姜耀东；郑少斌；王战会
目的评价RT-PCR法检测MN/CAⅨ基因在肾癌组织表达的可靠性.方法以5例肾癌和5例正常肾组织为研究对象,提取总RNA,两步法进行RT-PCR反应,用MN/CAⅨ的特异性引物扩增,2%琼脂糖凝胶电泳后观察并测序.结果经过测序证实5例肾癌组织的RT-PCR产物中有4例可见特异的MN/CAⅨ条带,而正常肾组织的RT-PCR产物均无相应的MN/CAⅨ条带.结论RT-PCR法检测MN/CAⅨ在肾癌组织中的表达是准确、可靠的.
作者：姜耀东；郑少斌；王战会 刊期： 2004年第08期
目的探讨腹腔镜手术对人体氧化应激的影响.方法测定20例子宫肌瘤患者在接受腹腔镜手术前、手术结束时(气腹解除后5 min)及术后24 h血浆丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)和血浆总抗氧化能力(AOA)的水平,并与20例开腹手术患者术前、手术结束时(缝合腹壁时)及术后24h的水平进行比较.结果手术结束时2组血浆MDA水平均增加(腹腔镜组P＜0.01,开腹组P=0.19);术后24 h腹腔镜组恢复至术前水平(P=0.20),而开腹组与术前比较继续升高(P＜0.01).血浆GPx活性及AOA水平在手术结束时两组均降低(腹腔镜组P＜0.01、P＜0.01;开腹组P=0.23、P=0.43);术后24h与术前比较腹腔镜组GPx活性部分恢复(p=0.11),AOA维持在手术结束时的水平(P＜0.01),而开腹组GPx活性和AOA水平继续下降(P＜0.01,P＜0.01).两组相比腹腔镜组术后24 h MDA水平低(P＜0.01),GPx活性高(P＜0.05),AOA水平无差异(P=0.33).结论腹腔镜手术过程中有氧化应激现象产生,但术后基本得以恢复,优于开腹组.
作者：张广亮；刘国炳；黄琦丽；邢福祺 刊期： 2004年第08期
目的探讨补阳还五汤对大鼠持续性局灶性脑缺血后脑组织内神经元型一氧化氮合酶(nNOS)免疫阳性神经元表达的影响.方法动物分为正常对照组,模型对照缺血1、4、10h组,补阳还五汤预处理缺血1、4、10h组.局灶性脑缺血模型由线栓法阻塞大鼠大脑中动脉(MCAO)制成,免疫组化SABC法测定大鼠脑缺血后,不同脑区在不同时间段的nNOS免疫阳性神经元表达的变化.结果缺血侧各脑区内nNOS免疫阳性神经元表达较正常对照组升高(P＜0.05),随时间延长而递增,在大脑皮层纹状区与尾壳核表达增加程度高.补阳还五汤预处理缺血4、10 h组大脑皮层纹状区nNOS免疫阳性神经元表达(170.80±21.71、189.20±18.53)比模型组同时段表达(244.60±12.44、363.00±24.82)显著性降低(P＜0.05);补阳还五汤预处理缺血1、4、10 h组尾壳核nNOS免疫阳性神经元表达(127.33±19.83、215.20±38.80、191.20±22.39)比模型组同时段表达(138.67±13.99、266.40±29.25、373.20±31.55)显著性降低(P＜0.05).早期即起效,并随缺血时间延长而递增.结论提示补阳还五汤能抑制缺血后脑组织内早期nNOS活性的升高,对缺血后脑组织具有早期保护作用.
作者：廖春来；佟丽；陈育尧 刊期： 2004年第08期
目的构建PcDNA4/His C-MBL表达载体,在哺乳细胞中表达人甘露聚糖结合凝集素(MBL).方法应用PCR从含有中国人野生型MBL cDNA的质粒pGEM-MBL中扩增目的基因片段,将其克隆至PcDNA4/His C真核表达载体.经酶切及测序鉴定后,以电穿孔法转染CHO细胞,以RT-PCR分析其mRNA表达,通过Ni-NTA琼脂糖柱层析纯化目的蛋白并以SDS-PAGE和Western-blotting鉴定,以其为免疫原免疫小鼠后取鼠血清进行ELISA检测分析目的蛋白的免疫活性.结果从pGEM-MBL中扩增得到约750 bp的cDNA片段,构建成重组载体经酶切出现约5 100和750 bp片段,测序鉴定与预期的完全一致.RT-PCR证实转染细胞有MBLmRNA表达,纯化蛋白经SDS-PAGE电泳可见约29000、58 000和87 000条带,其中29 000蛋白带可与6-His抗体反应.纯化蛋白免疫小鼠所获抗血清ELISA效价是1:819 200,与天然人MBL和重组MBL三聚体糖识别域反应的ELISA效价均为1:25 600.结论获得了表达中国人MBL的CHO细胞株和重组人MBL,为MBL分子的进一步研究提供了条件.
作者：白志军；张丽芸；林佐贤；卢晓；陈政良 刊期： 2004年第08期
目的探讨住院肺结核病人延误诊断的原因.方法对我所1999年1月～2003年12月住院的458例入院前延误诊断肺结核患者进行回顾性分析.结果与结论延误诊断的原因为:(1)患者对某些呼吸系统症状未引起重视,延误就诊时间;(2)首诊医师仅依靠胸部X线检查,忽视了痰菌及其它检查;(3)非专科医师对因症就诊患者忽略了结核病的存在.
作者：董秋兰；李艳明；吴东玲；郭红革；魏长春 刊期： 2004年第08期
目的研究药物1,25-二羟基维生素D3(二羟维D3)在高危角膜移植模型中对免疫排斥反应及新生血管生长情况的影响,揭示1,25-二羟维D3作为免疫抑制剂在角膜移植中的治疗作用及机制.方法建立大鼠高危角膜移植模型,按不同浓度的1,25-二羟维D3(1×10-5和1×10-7mol/L)及环孢霉素A(CsA)分组,连续用药2周,观察移植物排斥情况并于术后4、7、14 d取材行原位杂交等实验,分析各组细胞因子:白介素1α(IL-1α)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血管内皮生长因子(VEGF)mRNA水平的变化情况.结果在1,25-二羟维D3作用下,高危角膜移植物的存活时间明显延长;新生血管生长受抑制;合用CsA后效果更明显.原位杂交实验证实1,25-二羟维D3能显著抑制植片IL-1α、TNF-αmRNA表达(P＜0.01);对VEGF表达无直接影响.结论1,25-二羟维D3能有效地抑制新生血管生长及角膜移植急排期的免疫哌排斥反应,机制可能包括对前炎症因子(IL-1α、TNF-α)生成的抑制作用,而对VEGF无明显直接作用.
作者：党森涛；陆晓和；周瑾；白浪 刊期： 2004年第08期
目的探讨脑源性神经营养因子(BDNF)体外诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)分化成神经元样细胞的作用及其对诱导后的神经元样细胞保护作用,为治疗神经系统疾病提供更优良的细胞.方法体外培养MSCs至第5代后,分别用BDNF、β-巯基乙醇(β-ME)诱导MSCs,诱导后的第1、3和6小时计算两组神经元样细胞数,对各时间点两组神经元样细胞阳性率进行了比较;诱导后行神经细胞标记抗体的免疫细胞化学、RT-PCR及蛋白质印迹鉴定.结果两组诱导剂诱导后的细胞均呈神经元样细胞的形态;BDNF组诱导分化后细胞的存活时间远较β-ME组长;BDNF组在诱导后6 h近于诱导高峰,而β-ME在诱导2 h即达高峰,但随后神经元样细胞渐死亡.免疫细胞化学结果显示在两组诱导后细胞的巢蛋白(Nestin)、神经细胞特异性烯醇化酶(NSE)、微管相关蛋白-2 MAP-2)、神经丝蛋白(NF)表达均呈阳性,而胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达呈阴性;RT-PCR显示NSE、NFL,MAP-2的mRNA表达阳性,GFAP有较弱的表达;蛋白质印迹可见两组诱导剂诱导的细胞均表达神经元的特异性标记抗体NSE.结论BDNF能单独诱导MSCs分化形成神经元样细胞,而且分化后细胞的存活时间长,有望用于治疗脑缺血、神经变性等疾病.
作者：黄文；张成；陈松林；张为西；姚晓黎；曾缨；黄慧；冯善伟；柳太云 刊期： 2004年第08期
目的研究湿热环境对猫颅脑火器伤早期脑微循环的影响,为临床治疗提供实验依据.方法24只成年猫用改良Carey法制作猫颅脑火器伤模型后,随机分为两组,每组12只,放入温度和相对湿度分别为25℃和50%,35℃和85%仿真模拟气候舱.通过脑微血管形态学及通透性和周围组织病理变化的观察,测定生命体征代偿指标、微血管中流动血液流变学特征和血脑屏障的变化来反应脑微循环的变化.结果全部动物无死亡.两组动物在脑微血管形态学及通透性和周围组织病理变化显著;在生命体征指标、血液流变学特征和血脑屏障的损害程度上存在显著差异.结论湿热环境对颅脑火器伤的早期脑微循环有显著影响,是颅脑火器伤的二次创伤.
作者：马德选；徐如祥；朱红胜 刊期： 2004年第08期
目的克隆日本血吸虫8k CaBP(Sj8CaBP)基因启动子区并对该序列进行分析.方法提取日本血吸虫基因组DNA,并按ClontechUniversal Genome WalkerTM Kit的操作手册说明,建立日本血吸虫基因组DNA文库.根据手册要求及Sj8CaBP基因的cDNA序列,设计合成该基因染色体步移的特异性引物与试剂盒提供的端子引物进行巢式PCR.将得到的PCR产物克隆测序,测序结果用启动子区的分析软件及与其cDNA序列比对进行分析.结果得到的Sj8CaBP基因长度为1 079 bp(GenBank登录号AY262018),该基因包含Sj8CaBP基因完整的开放阅读框(ORF),包括1个内含子及2个外显子,在其5'端UTR区具有明显的启动子区,包括TATA盒及CAAT盒,没有发现GC盒及一些血吸虫基因启动子区所常见的AP-1(Active protein 1)结合位点.结论从日本血吸虫基因组文库中获得一个长1 079bp的Sj8CaBP基因片段(GenBank登录号为AY262018),经分析证明,该片段包含一个启动子区,具有TATA盒及CAAT盒的结构及1个内含子2个外显子.
作者：彭鸿娟；陈晓光；周晓红；沈树满 刊期： 2004年第08期
目的观察蚌肉提取物LX01对肺癌细胞株A549的抑制作用及对血液白细胞数目的影响.方法MTT法检测不同浓度的LX01对肺癌细胞株A549细胞增殖的抑制率;A549细胞接种BALB/C裸鼠,观察给药后肿瘤的生长情况,高、中、低剂量LX01对荷瘤小鼠的生存时间、瘤重及血液白细胞数目的影响.结果LX01对A549细胞的增殖有明显的抑制作用,IC50为56.85mg/L,与阴性对照组比差异有显著性(P＜0.01);LX01能剂量依赖性的抑制A549接种瘤的生长;LX01中、高剂量可明显延长A549荷瘤小鼠生存时间,高剂量组荷瘤瘤重明显减轻,与阳性对照药环磷酰胺相似,明显高于阴性对照组(P＜0.01);与5-FU治疗组相比,LX01各剂量组对A549荷瘤小鼠血白细胞数目无降低作用.结论蚌肉提取物LX01能显著抑制肺癌细胞株A549接种BALB/c裸鼠后的生长,且对免疫系统无明显抑制作用.
作者：王顺官；李琳 刊期： 2004年第08期
目的研究犬单侧膈神经离断后不同时期呼吸肌腺嘌呤核苷酸含量变化.方法选取8只成年健康杂种犬,离断其左侧膈神经,分别取其同侧肋间肌和膈肌组织,用高效液相色谱法测量膈神经离断前及离断后1、2个月呼吸肌中腺嘌呤核苷酸含量.结果犬肋间肌三磷酸腺苷(ATP)的含量三个时间组相比均无差别;而二磷酸腺苷(ADP)的含量上升,膈神经离断后2月组与离断后1月组相比,有统计学差别(P＜0.05);犬肋间肌总腺苷酸(TAN)含量以膈神经离断后1月组为低,但并无统计学差别;肋间肌腺苷酸能荷(AEC)以膈神经离断后1个月为低,与离断前组和离断后2月组相比,均有统计学差别(P＜0.05).犬的膈肌ATP、ADP及TAN、AEC含量在膈神经离断后2个月分别为:9.05±12.70,2.99±2.57,14.72±13.98,0.57±0.29;与膈神经离断前及离断后1个月相比,有统计学意义(P＜0.05).结论犬膈神经离断后膈肌能量代谢明显下降,肋间肌有一定程度代偿.
作者：田建昌；陈钢；肖飞；马俊杰；蔡瑞君 刊期： 2004年第08期
目的了解对专业不同满意程度军校医学生的心理健康状况及其人格特征.方法采用自编大学生一般情况调查问卷(其中一项是调查被试对录取专业的满意度)、症状自评量表(SCL-90)、艾森克个性问卷(EPQ),对4294名军校医学生进行测试和评定.结果对专业不同满意程度军校医学生在个性和心理健康水平上存在显著差异.军校医学生对专业的满意程度与个性因素和心理健康水平存在一定相关关系.结论人格特征表现为较内向、高神经质、高精神质的军校医学生更容易对专业不满意;对所学专业越不满意的军校医学生则表现出越多相应的心理问题.
作者：刘欢欢；张小远；肖蓉；冯现刚 刊期： 2004年第08期
目的探讨恶性腹膜间皮瘤的诊治方法.方法回顾分析16例恶性腹膜间皮瘤临床表现、实验检查及治疗方法.结果16例中术前确诊3例,剖腹探查10例,急诊手术1例,腹腔镜探查2例.随访12例,半年内死亡2例,2年内死亡7例,1例生存超过2年.另2例为近1年内患者,继续治疗中.结论恶性腹膜间皮瘤无特异性症状,诊断困难,误诊率高.诊断主要依据脱落细胞检查、腹腔穿刺活检、腹腔镜及剖腹探查.预后差,综合治疗有望延长患者生存期.
作者：王浩；厉周；黄宗海 刊期： 2004年第08期
目的构建人全长PLCγ1基因真核表达载体,以便进一步研究PLCγ1的作用及其机制.方法自行设计一对带有HindⅢ和NotⅠ酶切位点的引物,采用RT-PCR技术从MG63细胞中扩增人全长PLCγ1 cDNA(3 878 bp),纯化后,经HindⅢ-NotⅠ酶切,插入真核表达载体pLNCX2中,构建重组质粒pLNCX2/PLCγ1.通过PCR,限制性酶切分析及DNA直接测序对所构建的重组质粒进行鉴定.同时经瞬时转染后,利用RT-PCR及Western blotting转染后LoVo细胞中PLCγ1的表达.结果RT-PCR产物经琼脂糖电泳分析所得片段大小与预期相符(3 878bp).重组质粒经HindⅢ-Not Ⅰ酶切后,得到3 878bp(PLCγ1基因)及6 100bp(载体pLNCX2)两个片段,同时重组质粒经HindⅢ-BglⅡ酶切后,得到约4300bp及约8 500bp两个片段,与预期一致.DNA测序也证实了重组质粒的正确.经RT-PCR和Western blot分析证实转染pLNCX2/PLCγ1的LoVo细胞中PLCγ1的表达均高于转染空质粒pLNCX2的LoVo细胞及未转染的LoVo细胞.结论成功构建了人全长PLCγ1基因真核表达载体pLNCX2/PLCγ1,为进一步研究PLCγ1的作用奠定了基础.
作者：李秀梅；邓凡；曾位森；华亮；陆地；李明；王宏；刘忠英；罗深秋 刊期： 2004年第08期
目的在原核中高效表达及活性鉴定重组人survivin蛋白分子.方法应用RT-PCR的方法得到survivin的cDNA,并构建成pBV220-survivin原核表达质粒,将其导入E.coli B121(Gold)中,诱导表达survivin蛋白.通过DEAE SepharoseFastFlow离子交换柱和Sephacryl S-200分子筛二步柱纯化以获取目的蛋白.用Western blotting检测表达产物.结果PT-PCR产物经测序分析与预期结果完全一致,表达质粒在E.coli B121(Go1d)中得到高效表达,表达的survivin蛋白占总蛋白含量的30%以上,表达产物以包涵体的形式存在.通过离子交换柱和分子筛二步柱纯化及复性后获得的目的蛋白,其纯度达到95%以上.Western blotting证明表达产物具有特异性.结论获得了较高纯度的survivin蛋白,为进一步深入研究该蛋白的细胞凋亡调控功能提供了工具.
作者：别俊；孙茂盛；孙强明；郑建平；孙雯佳 刊期： 2004年第08期
目的对导致泌尿生殖系感染的大肠埃希菌对抗菌素的耐药趋势进行调查分析.方法应用纸片扩散法(K-B法)对分离的148株大肠埃希菌进行药敏测试与分析,并用纸片扩散法对β-内酰胺酶(ESBLs)菌株作确认试验.结果对28种抗生素的耐药检测结果显示,大肠埃希菌对青霉素类和喹诺酮类抗生素耐药率达73.6%～86.4%;对一代、二代头孢菌素(头孢拉啶、头孢唑啉、头孢克洛)耐药率在44%以上;对三代头孢菌中的头孢他啶耐药率低,为10.1%;对哌拉西林、头孢哌酮和氨苄西林的耐药率为84.5%、44.6%、83.0%;对含酶抑制剂的复合β-内酰胺类抗生素的耐药率(哌拉西林/他唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦和氨苄西林/舒巴坦为4.1%、10.8%和52.0%)要明显低于单剂型的同种抗生素,抗菌敏感率均有不同程度的提高(P＜0.001).148株大肠埃希菌中,产ESBLs菌株有38株(25.7%),不产ESBLs菌株有110株(74.3%).产ESBLs菌株对多种抗生素的耐药率显著高于不产ESBLs的菌株(P＜0.05).结论对于治疗因大肠埃希菌引起的泌尿生殖系感染,应该根据实验室的药敏和ESBLs的检测结果来指导合理用药,以提高治疗效果.呋南妥因和含酶抑制剂的β-内酰胺类抗生素比较有效.
作者：崔伟历；徐德兴；李文玲；王露霞 刊期： 2004年第08期
目的研究鼻咽癌常规放疗和调强放疗(IMRT)受照剂量的差异.方法用放疗计划系统分别进行鼻咽癌常规放疗和调强放疗计划设计,计算肿瘤量70 Gy时正常组织受照剂量-体积直方图和所需照射的总跳数.用X射线能量为6MV的加速器实施放疗计划.根据方野散射线和漏射线剂量率的测量值和总跳数,估算射野外不同距离正常组织所受辐射剂量.结果调强放疗射野内正常组织受照剂量低于28 Gy的体积是常规放疗的1.43～1.81倍,而高于35 Gy时,受照体积仅为常规放疗的0.73～0.30倍;射野外正常组织所受散射线和漏射线照射剂量的估计值约为常规放疗的2倍.结论鼻咽癌常规放疗与调强放疗相比,正常组织受照剂量和受照体积具有成倍差异,调强放疗漏射线和散射线是常规骀放疗的2倍.
作者：张书旭；徐海荣；林生趣；李文华 刊期： 2004年第08期
目的观察抗小鼠TLR-2胞外段B细胞识别表位抗体对小鼠肉瘤S180生长的影响.方法在对小鼠Toll样受体2(mTLR-2)B细胞优势表位预测的基础上,合成B细胞识别表位20 mer短肽,将其与载体蛋白偶联,制备免疫原.所得兔抗mTLR-2胞外段B细胞识别表位多克隆抗体TSP-1纯化后,采用Westem blotting、免疫组织化学和流式细胞仪进行初步鉴定.小鼠肉瘤株S180细胞注射小鼠左后肢,其中实验组混合100μg纯化抗体TSP-1,无关免疫球蛋白对照组混合100 μg正常兔IgG,空白对照组仅接种S180.小鼠经麻醉分别于10、14、18 d处死,称量瘤质量并计算抑瘤率.结果Western blotting显示在相对分子质量约95 000处可见清晰的反应条带;免疫组织化学和流式细胞术检测显示抗体可与表达天然mTLR-2的J774A.1细胞反应;实验组小鼠肉瘤生长明显受到抑制,其瘤质量在10、14、18 d与对照组相比差异显著(P＜0.05);抑瘤率分别为77%、51%和53%.结论局部应用抗mTLR-2胞外段B细胞识别表位抗体可抑制小鼠肉瘤S180生长,且表现在肿瘤生长的早期.
作者：赵文忠；刘艳君；朱平；刘洁；韩强涛；富宁 刊期： 2004年第08期
目的探讨重型脑损伤患者亚低温(33～35℃)治疗前后颅内压(ICP)、脑组织氧分压(PO2)的变化及临床意义.方法32例重型颅脑损伤患者分为亚低温组及对照组,放置ICP脑组织PO2光纤探头,持续监测ICP及脑组织PO2.结果亚低温治疗24h后ICP逐渐下降,脑组织PO2逐渐上升,与对照组比较差异有显著性(P＜0.05).结论亚低温治疗能明显降低重型颅脑损伤患者ICP,改善脑组织氧代谢,使患者死亡率及致残率降低.
作者：林源泉；贾军；刘文锋；张浚 刊期： 2004年第08期
目的观察L-精氨酸(L-Arg)对兔右冠状动脉缺血再灌注(IR)窦房结(SAN)传导时间(SACT)和恢复时间(SNRT)及房室结(AVN)传导有效不应期(AVERP)的影响.方法在体成年兔右冠状动脉缺血再灌注模型分4组:正常对照组,IR(缺血90 min,再灌注90 min)+生理盐水组,IR+L-Arg组和IR+左型精氨酸甲酯(L-NAME)组.在不同时相分别测定各组心房快速起搏或程序电刺激后的SACT、SNRT和AVERP.结果IR+L-Arg组缺血期及再灌注早期3项指标均有不同程度的下降,而再灌注后期升高;IR+L-NAME组结果却基本相反(P＜0.01).3组组内比,IR+L-Arg组和L-NAME组于缺血期与再灌早期3项指标均升高;再灌注后期,IR+L-Arg组无治疗意义甚至加重SAN和AVN损伤,而IR+L-NAME组3项指标下降.结论随着缺血时间延长SAN功能损伤加重;早期再灌注损伤敏感;组织内适当补充L-Arg,于缺血期和再灌早期对SAN电生理功能和AVERP恢复是有益的,于再灌注后期可能加重损伤.
作者：王庆志；戴景兴；韩培立；原林 刊期： 2004年第08期
南方医科大学学报杂志
主管:广东省教育厅
主办：南方医科大学
