王庆军;王勇;蔡剑鸣;蔡幼铨;刘丹青;韩旭
目的 建立一种快速灵敏检测甲磺酸帕珠沙星在血清、龈沟液和唾液中药物浓度的HPLC方法.方法 色普柱为AgilentZorbax SB-C18(5μm,250 mm×4.6 mm),流动相为乙腈-磷酸三乙胺溶液(0.5%磷酸,1%三乙胺)=(155∶850),紫外检测波长为245 nm,流速为1.0 ml/min.样本处理采用甲醇沉淀蛋白,上清吹干,流动相复溶残渣,离心后上清20μl进样检测.结果 样品中帕珠沙星色谱分离完全,无内源性物质干扰,在25~10 000 ng/ml内呈现良好的线性回归,线性方程为Area=0.10837903*Amt+0(r=0.99953).检测灵敏度高,低检测浓度可达到10 ng/ml,回收率,在91%以上.结论 HPLC可以迅速、准确地检测出甲磺酸帕珠沙星在血清、龈沟液和唾液样本中的含量.
作者:蒋一;李鸿波;鄂玲玲;吴霞;刘洪臣 刊期: 2013年第01期
目的 研究SOX2在宫颈上皮内瘤样病变(CIN)及宫颈癌组织中的表达,探讨其与CIN疾病及宫颈癌临床特征的相关性.方法 应用免疫组化SP法,检测10例正常宫颈、36例不同级别CIN(Ⅰ级10例,Ⅱ级12例,Ⅲ级14例)、40例宫颈癌组织(Ⅰ期21例,Ⅱ期19例)中SOX2蛋白的表达情况,分析比较其表达与临床特征的关系.结果 (1)SOx2蛋白在正常宫颈组织中表达率均为0%,在36例C1N组织中阳性表达率为41.6%(15/36),其中GIN Ⅰ级10.0%,CINⅡ级41.7%,CINⅢ级64.3%;而40例宫颈癌组织SOX2蛋白阳性表达率为82.5%(33/40),其中宫颈癌Ⅰ期78.2%,Ⅱ期88.2%.随着宫颈病变进展,SOX2的阳性表达率呈递增趋势.(2)SOX2蛋白表达与宫颈癌病理组织分级及淋巴结转移相关(P<0.05),与宫颈癌患者的年龄、临床分期无明显相关关系(P>0.05).结论 SOX2蛋白表达水平与CIN疾病及宫颈癌恶性度及淋巴结转移呈正相关,检测SOX2对了解CIN及宫颈癌生物学行为和评估预后具有一定的临床价值.
作者:蔡春芳;谭国胜;俞奇;栾峰;余雷;王莹 刊期: 2013年第01期
目的 了解脑卒中后便秘的发生率,并探讨其与脑损伤相关因素的关系.方法 采用便利抽样方法,对广州市10家医院的723例脑卒中住院患者进行问卷调查,包括人口统计学资料、脑损伤相关因素、排便情况、既往史等项目.结果 723例调查对象中便秘者共有250例,总发生率为34.6%,其中缺血性卒中便秘的发生率为31.0%,出血性卒中为44.8%,缺血合并出血为47.4%,3种类型脑卒中患者的便秘发生率的差异存在统计学意义(x2=12.369,P=0.002);按卒中时期,急性期发生率为41.9%,恢复期31,5%,后遗症期22.6%,3个时期便秘发生率的总体比较差异有统计学意义(x2=24.421,P<0.001);以损伤部位而言,基底节区脑卒中者便秘发生率45.1%,明显高于非基底节卒中者24.7%(P<0.001);脑损伤相关多因素分析显示:卒中类型、卒中时期、病灶数及基底节是脑卒中后便秘的影响因素.结论 脑卒中患者急性期常发生便秘,以脑出血类型为主,大脑基底节区受损者便秘发生率较非基底节区高.
作者:蔡文智;王丽;郭丽;王静新;张晓梅;曹文静;盛小燕 刊期: 2013年第01期
目的 通过对菝葜各化学部位的药效学筛选,确定其治疗慢性盆腔炎疾病(CPID)的有效部位,为菝葜制剂的二次开发提供科学依据.方法 采用苯酚胶浆注入大鼠子宫造成大鼠CPID模型,观察菝葜各化学部位对CPID模型大鼠的治疗作用;采用二甲苯致小鼠耳肿胀法和大鼠棉球肉芽肿法,探讨菝葜各化学部位的抗炎作用.结果 菝葜乙酸乙酯部位的高剂量组能显著降低CPID模型大鼠的子宫炎症反应,对小鼠耳肿胀和大鼠棉球肉芽肿的抗炎作用与模型对照组比较均有显著性差异(P<0.01);中剂量组也能明显改善炎症程度.总体抗炎作用优于总提液组.正丁醇部位作用不明显.结论 菝葜的乙酸乙酯部位为菝葜抗炎及抗慢性盆腔炎的有效部位.
作者:马云;罗艳琴;宋路遥;秦飞;侯连兵 刊期: 2013年第01期
目的 探讨连续运动与间断运动对高脂饮食大鼠肥胖和脂肪肝的作用效果.方法 根据饮食结构不同分为常规饮食?和高脂饮食(H)两大组,再根据运动的不同又分为静坐组(S)、连续运动组(CE)和间断运动组(IE),随机将Wistar大鼠分为6组(n=8).CE组大鼠每天游泳1次,90min/次;IE组大鼠每天游泳3次,30 min/次,每隔4h1次;两组每周运动5d,持续8周.重量分析法测定:腹膜后(RET)、附睾(EPI)和内脏(VIS)的白色脂肪组织、棕色脂肪组织(BAT)、肝脏(L)和腓肠肌(GAST).体内脂肪生成率测定:3H20与皂化后脂肪结合计算脂肪生成率.测定血总胆固醇(CHOL)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、甘油三酯(TG)的含量.每天记录体质量和摄食量.结果 间断运动能够改善血脂,减轻增加的体质量、中心性和内脏性肥胖和脂肪肝,能对控制肥胖症和相关并发症包括非酒精性脂肪肝疾病有效;间断运动在减少高脂饮食和久坐状态引起的肥胖和脂肪肝等不良反应方面较连续运动更有效;高脂饮食和不同运动方案对大鼠体质量增加、肥胖症、脂肪肝以及血脂的影响与运动方式、间隔时间、年龄、性别和实验周期有关.结论 间断运动是一种非药物治疗控制肥胖及其他并发症的重要措施.
作者:杨敏丽;李云川;张忍发 刊期: 2013年第01期
目的 通过研究鳖甲煎丸对肝细胞癌中Wnt信号通路及抑制基因DKK-1、FrpHe表达的影响,探讨其抗肝细胞癌转移侵袭的作用机制与Wnt/β-catenin信号通路的关系.方法 24只Wistar大鼠随机分为3组(8只/组),分别以临床剂量的20倍、10倍的鳖甲煎丸和生理盐水灌胃3d,3d后采血,离心,获取血清.分别将3组血清加入DMEM培养液中培养肝癌细胞HepG2,48h后采用流式细胞术检测细胞中的β-catenin蛋白含量,qRT-PCR法检测DKK-1、FrpHe基因的表达情况,以进一步阐明药物的作用机制与Wnt/β-catenin信号通路的关系.结果 流式细胞术结果:高剂量组和中剂量组含药血清均可显著降低细胞中β-catenin蛋白表达,且该作用与药物浓度有关.RT-PCR结果:高剂量组和中剂量组含药血清均可显著下调DKK-1基因的表达,且该作用与药物浓度有关.而高剂量组和中剂量组含药血清对FrpHe基因的表达影响不明显.结论 鳖甲煎丸能显著抑制肝细胞癌的生长、粘附和转移,且这种抑制作用与显著降低肝癌细胞中β-catenin蛋白表达、显著下调DKK-1基因的表达,从而阻断Wnt/β-catenin信号通路有关.
作者:贺松其;程旸;朱云;范钦;孙海涛;贾文燕 刊期: 2013年第01期
目的 研究干扰素-γ(IFN-γ)增强骨肉瘤患者γδ T细胞对骨肉瘤杀伤作用的影响.方法 以唑来磷酸法扩增骨肉瘤患者外周血γδT细胞.分别使用实时荧光定量聚合酶链反应和流式细胞术检测IFN-γ处理前后骨肉瘤细胞Fas的表达情况;LDH法检测骨肉瘤患者γδ T细胞对骨肉瘤细胞的杀伤活性.结果 IFN-γ对骨肉瘤细胞Fas的表达明显提高(P<0.01),骨肉瘤患者γδ T细胞对骨肉瘤细胞的杀伤作用显著增强(P<0.01).抗人FasL抗体对γδ T细胞杀伤OS细胞作用影响较小(P>0.05);但能显著阻断γδ T细胞杀伤IFN-γ预处理OS细胞的作用,差异均有统计学意义(P<0.01).结论 IFN-γ可增强骨肉瘤患者γδ T细胞的抗骨肉瘤作用.
作者:李朝旭;唐际存;叶招明 刊期: 2013年第01期
目的 评价斜矢状位T1W(QIR-FSE)黑血序列测量颈动脉分叉角的可行性及测量方法.方法 23例行颈动脉MRI扫描患者,分为正常组及斑块组,分别使用2D-TOF及斜矢状位T1W黑血序列测量颈动脉分叉角,3月后重复测量.分析两种序列前后两次测量的重复性,评价两种序列测量结果一致性.采用不同点连线以确定测量方法.结果 排除不符合标准病例后共有20例进行分析,两种序列两次测量结果均有较好的重复性.两种序列测量结果配对,无论是正常组还是斑块组,t检验显示两种序列测量结果有显著统计学差异(P<0.05),但是对于两侧颈动脉分叉角比值,两种序列比较无统计学意义(P>0.05).正常组及斑块组两侧颈动脉角度比值方差分析结果显示,斜矢状位T1W序列4组不同点连线夹角的4组数据间无差异.结论 采用我们测量颈动脉分叉角的方法,斜矢状位T1W(QIR-FSE)序列可用来测量颈动脉分叉角.
作者:王勇;王庆军;蔡剑鸣;马林;陈为军;刘丹青;韩旭 刊期: 2013年第01期
目的 通过研究鳞状细胞癌EZH2蛋白的表达,探讨其表达程度高低与患者术后预后的关系.方法 对1996~2006年本院心胸外科食管鳞癌术后病人随访,纳入研究对象,采用免疫组化方法研究其中鳞癌组织(102例)、癌旁组织(30例)、正常组织(30例)中EZH2蛋白的表达情况,研究该蛋白表达与临床病理参数(性别、年龄、分化、分期、淋巴结转移)的关系;结合随访资料,采用生存分析研究蛋白表达高低对术后患者预后的影响.结果 食管鳞状细胞癌中的EZH2表达高于非癌组织,中低分化鳞癌组织表达高于高分化组织,有淋巴结转移组织表达高于无转移组织,临床TNM分期Ⅱ、Ⅲ期患者表达高于Ⅰ期患者,低于Ⅳ期患者,高表达组患者术后远期生存时间较低表达组明显降低(P<0.05).结论 EZH2促进食管鳞癌的淋巴结转移,降低分化程度.术后患者EZH2高表达组较低表达组预后差.
作者:王浩然;王铭辉;连贵勇;吴多光 刊期: 2013年第01期
目的 探讨脉冲高强度聚焦超声(PHIFU)治疗过程中超声监控的准确性,提高PHIFU治疗中超声判断组织坏死的灵敏度.方法 采用定点辐照牛肝组织的方法,按治疗剂量设定为A组(2000 J)和B组(1440 J),A、B两组再根据占空比不同分为A1组:100W连续波辐照20 s,A2组:100W占空比50%的脉冲波辐照40 s,A3组:100W占空比40%的脉冲波辐照50 s;B1组:120W连续波辐照12s,B2组:120W占空比50%的脉冲波辐照24 s,B3组:120W占空比40%的脉冲波辐照30 s.观察各组辐照后超声图像出现灰度变化,并对辐照前后图像进行相关函数分析,比较灰度变化与相关函数二者对坏死判断的准确性.结果 超声图像灰度增强用于判断PHIFU辐照后损伤的判对率仅为51%,相关函数法判对率可达到85%,明显高于超声灰度增强的方法.结论 PHIFU辐照损伤的监控不能仅依赖于超声图像灰度变化,相关函数法能够更为准确、灵敏的判断PHIFU所致的组织损伤.
作者:赵欣;邹建中;伍烽;刘芳;焦娇 刊期: 2013年第01期
目的 采用静息态功能磁共振成像研究年龄对正常人脑边缘区功能连接的影响.方法 对64名健康志愿者进行常规MRI、三维结构像及静息态脑功能成像扫描.将受试者分为年轻组及年老组,并手工勾画边缘区蒙片,进行全脑基于感兴趣区的功能连接计算.单组数据采用单样本t检验,成组数据采用协方差分析,性别为协变量.结果 年轻组边缘区相关的功能连接位于双侧中扣带回、壳核、丘脑及杏仁核;年老组边缘区相关的功能连接脑区位于双侧壳核、丘脑、杏仁核、岛叶、岛盖及右侧缘上回.年老组较年轻组边缘区相关的功能连接减少脑区主要位于双侧中扣带回、海马旁回及左侧海马.结论 年龄增加可致边缘区功能连接改变.
作者:陈志晔;李金锋;刘梦雨;马林 刊期: 2013年第01期
目的 建立大鼠慢性身心应激模型,探讨加味四逆散对模型大鼠胃粘膜超微结构、血浆促肾上腺皮质激素(ACTH)和皮质醇(CORT)含量、胃组织胃泌素受体(GASR)、空肠组织血管活性肠肽Ⅱ型受体(VIPR2)mRNA表达的影响,阐明加味四逆散干预应激性胃肠功能障碍的机制.方法 大鼠随机分为正常组,模型组,加味四逆散大、中、小剂量组,奥美拉唑组,采用慢性身心应激方法建立大鼠应激模型,经加味四逆散等干预后透射电镜法观察腺胃区胃粘膜组织细胞及细胞间连接的超微结构改变,放免法测定血浆ACTH和血清CORT的变化,并用RT-PCR法检测胃组织GASR、空肠组织VIPR2 mRNA表达变化.结果 电镜观察显示正常组大鼠胃粘膜上皮细胞形态及大小正常;模型组大鼠胃粘膜上皮细胞细胞器及胞核受损严重;其余治疗组均较模型组不同程度好转.与模型组比较,加味四逆散方各给药组、奥美拉唑组大鼠血中ACTH和CORT含量不同程度降低;而胃组织GASR mRNA表达均升高,空肠组织VIPR2 mRNA表达则降低,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01).结论 加味四逆散可显著改善慢性身心应激模型大鼠胃粘膜组织细胞的微观病理形态,调节脑肠轴状态并可改善胃组织GASR、空肠组织VIPR2 mRNA表达.
作者:谢慧臣;刘芬;杨强;熊常初 刊期: 2013年第01期
目的 应用显微镜下保留精索动脉、淋巴的精索静脉高位结扎术与传统的Palomo术治疗陆军精索静脉曲张患者,并对两种术式的术后并发症进行比较.方法 选择原发性精索静脉曲张陆军患者260例,根据手术方式随机分为显微镜下经腹股沟途径高选择性保留精索内动脉、淋巴管的精索静脉高位结扎术组(A组,130例)和传统Palomo术组(B组,130例).比较两组术后阴囊水肿、睾丸疼痛、睾丸萎缩、复发等并发症情况.结果 经过1年随访,A、B组术后出现阴囊水肿发生率为3.1%(4/130)、14.6%(19/130),术后睾丸疼痛缓解率分别为90.7%(118/130)、67.7%(88/130),术后睾丸萎缩发生率分别为0.7%(1/130)、3.1%(4/130),A、B组间比较差异有统计学意义(P<0.05);术后复发的发生率分别为5.3%(7/130)、3.8%(5/130),A、B组间比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 原发性精索静脉曲张陆军患者,选择在显微镜下保留精索内动脉、淋巴管的精索静脉高位结扎术,术后阴囊水肿、睾丸疼痛、睾丸萎缩的发生率明显降低,而术后复发的机会并未增加.
作者:曾京华;胡卫列;罗汉宏;王鑫;曹建雄;谢俊杰;鲁亦君;彭怡华 刊期: 2013年第01期
目的 运用单心动周期实时三维超声评价肥厚型心肌病左室局部心肌的同步性及舒张功能.方法 收集69例窦性心律且左室射血分数≥45%的肥厚型心肌病患者及50例正常对照人群,应用二维及三维超声评估舒张功能.实时三维超声的主要评估参数包括:舒张末球形指数(EDSI),舒张失同步指数(DDI),舒张离散差(DISPED)包括舒张晚期失同步指数(DDI-晚期),舒张早期失同步指数(DDI-早期),舒张早期离散差(DISPED-早期),舒张晚期离散差(DISPED-晚期).将患者按传统二维超声舒张功能的分级标准分为3组:舒张功能轻度受损(23例)、舒张功能假性正常(37例)和舒张功能限制性充盈(9例).结果 DDI和DISPED会随着舒张功能不全等级的升高而增加.在舒张晚期,DDI-晚期和DISPED-晚期在舒张功能严重不全(限制性充盈)中才表现出异常升高(7.95±2.75,26.76±17.19,P<0.0001),而在轻度(轻度受损)及中度(假性正常)组中均与正常对照组无差异.但在舒张早期,DDI-早期和DISPED-早期在轻度(8.57±2.24,25.44±6.31)及中度舒张功能不全(9.56±4.66,35.42±14.19)中均已明显高于正常组(P<0.0001).结论 肥厚型心肌病舒张早期的失同步性比晚期更为明显,并且与整体舒张功能不全的关系更为密切.这种早期的临床损伤可以通过实时三维超声来评估.
作者:赵蓓;李娟;朱伟红;徐勇;周肖;智光 刊期: 2013年第01期
目的 对比分析原发性高血压(EHT)患者和正常血压患者的未诊断的糖代谢异常状况并探讨哪些EHT患者是口服葡萄糖耐量试验(OGTT)的合适检测对象.方法 这一横断面研究连续纳入895例EHT住院患者和486例正常血压住院患者.数据收集包括血压、血糖、血脂、冠脉造影、心脏彩超参数以及身体测量等.结果 EHT患者的糖代谢异常发生率在基线水平(P<0.001)和OGTT检测后(P<0.001)均显著高于正常血压患者.整体上,76.4%糖耐量异常患者和78.2%新诊断的糖尿病患者在没有执行OGTT情况下会被漏诊.新诊断的糖代谢异常和冠脉狭窄的存在和严重性以及左心室结构和功能的异常显著相关.空腹血糖大于等于5.6 mmol/L、高血压病程超过10年、冠心病、高敏C反应蛋白大于3 mg/L及高载脂蛋白B与载脂蛋白A-1比值是预测糖代谢异常存在的经济有效的指标.结论 EHT患者普遍存在糖代谢异常,且显著高于正常血压患者.利用OGTT检测那些存在糖代谢异常预示指标的EHT患者的血糖状况是经济可行的.
作者:张新梅;胡允兆;温主治;王景峰 刊期: 2013年第01期
目的 探讨丙戊酸钠对乳腺癌细胞Hs578T缝隙连接功能的影响及其可能机制.方法 MTT法检测丙戊酸钠的细胞毒性;细胞接种荧光示踪法测定Hs578T细胞之间荧光传递功能;Western blotting检测丙戊酸钠对Cx43总蛋白表达的影响;细胞免疫荧光法观察丙戊酸钠对Hs578T细胞膜Cx43蛋白表达的影响.结果 MTT检测结果显示丙戊酸钠在0~ 10 mmol/L浓度范围内对Hs578T细胞几乎无细胞毒性;细胞接种荧光示踪结果显示丙戊酸钠0~5 mmol/L显著增强Hs578T细胞荧光传递功能(P<0.01);Western blotting结果显示丙戊酸钠0~5 mmol/L可显著增强Cx43总蛋白表达(P<0.01);细胞免疫荧光结果显示丙戊酸钠0~5 mmol/L可显著增强Hs578T细胞膜Cx43蛋白的表达.结论 丙戊酸钠能够显著增强乳腺癌细胞Hs578T的缝隙连接功能,这种增强作用可能与其增强Cx43总蛋白和细胞膜Cx43蛋白表达水平有关.
作者:郑超;董淑英;童旭辉;蒋国君;韩溪 刊期: 2013年第01期
目的 探讨应用组织工程技术体外构建种植自体尿路上皮细胞的包膜化聚乳酸输尿管支架的可行性.方法 将聚乳酸输尿管支架于比格犬皮下包埋3周,在其表面诱导形成一层结缔组织薄膜,获得包膜化聚乳酸输尿管支架.经脱细胞处理后,将体外扩增培养的自体尿路上皮细胞种植于包膜输尿管支架表面.采用常规HE染色组织切片、扫描电镜和免疫组化法对包膜输尿管支架及尿路上皮附着情况进行观察;应用MTT比色法比较尿路上皮细胞在包膜化聚乳酸输尿管支架组和管状小肠粘膜下基质组的生长差异.结果 HE染色及Ⅷ因子免疫组化染色结果显示结缔组织层内含有大量毛细血管,但无明显局部炎症反应;扫描电镜和免疫组化染色提示包膜含有丰富的胶原纤维构成、表面呈现三维立体结构,尿路上皮细胞能在支架包膜表面粘附,形成连续的上皮层;MTT检测显示包膜化聚乳酸输尿管支架组和管状小肠粘膜下基质组组吸光光度值比较无明显差异(P>0.05),说明尿路上皮细胞在包膜化输尿管支架上能连续增殖.结论 包膜化聚乳酸输尿管支架适合尿路上皮细胞黏附和增殖,体外构建的包膜化组织工程输尿管有潜在的临床应用价值.
作者:谭海颂;符伟军;李健强;王忠新;李钢;马鑫;董隽;高江平;王晓雄;张旭 刊期: 2013年第01期
目的 研究单核细胞趋化因子-3(MCP-3)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)表达ICAM-1、VCAM-1、TF、TFPI及其凋亡的影响.方法 分离、培养人脐静脉内皮细胞,分别给予0~3.0 ng/ml的MCP-3进行干预,确定MCP-3对HUVECs的适作用浓度,以此浓度干预HUVECs,在MCP-3加药之前1h分别给予MCP-3抗体(20 ng/ml)、PI3K抑制剂LY-294002(5 mmol/ml)处理细胞,MCP-3作用24 h后提取各组总RNA、总蛋白,用RT-PCR、Western blot分别检测干预后的ICAM-1、VCAM-1 、TF、TFPI的表达.模拟病理状态,用ox-LDL干预HUVECs与空白组对照,24 h后提取各组总RNA、总蛋白,用RT-PCR、Western Blot分别检测各组MCP-3表达情况.后,用MCP-3及MCP-3+CCR2拮抗剂RS102895 (6μmol/L)分别干预HUVECs,作用24、48 h分别检测HUVECs凋亡率及caspase3的表达,并与空白对照组比较.结果 MCP-3对HUVECs的适作用浓度为0.3 ng/ml (P<0.05);MCP-3可诱导HUVECs细胞中ICAM-1、VCAM-1、TF表达的增加,同时可抑制TFPI表达(P<0.05);MCP-3抗体和LY-294002可分别拮抗、抑制此作用(P<0.05);ox-LDL可上调HUVECs表达MCP-3 (P<0.05);作用24、48 h后MCP-3可明显诱导HUVECs凋亡,CCR2抑制剂可拮抗此作用.结论 ox-LDL可诱导HUVECs表达MCP-3,MCP-3可诱导HUVECs凋亡,且可能部分通过PI3K信号通路影响HUVECs功能.
作者:陈劲松;张波;潘从泽;任磊;陈韵岱 刊期: 2013年第01期
目的 探讨术前外周血血小板/淋巴细胞比值(PLR)对结直肠癌患者预后的影响.方法 回顾性分析解放军总医院普通外科140例行结直肠癌根治术患者的临床资料,根据患者术前外周血血小板/淋巴细胞比值分为低PLR组(PLR<250)和高PLR组(PLR≥250),采用单因素和COX回归模型分析两组患者的PLR及其它临床病理因素与5年生存率的关系.结果 低PLR组的5年生存率明显高于高PLR组(71.4%vs51.5%;P=0.045);单因素分析显示肿瘤位置,肿瘤浸润深度,淋巴结转移,肿瘤分期,PLR对结直肠癌患者5年生存率有影响;多因素分析显示PLR是影响结直肠癌预后的独立危险因素(RR:2.213; 95% CI:1.007-4.863;P=0.0048).结论 术前PLR对结直肠癌预后评估有临床价值.
作者:刘海亮;杜晓辉;孙培鸣;肖春红;徐迎新;李荣 刊期: 2013年第01期
目的 获得小鼠血管内皮生长因子Ⅱ型受体(mVEGFR2)胞外1-4IgG样结构域融合蛋白并验证其免疫原性及生物活性.方法 利用RT-PCR法从孕龄14d的Balb/c小鼠胚胎组织中扩增mVEGFR2D1-4基因,测序正确后将其克隆至原核表达载体pET-42a,构建重组质粒pET-42a-mVEGFR2D 1-4.将其转化至大肠杆菌BL21 (DE3)中IPTG诱导表达,经SDS-PAGE分析,目的蛋白用Western blotting鉴定后,亲和层析法纯化融合蛋白,ELISA法检测纯化蛋白的抗原活性,并通过体外细胞培养检测该融合蛋白对血管内皮生长因子(VEGF)促人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖的阻断作用.结果 测序结果证实成功扩增出目的基因mVEGFR2D1-4;酶切和测序结果证实pET-42a-mVEGFR2D 1-4原核表达载体构建成功;转化后可以成功诱导并纯化出大小与预期一致的蛋白;Western blotting证实纯化的蛋白能与特异性抗体发生反应;ELISA检测显示纯化后的mVEGFR2D1-4融合蛋白具有免疫原性,并且体外细胞培养试验证实其能阻断VEGF对HUVEC的促增殖作用.结论 成功获得mVEGFR2D1-4/GST融合蛋白,该蛋白具有良好的免疫原性及生物活性,为进一步研究以VEGFR2为靶点的抗肿瘤主动免疫治疗奠定了基础.
作者:王伟;殷小涛;李云奇;田仁礼;阎瑾琦;高江平;于继云 刊期: 2013年第01期