组动物mPAP均高于常氧组，14 d组＞21 d组，7 d组＞1 d组；低氧7 d、14 d、21 d组动物RV／（ LV＋S）逐渐增高；Western blot结果示低氧各组肺组织OPN水平高于常氧组，7 d组＞1 d组＞14 d组。结论：低压低氧可刺激SD大鼠肺动脉压增高、右心室肥厚和肺组织OPN的表达增加，OPN的表达与肺动脉高压间有关联。
作者：刘杰 刊期： 2015年第10期
目的：活性氧（ ROS）调节诱导性多能干细胞（ iPSCs）向内皮细胞分化的分子机制还不清楚。本研究旨在探讨NADPH氧化酶2（Nox2）来源的ROS在iPSCs向内皮细胞分化中的作用和分子机制。方法和结果：我们利用野生型和Nox2基因缺失型小鼠胚胎成纤维细胞，诱导生成小鼠iPSCs，发现Nox2基因缺失的小鼠iPSCs分化的血管内皮细胞（ Nox2－／－miPSC－ECs）中， ；ROS水平、VEGF表达、内皮和动脉内皮细胞标志物以及Notch信号通路分子的表达均明显下调，且这种下调能被Nox2或Notch1过表达所逆转。外源性低浓度的H2 O2或过表达Nox2激活Notch信号通路，促进动脉内皮细胞标志物的表达，这种作用可被ROS抑制剂或抑制Notch1表达所阻断。 Nox2基因缺失导致iPSCs分化的内皮细胞存活、增殖、迁移及管腔形成能力下降。将Nox2－／－miPSC－ECs移植到小鼠缺血下肢肌肉中，缺血肢的毛细血管和小动脉密度明显低于对照ECs组， VEGF和Notch1表达下降。结论：Nox2产生的ROS通过激活Notch信号通路促进iPSCs向动脉内皮细胞分化。
作者：魏香香；康雪玲；蒋丽；牛琮；王新红；陈思锋；孟丹 刊期： 2015年第10期
目的：本实验旨在探究甘氨酸对STZ诱导的Ⅰ型糖尿病的降血糖作用及其作用机制。方法和结果：我们采用链脲佐菌素（ STZ，50 mg／kg）腹腔注射（连续5 d） C57小鼠建立Ⅰ型糖尿病模型，造模完成后腹腔注射给予小鼠80 mg／kg、400 mg／kg和800 mg／kg甘氨酸，每周检测各组小鼠空腹血糖值。实验结果显示，80 mg／kg甘氨酸对Ⅰ型糖尿病小鼠血糖无明显保护作用，400 mg／kg和800 mg／kg甘氨酸能显著降低Ⅰ型糖尿病小鼠血糖，且随着检测周数增加呈现剂量依赖性。此外，我们检测了各组小鼠糖耐量、胰岛素耐量及GSIS，400 mk／kg和800 mg／kg甘氨酸能有效保护Ⅰ型糖尿病小鼠胰岛功能。提取各组小鼠胰岛细胞蛋白，检测其凋亡情况，800 mg／kg甘氨酸组小鼠caspase－3表达明显降低。接着我们检测各组小鼠胰岛细胞内Ca2＋浓度及ROS水平，检测结果显示800 mg／kg甘氨酸组胰岛细胞内Ca2＋浓度和ROS水平明显较低。结论：甘氨酸能显著降低STZ诱导的Ⅰ型糖尿病小鼠血糖，其作用机制是降低胰岛细胞内Ca2＋浓度和ROS水平，从而减少胰岛细胞的凋亡。
作者：李科学 刊期： 2015年第10期
中国病理生理杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中国病理生理学会
