学术投稿

一株鸭乙型肝炎病毒DHBV全基因的克隆和序列分析

梁蔚芳;刘志华;何海棠;骆抗先

关键词:鸭乙型肝炎病毒, 同源性分析, 基因型
摘要:目的从本地樱桃谷鸭血清中克隆鸭乙型肝炎病毒(DHBV)DNA,并进行序列分析.方法用PCR扩增DHBV全基因,连接至T载体上,挑选克隆进行测序分析,与GenBank中16株DHBV全基因组进行同源性比较,并进行分子进化树分析.结果24-18与16株DHBV基因组比较,核苷酸同源性介于89.4%99.3%之间,各开放阅读框氨基酸同源性比较显示差异显著地方位于P区.结论24-18属于DHBV西方基因型中的一个亚型.
南方医科大学学报杂志相关文献
  • β受体阻滞剂对急性心肌梗死并发恶性心律失常的救治

    目的评价β受体阻滞剂治疗急性心肌梗死(AMI)并发恶性心律失常(频发多源性室早、室速、室颤)的临床疗效.方法选择2001年1月~2002年12月住院的AMI合并恶性心律失常6例,均为前壁(广泛前壁)AMI患者,在常规治疗(扩冠、抗凝、抗心律失常、补钾、补镁等)基础上应用β受体阻滞剂阿替洛尔或倍他乐克3.125~12.500 mg,每日2或3次(Bid或Tid),以后根据病情逐渐加量到25~50 mg,Bid或Tid.2例经多次电击复律及常规抗心律失常药等治疗未能终止室速、室颤发作,静脉应用艾司洛尔,先稀释后静脉注射5~10mg,继以1~2mg/min静脉滴注,约30min终止室速、室颤发作,静脉维持2d后改口服阿替洛尔12.5~50.0mg,Bid或Tid.结果6例中抢救成功5例,死亡1例,存活率83.33%.除在应用β受体阻滞剂开始阶段2例表现一过性低血压,1例因心功能不全猝死外,未见心功能恶化及致心律失常作用.结论AMI并发恶性心律失常患者早期合理应用β受体阻滞剂能够有效控制恶性心律失常的发作,降低死亡率.

    作者:马会利;方业民;马永利;冯军;王克强;葛均波 刊期: 2004年第04期

  • 半叶马尾藻多糖体内抗肿瘤作用及其机制探讨

    目的研究半叶马尾藻(SC)多糖体内抗肿瘤作用及其机制.方法观察SC多糖对S180小鼠瘤质(重)量、胸腺等免疫器官的影响及分别测定小鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX),丙二醛(MDA)的活性.结果SP可明显抑制S180小鼠瘤体的生长,腹腔注射SC150 mg/kg.· bw.,连续注射10 d,可使肿瘤抑制率达63.52%;小鼠血清中SOD、GSH-PX的活性分别由(350.76±31.34)NU/ml,(299.36±43.63)U增加到(487.76±16.67)NU/ml(P<0.01),(370.90±16.49)U(P<0.01);MDA由(9.46±1.77)nmol/ml降至(7.26±1.18)nmol/ml(P<0.05).结论SC多糖可通过提高机体免疫功能和抗氧化能力从而抑制肿瘤的生长.

    作者:刘秋英;孟庆勇 刊期: 2004年第04期

  • 创伤性癫痫的临床特征及外科治疗

    目的探讨创伤性癫痫的临床特征、外科治疗方法的选择及其效果.方法对35例创伤性癫痫病人进行电生理学、CT、MRI、SPECT及PET检查后行外科治疗,开颅手术病例术中行皮层脑电监测.结果在皮层脑电监测下16例行癫痫病灶切除、7例行多处软脑膜下横纤维切断术,12例在PET引导下行立体定向放射外科治疗,癫痫灶大都位于脑软化灶周边.术后得到随访32例(时间1至4年),18例无癫痫发作,10例明显好转,4例无改善.结论创伤性癫痫发作会加重原创伤引起的神经功能障碍,外科治疗均能取得良好效果并可减轻药物的毒副作用.近年来采用PET引导下的立体定向放射外科治疗具有无创、有效的特点,是一个非常有前景的创伤性癫痫外科新方法.

    作者:漆松涛;邱炳辉;欧阳辉;彭玉平 刊期: 2004年第04期

  • 荧光定量法测量平滑肌细胞内钙离子浓度的探讨

    目的研究平滑肌细胞内Ca2+浓度的动力学变化,建立一种定量测量细胞内Ca2+浓度的方法.方法分离肠系膜细动脉血管平滑肌(ASMC)细胞,用荧光探针Indo-1和激光扫描共聚焦显微成像技术测定单个平滑肌细胞Ca2+浓度的动力学变化:首先在37℃环境下标定Ca2+探针indo-1的解离常数Kd值,根据荧光-浓度换算公式将测量的荧光强度值换算成Ca2+浓度值.结果激光扫描共聚焦显微成像技术测量的细胞荧光图像分析显示,平滑肌细胞[Ca2+]i在地塞米松的刺激下显著上升,有时会出现自发钙波的现象,并且细胞内出现钙超载的现象(细胞荧光图像呈现白色).通过测量得到的Kd值结合荧光强度-浓度换算公式可准确地测量细胞内[Ca2+]i.结论荧光定量法结合共聚焦显微成像技术可以简易、快捷地监测细胞内钙离子的动力学变化,不失为一种定量测量细胞内钙离子的方法.

    作者:王水云;晏芳;彭贺新;郑昌东;柏承文 刊期: 2004年第04期

  • 一株鸭乙型肝炎病毒DHBV全基因的克隆和序列分析

    目的从本地樱桃谷鸭血清中克隆鸭乙型肝炎病毒(DHBV)DNA,并进行序列分析.方法用PCR扩增DHBV全基因,连接至T载体上,挑选克隆进行测序分析,与GenBank中16株DHBV全基因组进行同源性比较,并进行分子进化树分析.结果24-18与16株DHBV基因组比较,核苷酸同源性介于89.4%99.3%之间,各开放阅读框氨基酸同源性比较显示差异显著地方位于P区.结论24-18属于DHBV西方基因型中的一个亚型.

    作者:梁蔚芳;刘志华;何海棠;骆抗先 刊期: 2004年第04期

  • 昆明胚鼠生殖腺发育的形态学观察

    目的研究及观察发育不同时期胚鼠生殖腺发育的形态变化.方法取发育不同时期的胚鼠进行石蜡切片及H、E染色.结果从胚胎切片标本中可观察到,交配后第11天出现生殖嵴,第12天出现未分化生殖腺,第13天可在胚胎标本切片上区分雌雄性,第14天雄性的生殖腺演变为睾丸,出现生精小管,为实心的小管.第16天出现睾丸间质细胞,支持细胞的细胞核明显可见.第16天雌性的生殖腺演变为卵巢,皮质及髓质两者分化明显.第20天睾丸内可见生精小管横断面数目明显增多,管腔内出现空腔,管内有一层精原细胞和一层精母细胞.卵巢内可见一团团粗大的生卵泡性索沿着卵巢周边分布,内含许多原始的卵原细胞,此时有原始的卵泡出现.结论11~12 d为分离原始生殖干细胞(PGCs)佳时期.

    作者:刘小蓉;安靓;李进 刊期: 2004年第04期

  • 大鼠坐骨神经再生过程中的神经元轴突自噬作用

    目的探讨大鼠坐骨神经变性轴突清除中的自噬作用.方法横切大鼠坐骨神经制作Wallerian变性模型,造模后不同时间点取远断端组织行电镜结构观察和酸性磷酸酶(AcPase)活性检测.结果坐骨神经横切后轴突发生变性,主要变化为术后第5小时~2天轴质肿胀,轴突与髓鞘分离,术后第4天轴质浓缩,轴突与髓鞘完全分离形成游离轴突体.术后初期变性轴突主要形成大小不等的空泡,后期轴突与髓鞘完全分离并形成较大的游离轴突体,轴突体外包一层轴突膜是神经元细胞膜的延续,轴突体轴质浓缩,含大量各级自噬泡和纵横交错的神经丝、微管和微丝.经酸性磷酸酶(AcPase)染色证实自噬泡均呈AcPase阳性,第7天后轴突体被降解吸收,形成的空腔内偶见巨噬细胞.结论大鼠坐骨神经再生过程中变性轴突的清除主要靠轴突自身的自噬和施万细胞吞噬机制,而巨噬细胞只起辅助作用.

    作者:朴仲贤;王万山;徐锡金;王启伟;霍霞;韩明虎;朴英杰 刊期: 2004年第04期

  • 过氧化氢抑制三氧化二砷诱导的伯基特氏淋巴瘤细胞凋亡

    目的探讨过氧化氢(H2O2)对三氧化二砷(As2O3)诱导人类伯基特氏淋巴瘤细胞凋亡的影响及双染法荧光显微技术在检测细胞凋亡中的作用.方法应用AsO3诱导人类伯基特氏淋巴瘤细胞株BJAB细胞凋亡,采用Hoechst 33342和碘化丙啶(PI)核染料双染法荧光显微镜和透射电镜对细胞死亡进行观察及定量分析.结果BJAB细胞经As2O3处理后,荧光显微镜下可见大多数细胞出现细胞染色质凝集、核边集、核碎裂等凋亡的特征性改变;在低剂量(200μmo1/L)H2O2的影响下,抑制了As2O3诱导的细胞凋亡,降低细胞的死亡率;细胞的死亡方式由凋亡转变为核固缩性坏死,表现为既无凋亡的特征性改变,又非典型的细胞坏死,死亡细胞的细胞核呈固缩状态而非肿胀.结论低浓度(200μmol/L)H2O2可抑制临床治疗浓度的As2O3诱导的人类伯基特氏淋巴瘤BJAB细胞凋亡;双染法荧光显微镜技术不但可明确区分细胞凋亡及坏死,还可判断早期凋亡细胞和晚期凋亡细胞,并可进行定量分析,是一种良好的细胞凋亡检测方法.

    作者:陆地;白晓春;刘斌;李秀梅;邓凡;李明;程宝鸾;罗深秋 刊期: 2004年第04期

  • 抑癌基因p53诱导Wnt通路抑制因子sFRP的表达

    目的研究p53对Wnt通路抑制因子sFRP表达的调节作用.方法将携带p53基因的复制缺陷型腺病毒载体(A dp53)导人到p53缺失的人肝癌细胞株Hep3B中,以流式细胞术检测Adp53转基因情况,以RT-PCR技术检测p53对sFRP表达的调节作用.结果sFRP mRNA水平在转染p53 20h后即有明显升高,其中以32 h达高水平,随后逐渐降低.量效关系研究表明在转染剂量为0.05、0.5、5、50 pfu/cell的Adp53 sFRPmRNA表达均有显著增高,尤以5 pfu/cell时表达水平高.结论p53能明显诱导Wnt通路抑制剂sFRP的mRNA表达.

    作者:腊蕾;饶进军;吴曙光 刊期: 2004年第04期

  • 脂质体鬼臼毒素壳聚糖膜剂制备及膜剂中鬼臼毒素含量的测定

    目的筛选出脂质体鬼臼毒素壳聚糖膜剂制备的佳配方,制备脂质体鬼臼毒素壳聚糖膜剂并测定膜剂中鬼臼毒素的含量.方法选择制备壳聚糖膜剂所需的壳聚糖、醋酸、明胶作为三个因素,脂质体鬼臼毒素作为空白因素,每个因素三水平进行正交实验设计,根据正交实验设计的结果制备不同配方的膜剂,将膜剂的粘附性、溶解性作为评价指标进行综合评价,确定膜剂制备的佳配方.采用紫外分光光度法对所制备膜剂中鬼臼毒素的含量进行测定,检测波长为292 nm.结果对各配方膜剂的综合评价进行统计分析,以2%壳聚糖、1%醋酸、2%明胶、2.8%脂质体鬼臼毒素为配方制备的脂质体鬼臼毒素壳聚糖膜剂的综合评价高;紫外分光光度法检测结果显示鬼臼毒素在5~25 tμg/ml范围内线性关系良好(r=0.999 89),平均回收率为99.7%(n=5),相对标准误差(RSD)=1.11,膜剂中鬼臼毒素平均含量为10.46%,RSD=1.61%.结论根据正交实验结果制备的膜剂,在粘附性、溶解性方面均符合要求,紫外分光光度法测定脂质体鬼臼毒素壳聚糖膜剂中鬼臼毒素含量快捷、准确,膜剂中鬼臼毒素的含量基本符合要求,鬼臼毒素在膜剂中的分布较为均一.

    作者:曾抗;朱晓亮;李国锋;周再高 刊期: 2004年第04期

  • 截短形式弓形虫SAG1抗原在大肠杆菌中的可溶性高效表达、纯化及免疫反应性鉴定

    目的在大肠杆菌中以可溶性形式高效表达弓形虫SAG1基因的截短片段,并进行纯化及免疫反应性鉴定.方法利用Nco I、HindⅢ双酶切,从本室建立的pET-30a(+)-SAG1重组质粒中获取SAG1基因的截短片段,并将目的片段连接到经同样双酶切的质粒pET32a中,构建表达重组质粒pET-32a(+)-trSAG1.将重组质粒转入E.coli BL21中并进行诱导表达.表达蛋白经Ni-NTA agarose纯化后,Western-blotting分析其免疫反应性.结果成功构建重组质粒pET-32a(+)-trSAG1,通过IPTG诱导得到了以可溶性形式表达的重组SAG1蛋白,相对分子质量40000,Western-blotting结果显示纯化的重组蛋白具有良好的免疫反应性,ELISA试验表明重组SAG1蛋白能被弓形虫免疫兔血清及弓形虫感染人血清识别.结论在大肠杆菌中以可溶性形式高效表达了弓形虫SAG1基因的截短片段,表达蛋白能被弓形虫免疫兔血清及弓形虫感染人血清识别,有望成为一种有价值的诊断抗原.

    作者:言慧;李华;周晓红;吴昆;陈晓光 刊期: 2004年第04期

  • 肥厚左心室肌中层细胞Na+/Ca2+交换体电流及钾电流重构特征

    目的探讨肥厚左心室肌中层细胞Na+/Ca2+交换体电流(Na+/Ca2+ exchanger current,INa+/Ca2+)及钾电流重构特征,揭示心肌肥厚时心律失常发生的离子基础.方法新西兰兔分为正常对照组及手术组各10只,手术组通过肾上腹主动脉次全缩窄诱发左室肥厚.采用全细胞膜片钳技术分别记录对照组及手术组左心室肌中层细胞的动作电位、INa2+/Ca2+、慢激活的延迟整流钾电流(slowly activatingdelayed rectifier potassiUum current,IKs)、快激活的延迟整流钾电流(rapidly activatingdelayed rectifier potassium current,IKr)等.结果在基础刺激周长为2 s时,对照组和手术组的90%动作电位时程(90%action potential duration,APD90)分别为522.0±19.5 ms(n=6)、664.7±32.7 ms(n=7);在测试电位为+40 mV时,外向INa+/Ca2+密度在对照组及手术组分别为0.94±0.11pA/pF(n=9)、1.30±0.11pA/pF(n=8);在测试电位为-100mV时,内向INa2+/Ca2+密度在对照组及手术组分别为0.40±0.05 pA/pF(n=9)、0.56±0.02 pA/pF(n=8);在测试电位为+50 mV时,对照组及手术组的IKs尾电流密度分别为0.26±0.03 pA/pF(n=8),0.17±0.01 pA/pF(n=9);在测试电压为+50 mV时,对照组及手术组的IKr尾电流密度分别为0.34±0.02 pA/pF(n=8),0.23±0.02 pA/pF(n=9),以上二者相比均有统计学意义.结论肥厚左心室肌中层细胞的电生理特性发生改变,表现为动作电位时间延长、INa+/Ca2+上调、Iks及IKr下调.

    作者:王军奎;崔长琮;姚青海;姚晓伟;廉姜芳;韩克 刊期: 2004年第04期

  • 下呼吸道感染患者产超广谱β-内酰胺酶的细菌的耐药性分析

    目的分析下呼吸道感染病人产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)革兰阴性菌的发生及对10种抗菌药物耐药情况,并对临床针对性治疗ESBL耐药菌下呼吸道感染提出建议.方法采用全自动微生物分析仪鉴定细菌及用仪器法、双纸片协同试验法和标准纸片扩散确认法,对从下呼吸道感染患者中分离出的312株革兰阴性菌作ESBL检测,比较亚胺培南等10种抗菌药物对产ESBL耐药菌抗菌作用.结果产ESBLs耐药株占全部菌的23.1%,其中肺炎克雷伯占30.1%,大肠埃希菌占29.1%,阴沟肠杆菌占27.0%,铜绿色假单胞菌占11.3%,产酸克雷伯菌占2.5%;亚胺培南对产ESBL耐药菌表现出强抗菌作用.结论要注意产ESBL革兰阴性菌所致下呼吸道感染;对ESBL革兰阴性菌下呼吸道感染的治疗,亚胺培南可作为首选药物.

    作者:龙军;吕苏成 刊期: 2004年第04期

  • 高效毛细管电泳法测定尿液中柠檬酸盐、草酸盐的含量

    目的以高效毛细管电泳法测定尿液中柠檬酸盐、草酸盐的含量.方法以毛细管区带电泳分离分析尿样中的柠檬酸盐、草酸盐,以铬酸钠为紫外吸收剂进行间接紫外检测.结果柠檬酸根、草酸根阴离子在5min内得到很好的分离,迁移时间分别为3.76、3.14min,柠檬酸根在4.00~40.00μg/ml浓度范围内、草酸根在2.00~40.00 μg/ml浓度范围内线性关系良好,柠檬酸根阴离子低检测限为2μg/ml、草酸根阴离子的低检测限为1μg/ml.加样回收率分别为97.53%、99.11%.结论该方法简单,准确,成本低,可为尿液中柠檬酸盐、草酸盐的直接测定提供参考.

    作者:罗奇志;戴开金;马安德;周俊岭 刊期: 2004年第04期

  • 高效毛细管电泳法测定蒲公英及妇洁灌肠液中咖啡酸的含量

    目的采用高效毛细管电泳法对妇洁灌肠液及蒲公英原药材中所含咖啡酸进行含量测定,尝试从原药材到成品二个层面来控制妇洁灌肠液的质量.方法高效毛细管电泳法.电泳条件为:石英毛细管柱(75μm×60cm);运行缓冲液为20 mmo1/L的硼砂溶液(25℃时pH=9.18);分离电压12 kV;真空进样时间为5 s;温度为25℃,紫外检测波长为313 nm.结果咖啡酸在10~100μg/ml范围内呈良好的线性关系(r=0.999 2).平均回收率大于95%;RSD均小于3%(n=3).结论本法简单、快捷、灵敏,可用于蒲公英及妇洁灌肠液的质量控制.

    作者:晏媛;许重远;陈志良;谭亚非;郭丹 刊期: 2004年第04期

  • 神经内镜治疗导水管梗阻性脑积水12例临床经验

    目的总结神经内镜下手术治疗12例导水管水平梗阻性脑积水的初步体会.方法12例脑积水患者中导水管水平阻塞为原发性10例,继发于顶盖区肿瘤者2例.均采用神经内镜经侧脑室额角入路,经室间孔行三脑室底脚间池造瘘.结果12例患者造瘘术过程顺利,术中术后并发症少而轻,12例中术后3个月已随访的患者9例,7例有效,2例无效.结论神经内镜是治疗导水管梗阻性脑积水的有效手段,近期疗效满意.术中应针对三脑室底不同的特点采用适当的造瘘方法,随访应以确定颅内压是否正常、症状是否消失作为判断疗效的主要依据.

    作者:彭玉平;张喜安;漆松涛 刊期: 2004年第04期

  • N-甲基-D-天门冬氨酸受体介导缺氧SD大鼠PO//AH区神经元Ca2+浓度的变化

    目的研究N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体特性,探讨NMDA对缺氧大鼠PO/AH区神经元Ca2+浓度的影响.方法给大鼠应用NMDA受体激动剂NMDA和拮抗剂丙戊酸,观察其在正常和缺氧条件下对PO/AH区神经细胞内Ca2+浓度的影响.结果在正常条件下,细胞内Ca2+荧光比值为0.95,第40秒加入NMDA后[Ca2+]i的荧光强度迅速增高,25s后达到峰值2.054,并稳定在此水平,其升幅为(109±52)%,加入激动剂后30 s内达到峰值3.783,并持续稳定在此水平,加入NMDA后[Ca2+]i升高了(286±91)%;缺氧条件下神经元[Ca2+]i在加入丙戌酸后由平台向下的降幅为(103±45)%.结论[Ca2+]i的升高主要是由于NMDA受体通道开放,细胞外游离Ca2+易化扩散入胞内所致,丙戊酸可有效地降低NMDA受体活性,从而使细胞内游离Ca2+浓度明显下降,具有保护神经元免受缺氧损伤的作用.

    作者:赵庆平;邹飞;陈光忠;李铁林 刊期: 2004年第04期

  • 椎动脉窗式变异的成因及临床意义(附1例报道)

    窗式椎动脉是一种较为少见的血管变异,它与双椎动脉为两种不同的变异类型,通常可分为颅外型、颅内型和颅内-外型.本文报道1例经确诊为颅外型椎动脉窗式变异患者的全脑血管造影情况,并从胚胎学成因及临床意义方面进行分析和讨论.

    作者:樊俊;黄胜平 刊期: 2004年第04期

  • NK/LAK细胞对人口腔癌耐细胞药株杀伤活性的观察

    目的明确免疫活性细胞对肿瘤细胞的杀伤活性是否与肿瘤的耐药性相关.方法采用连续形态学观察及MTT比色法,研究淋巴因子激活的杀伤(LAK)细胞及自然杀伤(NK)细胞,对人口腔癌耐药细胞株KBV200耐药性逆转前后及亲本敏感株KB的杀伤活性.(1)在肿瘤细胞与LAK细胞共育后3 h内连续在倒置显微镜下观察LAK细胞对上述3者的杀瘤效应;(2)采用MTT比色法检测NK及LAK对3株细胞的杀伤率.结果与KB细胞组相比,在KBV200和KBV200+维拉帕米组,LAK细胞出现在靶细胞周围的时间早、数量多,伸出伪足的LAK细胞比率高,出现集落样细胞团块时间亦早.NK、LAK细胞对KBV200细胞株耐药性逆转前后的杀伤率均明显高于敏感株KB(P<0.05),而对耐药株耐药性逆转前后的杀伤率无统计学差异(P<0.05);LAK对各株的杀伤活力均明显强于NK细胞(P<0.05).结论免疫活性细胞对KBV200细胞株有较强的杀伤作用,逆转耐药性不降低免疫活性细胞杀伤活力,提示细胞过继免疫治疗可能成为控制化疗耐药病人病情发展的一个有效手段.

    作者:郑颖娟;张健;汪森明;张积仁 刊期: 2004年第04期

  • 兔骨髓基质细胞诱导分化成神经元样细胞的研究

    目的检测由骨髓基质细胞诱导分化而成的神经元样细胞能否分泌氨基酸类神经生物活性物质成分,从而推断是否具有神经元的生化特征.方法无菌条件下抽取新西兰大白兔骨髓,梯度密度离心分离获取兔骨髓基质细胞(BMSCs),在神经干细胞培养基及细胞因子0.5 μg/ml维甲酸(RA)、20ng/ml胶质源性神经营养因子(GDNF)于体外诱导分化为神经干细胞及神经元样细胞,采用免疫细胞化学方法进行鉴定,并应用高效液相色谱法(HPLC)检测其氨基酸类生物活性物质的含量.结果BMSCs培养10 d可见细胞大而圆,免疫细胞化学检测Nestin抗原阳性;培养20 d可见具有长突起的神经元样细胞形成,神经元特异烯醇化酶(NSE)免疫细胞化学检查阳性,高效液相检测骨髓源性神经元样细胞含有高浓度的天冬氨基酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、甘氨酸(Gly)、丙氨酸(Ala).方差分析显示:随着BMSC培养天数的增加,其所含的Asp、Glu浓度也渐增加,RA+GDNF组所含Asp生物活性物质与其余各组比较有显著性差异(P<0.01).结论兔BMSCs在体外条件下可以增殖分化,增殖细胞表达Nestin,分化的细胞则可表达NSE特异性抗原,并含有高浓度的兴奋性和抑制性氨基酸类神经递质成分;RA和GDNF作为BMSCs的诱导剂,在BMSCs向神经干细胞分化中起有重要的促进作用.

    作者:陈剑荣;徐如祥;姜晓丹;徐强;蔡颖谦;邹雨汐;丁涟沭 刊期: 2004年第04期

南方医科大学学报杂志

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